靶向犬神经生长因子的嵌合单克隆抗体及其应用

本发明涉及生物医药，特别是涉及靶向犬神经生长因子的嵌合单克隆抗体及其应用。

背景技术：

1、骨关节炎（osteoarthritis，oa）是一种以关节软骨退变、滑膜炎症、软骨下骨重塑及关节周围组织改变为主要特征的慢性、进行性关节疾病。疼痛是oa最主要的临床表现之一，并可导致患犬活动能力下降和关节功能受限，进而影响其生活质量。据报道，犬群体中oa及其相关临床症状具有较高的发生率，已成为影响伴侣动物健康和福利的重要疾病之一。目前，临床治疗主要以缓解疼痛、改善关节功能和提高动物生活质量为目的。非甾体抗炎药（non-steroidal anti-inflammatory drugs，nsaids）仍是犬oa疼痛管理的常用药物，但部分患犬在长期用药过程中可能存在胃肠道、肾脏及肝脏相关不良反应风险，且不同个体对药物的耐受性存在差异。因此，有必要开发具有不同作用机制、能够有效缓解犬oa相关疼痛的治疗药物。

2、神经生长因子（nerve growth factor，ngf）是一种参与感觉神经功能调控的重要神经营养因子。ngf可通过与酪氨酸激酶受体a（tropomyosin receptor kinase a，trka）结合并激活下游信号通路，参与外周伤害感受神经元的敏化，与oa相关疼痛的发生和维持密切相关。通过抗ngf抗体能够特异性结合ngf并阻断ngf/trka信号通路，从而降低外周痛觉敏化并缓解oa相关疼痛。因此ngf已成为oa相关疼痛治疗的重要靶点之一。

3、尽管现有技术已经对以ngf为靶点的oa疼痛治疗进行了研究，但仍有必要获得具有不同抗原结合序列、能够特异性结合犬ngf并高效抑制其生物学活性的抗体，从而为犬oa及其相关疼痛的治疗提供新的抗体药物候选物。也有望为我国犬oa生物治疗药物的自主研发提供新的技术基础。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供靶向犬神经生长因子的嵌合单克隆抗体及其应用，以解决上述现有技术存在的问题，本发明所提供的犬鼠嵌合单克隆抗体c1d4和c3e7具有高亲和力、高阻断活性，且安全性良好。经验证，c1d4与c3e7在mia诱导的小鼠骨关节炎性疼痛模型以及lps诱导的犬骨关节炎性疼痛模型中均具有治疗活性，本发明为犬骨关节炎的生物治疗提供了新的思路和方法，为犬骨关节炎药物的自主研发提供了技术基础。

2、为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

3、本发明提供一种特异性结合犬神经生长因子的犬鼠嵌合单克隆抗体c1d4，所述犬鼠嵌合单克隆抗体c1d4包括鼠源重链可变区vh、鼠源轻链可变区vl、犬源重链恒定区ch和犬源轻链恒定区cl；

4、所述鼠源重链可变区vh包括氨基酸序列如seq id no.7所示的重链cdr1、氨基酸序列如seq id no.8所示的重链cdr2和氨基酸序列如seq id no.9所示的重链cdr3；

5、所述鼠源轻链可变区vl包括氨基酸序列如seq id no.14所示的轻链cdr1、氨基酸序列如seq id no.15所示的轻链cdr2和氨基酸序列如seq id no.16所示的轻链cdr3；

6、所述犬源重链恒定区ch的氨基酸序列如seq id no.11所示；

7、所述犬源轻链恒定区cl的氨基酸序列如seq id no.18所示。

8、可选的是，所述鼠源重链可变区vh的氨基酸序列如seq id no.6所示；

9、所述鼠源轻链可变区vl的氨基酸序列如seq id no.13所示。

10、可选的是，所述鼠源重链可变区vh的编码基因的核苷酸序列如seq id no.5所示；

11、所述鼠源轻链可变区vl的编码基因的核苷酸序列如seq id no.12所示。

12、本发明还提供所述的犬鼠嵌合单克隆抗体c1d4在制备治疗骨关节炎和/或骨关节炎相关疼痛的药物中的应用。

13、本发明还提供一种治疗骨关节炎和/或骨关节炎相关疼痛的药物，所述药物以所述的犬鼠嵌合单克隆抗体c1d4作为活性成分。

14、本发明还提供一种特异性结合犬神经生长因子的犬鼠嵌合单克隆抗体c3e7，所述犬鼠嵌合单克隆抗体c3e7包括鼠源重链可变区vh、鼠源轻链可变区vl、犬源重链恒定区ch和犬源轻链恒定区cl；

15、所述鼠源重链可变区vh包括氨基酸序列如seq id no.21所示的重链cdr1、氨基酸序列如seq id no.22所示的重链cdr2和氨基酸序列如seq id no.23所示的重链cdr3；

16、所述鼠源轻链可变区vl包括氨基酸序列如seq id no.26所示的轻链cdr1、氨基酸序列如seq id no.27所示的轻链cdr2和氨基酸序列如seq id no.28所示的轻链cdr3；

17、所述犬源重链恒定区ch的氨基酸序列如seq id no.11所示；

18、所述犬源轻链恒定区cl的氨基酸序列如seq id no.18所示。

19、可选的是，所述鼠源重链可变区vh的氨基酸序列如seq id no.20所示；

20、所述鼠源轻链可变区vl的氨基酸序列如seq id no.25所示。

21、可选的是，所述鼠源重链可变区vh的编码基因的核苷酸序列如seq id no.19所示；

22、所述鼠源轻链可变区vl的编码基因的核苷酸序列如seq id no.24所示。

23、本发明还提供所述的犬鼠嵌合单克隆抗体c3e7在制备治疗骨关节炎和/或骨关节炎相关疼痛的药物中的应用。

24、本发明还提供一种治疗骨关节炎和/或骨关节炎相关疼痛的药物，所述药物以所述的犬鼠嵌合单克隆抗体c3e7作为活性成分。

25、本发明公开了以下技术效果：

26、本发明提供了两株具有不同抗原结合序列的犬鼠嵌合单克隆抗体c1d4和c3e7，其中，c1d4的重链可变区vh（鼠源）的氨基酸序列如seq id no.6所示，轻链可变区vl（鼠源）的氨基酸序列如seq id no.13所示，重链恒定区ch（犬源）的氨基酸序列如seq id no.11所示，轻链恒定区cl（犬源）的氨基酸序列如seq id no.18所示；c3e7的重链可变区vh（鼠源）的氨基酸序列如seq id no.20所示，轻链可变区vl（鼠源）的氨基酸序列如seq id no.25所示，重链恒定区ch的氨基酸序列如seq id no.11所示，轻链恒定区cl的氨基酸序列如seqid no.18所示。实验结果表明，c1d4和c3e7能够特异性结合犬ngf，具有高亲和力、高阻断活性，且安全性良好。经验证，c1d4与c3e7在mia诱导的小鼠骨关节炎性疼痛模型以及lps诱导的骨关节炎性疼痛模型中均具有治疗活性，本发明为犬骨关节炎的生物治疗提供了新的思路和方法，为犬骨关节炎及其相关疼痛药物的自主研发提供了技术基础。

1.一种特异性结合犬神经生长因子的犬鼠嵌合单克隆抗体c1d4，其特征在于，所述犬鼠嵌合单克隆抗体c1d4包括鼠源重链可变区vh、鼠源轻链可变区vl、犬源重链恒定区ch和犬源轻链恒定区cl；

2.如权利要求1所述的犬鼠嵌合单克隆抗体c1d4，其特征在于，所述鼠源重链可变区vh的氨基酸序列如seq id no.6所示；

3.如权利要求1所述的犬鼠嵌合单克隆抗体c1d4，其特征在于，所述鼠源重链可变区vh的编码基因的核苷酸序列如seq id no.5所示；

4.如权利要求1-3任一项所述的犬鼠嵌合单克隆抗体c1d4在制备治疗骨关节炎和/或骨关节炎相关疼痛的药物中的应用。

5.一种治疗骨关节炎和/或骨关节炎相关疼痛的药物，其特征在于，所述药物以权利要求1-3任一项所述的犬鼠嵌合单克隆抗体c1d4作为活性成分。

6.一种特异性结合犬神经生长因子的犬鼠嵌合单克隆抗体c3e7，其特征在于，所述犬鼠嵌合单克隆抗体c3e7包括鼠源重链可变区vh、鼠源轻链可变区vl、犬源重链恒定区ch和犬源轻链恒定区cl；

7.如权利要求6所述的犬鼠嵌合单克隆抗体c3e7，其特征在于，所述鼠源重链可变区vh的氨基酸序列如seq id no.20所示；

8.如权利要求6所述的犬鼠嵌合单克隆抗体c3e7，其特征在于，所述鼠源重链可变区vh的编码基因的核苷酸序列如seq id no.19所示；

9.如权利要求6-8任一项所述的犬鼠嵌合单克隆抗体c3e7在制备治疗骨关节炎和/或骨关节炎相关疼痛的药物中的应用。

10.一种治疗骨关节炎和/或骨关节炎相关疼痛的药物，其特征在于，所述药物以权利要求6-8任一项所述的犬鼠嵌合单克隆抗体c3e7作为活性成分。