一种恒温核酸扩增反应管的制作方法

本技术涉及医学检测工具，具体的，涉及一种恒温核酸扩增反应管。

背景技术：

1、重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification，rpa)是基于重组酶聚合酶介导的扩增原理，模拟体内dna复制的酶反应过程，依赖特定的酶和蛋白组合(重组酶、单链结合蛋白和dna聚合酶)对dna模板进行特异性扩增，是一种恒温核酸扩增技术，可在接近体温条件下实现快速特异性扩增(25℃-42℃，5-30min)，作为一种等温技术减少了对高精度昂贵仪器、稳定电力供应设施及高级别实验室的依赖，只需要一个恒温装置就可完成，且可通过荧光分析装置判别是否存在扩增产物，具有对设施和操作要求均较为简单的特点，已广泛应用于生命科学研究、医学检测、农业、食品安全、转基因检测等多个领域；

2、为了进一步提高rpa的检测灵敏度，有研究者提出了巢式rpa检测方法：先用外引物扩增目的基因第一片段，然后用内引物扩增完全位于第一扩增片段内的目的基因第二片段。为了消除酶的荧光信号影响，在第一次的rpa反应体系中不包含荧光探针。在第二次rpa反应中，加入荧光探针。经实验证实nestrpa具有超高灵敏度，将为新冠病毒、流感病毒、猪瘟病毒等各种病毒的尽早发现提供有力的技术支撑。但是，nestrpa要经两次rpa反应，第一次rpa反应完之后，需打开反应管盖子，加入第二次rpa反应所需的内引物和探针等，再盖上反应管盖子进行第二次rpa反应，直至反应结束检测结果。

3、其中，在第一次rpa反应完之后打开反应管盖子的过程中，容易产生核酸气溶胶污染，导致假阳性结果。因此，急需开发一种可以“一管法”完成nestrpa的反应管，在第一次rpa反应完之后无需打开反应管盖子，就可进行第二次rpa反应。

技术实现思路

1、本实用新型提出一种恒温核酸扩增反应管，解决了相关技术中的反应管容易出现污染且降低检测结果的准确度的问题。

2、本实用新型的技术方案如下： 一种恒温核酸扩增反应管，包括用于预存第二反应物的第一管体，所述第一管体的管口端螺纹连接有第二管体，所述第二管体的内侧固定连接有封口膜，所述第二管体的管口端滑动配合有管盖，所述管盖与封口膜之间形成用于放入第一反应物的密封舱，所述第一管体内侧的一端固定连接有锥形穿刺套，所述锥形穿刺套上开设有若干漏孔，所述第一管体的内侧转动连接有转杆，所述转杆的外侧固定连接有若干沿着转杆长度方向等距分布的磁条，所述第一管体的外侧固定连接有两个平行设置的限位环，两个所述限位环之间设置有用于驱使转杆转动的驱动件。

3、优选的，所述第一管体的外径与第二管体的内径相同，所述第一管体的长度大于第二管体。

4、优选的，所述第一管体的管口端固定连接有外螺纹，所述第二管体的内侧开设有与外螺纹螺纹配合的内螺纹槽。

5、优选的，所述封口膜为脆性金属箔或聚合物隔膜。

6、优选的，所述第二管体的外侧固定连接有第一旋转套，所述第一旋转套的外沿开设有若干环形分布的防滑槽。

7、优选的，所述驱动件包括套设在第一管体外侧的管套，所述管套与两个限位环转动连接，所述管套内侧的一端固定连接有弧形板，所述管套内侧的另一端固定连接有弧形磁块，所述弧形磁块与弧形板拼接成圆环结构。

8、优选的，所述弧形磁块的长度大于若干磁条的排布长度，所述弧形磁块与第一管体同心设置。

9、优选的，所述管套的外侧固定连接有第二旋转帽，所述第二旋转帽的外沿开设有若干环形分布的防滑槽。

10、本实用新型的工作原理及有益效果为：

11、1、第一次反应在第二管体的密封舱内完成后，只需取下管盖，将第二管体与预存第二反应物的第一管体螺纹连接，通过锥形穿刺套刺破封口膜，使第一次反应产物流入第一管体，避免了开盖带来的污染风险；整个流程在密封环境下进行，显著降低了假阳性概率，提高了医学检测的准确性。

12、2、封口膜采用脆性金属箔或聚合物隔膜，具有高脆性和耐温性，确保第一次反应物在储存和反应过程中不会泄漏或蒸发；封口膜将第一反应物和第二反应物完全隔离，直至触发混合，避免了预存试剂的交叉污染或降解。

13、3、通过驱动件带动转杆上的磁条旋转，对混合液进行磁力搅拌，使核酸模板与第二反应物快速均匀混合，有利于第二次反应的效率和重复性；等距分布的磁条和优化设计的驱动件提供了连续、稳定的搅拌力，减少了反应误差。

1.一种恒温核酸扩增反应管，其特征在于，包括用于预存第二反应物的第一管体（1），所述第一管体（1）的管口端螺纹连接有第二管体（2），所述第二管体（2）的内侧固定连接有封口膜（23），所述第二管体（2）的管口端滑动配合有管盖（3），所述管盖（3）与封口膜（23）之间形成用于放入第一反应物的密封舱，所述第一管体（1）内侧的一端固定连接有锥形穿刺套（12），所述锥形穿刺套（12）上开设有若干漏孔（13），所述第一管体（1）的内侧转动连接有转杆（14），所述转杆（14）的外侧固定连接有若干沿着转杆（14）长度方向等距分布的磁条（15），所述第一管体（1）的外侧固定连接有两个平行设置的限位环（16），两个所述限位环（16）之间设置有用于驱使转杆（14）转动的驱动件（17）。

2.根据权利要求1所述的一种恒温核酸扩增反应管，其特征在于，所述第一管体（1）的外径与第二管体（2）的内径相同，所述第一管体（1）的长度大于第二管体（2）。

3.根据权利要求1所述的一种恒温核酸扩增反应管，其特征在于，所述第一管体（1）的管口端固定连接有外螺纹（11），所述第二管体（2）的内侧开设有与外螺纹（11）螺纹配合的内螺纹槽（21）。

4.根据权利要求1所述的一种恒温核酸扩增反应管，其特征在于，所述封口膜（23）为脆性金属箔或聚合物隔膜。

5.根据权利要求1所述的一种恒温核酸扩增反应管，其特征在于，所述第二管体（2）的外侧固定连接有第一旋转套（22），所述第一旋转套（22）的外沿开设有若干环形分布的防滑槽。

6.根据权利要求1所述的一种恒温核酸扩增反应管，其特征在于，所述驱动件（17）包括套设在第一管体（1）外侧的管套（171），所述管套（171）与两个限位环（16）转动连接，所述管套（171）内侧的一端固定连接有弧形板（173），所述管套（171）内侧的另一端固定连接有弧形磁块（174），所述弧形磁块（174）与弧形板（173）拼接成圆环结构。

7.根据权利要求6所述的一种恒温核酸扩增反应管，其特征在于，所述弧形磁块（174）的长度大于若干磁条（15）的排布长度，所述弧形磁块（174）与第一管体（1）同心设置。

8.根据权利要求6所述的一种恒温核酸扩增反应管，其特征在于，所述管套（171）的外侧固定连接有第二旋转帽（172），所述第二旋转帽（172）的外沿开设有若干环形分布的防滑槽。