一种乙虫腈单克隆抗体的重链和轻链可变区及其应用的制作方法

本发明实施例涉及生物，具体涉及一种乙虫腈单克隆抗体的重链和轻链可变区及其应用。

背景技术：

1、乙虫腈（ethiprole），化学名称为5-氨基-1-（2,6-二氯-对三氟甲基苯基）-4-乙基亚磺酰基吡唑-3-腈基，是一种新型吡唑类杀虫剂。乙虫腈悬浮剂可用于水稻、蔬菜等多种作物，能有效防治多种咀嚼式口器和刺吸式口器害虫。随着乙虫腈的广泛施用，其在环境中的降解归趋及残留状况成为人们关注的焦点。

2、乙虫腈在农业生产中的大量使用，导致其在农作物及环境中广泛残留。乙虫腈及其代谢产物具有一定的神经毒性和内分泌干扰效应，可通过食物链传递和富集，对人类健康构成潜在威胁。我国《食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量》（gb 2763-2026）中明确规定了乙虫腈在谷物、蔬菜、水果等食品中的最大残留限量（mrls）。然而，由于乙虫腈在环境中降解缓慢、半衰期较长，且对多种害虫具有较高的防治效果，其在实际生产中的违规使用和超量施用现象时有发生，导致农产品中乙虫腈残留超标事件频发，严重威胁食品安全和公共卫生安全。因此，建立一种灵敏、快速、高效的乙虫腈残留检测方法，对于保障食品安全、加强农药残留监测和规范农业生产具有重要的现实意义。

3、目前乙虫腈的测定方法主要为高效液相色谱法（hplc）和液相色谱-串联质谱法（lc-ms/ms），这些仪器分析方法虽然灵敏度高、准确度好，但存在成本高、操作复杂、设备昂贵、对技术人员要求高、样品前处理繁琐等不足，难以满足大批量样品现场快速筛查的需求。免疫分析方法具有成本低、效率高、灵敏度高、操作简便、对技术人员要求低等优点，适用于大量样品的快速检测和现场筛查。本发明的目的在于提供一种对乙虫腈具有较高亲和力和检测灵敏度的单克隆抗体，为建立胶体金试纸条的检测方法奠定基础，为农产品质量安全监管提供技术支撑。

技术实现思路

1、为此，本发明提供一种乙虫腈单克隆抗体的重链和轻链可变区及其应用。

2、为了实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：

3、第一方面，本发明提供一种乙虫腈单克隆抗体，其特征在于：所述单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区；

4、所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.1所示；所述单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.2所示；

5、所述重链可变区和轻链可变区均由互补决定区和框架区组成，所述互补决定区均由cdr1、cdr2和cdr3组成；

6、所述单克隆抗体的重链可变区的cdr1的氨基酸序列如seq id no.5所示；所述单克隆抗体的重链可变区的cdr2的氨基酸序列如seq id no.6所示；所述单克隆抗体的重链可变区的cdr3的氨基酸序列如seq id no.7所示；

7、所述单克隆抗体的轻链可变区的cdr1的氨基酸序列如seq id no.8所示；所述单克隆抗体的轻链可变区的cdr2的氨基酸序列如seq id no.9所示；所述单克隆抗体的轻链可变区的cdr3的氨基酸序列如seq id no.10所示。

8、第二方面，上述乙虫腈单克隆抗体，其特征在于：编码所述单克隆抗体的重链可变区的核苷酸序列如seq id no.3所示；编码所述单克隆抗体的轻链可变区的核苷酸序列如seq id no.4所示。

9、第三方面，本发明提供一种乙虫腈单克隆抗体在制备检测乙虫腈的检测制品中的应用。

10、该抗体可作为免疫检测原料，本实施例进一步建立了基于该抗体的胶体金免疫层析检测方法。

11、本发明具有如下优点：

12、本发明所述单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高等特点，可作为酶联免疫检测和胶体金免疫检测的原料。本发明为elisa、胶体金试纸条的研发推广奠定基础。

1.一种乙虫腈单克隆抗体，其特征在于，包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.5、seq id no.6、seq id no.7所示；所述轻链可变区的cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.8、seq id no.9、seqid no.10所示。

2.根据权利要求1所述的乙虫腈单克隆抗体，其特征在于，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no.1所示；所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.2所示。

3.一种如权利要求1所述的乙虫腈单克隆抗体在制备用于检测含乙虫腈的产品中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述产品为试纸条。

5.一种检测乙虫腈的试纸条，其特征在于，所述试纸条包括底板、样品吸收垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；