一种减毒活疫苗及其应用

本发明属于水产养殖动物病害免疫防治，具体的说是一种减毒活疫苗及其应用。

背景技术：

1、气单胞菌（

aeromonas spp.）是广泛存在于淡水及半咸水环境中的一类重要条件性致病菌，可感染多种水产养殖动物，引发败血症、溃疡病及肠炎等，常导致大规模死亡，给全球水产养殖业造成重大的经济损失。目前，针对该病的防控主要依赖于抗生素等化学药物，但长期、不规范的使用已导致气单胞菌耐药性问题日益严峻，不仅使得防治效果下降，更引发了水产品中药物残留超标、环境污染及生态系统破坏等一系列公共安全问题。因此，寻求安全、高效、环保的抗生素替代策略已成为产业发展的迫切需求。

2、疫苗接种被认为是预防和控制细菌性鱼病最为经济、可持续的有效途径之一。目前，鱼类疫苗的研究主要集中于灭活疫苗、亚单位疫苗、dna疫苗及减毒活疫苗等类型。其中，灭活疫苗和亚单位疫苗虽然安全性较高，但通常存在免疫保护期较短、需要佐剂增强且主要激发体液免疫等局限性，特别是通过浸泡等适用大规模免疫的途径接种时，其抗原递呈效率低，免疫效果常不理想。减毒活疫苗能够模拟自然感染过程，在宿主体内有限复制，可同时激发强烈的体液免疫、细胞免疫及黏膜免疫应答，通常能提供更全面、持久的保护力，且更适合通过浸泡或口服等无应激方式进行群体免疫，在实际养殖生产中具有显著的应用优势。

3、目前，适用于鱼类、特别是能通过浸泡免疫有效递送的安全气单胞菌减毒活疫苗产品，在市场上依然稀缺。我国仅有一种获批生产的气单胞菌灭活疫苗，采用灭活的气单胞菌作为抗原，该疫苗通常需通过注射途径给药，但注射方式劳动强度大、易造成鱼体应激损伤，难以适用于苗种阶段或小规格鱼类的群体免疫。

4、综上所述，开发一种基于毒力明确减弱、遗传稳定、能通过便捷方式免疫并能提供良好保护力的减毒活疫苗，是解决当前气单胞菌病防治困境的重要研究方向，也具有显著的产业应用价值。

技术实现思路

1、本发明目的在于提供一种amax2作为鱼用减毒活疫苗的应用。

2、为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

3、一种减毒活疫苗，减毒活疫苗的活性成分含重组气单胞菌；

4、所述重组气单胞菌为在amax1作为宿主菌株敲除针对真核宿主的毒性因子所得，即amax2；其中，敲除的针对真核宿主的毒性因子为exoa、gcat、mepa、aspa、ahpb和msbb。

5、所述重组气单胞菌为将amax2菌株培养后，重悬，待用。

6、一种所述减毒活疫苗的应用，所述含amax2重组气单胞菌的减毒活疫苗在作为制备预防鱼类气单胞菌病的水产动物疫苗、免疫制剂或生物防控制剂中的应用。

7、一种减毒活疫苗组合物，疫苗组合物中活性成分含所述减毒活疫苗中活性成分。

8、上述疫苗或疫苗组合物免疫方式：浸泡免疫、注射免疫、口服免疫。

9、上述重组气单胞菌将amax2菌株的构建参见申请202511183646.2，发明名称一种重组气单胞菌及其构建方法与应用中记载。

10、所述注射免疫时，重组气单胞菌将amax2菌株培养后，用无菌磷酸盐缓冲液重悬，待用；一般重悬液中amax2浓度为5×107 cfu/ml。

11、本发明所具有的优点：

12、本发明以amax2菌株为活性成分制备减毒活疫苗或疫苗组合物，其预防或减轻气单胞菌感染，能够显著降低毒力的同时保留足够免疫原性。针对鱼类养殖特点，本发明疫苗可采用浸泡或注射两种方式进行免疫，其中浸泡免疫法操作简便、应激小，特别适用于鱼苗及大规模群体免疫，具有显著的实用优势。为验证疫苗效果，在斑马鱼模型中进行了系统评价：通过浸泡或注射途径免疫健康斑马鱼后，再用强毒力野生型气单胞菌攻毒，结果显示免疫组可获得较高的相对免疫保护率，证明疫苗能有效抵御野生型气单胞菌的侵袭。进一步的免疫机制研究表明，注射接种该疫苗后，斑马鱼体内免疫相关基因如

igm、

igt、

il-1β、

tnf-α的表达量显著上调，证实本发明疫苗能够有效激活宿主的固有免疫与适应性免疫应答，从而建立起针对病原的特异性免疫保护。本发明所提供的疫苗具有安全性高、免疫保护效果好、使用便捷、可激发全面免疫应答及环保无残留等突出优点，为气单胞菌病的防控提供了一种全新的、具有重大应用潜力的生物制品解决方案，对推动水产养殖业的绿色健康发展具有重要意义。

1.一种减毒活疫苗，其特征在于：减毒活疫苗的活性成分含重组气单胞菌；所述重组气单胞菌为在amax1作为宿主菌株敲除针对真核宿主的毒性因子所得，即amax2；其中，敲除的针对真核宿主的毒性因子为exoa、gcat、mepa、aspa、ahpb和msbb。

2.根据权利要求1所述的减毒活疫苗，其特征在于：所述重组气单胞菌为将amax2菌株培养后，重悬，待用。

3.一种权利要求1所述的减毒活疫苗的应用，其特征在于：所述减毒活疫苗在制备预防鱼类气单胞菌病的水产动物疫苗、免疫制剂或生物防控制剂中的应用。

4.一种减毒活疫苗组合物，其特征在于：疫苗组合物的活性成分中含权利要求1中所述减毒活疫苗。