一种用于缓解晕动症的滴鼻制剂及其制备方法和应用

本发明涉及生物，具体是一种用于缓解晕动症的滴鼻制剂及其制备方法和应用。

背景技术：

1、晕动症（motion sickness，ms）是由前庭、视觉和本体感觉系统信息冲突引发的自主神经功能紊乱，表现为头痛、恶心、呕吐、冷汗、疲劳嗜睡等症状，严重影响易感人群的生活质量。流行病学研究显示，约30%人群有明显晕车经历，自动驾驶场景发病率达50%，军事高强度作业及ar/vr技术应用诱发的视觉性晕动症发病率更是高达60%。

2、目前临床常用的晕动症治疗药物主要包括抗胆碱能药物（如东莨菪碱）、第一代抗组胺药（如茶苯海明）、钙通道阻滞剂（如桂利嗪）及多巴胺受体拮抗剂等。东莨菪碱透皮贴剂需提前6-8小时使用，且易引发口干、视力模糊、嗜睡等副作用；茶苯海明药效维持时间短，同样存在嗜睡不良反应；异丙嗪需肌肉注射，使用不便且可能导致呼吸抑制；长期使用多巴胺受体拮抗剂还可能引发锥体外系症状。

3、近年来，生姜、薄荷醇（menthol，mnt）等中药成分因安全性较高被用于晕动症缓解，但口服给药存在胃肠道吸收慢、肝脏首过效应明显、入脑剂量低等问题，且呕吐剧烈患者无法正常吞服。外泌体（exosomes，exo）作为直径30-200nm的细胞外囊泡，具有生物相容性好、低免疫原性、可穿越血脑屏障及靶向性强等优势，已成为新型药物递送载体。滴鼻给药可通过鼻腔黏膜-嗅神经通路直接入脑，起效迅速且避免首过效应，但目前尚无上市的晕动症滴鼻给药制剂。因此，针对以上现状，迫切需要提供一种用于缓解晕动症的滴鼻制剂及其制备方法和应用，以克服当前实际应用中的不足。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种用于缓解晕动症的滴鼻制剂及其制备方法和应用，旨在解决上述背景技术中的问题。

2、本发明是这样实现的，一种用于缓解晕动症的滴鼻制剂，包括载药外泌体，所述载药外泌体为装载有l-薄荷醇的小鼠海马神经元细胞系ht22来源的外泌体。

3、作为本发明进一步的方案：所述载药外泌体中l-薄荷醇的浓度为0.78mm，外泌体的剂量为1.2×109 particles/只。

4、本发明还提供一种如上所述的用于缓解晕动症的滴鼻制剂的制备方法，包括以下步骤：

5、s1、制备含exo的完全培养基；

6、s2、密度梯度离心法提取ht22来源的exo；

7、s3、超声辅助exo装载mnt，得到载药外泌体exo-mnt；

8、s4、将载药外泌体制备成滴鼻制剂。

9、作为本发明进一步的方案：步骤s1的具体步骤为：

10、4℃，100000g超速离心胎牛血清15h，去除血清中的exo；0.22μm滤器过滤，分装冻存；

11、将ht22培养至细胞融合度达到70%时，d-pbs洗涤细胞2次，加入无exo血清培养基，48h后收集细胞上清。

12、作为本发明进一步的方案：步骤s2的具体步骤为：

13、4℃，800g离心10min，收集上清液；

14、4℃，2000g离心10min，收集上清液；

15、4℃，16000g离心30min，收集上清液；

16、将上清液转移至超速离心管，4℃，120000g-150000g离心70min，弃上清，用无菌预冷pbs洗涤沉淀；

17、再次配平，超速离心，弃上清，用无菌预冷pbs 20-50μl重悬沉淀。

18、作为本发明进一步的方案：步骤s3的具体步骤为：

19、将外泌体用含ph 7.4的10 mm tris、10 mm mgcl2和1 mm苯基甲基磺酰氟的200 μl低渗裂解液处理30 min；

20、冰上超声5 s，振幅20%，16000g离心30min，弃上清；

21、用1mm mnt溶液重悬沉淀，冰上超声2min；

22、16000g离心30min，弃上清，pbs洗涤沉淀，得到exo-mnt。

23、本发明还提供一种如上所述的滴鼻制剂在制备缓解晕动症的药物中的应用。

24、作为本发明进一步的方案：所述滴鼻制剂的给药方式为滴鼻给药，每次给药剂量为20μl。

25、作为本发明进一步的方案：所述滴鼻制剂于晕动刺激前30min给药。

26、作为本发明进一步的方案：所述晕动症包括交通出行诱发的晕动症和前庭功能相关的特殊军事作业活动诱发的晕动症。

27、与现有技术相比，本发明的有益效果：

28、本发明通过超声法辅助制备用于治疗ms的ht22来源的exo-mnt。与既往治疗ms的药物相比，exo-mnt副作用较小，小鼠未出现模糊、嗜睡、眩晕等不良反应。滴鼻的给药方式，有效避免了呕吐剧烈者无法采用传统口服的方式摄入药物的缺点；由于滴鼻给药可以直接入脑，减弱了胃肠道吸收与肝脏的首过效应，有利于精确靶向与ms关系密切的脑区。

29、行为学实验表明，exo-mnt组小鼠运动能力的改善程度优于mnt组小鼠。对于平衡木实验，exo-mnt组小鼠的通过时间与脚滑次数显著下降，mnt组仅具有下降的趋势，且与mnt组相比，exo-mnt组小鼠的通过时间与脚滑次数均也有下降的趋势。对于圆筒实验，exo-mnt组小鼠单脚扒壁次数的百分比显著下降，双脚扒壁次数的百分比显著上升，mnt组则仅具有下降或上升的趋势。

30、elisa结果表明，exo-mnt组小鼠血清中的avp、cort、na、epi、β-ep、acth含量的恢复程度均优于mnt组，表明滴鼻给予exo-mnt后，ms小鼠的激素水平逐渐向正常水平恢复。以上结果共同表明，滴鼻给予exo-mnt对ms小鼠的治疗效果优于mnt。

1.一种用于缓解晕动症的滴鼻制剂，其特征在于，包括载药外泌体，所述载药外泌体为装载有l-薄荷醇的小鼠海马神经元细胞系ht22来源的外泌体。

2.根据权利要求1所述的用于缓解晕动症的滴鼻制剂，其特征在于，所述载药外泌体中l-薄荷醇的浓度为0.78mm，外泌体的剂量为1.2×109 particles/只。

3.一种如权利要求1或2所述的用于缓解晕动症的滴鼻制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤s1的具体步骤为：

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤s2的具体步骤为：

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤s3的具体步骤为：

7.一种如权利要求1或2所述的滴鼻制剂在制备缓解晕动症的药物中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述滴鼻制剂的给药方式为滴鼻给药，每次给药剂量为20μl。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述滴鼻制剂于晕动刺激前30min给药。

10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述晕动症包括交通出行诱发的晕动症和前庭功能相关的特殊军事作业活动诱发的晕动症。