一种用于修复猪皮肤破溃的负载外泌体的复合凝胶及其制备方法

本发明涉及生物医用材料及组织工程，尤其涉及一种用于修复猪皮肤破溃的负载外泌体的复合凝胶及其制备方法。

背景技术：

1、猪皮肤破溃在兽医临床多发，常迁延不愈，主要伴随持续炎症、血管新生障碍与细胞外基质重塑异常。损伤部位炎症无法正常消退，促炎因子持续释放并与继发感染形成恶性循环；慢性炎症抑制血管内皮增殖，阻碍微血管新生，造成创面微循环不良、肉芽生长受阻；同时基质金属蛋白酶过度活化，打破胶原蛋白合成与降解平衡，细胞外基质构建紊乱。三者相互影响，共同抑制肉芽形成与上皮爬行，导致创面难以愈合。单纯抗菌仅能控制感染，难以改善组织修复缺陷，临床需兼顾抗感染、调控炎症、促进血管再生及平衡基质重塑，方可有效促进创面修复。

2、猪皮肤破溃治疗中，传统敷料应用效果存在明显局限性。常规纱布等传统敷料仅具备简单覆盖、吸收渗出物与物理隔绝污染的基础作用，难以干预创面内在病理紊乱。这类敷料易与新生肉芽组织粘连，更换时易造成二次机械损伤，持续刺激局部炎症；无法主动调节创面微环境，不能缓解病灶持续性炎症状态，也难以改善血管新生障碍，更无法调控细胞外基质异常重塑。同时传统敷料保湿性能较差，易导致创面干燥结痂、痂下积脓，不利于上皮细胞迁移生长，仅能被动防护而不具备促修复活性。因此仅依靠传统敷料处理顽固性猪皮肤破溃，往往愈合周期长、复发风险高，难以解决创面迁延不愈的核心问题，亟须一种兼具仿生结构、抗炎、促愈合及可注射性的生物活性材料。

3、基于此，提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种用于修复猪皮肤破溃的负载外泌体的复合凝胶及其制备方法，以解决现有技术中传统敷料愈合周期长、复发风险高，难以解决创面迁延不愈的问题。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种负载外泌体的复合凝胶的制备方法，包括如下步骤：

4、（1）将脱细胞猪皮与脱细胞猪心混合，粉碎，得到混合粉末；

5、（2）将混合粉末与消化溶液混合，反应36~60h，调节ph值为7.2~7.4，得到脱细胞基质溶液；

6、（3）将脱细胞基质溶液和丝素蛋白溶液混合，得到混合溶液1，将硫辛酸、海藻酸钠和壳聚糖与混合溶液1混合，搅拌50~70min得到混合溶液2；

7、（4）将外泌体溶液、混合溶液2和氯化钙溶液混合，得到负载外泌体的复合凝胶。

8、优选的，步骤（1）中脱细胞猪皮与脱细胞猪心混合的质量比为1~2：1~2；所述粉碎的粒径为0.2~0.4mm。

9、优选的，步骤（2）中所述混合粉末与消化溶液混合的质量体积比为1~3g：100ml。

10、优选的，步骤（2）中所述消化溶液以水为溶剂包括如下浓度的组分：

11、0.5~1.5mg/ml的胃蛋白酶和0.05~0.15mol/l的盐酸。

12、优选的，步骤（3）中所述脱细胞基质溶液与丝素蛋白溶液混合的体积比为1~2：1~2；

13、所述丝素蛋白溶液的浓度为15~25wt%。

14、优选的，步骤（3）中所述混合溶液2中硫辛酸的浓度为4~6mg/ml，海藻酸钠的浓度为2~4mg/ml，壳聚糖的浓度为2~4mg/ml。

15、优选的，步骤（4）中所述外泌体溶液为猪脂肪间充质干细胞外泌体溶液，浓度为1~3×1012颗粒/ml。

16、优选的，步骤（4）中所述外泌体溶液、混合溶液2和氯化钙溶液混合的体积比为1~2：9~11：1~1.2；

17、所述氯化钙溶液的浓度为0.1~0.3mol/l。

18、本发明提供了所述的制备方法制备得到的负载外泌体的复合凝胶。

19、本发明提供了所述的负载外泌体的复合凝胶在制备修复猪皮肤破溃的产品中的应用。

20、本发明具有如下技术效果和优点：

21、本发明复合水凝胶可用于修复猪皮肤全层缺损创面，尤其适用于猪的慢性、难愈性皮肤破溃；可作为外泌体载体，实现长效、可控的生物活性释放。本发明的复合水凝胶实现了结构支持（ecm+sf）、抗氧化（la）、抗菌（cs）、免疫调节（cs+外泌体）与能量代谢重编程的多维度协同；在动物模型中显著加快创面闭合，促进再上皮化、胶原沉积与基底膜重塑；为猪皮肤破溃提供了一种具备临床转化潜力的生物材料策略。

1.一种负载外泌体的复合凝胶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中脱细胞猪皮与脱细胞猪心混合的质量比为1~2：1~2；所述粉碎的粒径为0.2~0.4mm。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述混合粉末与消化溶液混合的质量体积比为1~3g：100ml。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述消化溶液以水为溶剂包括如下浓度的组分：

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述脱细胞基质溶液与丝素蛋白溶液混合的体积比为1~2：1~2；

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述混合溶液2中硫辛酸的浓度为4~6mg/ml，海藻酸钠的浓度为2~4mg/ml，壳聚糖的浓度为2~4mg/ml。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（4）中所述外泌体溶液为猪脂肪间充质干细胞外泌体溶液，浓度为1~3×1012颗粒/ml。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（4）中所述外泌体溶液、混合溶液2和氯化钙溶液混合的体积比为1~2：9~11：1~1.2；

9.权利要求1~8任意一项所述的制备方法制备得到的负载外泌体的复合凝胶。

10.权利要求9所述的负载外泌体的复合凝胶在制备修复猪皮肤破溃的产品中的应用。