用于在清洁组合物中使用的具有蛋白酶活性的多肽的制作方法

在本发明中，提供了使用新蛋白酶和包含新蛋白酶的组合物的方法。

背景技术：

1、酶作为石油化学的可持续替代品越来越多地用于各种应用。酶是可生物降解的，并且已经能够在较低温度发挥催化活性，从而减少能量消耗。特定地，在洗涤剂工业中，在洗涤配制品中应用酶以改善清洁效率和/或减少洗涤步骤中的能量消耗。

2、蛋白酶是能够水解蛋白质的酶。因此，蛋白酶已被用于去除蛋白质污渍，并已出于该目的而被添加到洗涤剂组合物中。在洗涤剂应用中，蛋白酶应在升高的温度和/或在洗涤剂和洗涤液的变性条件内稳定。

3、wo 2016/096711和wo 2016/096714描述了枯草杆菌酶变体和含有该变体的洗涤剂，与亲本枯草杆菌酶相比，该变体在液体洗涤剂中具有改善的稳定性和/或改善的洗涤性能。wo 2016/001450和wo 2020/002255披露了稳定性增加的枯草杆菌酶变体。wo 2010/056640也描述了枯草杆菌蛋白酶变体。us 6,376,450披露了多重取代的蛋白酶变体，该变体提供改善和增强的清洁能力。us 2020/172890 a1披露了性能增强且储存稳定的蛋白酶变体。wo 99/20770 a2、wo 03/062381 a2、wo 2011/140364 a1、wo 2011/072117 a1、wo2011/072099 a2、wo 2012/151534 a1、wo 2015/144932 a1、wo 2017/207762 a1、wo 2017/192692a1、wo 2018/069158 a1、wo 2022/225696 a2、wo 2024/094732、wo 2024/094735和wo 2024/094733也披露了蛋白酶变体。

4、然而，仍然需要新的蛋白酶，这些蛋白酶在苛刻的清洁组合物中是稳定的并且显示出良好的洗涤性能。

技术实现思路

1、本发明涉及一种用于清洁物体的方法，该方法包括在15°c至65°c的温度，使所述物体与清洁组合物接触，该清洁组合物包含具有蛋白酶活性的多肽或所述具有蛋白酶活性的多肽的片段，

2、其中所述具有蛋白酶活性的多肽：

3、(i)具有与seq id no: 1中所示的氨基酸序列至少80%但小于100%相同的氨基酸序列；

4、(ii)参考seq id no: 2的编号，在位置9处包含丝氨酸残基；

5、(iii)与seq id no: 3中所示的氨基酸序列相比并参考seq id no: 2的编号，在选自由21、25、38、160、210、212、228、261和271组成的组的氨基酸残基处包含至少一个氨基酸取代；并且

6、(iv)与seq id no: 3中所示的氨基酸序列相比并参考seq id no: 2的编号，在选自由18、24、56、78、103、109、144、182、183、194、204、218、248和260组成的组的氨基酸残基处包含至少一个氨基酸取代，

7、其中该变体多肽的片段包含全长变体多肽的100至259个连续氨基酸。

8、本发明进一步涉及一种组合物，该组合物包含：

9、(a)具有蛋白酶活性的多肽，其中所述具有蛋白酶活性的多肽：

10、(i)具有与seq id no: 1中所示的氨基酸序列至少80%但小于100%相同的氨基酸序列；

11、(ii)参考seq id no: 2的编号，在位置9处包含丝氨酸残基；

12、(iii)与seq id no: 3中所示的氨基酸序列相比并参考seq id no: 2的编号，在选自由21、25、38、160、210、212、228、261和271组成的组的氨基酸残基处包含至少一个氨基酸取代；并且

13、(iv)与seq id no: 3中所示的氨基酸序列相比并参考seq id no: 2的编号，在选自由18、24、56、78、103、109、144、182、183、194、204、218、248和260组成的组的氨基酸残基处包含至少一个氨基酸取代，

14、其中该变体多肽的片段包含全长变体多肽的100至259个连续氨基酸；以及

15、(b)至少一种选自由新戊二醇、γ-戊内酯、1,6-己二醇和二乙二醇组成的组的增溶剂。

1.一种用于清洁物体的方法，该方法包括在15°c至65°c的温度，使所述物体与清洁组合物接触，该清洁组合物包含具有蛋白酶活性的变体多肽或所述具有蛋白酶活性的变体多肽的片段，

2.根据权利要求1所述的方法，其中参考seq id no: 2的编号，该变体多肽或其片段在位置59处包含谷氨酰胺。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中该变体多肽或其片段

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该变体多肽或其片段

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中：

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述变体多肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：seq id no: 4、seq id no: 5、seq id no: 6、seq id no: 7、seq id no:8、seq id no: 9、seq id no: 10、seq id no: 11、seq id no: 12和seq id no: 13。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述物体是纺织品或硬表面，优选地餐具。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该物体具有蛋白酶敏感的污渍。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述多肽具有与根据seq id no: 3的蛋白酶相当的洗涤性能，并且与根据seq id no: 3的蛋白酶相比具有增加的储存稳定性，优选地其中所述多肽对选自由蛋、血液/奶/墨水、奶/巧克力和草/菠菜组成的组的污渍具有与根据seq id no: 3的蛋白酶相当的洗涤性能。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该清洁组合物是液体洗涤剂组合物。

11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该清洁组合物包含与前述权利要求中任一项所述的变体多肽不同的一种或多种另外的酶，优选地选自由以下组成的组的一种或多种另外的酶：淀粉酶、另外的蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶、半纤维素酶、甘露聚糖酶、木聚糖酶、dna酶、分散蛋白、果胶酶、氧化还原酶和角质酶，优选地选自淀粉酶、甘露聚糖酶、纤维素酶和脂肪酶，最优选地淀粉酶。

12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该清洁组合物包含一种或多种表面活性剂和/或一种或多种助洗剂，优选地强螯合助洗剂。

13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该清洁组合物进一步包含2-苯氧基乙醇和/或4,4’-二氯2-羟基二苯基醚，优选地包含范围为按该组合物的重量计2 ppm至5%的量的苯氧基乙醇；更优选地包含按该组合物的重量计0.1%至2%的苯氧基乙醇，和/或优选地包含0.001%至3%、优选地0.002%至1%、更优选地0.01%至0.6%的浓度的4,4’-二氯2-羟基二苯基醚，各自按该组合物的重量计。

14.一种组合物，其包含：

15.根据权利要求14所述的组合物，其中该组合物包含蛋白酶抑制剂，并且该组合物中蛋白酶抑制剂与蛋白酶的摩尔比不超过3:1、优选地不超过1:1，或者其中该组合物不包含蛋白酶抑制剂，优选地其中该组合物不包含肽醛蛋白酶抑制剂、或其盐或亚硫酸氢盐加合物。