一种南极磷虾来源的提高免疫力的生物活性肽及制备方法与流程

本发明涉及生物活性肽，尤其是涉及一种南极磷虾来源的提高免疫力的生物活性肽及制备方法。

背景技术：

1、南极磷虾（euphausia superba）通常称作南极大磷虾，属于极地甲壳类动物，以群居为生，主要觅食区是在200m以上的浅水层。幼年磷虾体长0.8-5.0cm，成年后一般约5.6~6.0cm左右。南极磷虾一次产卵量较多，且卵孵化周期较短，一般为三到四周，因此南极磷虾是地球上多细胞动物中生物数量最大、繁衍最成功的单种生物资源之一。南极磷虾的肌肉中含有约78%的蛋白质，8%的脂肪，27%的脂肪，含有18种常见氨基酸，因此，南极磷虾也是人类重要的动物蛋白资源库，具有巨大的开发和应用潜力。

2、肽（peptides）是20种天然氨基酸通过不同组成和排列方式构成的，从二肽到线性或环形结构的多肽的总称，并且把能够在人体内发挥生理功能具有活性的多肽称为活性肽。人工获得肽的方法有多种，主要有微生物发酵法、酸法、碱法、电法、人工嫁接法、基因表达法、酶解法等。酶解法是用生物酶催化蛋白质水解获得的肽。酶法较酸法、碱法、电法温和、环保，并且具有生产工艺简易，投资少、见效快，适宜工业化生产等优点。

3、在制备南极磷虾活性肽的过程中，由于南极磷虾体内含有大量的氟，因此需要脱氟处理，通常采用化学方法进行脱氟处理，例如使用盐酸、亚硫酸钠、氯化钠、柠檬酸、盐酸甜菜碱或钙盐沉降等，但是化学试剂脱氟对于水解氨基酸和粗蛋白都有一定的破坏作用，钙盐沉淀法脱氟，会导致溶液具有苦涩味，因此需要新的处理方法来进行脱氟处理。同时单一的酶解或发酵生产肽，肽的分子量较大，不利于人体吸收。为解决以上技术问题，本发明提供了一种南极磷虾来源的提高免疫力的生物活性肽及制备方法。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种南极磷虾来源的提高免疫力的生物活性肽及制备方法，制备得到的生物活性肽分子量小于800da，易于被人体吸收利用，提高免疫力，同时生产过程中不添加化学物质，健康安全。

2、为实现上述目的，本发明提供了一种南极磷虾来源的提高免疫力的生物活性肽的制备方法，包括以下步骤：

3、步骤1，将南极磷虾清洗干净，并搅碎，得到南极磷虾浆液；

4、步骤2，在南极磷虾浆液中加入蒸馏水，混合均匀后，加入脱氟剂，进行反应，反应完成后过滤得到脱氟虾糜；

5、步骤3，在脱氟虾糜中加入蒸馏水，混合均匀后，巴氏杀菌30min，得到灭菌的脱氟虾糜浆液；

6、步骤4，在灭菌的脱氟虾糜浆液中接种种子液进行发酵，发酵完成后，离心得到发酵液；

7、步骤5，在发酵液中添加风味蛋白酶，进行酶解，酶解完成后进行灭酶，降温离心后得到酶解液；

8、步骤6，酶解液使用超滤膜截流，得到生物活性肽。

9、进一步地，步骤2中，脱氟反应进行1-3次，每次反应时，脱氟剂的用量为总质量的5-10%。

10、进一步地，所述脱氟剂为果皮和蛋壳的混合物，脱氟剂粒径为0.002-0.02mm，果皮和蛋壳的干重质量比为2：1；果皮为橘皮、柚子皮、香蕉皮或椰壳中的一种或几种，蛋壳为禽蛋中的一种。

11、进一步地，脱氟反应条件为：反应时间90-120min，ph 3-5，温度25-30℃。

12、进一步地，步骤3中，每5-10g脱氟虾糜中加入60ml蒸馏水，并混合均匀。

13、进一步地，步骤4中，种子液为厦门假交替单胞菌cgmcc 1.12157种子液，种子液的浓度为1×106-1×109个/ml，发酵时接种浓度为5-10%，发酵温度为20-25℃，发酵时间为24-36h。

14、进一步地，步骤5中风味蛋白酶的添加量为3%，酶活力为1.5×104-2×104u/ml，酶解温度45-50℃，酶解时间0.5-1h，酶解ph7.0-7.5。

15、进一步地，步骤6中，得到的生物活性肽的分子量小于800da。

16、本发明还提供了上述的制备方法制备得到的生物活性肽。

17、本发明还提供了上述的生物活性肽在制备提高免疫力产品中的应用。

18、本发明所述的一种南极磷虾来源的提高免疫力的生物活性肽及制备方法的优点和积极效果是：

19、1、本发明中采用脱氟剂进行脱氟处理，脱氟剂为果皮和蛋壳的混合物，果皮中的活性官能团（如羧基、羟基等），进行离子交换，从而进行吸附氟离子，同时为了提高脱氟效果，加入富含碳酸钙的蛋壳，沉降氟离子，同时果皮中的芳香类物质能够遮盖蛋壳中碳酸钙沉降过程中的苦涩味，提升口味。

20、2、本发明使用农业副产物（果皮和蛋壳）作为脱氟剂，不仅避免使用化学试剂，保证了安全的同时实现了废弃物的再利用，节能环保。

21、3、本发明首先厦门假交替单胞菌cgmcc 1.12157进行发酵，发酵过程中厦门假交替单胞菌cgmcc 1.12157产生碱性蛋白酶和其他蛋白酶，蛋白酶将蛋白水解成活性小片段，然后经过风味蛋白酶的酶解，去除苦味，改善口感，得到分子量小于800da的活性肽，易于被人体吸收利用，提高免疫力。

22、下面通过实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。

1.一种南极磷虾来源的提高免疫力的生物活性肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种南极磷虾来源的提高免疫力的生物活性肽的制备方法，其特征在于：步骤2中，脱氟反应进行1-3次，每次反应时，脱氟剂的用量为总质量的5-10%。

3.根据权利要求2所述的一种南极磷虾来源的提高免疫力的生物活性肽的制备方法，其特征在于：脱氟剂粒径为0.002-0.02mm，果皮和蛋壳的干重质量比为2：1；果皮为橘皮、柚子皮、香蕉皮或椰壳中的一种或几种，蛋壳为禽蛋中的一种。

4.根据权利要求2所述的一种南极磷虾来源的提高免疫力的生物活性肽的制备方法，其特征在于，脱氟反应条件为：反应时间90-120min，ph 3-5，温度25-30℃。

5.根据权利要求1所述的一种南极磷虾来源的提高免疫力的生物活性肽的制备方法，其特征在于：步骤3中，每5-10g脱氟虾糜中加入60ml蒸馏水，并混合均匀。

6.根据权利要求1所述的一种南极磷虾来源的提高免疫力的生物活性肽的制备方法，其特征在于：步骤5中风味蛋白酶的添加量为3%，酶活力为1.5×104-2×104u/ml，酶解温度45-50℃，酶解时间0.5-1h，酶解ph7.0-7.5。

7.根据权利要求1所述的一种南极磷虾来源的提高免疫力的生物活性肽的制备方法，其特征在于：步骤6中，得到的生物活性肽的分子量小于800da。

8.如权利要求1-7任一项所述的制备方法制备得到的生物活性肽。

9.如权利要求8所述的生物活性肽在制备提高免疫力产品中的应用。