蔗糖合成酶突变体及应用的制作方法

本申请涉及生物，尤其涉及一种蔗糖合成酶突变体及应用。

背景技术：

1、乙基香兰素-β-d-吡喃葡萄糖苷是一种酚苷，由于酚的亲核性较差，酚类糖苷化的发生比较困难。目前，乙基香兰素-β-d-吡喃葡萄糖苷的生物制备工艺中，以乙基香兰素为底物，以udpg为糖基供体，通过糖基转移酶催化得到产物，由于udpg成本昂贵，极大限制了乙基香兰素-β-d-吡喃葡萄糖苷的合成效率。

技术实现思路

1、鉴于以上问题，本申请实施例提供一种蔗糖合成酶突变体及应用，以解决上述不利于提高乙基香兰素-β-d-吡喃葡萄糖苷的合成效率的技术问题。

2、第一方面，本申请实施例提供一种蔗糖合成酶突变体，所述蔗糖合成酶突变体的氨基酸序列如seq id no：16～seq id no：17所示。

3、第二方面，本申请实施例提供一种蔗糖合成酶突变体基因，所述蔗糖合成酶突变体基因编码上述的蔗糖合成酶突变体。

4、第三方面，本申请实施例提供一种重组载体，所述重组载体包括上述的蔗糖合成酶突变体基因。

5、第四方面，本申请实施例提供一种重组工程菌，所述重组工程菌包括上述的重组载体。

6、可选地，所述重组工程菌为大肠杆菌，所述大肠杆菌为

e. colibl21(de3)。

7、第五方面，本申请实施例提供一种乙基香兰素-β-d-吡喃葡萄糖苷合成系统，包括乙基香兰素、udpg和/或udp、蔗糖、糖基转移酶以及蔗糖合成酶突变体，所述蔗糖合成酶突变体的氨基酸序列如seq id no：16～seq id no：17所示。

8、可选地，所述蔗糖合成酶突变体来源于含蔗糖合成酶突变体编码基因的第一重组工程菌，所述糖基转移酶来源于含糖基转移酶编码基因的第二重组工程菌。

9、可选地，所述蔗糖合成酶突变体为所述第一重组工程菌诱导培养获得的第一湿菌体或所述第一湿菌体破碎得到的粗酶液或所述第一湿菌体制备的固定化细胞；所述糖基转移酶为所述第二重组工程菌诱导培养获得的第二湿菌体或所述第二湿菌体破碎得到的粗酶液或所述第二湿菌体制备的固定化细胞。

10、第六方面，本申请实施例提供一种乙基香兰素-β-d-吡喃葡萄糖苷的生物制备方法，在蔗糖合成酶突变体以及蔗糖存在下，以乙基香兰素为底物，加入糖基转移酶，40℃～50℃下，于ph为7.0～9.0的反应体系中反应，得到产物，所述蔗糖合成酶突变体的氨基酸序列如seq id no：16～seq id no：17所示。

11、可选地，所述蔗糖合成酶突变体为上述的重组工程菌。

12、本申请实施例提供的蔗糖合成酶突变体及应用，蔗糖合成酶突变体的氨基酸序列如seq id no：16～seq id no：17所示，其能够高效地将蔗糖分子中的葡萄糖基转移给udp，从而生成udpg和果糖，其在乙基香兰素-β-d-吡喃葡萄糖苷合成体系中，能够高效地催化蔗糖生成udpg，使得乙基香兰素-β-d-吡喃葡萄糖苷合成所需的糖基供体充足，进而提高了乙基香兰素-β-d-吡喃葡萄糖苷的合成效率。

13、本申请的这些方面或其他方面在以下实施例的描述中会更加简明易懂。

1.一种蔗糖合成酶突变体，其特征在于，所述蔗糖合成酶突变体的氨基酸序列如seqid no：16～seq id no：17所示。

2.一种蔗糖合成酶突变体基因，其特征在于，所述蔗糖合成酶突变体基因编码如权利要求1所述的蔗糖合成酶突变体。

3.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体包括如权利要求2所述的蔗糖合成酶突变体基因。

4.一种重组工程菌，其特征在于，所述重组工程菌包括如权利要求3所述的重组载体。

5.根据权利要求4所述的重组工程菌，其特征在于，所述重组工程菌为大肠杆菌，所述大肠杆菌为e. coli bl21(de3)。

6.一种乙基香兰素-β-d-吡喃葡萄糖苷合成系统，其特征在于，包括乙基香兰素、udpg和/或udp、蔗糖、糖基转移酶以及蔗糖合成酶突变体，所述蔗糖合成酶突变体的氨基酸序列如seq id no：16～seq id no：17所示。

7.根据权利要求6所述的乙基香兰素-β-d-吡喃葡萄糖苷合成系统，其特征在于，所述蔗糖合成酶突变体来源于含蔗糖合成酶突变体编码基因的第一重组工程菌，所述糖基转移酶来源于含糖基转移酶编码基因的第二重组工程菌。

8.根据权利要求6所述的乙基香兰素-β-d-吡喃葡萄糖苷合成系统，其特征在于，所述蔗糖合成酶突变体为所述第一重组工程菌诱导培养获得的第一湿菌体或所述第一湿菌体破碎得到的粗酶液或所述第一湿菌体制备的固定化细胞；所述糖基转移酶为所述第二重组工程菌诱导培养获得的第二湿菌体或所述第二湿菌体破碎得到的粗酶液或所述第二湿菌体制备的固定化细胞。

9.一种乙基香兰素-β-d-吡喃葡萄糖苷的生物制备方法，其特征在于，在蔗糖合成酶突变体以及蔗糖存在下，以乙基香兰素为底物，加入糖基转移酶，40℃～50℃下，于ph为7.0～9.0的反应体系中反应，得到产物，所述蔗糖合成酶突变体的氨基酸序列如seq id no：16～seq id no：17所示。

10.根据权利要求9所述的乙基香兰素-β-d-吡喃葡萄糖苷的生物制备方法，其特征在于，所述蔗糖合成酶突变体为如权利要求4所述的重组工程菌。