一种呋喃唑酮代谢物AOZ衍生化半抗原、完全抗原和血清抗体的制备方法及其应用

技术特征：
1.一种呋喃唑酮代谢物aoz衍生化半抗原，其特征在于，该半抗原的结构式如下：其中，r表示r表示l表示(ch2)
n
或e表示c1-c20的直链或支链烷基；n表示1-20的自然数；a为1-17的自然数，b为1-17的自然数，且a b≤18。2.一种如权利要求1所述的呋喃唑酮代谢物aoz衍生化半抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将化合物ⅰ和化合物ⅱ进行亲核取代反应合成得到中间体ⅲ；(2)将中间体ⅲ与化合物ⅳ进行亲和取代反应，并将所得产物进一步水解反应得到一类具有醛基和羧基及苯偶联芳香基结构的aoz衍生化半抗原活性连接手臂
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；(3)将呋喃唑酮代谢物aoz与活性连接手臂
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通过胺醛缩合反应进行偶联，合成得到了一大类具有苯偶联芳香基结构的aoz衍生化半抗原；其中，化合物ⅰ的结构式为：所述化合物ⅱ的结构式为：br-r-oh所述中间体ⅲ的结构式为：所述化合物ⅳ的结构式为：所述活性连接手臂
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的结构式为：所述呋喃唑酮代谢物aoz的结构式为：
其中，r表示r表示l表示(ch2)
n
或e表示c1-c20的直链或支链烷基；n表示1-20的自然数；a为1-17的自然数，b为1-17的自然数，且a b≤18。3.根据权利要求2所述的呋喃唑酮代谢物aoz衍生化半抗原的制备方法，其特征在于，该半抗原具体合成路线如下：其中，r表示r表示l表示(ch2)
n
或e表示c1-c20的直链或支链烷基；n表示1-20的自然数；a为1-17的自然数，b为1-17的自然数，且a b≤18。4.一种呋喃唑酮代谢物aoz衍生化完全人工抗原，其特征在于，是载体蛋白与权利要求1所述的新型aoz衍生化半抗原偶联得到的偶联物，其结构式如下：5.根据权利要求4所述的呋喃唑酮代谢物aoz衍生化完全人工抗原，其特征在于，所述
载体蛋白为牛血清白蛋白或卵清蛋白；完全人工抗原为免疫抗原时，载体蛋白采用牛血清白蛋白；完全人工抗原为包被抗原时，载体蛋白采用卵清蛋白。6.一种如权利要求4或5所述的呋喃唑酮代谢物aoz衍生化完全人工抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取半抗原2mg溶于2ml dmf中，加入10.32mg dcc和5.76mg nhs；在4℃下磁力搅拌反应过夜，将反应液在转速3000r/min下进行离心5min，取离心后上清液为a液；(2)称取bsa或ova42mg并溶于7ml浓度为6mol/l的碳酸缓冲液中，并加入1ml的dmf，搅拌溶解，制备的蛋白溶液为b液；(3)用2.5ml注射器吸取a液缓慢滴入b液中，在4℃下磁力搅拌反应12h；反应停止后取出反应液，放入低温且转速5000r/min的离心机离心10min，取上清液，移入透析袋中，在4℃下用pbs透析3天，每天更换3次透析液。得到的完全抗原分装于0.5ml离心管中，并放入-20℃冰箱冻存；得到呋喃唑酮代谢物aoz衍生化完全人工抗原。7.权利要求4所述的呋喃唑酮代谢物aoz衍生化完全人工抗原作为包被抗原在检测小鼠血清抗体效价和特异性中的应用。8.一种小鼠血清抗体，其特征在于，通过权利要求4所述的呋喃唑酮代谢物aoz衍生化完全人工抗原制备的小鼠血清抗体；其中，完全人工抗原为免疫抗原。9.一种如权利要求8所述的小鼠血清抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将呋喃唑酮代谢物aoz衍生化完全人工抗原中免疫人工抗原按照既定免疫程序对6-8周龄雌性spf级balb/c小鼠进行免疫，并于第四次免疫10天之后断尾采血于灭菌的0.5ml的pe管中，37℃放置2h，让血液有所凝结，再放入4℃冰箱过夜，使血块收缩，血清自然析出，再用细针将凝结在壁上的血块搅落，3000r/min，离心5min，收集血清加入甘油进行分装，-20℃保存备用，得到小鼠血清抗体。10.权利要求8所述的小鼠血清抗体在检测小鼠血清抗体效价和特异性中的应用。

技术总结
本发明公开了一种呋喃唑酮代谢物AOZ衍生化半抗原、完全抗原和血清抗体的制备方法及其应用，包括以下步骤：将化合物Ⅰ和化合物Ⅱ进行亲核取代反应合成得到中间体Ⅲ；将中间体Ⅲ与化合物Ⅳ进行亲和取代反应并将所得产物进一步水解得到一类具有醛基和羧基及苯偶联芳香基结构的AOZ衍生化半抗原连接手臂


技术研发人员：杨武英 王学渊 洪艳平 熊建华 王丹 杜华英 戴棚 邓炜杰
受保护的技术使用者：江西农业大学
技术研发日：2022.08.30
技术公布日：2022/11/18