灵芝外泌体在制备抗过敏性鼻炎产品中的应用与产品的制作方法

本发明属于生物技术与食品科学的，具体而言，涉及到灵芝外泌体在制备抗过敏性鼻炎产品中的应用与产品。

背景技术：

1、灵芝（ganoderma lucidum）作为我国传统药食同源真菌，在中医典籍中早有记载。《神农本草经》将其列为“上品”，称其“主胸中结，益心气，补中，增智慧，不忘”；《本草纲目》则记载其“疗虚劳，治痔”。现代研究表明，灵芝的药理活性与其丰富的生物活性成分密切相关，主要包括：多糖类：以β-葡聚糖为主，通过激活巨噬细胞、t淋巴细胞等免疫细胞表面的受体（如tlr4），调节免疫因子分泌，发挥免疫调节、抗肿瘤作用；三萜类化合物：如灵芝酸a、b、c等，具有抗炎、抗氧化、抑制肿瘤细胞增殖的活性，其机制与抑制nf-κb通路、清除自由基相关；蛋白质与多肽：部分小分子肽可通过肠道吸收，参与机体代谢调节，增强细胞活力。然而，传统灵芝产品（如灵芝孢子粉、水煎剂）存在明显局限性：一是活性成分提取率低，如三萜类成分因脂溶性强，水提工艺得率不足0.3%；二是生物利用度差，大分子多糖需经肠道菌群分解为小分子后才能吸收，利用率不足20%；三是功能单一，多依赖单一成分，未发挥活性成分的协同作用。因此，开发新型灵芝活性成分载体，成为突破传统产品瓶颈的关键。

2、外泌体（exosomes）是细胞分泌的直径30-150nm的囊泡结构，富含蛋白质、核酸、脂质等生物活性物质，是细胞间通讯的重要介质，具有良好的生物相容性、靶向性和穿透性。

3、近年来，植物/真菌外泌体的研究逐渐兴起。葡萄外泌体被证实可通过抑制炎症因子缓解结肠炎；香菇外泌体则能提升小鼠免疫功能。与其他真菌相比，灵芝外泌体因富含三萜、多糖等特有成分，其抗炎活性更显著。因此，开发天然、高效、稳定的抗炎抗衰老活性物质，成为市场迫切需求。本发明聚焦灵芝外泌体，通过优化制备工艺与验证其功能，旨在填补这一领域的技术空白。

4、检索到的相关专利文献：

5、公开国别中国，公开号cn120505207a，公开日期2025年8月19日，该文献公开了一种含有药食同源有效成分的灵芝外泌体的制备方法，该制备方法，包括以下步骤：培养灵芝菌丝体发酵液；将黄精溶液加入灵芝菌丝体发酵液中，进行生物转化黄精粉底物，获取灵芝外泌体发酵液；对灵芝外泌体发酵液进行分离、提取和纯化，获取灵芝外泌体，对癌细胞具有较强的杀伤作用。

6、检索到的相关非专利文献：

7、期刊名称或书名《上海中医药杂志》，文献名称《中药灵芝复方治疗变应性鼻炎及相关体质的研究》，第8期，公开日期1999年09月27日，该文献公开了中药灵芝复方治疗变应性鼻炎的效果，中药灵芝复方包括灵芝1.5g、冬虫夏草0.3g，能够显著降低测il-4和eos含量。

8、前述文献代表的现有技术至少存在以下未解决的技术问题或缺陷：

9、cn120505207a制备的灵芝外泌体的制备方法更加复杂，且仅对于癌细胞具有杀伤作用，相关证据为：灵芝外泌体还含有黄精，发挥黄精和灵芝外泌体的协同才具有良好的作用。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供：

2、一种灵芝外泌体在制备抗过敏性鼻炎产品中的应用与产品，及其相关技术，以解决灵芝外泌体活性成分含量较低、抗过敏性鼻炎效果较差等技术问题或其组合。

3、术语说明：

4、除非另有定义，否则本文所有科技术语具有的涵义与权利要求主题所属领域技术人员通常理解的涵义相同。除非另有说明，本文全文引用的所有专利、专利发明、公开材料通过引用方式整体并入本文。如果本文对术语有多个定义，以本章的定义为准。

5、应理解，上述简述和下文的详述为示例性且仅用于解释，而不对本发明的主题作任何限制。在本发明中，除非另有具体说明，否则使用单数时也包括复数。还应注意，除非另有说明，否则所用“或”、“或者”表示“和/或”。此外，所用术语“包括”以及其它形式，例如“包含”、“含”和“含有”并非限制性。

6、除非提出具体定义，本文中使用的各类市售产品的使用，均采用标准技术。例如，可利用厂商对试剂盒的使用说明，或者按照本领域公知的方式或本发明的说明来进行实施。通常可根据本说明书中引用和讨论的多个概要性和较具体的文献中的描述，按照本领域熟知的常规方法实施上述技术和方法。

7、术语“任选/任意”或“任选地/任意地”是指随后描述的事件或情况可能发生或可能不发生，该描述包括发生所述事件或情况和不发生所述事件或情况。

8、本文所用的术语“外泌体”，指：由细胞分泌的直径约为30～150 nm的细胞外囊泡，具有脂质双分子层结构，携带蛋白质、脂质、核酸等生物活性分子，在细胞间通讯中发挥重要作用。

9、本文所用的术语“分离纯化”，指：从复杂的生物样品（如细胞培养上清液、组织提取物等）中，采用物理或化学方法（如超速离心、色谱、沉淀等）将目标组分（如外泌体、多糖、三萜化合物）与杂质分离开来，并获得较高纯度的过程。

10、本文所用的术语“高产三萜灵芝菌丝”，指：通过菌种筛选或发酵条件优化，获得的三萜类化合物产量显著高于普通菌株的灵芝（ganoderma spp.）菌丝体培养物。

11、本文所用的术语“一级种子液”，指：将斜面或平板保存的灵芝菌种接种至液体培养基后，经初次培养获得的菌悬液，用于后续扩大培养的起始接种物。

12、本文所用的术语“深层液体发酵培养基”，指：供灵芝菌丝体在液体深层通气培养条件下生长和代谢所用的营养液，通常包含碳源、氮源、无机盐及微量元素等成分。

13、本文所用的术语“梯度离心”，指：在离心过程中使用密度连续或阶梯式变化的介质，使样品中的不同颗粒依据其密度和大小在离心场中沉降到不同区带，从而实现分离的方法。

14、本文所用的术语“过滤除菌”，指：利用孔径小于细菌（通常为0.22μm或0.45μm）的微孔滤膜，对热不稳定液体（如培养基、缓冲液、活性物质溶液）进行过滤，以去除其中微生物的操作。

15、本文所用的术语“过敏性鼻炎”，指：由过敏原（如花粉、尘螨、动物皮屑等）诱发，以免疫球蛋白e（ige）介导的鼻黏膜慢性炎症性疾病，临床典型症状包括阵发性喷嚏、清水样涕、鼻塞和鼻痒。

16、本文所用的术语“粒径”，指：颗粒（如外泌体、纳米粒子、菌丝碎片等）在特定测量方法下表征的直径或尺寸分布值，常用动态光散射或电子显微镜测定，本文中特指外泌体的平均水合直径。

17、第一方面，本发明提供了：灵芝外泌体在制备抗过敏性鼻炎产品中的应用，所述的灵芝外泌体的制备方法包括如下步骤：

18、（1）培养二级种子液；

19、（2）扩大培养与灵芝菌丝体发酵液获取；

20、（3）对灵芝菌丝体发酵液进行分离、提取和纯化，获取灵芝外泌体。

21、优选地，步骤（1）所述的培养的具体方法为：

22、（1.1）将高产三萜灵芝菌丝接入pda培养基中进行斜面培养，至灵芝菌丝长满斜面试管；

23、（1.2）将水倒入长满灵芝菌丝的斜面试管中，将培养基上的灵芝菌丝刮入水中，制成菌丝悬液；将该悬液接入种子培养基中培养，得一级种子液；

24、（1.3）将步骤（1.2）制备的一级种子液振荡打碎菌丝球，吸取打碎后的菌丝体接入深层液体发酵培养基培养，得二级种子液。

25、优选地，步骤（1.1）所述的高产三萜灵芝菌丝为赤芝菌丝体发酵提取的菌源性外泌体，其灵芝酸a含量≥1.2mg/g。

26、优选地，步骤（1.1）所述的pda培养基包括：马铃薯提取物180-220g/l、葡萄糖18-22g/l和琼脂粉15-20g/l。

27、优选地，步骤（1.1）所述的pda培养基中的马铃薯提取物的浓度选自180-220g/l之间的任意值或范围，具体可选自：180g/l、190g/l、200g/l、210g/l、220g/l或其二者之间范围。

28、进一步优选地，步骤（1.1）所述的pda培养基中的马铃薯提取物的浓度为200g/l。

29、优选地，步骤（1.1）所述的pda培养基中的葡萄糖的浓度选自18-22g/l之间的任意值或范围，具体可选自：18g/l、19g/l、20g/l、21g/l、22g/l或其二者之间范围。

30、进一步优选地，步骤（1.1）所述的pda培养基中的葡萄糖的浓度为20g/l。

31、优选地，步骤（1.1）所述的pda培养基中的琼脂粉的浓度选自15-20g/l之间的任意值或范围，具体可选自：15g/l、16g/l、17g/l、18g/l、19g/l、20g/l或其二者之间范围。

32、进一步优选地，步骤（1.1）所述的pda培养基中的琼脂粉的浓度为15g/l。

33、优选地，步骤（1.1）所述的pda培养基的ph选自5.5-6.0之间的任意值或范围，具体可选自：5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0或其二者之间范围。

34、进一步优选地，步骤（1.1）所述的pda培养基的ph为6.0。

35、优选地，步骤（1.1）所述的培养的温度选自26-37℃之间的任意值或范围，具体可选自：26℃、26.5℃、27℃、27.5℃、28℃、30℃、35℃、37℃或其二者之间范围。

36、进一步优选地，步骤（1.1）所述的培养的温度为37℃。

37、优选地，步骤（1.1）所述的培养的时间选自7-10天之间的任意值或范围，具体可选自：7天、8天、9天、10天或其二者之间范围。

38、进一步优选地，步骤（1.1）所述的培养的时间为5天。

39、优选地，步骤（1.2）所述的水为无菌水。

40、优选地，步骤（1.2）所述的水的添加量为5-20ml之间的任意值或范围，具体可选自：5ml、6ml、7ml、8ml、9ml、10ml、11ml、12ml、13ml、14ml、15ml、16ml、17ml、18ml、19ml、20ml或其二者之间范围。

41、进一步优选地，步骤（1.2）所述的水的添加量为5ml。

42、优选地，步骤（1.2）所述的种子培养基包括：葡萄糖30-40g/l、胰蛋白胨4-6g/l、酵母提取物2-3g/l、kh2po40.8-1.2g/l和mgso4·7h2o 0.4-0.6g/l。

43、优选地，步骤（1.2）所述的种子培养基中的葡萄糖浓度选自30-40g/l之间的任意值或范围，具体可选自：30g/l、31g/l、32g/l、33g/l、34g/l、35g/l、36g/l、37g/l、38g/l、39g/l、40g/l或其二者之间范围。

44、进一步优选地，步骤（1.2）所述的种子培养基中的葡萄糖浓度为20g/l。

45、优选地，步骤（1.2）所述的种子培养基中的胰蛋白胨浓度选自4.0-6.0g/l之间的任意值或范围，具体可选自：4g/l、4.5g/l、5g/l、5.5g/l、6g/l或其二者之间范围。

46、进一步优选地，步骤（1.2）所述的种子培养基中的胰蛋白胨浓度为10g/l。

47、优选地，步骤（1.2）所述的种子培养基中的酵母提取物浓度选自2-3g/l之间的任意值或范围，具体可选自：2g/l、2.1g/l、2.2g/l、2.3g/l、2.4g/l、2.5g/l、2.6g/l、2.7g/l、2.8g/l、2.9g/l、3g/l或其二者之间范围。

48、进一步优选地，步骤（1.2）所述的种子培养基中的酵母提取物浓度为5g/l。

49、优选地，步骤（1.2）所述的种子培养基中的kh2po4选自0.8-1.2g/l之间的任意值或范围，具体可选自：0.8g/l、0.9g/l、1g/l、1.1g/l、1.2g/l或其二者之间范围。

50、进一步优选地，步骤（1.2）所述的种子培养基中的kh2po4浓度为1g/l。

51、优选地，步骤（1.2）所述的种子培养基中的mgso4·7h2o浓度选自0.5-0.85g/l之间的任意值或范围，具体可选自：0.5g/l、0.55g/l、0.6g/l、0.65g/l、0.7g/l、0.75g/l、0.8g/l、0.85g/l或其二者之间范围。

52、进一步优选地，步骤（1.2）所述的种子培养基中的mgso4·7h2o浓度为0.5g/l。

53、优选地，步骤（1.2）所述的种子培养基的ph选自5.5-6.0之间的任意值或范围，具体可选自：5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0或其二者之间范围。

54、进一步优选地，步骤（1.2）所述的种子培养基的ph为6.0。

55、优选地，步骤（1.2）所述的培养的温度选自26-28℃之间的任意值或范围，具体可选自：26℃、26.5℃、27℃、27.5℃、28℃或其二者之间范围。

56、进一步优选地，步骤s1-2所述的培养的温度为28℃。

57、优选地，步骤（1.2）所述的培养为振荡培养。

58、优选地，所述的振荡培养的转速选自120-140rpm之间的任意值或范围，具体可选自：120rpm、123rpm、125rpm、128rpm、130rpm、133rpm、135rpm、137rpm、140rpm或其二者之间范围。

59、进一步优选地，所述的振荡培养的转速为150rpm。

60、优选地，步骤（1.2）所述的培养的终点判断为：od600值达1.8-2.0，活菌数≥108cfu/ml（平板计数法）。

61、优选地，步骤（1.3）所述的深层液体发酵培养基包括：葡萄糖30-40g/l、豆饼粉8-15g/l、kh2po41.2-1.8g/l、mgso4·7h2o 1.3-1.8g/l。

62、优选地，步骤（1.3）所述的深层液体发酵培养基中的葡萄糖浓度选自30-40g/l之间的任意值或范围，具体可选自：30g/l、31g/l、32g/l、33g/l、34g/l、35g/l、36g/l、37g/l、38g/l、39g/l、40g/l或其二者之间范围。

63、进一步优选地，步骤（1.3）所述的深层液体发酵培养基中的葡萄糖浓度为25g/l。

64、优选地，步骤（1.3）所述的深层液体发酵培养基中的豆饼粉浓度选自8-15g/l之间的任意值或范围，具体可选自：8g/l、9g/l、10g/l、11g/l、12g/l、13g/l、14g/l、15g/l或其二者之间范围。

65、进一步优选地，步骤（1.3）所述的深层液体发酵培养基中的豆饼粉浓度为15g/l。

66、优选地，步骤（1.3）所述的深层液体发酵培养基中的kh2po4浓度选自1.2-1.8g/l之间的任意值或范围，具体可选自：1.2g/l、1.3g/l、1.4g/l、1.5g/l、1.6g/l、1.7g/l、1.8g/l或其二者之间范围。

67、进一步优选地，步骤（1.3）所述的深层液体发酵培养基中的kh2po4浓度为1.5g/l。

68、优选地，步骤（1.3）所述的深层液体发酵培养基中的mgso4·7h2o浓度选自0.8-2.5g/l之间的任意值或范围，具体可选自：0.5g/l、0.55g/l、0.6g/l、0.65g/l、0.7g/l、0.75g/l、0.8g/l、0.85g/l或其二者之间范围。

69、进一步优选地，步骤（1.3）所述的深层液体发酵培养基中的mgso4·7h2o浓度为0.8g/l。

70、优选地，步骤（1.3）所述的深层液体发酵培养基的ph选自5.5-6.0之间的任意值或范围，具体可选自：5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0或其二者之间范围。

71、进一步优选地，步骤（1.3）所述的深层液体发酵培养基的ph为6.0。

72、优选地，步骤（1.3）所述的振荡打碎的转速选自3000-5000rpm之间的任意值或范围，具体可选自：3000rpm、3500rpm、4000rpm、4500rpm、5000rpm或其二者之间范围。

73、进一步优选地，步骤（1.3）所述的振荡打碎的转速为3000rpm。

74、优选地，步骤（1.3）所述的振荡打碎的时间选自10-60s之间的任意值或范围，具体可选自：10s、15s、20s、25s、30s、35s、40s、45s、50s、55s、60s或其二者之间范围。

75、进一步优选地，步骤（1.3）所述的振荡打碎的时间为30s。

76、优选地，步骤（1.3）所述的打碎后的菌丝体的接种量选自5-10%（v/v）之间的任意值或范围，具体可选自：5%、6%、7%、8%、9%、10%或其二者之间范围。

77、进一步优选地，步骤（1.3）所述的打碎后的菌丝体的接种量为10%（v/v）。

78、优选地，步骤（1.3）所述的培养温度选自26-28℃之间的任意值或范围，具体可选自：26℃、26.5℃、27℃、27.5℃、28℃或其二者之间范围。

79、进一步优选地，步骤（1.3）所述的培养的温度为28℃。

80、优选地，步骤（1.3）所述的培养的时间选自1-5天之间的任意值或范围，具体可选自：1天、2天、3天、4天、5天或其二者之间范围。

81、进一步优选地，步骤（1.3）所述的培养的时间为2天。

82、优选地，步骤（1.3）所述的培养为振荡培养。

83、优选地，所述的振荡培养的转速选自120-140rpm之间的任意值或范围，具体可选自：120rpm、123rpm、125rpm、128rpm、130rpm、133rpm、135rpm、137rpm、140rpm或其二者之间范围。

84、进一步优选地，所述的振荡培养的转速为150rpm。

85、优选地，步骤（2）所述的扩大培养与发酵液获取的具体方法为：

86、（2.1）：将步骤（1.3）制备的二级种子液接入发酵罐中培养，进行扩大培养，得到一级灵芝菌种；

87、（2.2）：将步骤（2.1）制备的一级灵芝菌种再接入发酵罐培养，结束后过滤，得灵芝菌丝体发酵液。

88、优选地，步骤（2.1）所述的二级种子液的接种量选自5-10%（v/v）之间的任意值或范围，具体可选自：5%、6%、7%、8%、9%、10%或其二者之间范围。

89、进一步优选地，步骤（2.1）所述的二级种子液的接种量为10%（v/v）。

90、优选地，步骤（2.1）所述的培养温度选自26-28℃之间的任意值或范围，具体可选自：26℃、26.5℃、27℃、27.5℃、28℃或其二者之间范围。

91、进一步优选地，步骤（2.1）所述的培养的温度为28℃。

92、优选地，步骤（2.1）所述的培养的时间选自1-5天之间的任意值或范围，具体可选自：1天、2天、3天、4天、5天或其二者之间范围。

93、进一步优选地，步骤（2.1）所述的培养的时间为5天。

94、优选地，步骤（2.1）所述的培养的通气量为1:0.8（v/v/min）。

95、优选地，步骤（2.1）所述的培养还需要进行搅拌。

96、优选地，所述的搅拌的转速选自100-500rpm之间的任意值或范围，具体可选自：100rpm、150rpm、200rpm、250rpm、300rpm、350rpm、400rpm、450rpm、500rpm或其二者之间范围。

97、进一步优选地，所述的搅拌的转速为200rpm。

98、优选地，步骤（2.1）所述的发酵罐和步骤（2.2）所述的发酵罐均包括：葡萄糖30-40g/l、豆饼粉8-15g/l、kh2po41.2-1.8g/l、mgso4·7h2o 1.3-1.8g/l。

99、优选地，步骤（2.1）所述的发酵罐和步骤（2.2）所述的发酵罐中的葡萄糖浓度均选自30-40g/l之间的任意值或范围，具体可选自：30g/l、31g/l、32g/l、33g/l、34g/l、35g/l、36g/l、37g/l、38g/l、39g/l、40g/l或其二者之间范围。

100、进一步优选地，步骤（2.1）所述的发酵罐和步骤（2.2）所述的发酵罐中的葡萄糖浓度均为25g/l。

101、优选地，步骤（2.1）所述的发酵罐和步骤（2.2）所述的发酵罐中的豆饼粉浓度均选自8-15g/l之间的任意值或范围，具体可选自：8g/l、9g/l、10g/l、11g/l、12g/l、13g/l、14g/l、15g/l或其二者之间范围。

102、进一步优选地，步骤（2.1）所述的发酵罐和步骤（2.2）所述的发酵罐中的豆饼粉浓度均为15g/l。

103、优选地，步骤（2.1）所述的发酵罐和步骤（2.2）所述的发酵罐中的kh2po4浓度均选自1.2-1.8g/l之间的任意值或范围，具体可选自：1.2g/l、1.3g/l、1.4g/l、1.5g/l、1.6g/l、1.7g/l、1.8g/l或其二者之间范围。

104、进一步优选地，步骤（2.1）所述的发酵罐和步骤（2.2）所述的发酵罐中的kh2po4浓度均为1.5g/l。

105、优选地，步骤（2.1）所述的发酵罐和步骤（2.2）所述的发酵罐中的mgso4·7h2o浓度均选自0.8-2.5g/l之间的任意值或范围，具体可选自：0.8g/l、0.9g/l、1.0g/l、1.1g/l、1.2g/l、1.3g/l、1.4g/l、1.5g/l、1.6g/l、1.7g/l、1.8g/l、1.9g/l、2g/l、2.2g/l、2.3g/l、2.4g/l、2.5g/l或其二者之间范围。

106、进一步优选地，步骤（2.1）所述的发酵罐和步骤（2.2）所述的发酵罐中的mgso4·7h2o浓度均为0.8g/l。

107、优选地，步骤（2）扩大培养还需要每6小时监测下列指标：od600值（反映菌丝浓度）、ph值（维持5.8-6.2）、溶氧量（≥20%）。

108、优选地，步骤（2.2）所述的一级灵芝菌种的接种量选自5-10%（v/v）之间的任意值或范围，具体可选自：5%、6%、7%、8%、9%、10%或其二者之间范围。

109、进一步优选地，步骤（2.2）所述的一级灵芝菌种的接种量为8%（v/v）。

110、优选地，步骤（2.2）所述的培养温度选自26-28℃之间的任意值或范围，具体可选自：26℃、26.5℃、27℃、27.5℃、28℃或其二者之间范围。

111、进一步优选地，步骤（2.2）所述的培养的温度为28℃。

112、优选地，步骤（2.2）所述的培养的时间选自24-48h之间的任意值或范围，具体可选自：24h、30h、35h、40h、45h、48h或其二者之间范围。

113、进一步优选地，步骤（2.2）所述的培养的时间为24h。

114、优选地，步骤（2.2）所述的培养的通气量为1:0.8（v/v/min）。

115、优选地，步骤（2.2）所述的培养还需要进行搅拌。

116、优选地，所述的搅拌的转速选自100-500rpm之间的任意值或范围，具体可选自：100rpm、150rpm、200rpm、220rpm、250rpm、300rpm、350rpm、400rpm、450rpm、500rpm或其二者之间范围。

117、进一步优选地，所述的搅拌的转速为220rpm。

118、优选地，步骤（3）所述的分离、提取和纯化的具体方法为：

119、将灵芝菌丝体发酵液进行梯度离心、过滤后取沉淀冲洗，再将其悬浮于缓冲液中再过滤，得纯化的灵芝外泌体

120、优选地，所述的过滤的径目为0.22μm。

121、优选地，所述的梯度离心的具体操作为：800-1200×g离心8-15分钟、1800-2200×g离心15-25分钟、3500-4500×g离心25-40分钟，最后在4℃下以90000-120000×g超速离心1.0-2.0小时。

122、进一步优选地，所述的梯度离心的具体操作为：1000×g离心10分钟、2000×g离心20分钟、4000×g离心30分钟，最后在4℃下以1000000×g超速离心1.5小时。

123、优选地，所述的冲洗的具体操作为：用预冷pbs缓冲液冲洗灵芝外泌体沉淀3次，预冷pbs缓冲液用量为每次5ml。

124、优选地，所述的悬浮于缓冲液的具体操作为：将冲洗后的沉淀悬浮于pbs中。

125、优选地，步骤（2.2）所述的再过滤的径目为0.22μm。

126、优选地，所述的灵芝外泌体的给药剂量为1×108-1×109微粒（particles）/只之间的任意值或范围。

127、进一步优选地，所述的灵芝外泌体的给药剂量为3×108particles/只。

128、基于对本发明的技术问题的进一步解决或同时解决多个技术问题，在本发明第一方面所提供的技术方案中，优选方案包括：

129、第一项优先方案：灵芝外泌体在制备抗过敏性鼻炎产品中的应用。该技术方案在解决了技术问题“灵芝外泌体中的活性成分含量低”的基础上，进一步解决了技术问题“抗过敏性鼻炎效果较差”。

130、本发明的有益效果为：

131、本发明至少具有如下有益效果：

132、1、本发明通过优化发酵条件与分离纯化工艺，实现灵芝外泌体规模化制备，显著提高外泌体得率与活性成分含量，为相关产品研发提供理论与技术支撑。

133、2、本发明的方法可高效获取高纯度灵芝外泌体，外泌体形态完整、粒径均一、特征标志物表达明确，制备工艺稳定可控，适合工业化放大生产。

134、3、本发明的方法制备的灵芝外泌体可显著改善模型小鼠的体重下降、抑制过敏行为发作，同时减轻呼吸道（肺、鼻黏膜）的炎症浸润、修复黏膜组织结构，在体内具备明确的抗过敏性炎症活性，可有效改善过敏性鼻炎全身及局部病理损伤。