NLRP3调节剂的制作方法

nlrp3调节剂
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求2020年1月10日提交的第62/959,208号美国临时申请的优先权；其整体内容通过引用并入本文。
技术领域
3.本公开的特征在于调节(例如，激动或部分激动)nlrp3的化学实体(例如，化合物或该化合物的药学上可接受的盐和/或水合物和/或共晶和/或药物组合)，所述化学实体适用于例如治疗如下的病症、疾病或障碍，其中nlrp3信号传导的增加可校正先天性免疫活性的缺陷，该先天性免疫活性的缺陷促进个体(例如人类)病症、疾病或障碍(例如，具有低t细胞浸润的癌症)的病理和/或症状和/或进展和/或难以治疗的状态。本公开的特征还在于组合物以及使用及制备其的其他方法。
4.发明背景
5.核苷酸结合寡聚化结构域样受体(“nlr”)包括检测病原体相关分子模式(“pamp”)及内源性分子的细胞内受体家族(参见例如ting,j.p.y.等人,“the nlr gene family:a standard nomenclature”,immunity,28(3):285-287,(2008))。
6.nlrp表示包括pyrin结构域且由诸如nlrp1、nlrp3、nlrp4、nlrp6、nlrp7及nlrp12的蛋白质构成的nlr亚家族。认为nlrp涉及称为炎性小体(inflammasomes)的多蛋白复合物的形成(参见例如chaput,c.等人,“nod-like receptors in lung diseases”,frontiers in immunology,4:章节393,(2013))。所述复合物通常包括一或两种nlr蛋白质、含有card域的接头分子细胞凋亡相关的斑点样蛋白(asc)及胱天蛋白酶-1f(参见例如bauernfeind,f及hornung,v.“of inflammasomes and pathogens-sensing of microbes by the inflammasome”,embo molecular medicine,5(6):814-826,(2013))。
7.一种所述炎性小体由nlrp3骨架、asc接头及胱天蛋白酶-1形成(参见例如hirota,j.a.,等人,“the airway epithelium nucleotide-binding domain and leucine-rich repeat protein 3 inflammasome is activated by urban particulate matter”,journal of allergy and clinical immunology,129(4):1116.e6-1125.e6,(2012))，且认为其表达通过骨髓细胞及人类支气管上皮细胞中的炎性细胞因子及tlr激动剂诱导(id.)。认为nlrp3炎性小体介导前il-1β及前il-18至il-1β及il-18的胱天蛋白酶-1-依赖型转化。此外，il-1β及il-18在各种癌症类型的治疗中具有潜能(参见例如chen,l-c.等人,embo mol med.,4(12):1276-1293(2012)及tse,b.w-c.等人,plos one,6(9):e24241(2011))。已显示il-18在结肠癌动物肿瘤模型中不受对检查点抑制剂的抗性的限制(参见例如ma,z.等人,clin.cancer res.jan 11.(2016)doi:10.1158/1078-0432.ccr-15-1655)。
8.发明概述
9.本发明涉及式(i)的化合物:
[0010][0011]
其中所有变量如下文所定义。
[0012]
本发明范围内还包括式(i)的化合物的药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体和溶剂化物。
[0013]
本发明还涉及包含一种或多种本发明化合物的药物组合物。本发明还涉及使用一种或多种本发明的化合物治疗癌症的方法。
[0014]
本发明还提供了制备式(i)的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体和溶剂化物的方法和中间体。
[0015]
本发明的化合物可用于治疗法。
[0016]
本发明的化合物可以用于制备用于治疗癌症的药物。
[0017]
本发明的化合物可以单独使用，与本发明的其它化合物组合使用，或与一种或多种其它活性剂组合使用。
[0018]
本发明的其它特征和优点将从下面的详细描述和权利要求中明显可见。
[0019]
发明详述
[0020]
本发明的化合物
[0021]
在第一方面，本发明尤其提供了式(i)化合物：
[0022][0023]
或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，其中:
[0024]
r1独立地选自:h或被0至3个卤素取代的c
1-6
烷基；
[0025]
r2、r3和r5在每次出现时独立地选自:h、卤素、氰基、c
1-4
烷基、c
1-4
卤代烷基、c
1-4
烷氧基和c
1-4
卤代烷氧基；
[0026]
r4独立地为5-元杂芳基，其包含1至4个各自独立地选自n、n(ra)、o和s的环原子，其中所述杂芳基被0至3个rb取代；
[0027]
r6独立地选自:
[0028][0029]
r7独立地选自:h、c
1-4
烷基和-c(＝o)r8；
[0030]
r8独立地选自:c
2-4
炔基、c
1-4
烷氧基、c
1-4
卤代烷基、被0至2个rc取代的c
1-4
烷基、被0至3个rd取代的-(ch2)
0-2-c
3-6
环烷基、被0至3个rd取代的-(ch2)
0-2-苯基和-(ch2)
0-2-(5-至6-元杂芳基，其包含1至4个各自独立地选自n、n(ra)、o和s的环原子，其中所述杂芳基被0至3个rd取代)；
[0031]
ra在每次出现时独立地选自:h和c
1-4
烷基；且
[0032]
rb、rc和rd在每次出现时独立地选自:卤素、oh、氰基、c
1-4
烷基、c
1-4
卤代烷基、c
1-4
烷氧基和c
1-4
卤代烷氧基。
[0033]
在第二个方面，本发明提供了式(i)的化合物、或其互变异构体或药学上可接受的盐，其在第一个方面的范围内，其中:
[0034]
r1独立地选自:h或c
1-6
烷基；
[0035]
r2、r3和r5在每次出现时独立地选自:h、卤素和c
1-4
烷基；
[0036]
r4独立地是吡唑基、噻吩基或异噻唑基；
[0037]
r6独立地选自:
[0038]
且
[0039]
r7独立地是h或-c(＝o)r8。
[0040]
在第三个方面，本发明提供了式(ii)的化合物:
[0041][0042]
或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐；其中:
[0043]
r1独立地是h或c
1-4
烷基；
[0044]
r6独立地选自:
[0045][0046]
r8独立地选自:c
2-4
炔基、c
1-4
烷氧基、c
1-4
卤代烷基、苯基、吡啶基、苄基、被0至1个rc取代的c
1-4
烷基和被0至2个rd取代的c
3-6
环烷基；
[0047]
rc独立地是c
1-4
烷氧基或氰基；且
[0048]
rd独立地选自:f、氰基和c
1-4
卤代烷基。
[0049]
在第四个方面，本发明提供了式(ii)的化合物，或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，其在第三个方面的范围内，其中:
[0050]
r6独立地是
[0051]
在第五个方面，本发明提供了式(ii)的化合物，或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，其在第三个方面的范围内，其中:
[0052]
r6独立地选自:
[0053][0054]
在另一个方面，本发明提供了式(ii)的化合物，或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，其在第三或第四个方面的范围内，其中:
[0055]
r6独立地是
[0056]
在另一个方面，本发明提供了式(ii)的化合物、或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，其在第三或第四个方面的范围内，其中:
[0057]
r6独立地是
[0058]
在另一个方面，本发明提供了式(ii)的化合物，或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，其在第三或第五个方面的范围内，其中:
[0059]
r6独立地是
[0060]
在另一个方面，本发明提供了式(ii)的化合物，或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，其在第三或第五个方面的范围内，其中:
[0061]
r6独立地是
[0062]
在另一个方面，本发明提供了式(ii)的化合物，或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，其在第三或第五个方面的范围内，其中:
[0063]
r6独立地是
[0064]
在一个实施方案中，r1是h。在另一个实施方案中，r1是c
1-4
烷基。在另一个实施方案
中，r1是乙基或异丙基。
[0065]
在第六个方面，本发明提供了化合物，其选自示例性实施例1至96或其立体异构体、互变异构体或可药用盐。
[0066]
在另一个方面，本发明提供了选自化合物任何子集列表或来自示例性实施例的单一化合物的化合物，其在任何上述方面的范围内。
[0067]
本领域技术人员将认识到，本文所描述的一些化学结构可通过一或多种其他共振形式展现在论文上；或可以一或多种其他互变异构形式存在，即使在以动力学方式表示时，技术人员会认可的是，此类互变异构形式仅表示此类化合物的样品的极小部分。尽管本文未明确地展现此类共振形式或互变异构体，但此类化合物明显地涵盖在本发明范畴内。
[0068]
本发明的其它方面和实施方案
[0069]
在一个方面中，涉及用于调节(例如，激动、部分激动、拮抗)nlrp3活性的方法，其包括使nlrp3与本文所描述的化学实体(例如，本文概括或具体描述的化合物或其药学上可接受的盐或含有其的组合物)接触。在优选实施方案中，用于调节nlrp3活性的方法是激动和部分激动。在某些实施方案中，用于调节nlrp3活性的方法是激动。在某些实施方案中用于调节nlrp3活性的方法是部分激动。方法包括体外方法，例如使包括包含nlrp3的一或多种细胞(例如，thp-1细胞)的样品与化学实体接触。方法还可包括体内方法；例如向患有如下疾病的个体(例如人类)施用所述化学实体，其中nlrp3信号传导的增加可校正先天性免疫活性的缺陷，该先天性免疫活性的缺陷促进疾病(例如，癌症；例如顽固性癌症)的病理和/或症状和/或进展。
[0070]
在一些实施方案中，本发明化合物适用于治疗如下病症、疾病或障碍，其中nlrp3活性的降低(例如，与受抑制或受损nlrp3信号传导相关的病症、疾病或障碍)促进个体(例如人类)的病症、疾病或障碍(例如，癌症)的病理和/或症状和/或进展。
[0071]
当癌症对癌症治疗没有响应(或具有抗性)时，称其为是顽固性的。顽固性癌症还称为抗性癌症。
[0072]
在另一方面中，涉及治疗癌症的方法，其包括向需要此类治疗的个体施用有效量的本文所描述的化学实体(例如，本文概括或具体描述的化合物或其药学上可接受的盐或含有其的组合物)。在一些实施方案中，癌症可为顽固性癌症。
[0073]
在另一方面中，涉及治疗如下疾病的方法，其中nlrp3信号传导的增加可校正先天性免疫活性的缺陷，所述先天性免疫活性的缺陷促进该疾病的病理和/或症状和/或进展，其包括向需要此类治疗的个体施用有效量的本文所描述的化学实体(例如，本文概括或具体描述的化合物或其药学上可接受的盐或含有其的组合物)。
[0074]
在另一方面中，涉及治疗方法，其包括向患有如下疾病的个体施用有效量的本文所描述的化学实体(例如，本文概括或具体描述的化合物或其药学上可接受的盐或含有其的组合物)，其中nlrp3信号传导的增加可校正先天性免疫活性的缺陷，所述先天性免疫活性的缺陷促进该疾病的病理和/或症状和/或进展。
[0075]
在另一方面中，涉及治疗方法，其包括向个体施用本文所描述的化学实体(例如，本文概括或具体描述的化合物或其药学上可接受的盐或含有其的组合物)，其中化学实体以有效地治疗如下疾病的量施用以治疗该疾病，其中nlrp3信号传导的增加可校正先天性免疫活性的缺陷，所述先天性免疫活性的缺陷促进该疾病的病理和/或症状和/或进展。
[0076]
实施方案可包括以下特征中的一或多者。
[0077]
所述化学实体可与一或多种另外的癌症疗法组合施用(例如，手术、放射疗法、化学疗法、毒素疗法、免疫疗法、冷冻疗法或基因疗法或其组合)；例如包括施用一或多种(例如，两种、三种、四种、五种、六种或更多种)另外抗癌剂的癌症疗法。另外抗癌剂(化学治疗剂)的非限制性实例选自烷化剂(例如，顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、氮芥、环磷酰胺、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、异环磷酰胺(ifosfamide)和/或奥沙利铂(oxaliplatin))；抗代谢物(例如，硫唑嘌呤和/或巯基嘌呤)；萜类化合物(例如，长春花生物碱(vinca alkaloid)和/或紫杉烷；例如长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、长春瑞宾(vinorelbine)和/或长春地辛(vindesine)、泰素(taxol)、紫杉醇(paclitaxel)和/或多西他赛(docetaxel))；拓扑异构酶(例如，i型拓扑异构酶和/或2型拓扑异构酶；例如喜树碱(camptothecin)，诸如伊立替康(irinotecan)和/或拓扑替康(topotecan)；安吖啶(amsacrine)、依托泊苷(etoposide)、磷酸依托泊苷和/或替尼泊苷(teniposide))；细胞毒性抗生素(例如，放线菌素、蒽环霉素(anthracycline)、多柔比星、柔红霉素、戊柔比星(valrubicin)、伊达比星、表柔比星(epirubicin)、博莱霉素(bleomycin)、普卡霉素(plicamycin)和/或丝裂霉素(mitomycin))；激素(例如，黄体激素释放激素激动剂；例如亮丙瑞林(leuprolidine)、戈舍瑞林(goserelin)、曲普瑞林(triptorelin)、组胺瑞林(histrelin)、比卡鲁胺(bicalutamide)、氟他胺(flutamide)和/或尼鲁米特)；抗体(例如，阿昔单抗(abciximab)、阿达木单抗(adalimumab)、阿仑单抗(alemtuzumab)、阿利珠单抗(atlizumab)、巴利昔单抗(basiliximab)、贝利木单抗(belimumab)、贝伐珠单抗(bevacizumab)、本妥昔单抗(brentuximab vedotin)、康纳单抗(canakinumab)、西妥昔单抗(cetuximab)、培舍珠单抗(certolizumab pegol)、达利珠单抗(daclizumab)、地舒单抗(denosumab)、依库珠单抗(eculizumab)、艾法珠单抗(efalizumab)、吉妥珠单抗(gemtuzumab)、戈利木单抗(golimumab)、替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)、英利昔单抗(infliximab)、伊匹木单抗(ipilimumab)、莫罗单抗(muromonab)-cd3、那他珠单抗(natalizumab)、奥伐木单抗(ofatumumab)、奥马珠单抗(omalizumab)、帕利珠单抗(palivizumab)、帕尼单抗(panitummuab)、雷珠单抗(ranibizumab)、利妥昔单抗(rituximab)、妥珠单抗(tocilizumab)、托西莫单抗(tositumomab)和/或曲妥珠单抗(trastuzumab))；抗血管生成剂；细胞因子；血栓形成活性剂；生长抑制剂；抗肠虫剂；及靶向选自以下的免疫检查点受体的免疫检查点抑制剂：ctla-4、pd-1、pd-l1、pd-1-pd-l1、pd-1-pd-l2、t细胞免疫球蛋白及粘蛋白3(tim3或havcr2)、半乳凝素9-tim3、磷脂酰丝氨酸-tim3、淋巴细胞活化基因3蛋白(lag3)、ii类mhc-lag3、4-1bb-4-1bb配体、ox40-ox40配体、gitr、gitr配体-gitr、cd27、cd70-cd27、tnfrsf25、tnfrsf25-tl1a、cd40l、cd40-cd40配体、hvem-light-lta、hvem、hvem-btla、hvem-cd160、hvem-light、hvem-btla-cd160、cd80、cd80-pdl-1、pdl2-cd80、cd244、cd48-cd244、cd244、icos、icos-icos配体、b7-h3、b7-h4、vista、tmigd2、hhla2-tmigd2、嗜乳脂蛋白包括btnl2、siglec家族、tigit及pvr家庭成员、kir、ilt及lir、nkg2d及nkg2a、mica及micb、cd244、cd28、cd86-cd28、cd86-ctla、cd80-cd28、磷脂酰丝氨酸、tim3、磷脂酰丝氨酸-tim3、sirpa-cd47、vegf、神经毡蛋白、cd160、cd30及cd155(例如，ctla-4或pd1或pd-l1)以及其他免疫调节剂，诸如白介素-2(il-2)、吲哚胺2,3-二加氧酶(ido)、il-10、转型生长因子-β(tgfβ)、
cd39、cd73腺苷-cd39-cd73及cxcr4-cxcl12。
[0078]
个体可患有癌症；例如个体已经历和/或正经历和/或将经历一或多种癌症疗法。
[0079]
癌症的非限制性实例包括急性髓性白血病、肾上腺皮质癌、卡波西氏肉瘤(kaposi sarcoma)、淋巴瘤、肛门癌、阑尾癌、畸胎样/横纹肌样瘤、基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、支气管瘤、类癌瘤、心脏肿瘤、子宫颈癌、脊索瘤、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓增生性肿瘤、结肠癌、结肠直肠癌、颅咽管瘤、子宫内膜癌、室管膜瘤、食道癌、成感觉神经细胞瘤(esthesioneuroblastoma)、尤因瘤(ewing sarcoma)、眼癌、输卵管癌、胆囊癌、胃肠道类癌瘤、胃肠道基质肿瘤、胚细胞瘤、多毛细胞白血病、头颈癌、心脏癌、肝癌、下咽癌(hypopharngeal cancer)、胰腺癌、肾癌、喉癌、慢性髓性白血病、唇及口腔癌、肺癌、黑素瘤、梅克尔(merkel)细胞癌、间皮瘤、口腔癌(mouth cancer)、口癌(oral cancer)、骨肉瘤、卵巢癌、阴茎癌、咽癌、前列腺癌、直肠癌、唾液腺癌、皮肤癌、小肠癌、软组织肉瘤、睾丸癌、咽喉癌、甲状腺癌、尿道癌、子宫癌、阴道癌及外阴癌。
[0080]
在其他实施方案中，哺乳动物已经鉴别为患有癌症或传染病。代表性传染病包括但不限于不动细菌(acinobacter)感染、放线菌病、非洲(african)睡眠疾病、获得性免疫缺乏综合征、阿米巴虫病(amebiasis)、边虫病、炭疽病、溶血隐秘杆菌(arcanobacterium haemolyticum)感染、阿根廷出血热、蛔虫病、曲霉病、星状病毒感染、巴贝虫病、蜡样芽胞杆菌(bacillus cereus)感染、细菌性肺炎、细菌性阴道炎、拟杆菌(bacteroide)感染、小袋纤毛虫病、贝利蛔线虫属(baylisascaris)感染、bk病毒感染、黑色毛结节菌病、人芽囊原虫(blastocystic hominis)感染、芽生菌病、玻利维亚(bolivian)出血热、肉毒中毒、巴西(brazilian)出血热、普鲁斯病、淋巴腺鼠疫、伯克氏菌(burkholderi)感染、布鲁利(buruli)溃疡、杯状病毒(calicivirus)感染、弯曲菌病(campylobacteriosis)、念珠菌病、猫刮擦病、蜂窝组织炎、查加斯病(chagas disease)、软下疳、水痘、屈公热、衣原体、肺炎嗜衣原体(chlamydophila pneumoniae)感染、霍乱、着色芽生菌病、支睾吸虫病、艰难梭菌(clostridium difficile)感染、球孢子菌病、科罗拉多(colorado)壁虱热、感冒、克雅氏病(creutzfeldt-jakob disease)、克里米亚-冈果(crimean-congo)出血热、隐球菌病、隐孢子虫病、皮肤幼虫移行症、圆孢子虫病、囊虫病、巨细胞病毒感染、登革热(dengue fever)、链带藻(desmodesmus)感染、deintamoebiasis、白喉、裂头绦虫病、龙线虫病、埃博拉(ebola)出血热、包虫病、埃利希病(ehrlichiosis)、蛲虫病、肠球菌(enterococcus)感染、肠病毒(enterovirus)感染、流行性斑疹伤寒、红斑感染、猝发疹、姜片吸虫病、肝片吸虫病、致死性家族失眠、丝虫病、因梭状芽孢杆菌肌坏死(clostridium myonecrosis)引起的食物中毒、自生生活阿米巴感染、梭杆菌(fusobacterium)感染、气性坏疽、地丝菌症、格斯曼-斯-谢恩克尔综合征(gerstmann
‑‑
scheinker syndrome)、梨形鞭毛虫病、马鼻疽、颚口线虫病、淋病、腹股沟肉芽肿、a组链球菌感染、b组链球菌感染、流感嗜血杆菌(haemophilus influenzae)感染、手足口病、汉坦病毒(hantavirus)肺综合征、陆心病毒(heartland virus)病、幽门螺杆菌(heliobacter pylori)感染、溶血性尿毒症综合征、出血热伴肾综合征、甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎、戊型肝炎、单纯疱疹、组织浆菌病、钩虫(hookworm)感染、人类博卡病毒(bocavirus)感染、人类尤因氏埃里希体病(human ewingii ehrlichiosis)、人类粒细胞边虫病、人类肺炎后病毒(human metapneuomovirus)感染、人类单核球性埃里希体病、人类乳突状瘤病毒感染、人类副流行性感冒病毒感染、绦
虫膜壳绦虫病、艾司坦-巴尔病毒(epstein-barr virus)感染性单核白血球增多症、流感、等孢球虫病、川崎病(kawasaki disease)、角膜炎、金格杆菌(kingella kingae)感染、库鲁病(kuru)、拉沙热、莱金奈尔病(legionnaires'disease)、庞蒂亚克热(pontiac fever)、利什曼体病(leishmaniasis)、麻风、钩端螺旋体病、李斯特菌病(listeriosis)、莱姆病(lyme disease)、淋巴丝虫病、淋巴细胞脉络丛脑膜炎、疟疾、马堡(marburg)出血热、麻疹、中东(middle east)呼吸道综合征、类鼻疽、脑膜炎、脑膜炎球菌病、后殖吸虫病、微孢子虫病、传染性软疣、猴痘、腮腺炎、鼠斑疹伤寒、支原体肺炎、足菌病、蝇蛆病、新生儿结膜炎、变异型克雅氏病、奴卡菌病、盘尾丝虫病、副球孢子菌病、肺吸虫病、巴氏杆菌症(pasteurellosis)、头虱病、体虱病、阴虱病、骨盆发炎症、百日咳、瘟疫、肺炎、脊髓灰白质炎、普雷沃菌(prevotella)感染、原发性阿米巴脑膜脑炎、渐进性多病灶脑白质病、鹦鹉病、q热、狂犬病、回归热、呼吸道融合细胞病毒感染、鼻芽孢虫病、鼻病毒(rhinovirus)感染、立克次体感染、痘立克次体病、裂谷热(rift valley fever)、落基山(rocky mountain)斑点热、轮状病毒感染、风疹、沙门氏杆菌病(salmonellosis)、严重急性呼吸综合征、疥疮、血吸虫病、败血症、志贺杆菌病(shigellosis)、带状疱疹、天花、孢子丝菌病(sporothrichosis)、葡萄球菌食物(staphylococcal)中毒、葡萄球菌感染、类圆线虫病、亚急性硬化性泛脑炎、梅毒、绦虫病、破伤风、须癣、头癣、体癣、股癣、手癣、黑癣、足癣、甲癣、花斑癣、蛔虫症、沙眼、弓形虫病、旋毛虫病、滴虫病、鞭虫症、肺结核、土拉菌病(tularemia)、伤寒热、解脲支原体(ureaplasma urealyticum)感染、山谷热、委内瑞拉(venezuelan)出血热、病毒性肺炎、西尼罗河(west nile)热、白色毛结节菌病、假结核耶尔森菌(yersinia psuedotuberculosis)感染、耶尔森氏鼠疫杆菌肠道病(yersiniosis)、黄热病及接合菌病。
[0081]
可瘤内施用所述化学实体。
[0082]
可全身性地(包括但不限于口服、皮下、肌肉内、经静脉内)施用所述化学实体。
[0083]
所述方法可进一步包括鉴别个体。
[0084]
其他实施方案包括描述于发明详述和/或权利要求范围中的实施方案。
[0085]
定义
[0086]
为便于理解本文所阐述的本发明，下文定义一些其他术语。一般而言，本文所使用的命名法及本文所描述的有机化学、药物化学及药理学中的实验室程序是本领域公知的且通常用于本领域中。除非另外规定，否则本文所用的所有技术及科学术语一般具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解相同的含义。
[0087]
除非本文另有具体说明，否则以单数形式提及也可包括复数形式。例如，“一(a)”和“一个(an)”可以指一个，或者一个或多个。
[0088]
除非另有说明，否则具有不满足化合价的任何杂原子设定为具有足以满足化合价的氢原子。
[0089]
为了清楚起见，并根据本领域的标准惯例，在式和表中使用符号以显示键，该键是基团或取代基与结构的核/核心的连接点。
[0090]
另外，为了清楚起见，当取代基具有不在两个字母或符号之间的破折号(-)时，这用于表示取代基的连接点。例如，-och3通过氧原子连接。
[0091]
如本文所使用，术语“nlrp3”意指包括但不限于核酸、聚核苷酸、寡核苷酸、正义及
反义多核苷酸链、互补序列、肽、多肽、蛋白质、同源和/或直系同源nlrp3分子、同工型、前体、突变体、变体、衍生物、剪接变体、等位基因、不同物种及其活性片段。
[0092]
nlrp3的“激动剂”包括例如通过活化、稳定化、改变分布或以其他方式在蛋白质水平直接结合或改变nlrp3而使得nlrp3活性增加的化合物。
[0093]
与nlrp3完全激动剂相比在更小程度上激动nlrp3的本文所描述的某些化合物可在测定中用作拮抗剂以及激动剂。这些化合物拮抗由nlrp3完全激动剂导致的nlrp3的活化，因为其防止nlrp3相互作用的完全作用。然而，所述化合物自身还活化一些nlrp3活性，通常小于nlrp3完全激动剂的对应量。此类化合物可称作”nlrp3的部分激动剂”。
[0094]
在一些实施方案中，本文所描述的化合物是nlrp3的激动剂(例如，完全激动剂)。在其他实施方案中，本文所描述的化合物是nlrp3的部分激动剂。
[0095]
一般而言，受体以活性(ra)及非活性(ri)构象存在。影响受体的某些化合物可改变ra比ri(ra/ri)的比。举例而言，完全激动剂增加ra/ri的比且可产生“最大”饱和作用。当结合于受体时，部分激动剂产生低于由完全激动剂(例如，内源性激动剂)引发的响应的响应。因此，部分激动剂的ra/ri小于完全激动剂的ra/ri。然而，部分激动剂的效能可大于或小于完全激动剂的效能。
[0096]
如本文所使用，关于配制物、组合物或成分的术语“可接受”意指对所治疗的个体的整体健康不具有持续有害作用。
[0097]“api”是指活性药物成分。
[0098]
如本文所使用，术语“有效量”或“治疗有效量”是指所施用化学实体(例如，展现作为线粒体解偶剂活性的化合物或其药学上可接受的盐和/或水合物和/或共晶；例如化合物，诸如氯硝柳胺或其药学上可接受的盐和/或水合物和/或共晶；例如化合物，诸如氯硝柳胺类似物或其药学上可接受的盐和/或水合物和/或共晶)的足够量，其将在一定程度上缓解所治疗的疾病或病症的症状中的一或多者。结果包括减轻和/或缓解疾病的病征、症状或病因，或生物系统的任何其他所需改变。举例而言，用于治疗用途的“有效量”是使疾病症状在临床上显著减轻所需的包含如本文所公开的化合物的组合物的量。可使用诸如剂量递增研究的任何适合技术测定任何个别情况下的适当“有效”量。
[0099]
术语“赋形剂”或“药学上可接受的赋形剂”意指药学上可接受的物质、组合物或介质，诸如液体或固体填充剂、稀释剂、载体、溶剂或囊封物质。在一个实施方案中，各组分在以下意义上为“药学上可接受的”：与药物配制物的其他成分兼容且适用于与人类及动物的组织或器官接触而无过度毒性、刺激、过敏反应、免疫原性或其他问题或并发症，与合理益处/风险比相匹配。参见例如remington:the science and practice of pharmacy,第22版,pharmaceutical press,london,uk(2012)；handbook of pharmaceutical excipients,第6版；rowe等人编；the pharmaceutical press and the american pharmaceutical association:(2009)；handbook of pharmaceutical additives,第3版；ash及ash编；gower publishing company:(2007)；pharmaceutical preformulation and formulation,第2版；gibson编；crc press llc:boca raton,fl,(2009)。
[0100]
术语“药学上可接受的盐”是指不对其所施用的生物体产生显著刺激且不消除化合物的生物活性及特性的化合物的配制物。在某些情况下，药学上可接受的盐通过使本文所描述的化合物与诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨
酸及其类似物的酸反应获得。在一些情况下，药学上可接受的盐通过使本文所描述的具有酸性基团的化合物与碱反应以形成盐或通过预先确定的其他方法来获得，所述盐诸如铵盐；碱金属盐，诸如钠盐或钾盐；碱土金属盐，诸如钙盐或镁盐；有机碱的盐，诸如二环己胺、n-甲基-d-葡糖胺；三(羟基甲基)甲胺及与氨基酸诸如精氨酸、离氨酸的盐及其类似物。药理学上可接受的盐不受特定限制，只要其可用于药物即可。本文所描述的化合物与碱形成的盐的实例包括以下：其与无机碱诸如钠、钾、镁、钙及铝的盐；其与有机碱诸如甲胺、乙胺及乙醇胺的盐；其与碱性氨基酸诸如离氨酸及鸟氨酸的盐；及铵盐。盐可为酸加成盐，其通过使用以下的酸加成盐来特定例示：矿物酸，诸如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸及磷酸；有机酸，诸如甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、丁二酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸及乙磺酸；酸性氨基酸，诸如天冬氨酸及谷氨酸。
[0101]
术语“药物组合物”是指本文所描述的化合物与其他化学组分(在本文中通称为”赋形剂”)诸如载体、稳定剂、稀释剂、分散剂、悬浮剂和/或增稠剂的混合物。药物组合物有助于向生物体施用化合物。本领域中存在多种施用化合物的技术，其包括但不限于：经直肠、口服、经静脉内、气雾剂、胃肠外、经眼、经肺及局部施用。
[0102]
术语“个体”是指动物，包括但不限于灵长类动物(例如人类)、猴、牛、猪、绵羊、山羊、马、犬、猫、兔、大鼠或小鼠。术语“个体”及”患者”在本文中关于例如哺乳动物个体(诸如人类)时可互换使用。
[0103]
在治疗疾病或障碍的情况下，术语“治疗”意指包括缓解或消除障碍、疾病或病症或与该障碍、疾病或病症有关的症状中的一或多者；或减缓疾病、障碍或病症或一或多种其症状的进展、扩散或恶化。“癌症治疗”是指以下作用中的一或多者：(1)在一定程度上抑制肿瘤生长，包括(i)减缓及(ii)完全的生长阻止；(2)减少肿瘤细胞数目；(3)维持肿瘤尺寸；(4)减小肿瘤尺寸；(5)抑制，包括(i)减少、(ii)减缓或(iii)完全防止肿瘤细胞浸润于周边器官中；(6)抑制，包括(i)减少、(ii)减缓或(iii)完全防止癌转移；(7)增强抗肿瘤免疫反应，其可(i)维持肿瘤尺寸，(ii)减小肿瘤尺寸，(iii)减缓肿瘤生长，(iv)减少、减缓或防止侵袭和/或(8)在一定程度上减轻与障碍相关的一或多种症状的严重性或数目。
[0104]
术语“卤代基”或“卤素”是指氟(f)、氯(cl)、溴(br)或碘(i)。
[0105]
术语“烷基”是指含有指定数目的碳原子的可为直链或支链的烃链。举例而言，c
1-10
指示基团中可具有1至10个(包括端点)碳原子。非限制性实例包括甲基、乙基、异丙基、叔丁基、正己基。
[0106]
术语“亚烷基”是指支链或非支链二价烷基(例如，-ch
2-)。
[0107]
术语“卤代烷基”是指一或多个氢原子被独立选择的卤代基替换的烷基。
[0108]
术语“烷氧基”是指-o-烷基(例如，-och3)。
[0109]
术语“卤代烷氧基”是指如上文定义的-o-卤代烷基，其具有通过氧桥连接的指定数目的碳原子。例如，“c
1-6
卤代烷氧基”旨在包括c1、c2、c3、c4、c5和c6卤代烷氧基。卤代烷氧基的实例包括但不限于三氟甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基和五氟乙氧基。
[0110]
术语“烯基”是指具有一或多个碳-碳双键的可为直链或支链的烃链。烯基结构部分含有指定数目个碳原子。举例而言，c
2-6
指示基团中可具有2至6个(包括端点)碳原子。
[0111]
术语“炔基”是指具有一或多个碳-碳参键的可为直链或支链的烃链。炔基结构部分含有指定数目个碳原子。举例而言，c
2-6
指示基团中可具有2至6个(包括端点)碳原子。
[0112]
术语“芳族”通常是指包括共振稳定的4n 2pi电子的环状阵列的环，其中n为整数(例如，1或2)。芳族基团包括芳基和杂芳基。术语“非芳族”描述的是不属于“芳族”定义的任何基团。
[0113]
术语“芳基”是指6碳单环、10碳双环或14碳三环芳族环系统，其中各环的0、1、2、3或4个原子可被取代基取代，且其中包含单环基团的环是芳族的且其中包含双环或三环基团的稠环中的至少一个是芳族的，例如四氢萘基。芳基的实例还包括苯基、萘基及其类似基团。
[0114]
本文所用的术语“环烷基”包括具有5-12个碳的饱和环烃基，优选双环或三环和5至10个碳，其中环烷基可以是螺环或含有一个或多个桥连连接基，并且可以任选被取代。本文所用的术语“亚环烷基”是指二价环烷基。
[0115]
本文所用的术语“杂环烷基”包括具有5至12个环原子的饱和环烃基，优选5至10个双环环原子，包括1至4个各自独立地选自n(或取代的n)、o和s的环原子，其中杂环烷基可以是螺环或含有桥连连接基，并且可以任选地被取代。如本文所用的术语“亚杂环烷基”是指二价杂环烷基。
[0116]“杂芳基”是指芳族5-8员单环、8-12员双环或11-14员三环环系统，其若为单环，则具有1-3个杂原子，若为双环，则具有1-6个杂原子，或若为三环，则具有1-9个杂原子，所述杂原子选自o、n或s(例如，若分别为单环、双环或三环，则碳原子及1-3、1-6或1-9个n、o或s的杂原子)，其中各环的0、1、2、3或4个原子可被取代基取代，且其中包含单环基团的环是芳族的且其中包含双环或三环基团的稠环中至少一个是芳族的(但不一定必须为含有杂原子的环)，例如四氢异喹啉基。杂芳基的实例还包括吡啶基、呋喃基(furyl/furanyl)、咪唑基、苯并咪唑基、嘧啶基、噻吩基(thiophenyl/thienyl)、喹啉基、吲哚基、噻唑基等。
[0117]
术语“杂环基”是指非芳族5-8员单环、8-12员双环或11-14员三环环系统，其若为单环，则具有1-3个杂原子，若为双环，则具有1-6个杂原子，或若为三环，则具有1-9个杂原子，所述杂原子选自o、n或s(例如，若分别为单环、双环或三环，则碳原子及1-3、1-6或1-9个n、o或s的杂原子)，其中各环的0、1、2或3个原子可被取代基取代。杂环基的实例包括哌嗪基、吡咯烷基、二氧杂环己烷基、吗啉基、四氢呋喃基等。
[0118]
另外，构成本发明实施方案的化合物的原子旨在包括此类原子的所有同位素形式。如本文所使用，同位素包括具有相同原子数、但不同质量数的那些原子。通常的实例(但不限于此)是，氢同位素包括氚及氘，碳同位素包括
13
c及
14
c。
[0119]
本发明的一或多个实施方案的详情阐述于以下所附的图及描述中。本发明的其他特征及优势将自本说明书及附以及权利要求明显可见。
[0120]
本发明的特征在于调节(例如，激动或部分激动)nlrp3的化学实体(例如，化合物或该化合物的药学上可接受的盐和/或水合物和/或共晶和/或药物组合)，所述化学实体例如适用于治疗如下病症、疾病或障碍(例如，与不足的免疫反应相关的病症、疾病或障碍)，其中nlrp3信号传导的增加可校正先天性免疫活性的缺陷，该先天性免疫活性的缺陷促进个体(例如人类)的该病症、疾病或障碍(例如，癌症)的病理和/或症状和/或进展。本发明的特征还在于组合物以及使用和制备其的其他方法。
[0121]
药物组合物和施用
[0122]
在一些实施方案中，化学实体(例如，调节(例如，激动或部分激动)nlrp3的化合物
或其药学上可接受的盐和/或水合物和/或共晶和/或药物组合)是作为药物组合物施用，该药物组合物包括化学实体及一或多种药学上可接受的赋形剂及任选的如本文所描述的一或多种另外治疗剂。
[0123]
在一些实施方案中，药物组合物包含本发明化合物或其盐，及一或多种药学上可接受的赋形剂。在某些实施方案中，药物组合物包含本发明化合物或其药学上可接受的盐，及一或多种药学上可接受的赋形剂。在某些实施方案中，药物组合物包含治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐，及一或多种药学上可接受的赋形剂。
[0124]
在一些实施方案中，所述化学实体可与一或多种常规药物赋形剂组合施用。药学上可接受的赋形剂包括但不限于离子交换剂；氧化铝；硬脂酸铝；卵磷脂；自乳化药物递送系统(sedds)，诸如d-α-生育酚聚乙二醇1000丁二酸盐；以药物剂型使用的表面活性剂，诸如tweens、泊洛沙姆(poloxamer)或其他类似的聚合物递送基质；血清蛋白，诸如人类血清白蛋白；缓冲物质，诸如磷酸盐、tris、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾；饱和植物性脂肪酸的部分甘油酯混合物；水、盐或电解液，诸如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠；锌盐；胶态二氧化硅；三硅酸镁；聚乙烯吡咯烷酮；纤维素类物质；聚乙二醇；羧甲基纤维素钠；聚丙烯酸酯；蜡；聚乙烯-聚氧化丙烯嵌段共聚物及羊毛脂。环糊精诸如α-环糊精、β-环糊精及γ环糊精，或化学改性衍生物诸如羟基烷基环糊精，包括2-羟丙基-β-环糊精及3-羟丙基-β-环糊精，或其他溶解衍生物还可用于增强本文所描述的化合物的递送。可制备含有在0.005％至100％范围内的如本文所描述的化学实体且其余部分由无毒赋形剂组成的剂型或组合物。预期的组合物可含有0.001％-100％的本文所提供的化学实体，在一个实施方案中，0.1-95％，在另一实施方案中75-85％，在另一实施方案中，20-80％。制备此类剂型的实际方法为本领域技术人员所已知或对于本领域技术人员而言将为明显可见的；例如参见remington:the science and practice of pharmacy,第22版(pharmaceutical press,london,uk.2012)。
[0125]
施用途径及组合物组分
[0126]
在一些实施方案中，本文所描述的化学实体或其药物组合物可通过任何可接受的施用途径给予有需要个体。可接受的施用途径包括但不限于口腔内、皮肤、子宫颈内、窦道内(endosinusial)、气管内、经肠、硬膜外、间质、腹部内、动脉内、支气管内、囊内、脑内、脑池内、冠状动脉内、皮内、管内、十二指肠内、硬膜内、表皮内、食道内、胃内、齿龈内、回肠内、淋巴管内、髓内、脑膜内、肌肉内、卵巢内、腹膜内、前列腺内、肺内、窦内(intrasinal)、脊髓内、滑膜内、睾丸内、鞘内、小管内、瘤内、子宫内、血管内、静脉内、经鼻、鼻胃管、口服、胃肠外、经皮、硬膜外(peridural)、经直肠、呼吸道(吸入)、皮下、舌下、粘膜下、局部、经皮、经粘膜、经气管、输尿管、尿道及阴道。在某些实施方案中，优选的施用途径是胃肠外(例如，肿瘤内)的。在某些实施方案中，优选的施用途径是全身性的。
[0127]
组合物可经配制用于胃肠外施用，例如，配制用于经由静脉内、肌肉内、皮下或甚至腹膜内途径注射。通常，此类组合物可以以可注射剂形式、以液体溶液或混悬液形式制备；还可制备在注射前在添加液体时适用于制备溶液或混悬液的固体形式；且制剂还可乳化。此类配制物的制备将根据本发明为本领域技术人员所已知。
[0128]
适用于可注射使用的药物形式包括无菌水溶液或分散液；配制物，包括芝麻油、花生油或丙二醇水溶液；及用于无菌可注射溶液或分散液的临时制备的无菌粉末。在所有情
况下，形式必须是无菌的且必须是流体，达到其可易于注射的程度。其还应在制造及储存条件下稳定且必须保存以防诸如细菌及真菌的微生物的污染作用。
[0129]
载剂载体还可为含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇及液体聚乙二醇等)、其适合混合物及植物油的溶剂或分散介质。举例而言，可通过使用包衣诸如卵磷脂、通过维持就分散液而言所需粒度及通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。微生物作用的预防可通过各种抗菌剂及抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、酚、山梨酸、硫柳汞等来实现。在多数情况下，将优选包括等渗剂，例如糖或氯化钠。可注射组合物的延长吸收可通过在组合物中使用延迟吸收剂例如单硬脂酸铝及明胶来实现。
[0130]
无菌可注射溶液是如下制备：将所要量的活性化合物视需要与上文列举的各种其他成分一起并入适当溶剂中，随后过滤灭菌。一般而言，通过将各种灭菌活性成分并入含有碱性分散介质及来自上文列举的那些的所需其他成分的无菌媒剂中来制备分散液。在无菌粉末用于制备无菌可注射溶液的情况下，优选制备方法是真空干燥及冷冻干燥技术，由其先前无菌过滤溶液产生活性成分加任何另外所需成分的粉末。
[0131]
肿瘤内注射论述于例如lammers,等人,“effect of intratumoral injection on the biodistribution and the therapeutic potential of hpma copolymer-based drug delivery systems”neoplasia.10:788-795(2006)中。
[0132]
可作为凝胶、乳膏剂、灌肠剂或经直肠栓剂用于经直肠组合物中的药理学上可接受的赋形剂包括但不限于以下中的任何一或多者：可可脂甘油酯、合成聚合物诸如聚乙烯吡咯烷酮、peg(如peg软膏)、甘油、甘油明胶、氢化植物油、泊洛沙姆、各种分子量的聚乙二醇与聚乙二醇凡士林的脂肪酸酯的混合物、无水羊毛脂、鲨鱼肝油、糖精钠、薄荷醇、甜杏仁油、山梨糖醇、苯甲酸钠、anoxid sbn、香草精油、气雾剂、苯氧基乙醇中的对羟基苯甲酸酯、甲基对氧基苯甲酸钠、丙基对氧基苯甲酸钠、二乙基胺、卡波姆(carbomers)、卡波莫(carbopol)、甲基氧基苯甲酸酯、聚乙二醇十六基十八基醚、辛基癸酸椰油酰酯(cocoyl caprylocaprate)、异丙醇、丙二醇、液体石蜡、三仙胶、羧基-偏亚硫酸氢盐、乙二胺四乙酸钠、苯甲酸钠、偏亚硫酸氢钾、葡萄柚籽提取物、甲基磺酰基甲烷(msm)、乳酸、甘氨酸、维生素诸如维生素a及e以及乙酸钾。
[0133]
在某些实施方案中，可通过将本文所描述的化学实体与适合的非刺激赋形剂或载体诸如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡混合来制备栓剂，其在环境温度下是固体但在体温下是液体且因此在直肠中融化并释放活性化合物。在其他实施方案中，用于经直肠施用的组合物呈灌肠剂形式。
[0134]
在其他实施方案中，本文所描述的化合物或其药物组合物适用于通过口服施用(例如，固体或液体剂型)局部递送至消化道或胃肠道。
[0135]
用于口服施用的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、散剂及颗粒剂。在此类固体剂型中，化学实体是与一或多种药学上可接受的赋形剂诸如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或以下各者混合：a)填充剂或增量剂诸如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇及硅酸，b)粘合剂诸如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖及阿拉伯胶，c)保湿剂诸如甘油，d)崩解剂诸如琼脂-琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐及碳酸钠，e)溶液阻滞剂诸如石蜡，f)吸收激动剂诸如季铵化合物，g)湿润剂诸如鲸蜡醇及甘油单硬脂酸酯，h)吸收剂诸如高岭土及膨润土，以及i)润滑剂诸如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月
桂基硫酸钠，以及其混合物。在胶囊、片剂及丸剂的情况下，剂型还可包含缓冲剂。还可使用相似类型的固体组合物作为软填充及硬填充的明胶胶囊中的填充剂，所述胶囊使用赋形剂，诸如乳糖(lactose/milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等。
[0136]
在一个实施方案中，组合物将采取单位剂型诸如丸剂或片剂的形式，且因此除了本文所提供的化学实体以外，组合物可含有稀释剂诸如乳糖、蔗糖、磷酸二钙等；润滑剂诸如硬脂酸镁等；及粘合剂诸如淀粉、阿拉伯胶、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、纤维素、纤维素衍生物等。在另一种固体剂型中，粉末、造粒(marume)、溶液或混悬液(例如，在碳酸亚丙酯、植物油、peg、泊洛沙姆124或三酸甘油酯中)囊封于胶囊(明胶或纤维素类胶囊)中。还涵盖其中本文所提供的一或多种化学实体或另外活性剂以物理方式分离的单位剂型；例如，具有各药物的颗粒的胶囊(或呈胶囊形式的片剂)；双层片剂；二室凝胶帽等。还涵盖包覆肠溶包衣或延迟释放口服剂型。
[0137]
其他生理学上可接受的化合物包括湿润剂、乳化剂、分散剂或尤其适用于防止微生物生长或活动的防腐剂。各种防腐剂已众所周知且包括例如酚及抗坏血酸。
[0138]
在某些实施方案中，赋形剂是无菌的且一般不含非所要物质。所述组合物可通过常规、众所周知的灭菌技术来灭菌。对于各种口服剂型赋形剂，诸如片剂及胶囊，不需要无菌。usp/nf标准通常是足够的。
[0139]
在某些实施方案中，固体口服剂型可进一步包括化学上和/或结构上使组合物易于将化学实体递送至胃或下部gi；例如升结肠和/或横结肠和/或远侧结肠和/或小肠的一或多种组分。示例性配制技术描述于例如filipski,k.j.等人,current topics in medicinal chemistry,2013,13,776-802中。
[0140]
实例包括上部gi靶向技术，例如，accordion pill(intec pharma)、浮动胶囊及能够粘附至粘膜壁的物质。
[0141]
其他实例包括下部gi靶向技术。针对靶向肠道中的各个区域，数种肠溶/ph反应性包衣及赋形剂是可用的。基于所需药物释放的gi区域来选择，这些材料通常是经设计以在特定ph范围下溶解或腐蚀的聚合物。这些材料还起作用以保护酸不稳定药物免遭胃液或极限暴露破坏，在活性成分可能刺激上部gi的情况下(例如，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯系列、coateric(聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯)、醋酞纤维素、乙酸羟丙基甲基纤维素丁二酸酯(hydroxypropyl methylcellulose acetate succinate)、eudragit系列(甲基丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物)及marcoat)。其他技术包括对胃肠道中的局部菌群起反应的剂型、控压式结肠递送胶囊及脉冲塞囊(pulsincap)。
[0142]
眼部组合物可包括但不限于以下任一者中的一或多者：粘胶蛋白(例如，羧甲基纤维素、甘油、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇)；稳定剂(例如，普洛尼克(pluronic)(三嵌段共聚物)、环糊精)；防腐剂(例如，苯扎氯铵(benzalkonium chloride)、etda、sofzia(硼酸、丙二醇、山梨糖醇及氯化锌；alcon laboratories,inc.)、purite(稳定的氧氯复合物；allergan,inc.))。
[0143]
局部组合物可包括软膏剂及乳膏剂。软膏剂是通常基于石蜡脂或其他石油衍生物的半固体制剂。含有所选择活性剂的乳膏剂通常是粘稠液体或半固体乳液，通常是水包油或油包水的。乳膏剂基质通常是水可洗的，且含有油相、乳化剂及水相。油相，有时还称作“内部”相，一般包含石蜡脂及脂肪醇诸如十六醇或十八醇；尽管不必需，但水相的体积通常
超过油相，且一般含有保湿剂。乳膏剂配制物中的乳化剂一般是非离子、阴离子、阳离子或两性表面活性剂。如同其他载体或媒剂，软膏剂基质应为惰性、稳定、无刺激性及不敏感的。
[0144]
在前述实施方案中的任一者中，本文所描述的药物组合物可包括以下中的一或多者：脂质、双层间交联多层囊泡、生物可降解聚(d,l-乳酸-共-乙醇酸)[plga]基或聚酐类纳米粒子或微米粒子，及纳米多孔粒子负载型脂质双层。
[0145]
剂量
[0146]
剂量可视患者需求、所治疗病状的严重性及所采用的特定化合物而变化。针对特定情况的适当剂量可由医学领域的技术人员来确定。每日总剂量可划分为多份且全天内数份施用或通过提供连续递送的手段施用。
[0147]
在一些实施方案中，本文所描述的化合物的施用剂量是约0.001mg/kg至约500mg/kg(例如，约0.001mg/kg至约200mg/kg；约0.01mg/kg至约200mg/kg；约0.01mg/kg至约150mg/kg；约0.01mg/kg至约100mg/kg；约0.01mg/kg至约50mg/kg；约0.01mg/kg至约10mg/kg；约0.01mg/kg至约5mg/kg；约0.01mg/kg至约1mg/kg；约0.01mg/kg至约0.5mg/kg；约0.01mg/kg至约0.1mg/kg；约0.1mg/kg至约200mg/kg；约0.1mg/kg至约150mg/kg；约0.1mg/kg至约100mg/kg；约0.1mg/kg至约50mg/kg；约0.1mg/kg至约10mg/kg；约0.1mg/kg至约5mg/kg；约0.1mg/kg至约1mg/kg；约0.1mg/kg至约0.5mg/kg)。
[0148]
给药方案
[0149]
前述剂量可基于每天施用(例如，作为单次剂量或作为两次或更多次的分次剂量)或非每日施用(例如，每隔一天、每两天、每三天、每周一次、每周两次、每两周一次、每月一次)。
[0150]
在一些实施方案中，本文中所描述的化合物的施用时段是持续1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月或更长时间。在另一实施方案中，停止施用的时段是持续1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月或更长时间。在一个实施方案中，在一时间段里向个人施用治疗性化合物，随后为一独立的时间段。在另一个实施方案中，在第一时段及第一时段后的第二时段里施用治疗性化合物，其中在第二时段期间施用停止，随后为开始施用治疗性化合物的第三时段，且接着在第三时段后为停止施用的第四时段。在此实施方案的一方面中，治疗化合物的施用时间后为停止施用的时间段，将该过程重复确定的或不确定的时间段。在另一实施方案中，施用时段是持续1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月或更长时间。在另一实施方案中，停止施用的时段是持续1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月或更长时间。
[0151]
治疗方法
[0152]
在一些实施方案中，提供用于治疗患有如下病症、疾病或障碍(例如，与不足的免疫反应相关的病症、疾病或障碍)的个体的方法，其中nlrp3信号传导的增加可校正先天性
免疫活性的缺陷，该先天性免疫活性的缺陷促进病症、疾病或障碍(例如，癌症)的病理和/或症状和/或进展。
[0153]
适应证
[0154]
在本文所描述的任一方法中，个体可患有癌症。在本文所描述的任一方法的一些实例中，哺乳动物已经鉴别为患有癌症或已经诊断为患有癌症。
[0155]
癌症的非限制性实例包括：急性髓性白血病、肾上腺皮质癌、卡波西氏肉瘤、淋巴瘤、肛门癌、阑尾癌、畸胎样/横纹肌样瘤、基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、支气管瘤、类癌瘤、心脏肿瘤、子宫颈癌、脊索瘤、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓增生性肿瘤、结肠癌、结肠直肠癌、颅咽管瘤、子宫内膜癌、室管膜瘤、食道癌、成感觉神经细胞瘤、尤因瘤、眼癌、输卵管癌、胆囊癌、胃肠道类癌瘤、胃肠道基质肿瘤、胚细胞瘤、多毛细胞白血病、头颈癌、心脏癌、肝癌、下咽癌、胰腺癌、肾癌、喉癌、慢性髓性白血病、唇及口腔癌、肺癌、黑素瘤、梅克尔细胞癌、间皮瘤、口腔癌、口癌、骨肉瘤、卵巢癌、阴茎癌、咽癌、前列腺癌、直肠癌、唾液腺癌、皮肤癌、小肠癌、软组织肉瘤、睾丸癌、咽喉癌、甲状腺癌、尿道癌、子宫癌、阴道癌及外阴癌。
[0156]
在某些实施方案中，癌症的非限制性实例包括：乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、胰腺癌及前列腺癌。
[0157]
将个体诊断为患有癌症或将哺乳动物鉴别为患有癌症的方法是本领域熟知的。举例而言，医学专业人员(例如，医师、医师助理或技术员)可通过观测哺乳动物的癌症的一或多种症状来诊断哺乳动物的癌症。癌症的症状的非限制性实例包括：疲劳、皮肤下感觉到的肿块或变厚区域、体重变化、黄疸、皮肤变黑或发红、不会愈合的疮、现有痣的变化、肠道或膀胱习惯的变化、持久性咳嗽或呼吸困难、吞咽困难、嘶哑、进食后持久性消化不良或不适、不明原因的持久性肌肉或关节痛、不明原因的持久性发热或盗汗、以及不明原因的出血或伤痕。将个体诊断为患有癌症或将个体鉴别为患有癌症的方法可进一步包括进行一或多项诊断测试(例如，对活体组织切片或血液样品进行一或多项诊断测试)。
[0158]
在本文所描述的任一方法的一些实例中，个体可为患有癌症的个体、诊断为患有癌症的个体或鉴别为患有癌症的已经对针对癌症的先前施用治疗无响应的个体。用于将个体诊断为患有癌症或将哺乳动物鉴别为患有癌症的诊断测试是本领域中已知的。
[0159]
在一些实施方案中，提供用于治疗其中患有如下病症、疾病或障碍的个体的方法，其中nlrp3信号传导的增加可校正先天性免疫活性的缺陷(例如，与不足的免疫反应相关的病症、疾病或障碍)，该先天性免疫活性的缺陷促进病症、疾病或障碍(例如，癌症)的病理和/或症状和/或进展。
[0160]
在一些实施方案中，本发明提供治疗癌症的方法，其中该癌症可为不诱发最佳先天性免疫系统响应的任何癌症。
[0161]
先天性免疫系统是指免疫系统的一部分，其由以抗原非特异性方式对针对生物体的威胁如感染或癌症反应、且刺激适应性的抗原特异性免疫系统的细胞组成。一般而言，对威胁及长效保护(＝免疫性)的完全移除需要适应性的抗原特异性免疫系统的活性，而该免疫系统依赖于先天性免疫系统的刺激。
[0162]
在一些实施方案中，本发明提供治疗病例的方法，癌症基于对t细胞检查点抑制的抗性来选择，其独立于癌症类型且基于未能对先前t细胞检查点抑制剂疗法有响应，或基于
一般对t细胞检查点抑制剂疗法具抗性的癌症类型，诸如激素受体阳性乳腺癌、小随体稳定结肠或直肠癌、胰腺癌及前列腺癌。
[0163]
在某些其他实施方案中，本发明提供治疗癌症的方法，其包含本发明的nlpr3激动剂，以治疗具有低cd8 t细胞浸润的非炎症的肿瘤，以增强肿瘤免疫原性且促进炎症反应。举例而言，基于证实低cd8 t细胞浸润或cd8 t细胞所产生的基因低表达的活体组织切片结果，组合可用以治疗实体肿瘤。
[0164]
对t细胞检查点抑制的抗性，是指根据癌症各自的共识响应标准，诸如针对大多数实体肿瘤的recist1.1，在疗法6个月内对疗法缺乏响应或治疗中癌症进展。
[0165]
t细胞浸润是指通过肿瘤活体组织切片样本的免疫组织化学得到的t细胞占所有有核细胞的百分比。
[0166]
cd8 t细胞浸润是指通过肿瘤活体组织切片样本的免疫组织化学得到的cd8 细胞占所有有核细胞的百分比。
[0167]
除用于量化活体组织切片样本中的cd8 t细胞的免疫组织化学以外，通过cd8 t细胞产生的基因表达如干扰素-γ可通过使用例如下一代测序来量化mrna从而测定，并告知有关cd8 t细胞浸润。各个研究组正在开发通过mrna量化技术的免疫组织化学得到低及高cd8 t细胞浸润的阈值，且将贯穿各癌症以及针对特定癌症的cd8 t细胞浸润谱考虑在内。
[0168]
在本文所描述的任一方法中，个体可患有传染病。在本文所描述的任一方法的一些实例中，个体已经鉴别为患有传染病，或已经诊断为患有传染病。举例而言，传染病可由细菌、病毒、真菌、寄生虫或分支杆菌引起。
[0169]
传染病的非限制性实例包括：不动细菌感染、放线菌病、非洲睡眠疾病、获得性免疫缺乏综合征、阿米巴虫病、边虫病、炭疽病、溶血隐秘杆菌感染、阿根廷出血热、蛔虫病、曲霉病、星状病毒感染、巴贝虫病、蜡样芽胞杆菌感染、细菌性肺炎、细菌性阴道炎、拟杆菌感染、小袋纤毛虫病、贝利蛔线虫属感染、bk病毒感染、黑色毛结节菌病、人芽囊原虫感染、芽生菌病、玻利维亚出血热、肉毒中毒、巴西出血热、普鲁斯病、淋巴腺鼠疫、伯克氏菌感染、布鲁利溃疡、杯状病毒感染、弯曲菌病、念珠菌病、猫刮擦病、蜂窝组织炎、查加斯病、软下疳、水痘、屈公热、衣原体、肺炎嗜衣原体感染、霍乱、着色芽生菌病、支睾吸虫病、艰难梭菌感染、球孢子菌病、科罗拉多壁虱热、感冒、克雅氏病、克里米亚-冈果出血热、隐球菌病、隐孢子虫病、皮肤幼虫移行症、圆孢子虫病、囊虫病、巨细胞病毒感染、登革热、链带藻感染、deintamoebiasis、白喉、裂头绦虫病、龙线虫病、埃博拉出血热、包虫病、埃利希病、蛲虫病、肠球菌感染、肠病毒感染、流行性斑疹伤寒、红斑感染、猝发疹、姜片吸虫病、肝片吸虫病、致死性家族失眠、丝虫病、因梭状芽孢杆菌肌坏死引起的食物中毒、自生生活阿米巴感染、梭杆菌感染、气性坏疽、地丝菌症、格斯曼-斯-谢恩克尔综合征、梨形鞭毛虫病、马鼻疽、颚口线虫病、淋病、腹股沟肉芽肿、a组链球菌感染、b组链球菌感染、流感嗜血杆菌感染、手足口病、汉坦病毒肺综合征、陆心病毒病、幽门螺杆菌感染、溶血性尿毒症综合征、出血热伴肾综合征、甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎、戊型肝炎、单纯疱疹、组织浆菌病、钩虫感染、人类博卡病毒感染、人类尤因氏埃里希体病、人类粒细胞边虫病、人类肺炎后病毒感染、人类单核球性埃里希体病、人类乳突状瘤病毒感染、人类副流行性感冒病毒感染、绦虫膜壳绦虫病、艾司坦-巴尔病毒感染性单核白血球增多症、流感、等孢球虫病、川崎病、角膜炎、金格杆菌感染、库鲁病、拉沙热、莱金奈尔病、庞蒂亚克热、利什曼体病、麻风、钩端螺旋体病、
李斯特菌病、莱姆病、淋巴丝虫病、淋巴细胞脉络丛脑膜炎、疟疾、马堡出血热、麻疹、中东呼吸道综合征、类鼻疽、脑膜炎、脑膜炎球菌病、后殖吸虫病、微孢子虫病、传染性软疣、猴痘、腮腺炎、鼠斑疹伤寒、支原体肺炎、足菌病、蝇蛆病、新生儿结膜炎、变异型克雅氏病、奴卡菌病、盘尾丝虫病、副球孢子菌病、肺吸虫病、巴氏杆菌症、头虱病、体虱病、阴虱病、骨盆发炎症、百日咳、瘟疫、肺炎、脊髓灰白质炎、普雷沃菌感染、原发性阿米巴脑膜脑炎、渐进性多病灶脑白质病、鹦鹉病、q热、狂犬病、回归热、呼吸道融合细胞病毒感染、鼻芽孢虫病、鼻病毒感染、立克次体感染、痘立克次体病、裂谷热、落基山斑点热、轮状病毒感染、风疹、沙门氏杆菌病、严重急性呼吸综合征、疥疮、血吸虫病、败血症、志贺杆菌病、带状疱疹、天花、孢子丝菌病、葡萄球菌食物中毒、葡萄球菌感染、类圆线虫病、亚急性硬化性泛脑炎、梅毒、绦虫病、破伤风、须癣、头癣、体癣、股癣、手癣、黑癣、足癣、甲癣、花斑癣、蛔虫症、沙眼、弓形虫病、旋毛虫病、滴虫病、鞭虫症、肺结核、土拉菌病、伤寒热、解脲支原体感染、山谷热、委内瑞拉出血热、病毒性肺炎、西尼罗河热、白色毛结节菌病、假结核耶尔森菌感染、耶尔森氏鼠疫杆菌肠道病、黄热病及接合菌病。
[0170]
用于将个体诊断为患有传染病或将个体鉴别为患有传染病的方法是本领域熟知的。举例而言，医学专业人员(例如，医师、医师助理或技术员)可通过观测个体的传染病的一或多种症状来诊断个体的传染病。传染病的症状的非限制性实例包括：发热、腹泻、疲劳及肌肉疼痛。将哺乳动物诊断为患有传染病或将个体鉴别为患有传染病的方法可进一步包括进行一或多项诊断测试(例如，对活体组织切片或血液样品进行一或多项诊断测试)。用于将个体诊断为患有传染病或将个体鉴别为患有传染病的诊断测试是本领域已知的。
[0171]
组合疗法
[0172]
本发明涵盖单一疗法方案以及组合疗法方案两者。
[0173]
在一些实施方案中，本文所描述的方法可进一步包括施用一或多种另外疗法(例如，一或多种另外治疗剂和/或一或多种治疗方案)以及施用本文所描述的化合物。
[0174]
在某些实施方案中，本文所描述的方法可进一步包括施用一或多种另外的癌症疗法。
[0175]
该一或多种另外的癌症疗法可包括但不限于手术、放射疗法、化学疗法、毒素疗法、免疫疗法、冷冻疗法、癌症疫苗(例如，hpv疫苗、乙型肝炎疫苗、oncophage、provenge)及基因疗法及其组合。免疫疗法包括但不限于过继细胞疗法、干细胞和/或树突状细胞的衍生、输血、灌洗和/或其他治疗，包括但不限于冷冻肿瘤。
[0176]
在一些实施方案中，该一或多种另外的癌症疗法是化学疗法，其可包括施用一或多种另外化学治疗剂。
[0177]
实施方案中，另外的癌症疗法包含(化学治疗剂)免疫调节部分，例如，免疫检查点抑制剂。在这些实施方案中的某些中，免疫检查点抑制剂靶向选自以下的免疫检查点受体：ctla-4、pd-1、pd-l1、pd-1-pd-l1、pd-1-pd-l2、t细胞免疫球蛋白及粘蛋白3(tim3或havcr2)、半乳凝素9-tim3、磷脂酰丝氨酸-tim3、淋巴细胞活化基因3蛋白(lag3)、ii类mhc-lag3、4-1bb-4-1bb配体、ox40-ox40配体、gitr、gitr配体-gitr、cd27、cd70-cd27、tnfrsf25、tnfrsf25-tl1a、cd40l、cd40-cd40配体、hvem-light-lta、hvem、hvem-btla、hvem-cd160、hvem-light、hvem-btla-cd160、cd80、cd80-pdl-1、pdl2-cd80、cd244、cd48-cd244、cd244、icos、icos-icos配体、b7-h3、b7-h4、vista、tmigd2、hhla2-tmigd2、嗜乳脂蛋
白包括btnl2、siglec家族、tigit及pvr家庭成员、kir、ilt及lir、nkg2d及nkg2a、mica及micb、cd244、cd28、cd86-cd28、cd86-ctla、cd80-cd28、磷脂酰丝氨酸、tim3、磷脂酰丝氨酸-tim3、sirpa-cd47、vegf、神经毡蛋白、cd160、cd30及cd155(例如，ctla-4或pd1或pd-l1)以及其他免疫调节剂，诸如白介素-2(il-2)、吲哚胺2,3-二加氧酶(ido)、il-10、转型生长因子-β(tgfβ)、cd39、cd73腺苷-cd39-cd73及cxcr4-cxcl12。参见例如postow,m.j.clin.oncol.33,1(2015)。
[0178]
在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂靶向选自以下的免疫检查点受体：ctla-4、pd-1、pd-l1、pd-1-pd-l1及pd-1-pd-l2。
[0179]
在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂选自：纳武单抗(nivolumab)(也称为“opdivo”；先前命名为5c4、bms-936558、mdx-1106或ono-4538)、派姆单抗(pembrolizumab)(也称为”keytruda”、兰利珠单抗(lambrolizumab)及mk-3475。参见wo 2008/156712)、pdr001(novartis；参见wo 2015/112900)、medi-0680(astrazeneca；amp-514；参见wo2012/145493)、西米匹单抗(cemiplimab)(regn-2810)(regeneron；参见wo 2015/112800)、js001(taizhou junshi pharma；参见si-yang liu等人,j.hematol.oncol.10:136(2017))、bgb-a317(beigene；参见wo 2015/35606及us 2015/0079109)、incshr1210(shr-1210；jiangsu hengrui medicine；参见wo 2015/085847；si-yang liu等人,j.hematol.oncol.10:136(2017))、tsr-042(anb011；tesaro biopharmaceutical；参见wo2014/179664)、gls-010(wbp3055；wuxi/harbin gloria pharmaceuticals；参见si-yang liu等人,j.hematol.oncol.10:136(2017))、am-0001(armo)、sti-1110(sorrento therapeutics；参见wo 2014/194302)、agen2034(agenus；参见wo 2017/040790)、mgd013(macrogenics)、ibi308(innovent；参见wo 2017/024465、wo 2017/025016、wo 2017/132825、wo2017/133540)、bms-936559(先前为12a4或mdx-1105；参见例如美国专利第7,943,743号及第wo 2013/173223号)、mpdl3280a(还称为rg7446、阿特珠单抗(atezolizumab)及tecentriq；us 8,217,149；还参见herbst等人(2013)j clin oncol 31(增刊):3000)、德瓦鲁单抗(durvalumab)(imfinzi；medi-4736；astrazeneca；参见wo 2011/066389)、阿维鲁单抗(avelumab)(pfizer；msb-0010718c；bavencio；参见wo 2013/079174)、sti-1014(sorrento；参见wo2013/181634)、cx-072(cytomx；参见wo2016/149201)、kn035(3d med/alphamab；参见zhang等人,cell discov.7:3(2017年3月)、ly3300054(eli lilly co.；参见例如wo 2017/034916)、ck-301(checkpoint therapeutics；参见gorelik等人,aacr:摘要(abstract)4606(2016年4月))、优瑞路单抗(urelumab)、pf-05082566、medi6469、trx518、瓦里路单抗(varlilumab)、cp-870893、bms-986016、mga271、利瑞路单抗(lirilumab)、iph2201、埃玛图单抗(emactuzumab)、incb024360、高伦替布(galunisertib)、尤洛库单抗(ulocuplumab)、bkt140、巴维昔单抗(bavituximab)、cc-90002、贝伐珠单抗(bevacizumab)、mnrp1685a、伊匹木单抗(ipilimumab)(yervoy；美国专利第6,984,720号)、mk-1308(merck)、agen-1884(agenus inc.；wo 2016/196237)及曲美木单抗(tremelimumab)(之前为替西木单抗(ticilimumab)、cp-675,206；astrazeneca；参见例如wo2000/037504及ribas,update cancer ther.2(3):133-39(2007))。
[0180]
在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂选自：纳武单抗、派姆单抗、js001、bgb-a317、incshr1210、tsr-042、gls-010、sti-1110、mgd013、ibi308、bms-936559、阿特珠单抗、
德瓦鲁单抗、阿维鲁单抗、sti-1014、cx-072、kn035、ly3300054、ck-301、优瑞路单抗、pf-05082566、medi6469、trx518、瓦里路单抗、bms-986016、伊匹木单抗、agen-1884及曲美木单抗。
[0181]
在这些实施方案中的某些中，免疫检查点抑制剂选自：优瑞路单抗、pf-05082566、medi6469、trx518、瓦里路单抗、cp-870893、派姆单抗(pd1)、纳武单抗(pd1)、阿特珠单抗(以前称mpdl3280a)(pdl1)、medi4736(pd-l1)、阿维鲁单抗(pd-l1)、pdr001(pd1)、bms-986016、mga271、利瑞路单抗、iph2201、埃玛图单抗、incb024360、高伦替布、尤洛库单抗、bkt140、巴维昔单抗、cc-90002、贝伐珠单抗及mnrp1685a。
[0182]
在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂选自：纳武单抗、伊匹木单抗、派姆单抗、阿特珠单抗、德瓦鲁单抗及阿维鲁单抗。
[0183]
在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂选自：纳武单抗及伊匹木单抗。
[0184]
在某些实施方案中，另外抗癌剂(化学治疗剂)是sting激动剂。举例而言，sting激动剂可包括环二核苷酸，诸如camp、cgmp及cgamp，以及包括以下修饰特征中的一或多者的经修饰环二核苷酸：(2'-o/3'-o连接的、硫代磷酸酯连接的、腺嘌呤和/或鸟嘌呤类似物、2'-oh修饰(例如，-och3或替代物，例如，-f或n3))。参见例如wo 2014/189805。
[0185]
在某些实施方案中，另外化学治疗剂是烷化剂。如此命名烷化剂是由于其能够在存在于包括但不限于癌细胞的细胞中的条件下烷基化许多亲核官能基。在另一实施方案中，烷化剂包括但不限于顺铂、卡铂、氮芥、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、异环磷酰胺和/或奥沙利铂。在一实施方案中，烷化剂可通过与生物学上重要的分子中的氨基、羧基、硫氢基及磷酸酯基形成共价键而削弱细胞功能来起作用，或其可通过修饰细胞dna来工作。在另一实施方案中，烷化剂是合成物、半合成物或衍生物。
[0186]
在某些实施方案中，另外化学治疗剂是抗代谢物。抗代谢物伪装成dna的构造片段嘌呤或嘧啶，且通常在(细胞周期的)”s”期的期间防止所述物质并入dna中，停止正常发育及分裂。抗代谢物还可影响rna合成。在一个实施方案中，抗代谢产物包括(但不限于)硫唑嘌呤和/或巯基嘌呤。在另一实施方案中，抗代谢物是合成物、半合成物或衍生物。
[0187]
在某些实施方案中，另外化学治疗剂是植物生物碱和/或萜类化合物。所述生物碱来源于植物且通常通过防止微管功能而阻断细胞分裂。在一个实施方案中，植物生物碱和/或萜类化合物是长春花生物碱、鬼臼毒素(podophyllotoxin)和/或紫杉烷。一般而言，在细胞周期的m期的期间，长春花生物碱一般与微管蛋白上的特异性位点结合，抑制微管蛋白组装成微管。在一个实施方案中，长春花生物碱衍生自(但不限于)四时花(madagascar periwinkle)、日日春(catharanthus roseus)(以前称为长春花(vinca rosea))。在一个实施方案中，长春花生物碱包括(但不限于)长春新碱、长春碱、长春瑞宾和/或长春地辛。在一个实施方案中，紫杉烷包括(但不限于)泰素、紫杉醇和/或多西他赛。在另一实施方案中，植物生物碱或萜类化合物是合成物、半合成物或衍生物。在另一实施方案中，鬼臼毒素是(但不限于)依托泊苷和/或替尼泊苷。在一个实施方案中，紫杉烷是(但不限于)多西他赛和/或沃塔紫杉醇(ortataxel)。在一个实施方案中，癌症治疗剂是拓扑异构酶。拓扑异构酶是维持dna的拓扑结构的必需酶。通过扰乱适当的dna超螺旋化，i型或ii型拓扑异构酶的抑制干扰dna的转录及复制两者。在另一实施方案中，拓扑异构酶是(但不限于)i型拓扑异构酶抑制剂或ii型拓扑异构酶抑制剂。在一个实施方案中，i型拓扑异构酶抑制剂是(但不限于)喜
树碱。在另一实施方案中，喜树碱是(但不限于)依沙替康(exatecan)、伊立替康、勒托替康(lurtotecan)、拓扑替康、bnp 1350、ckd602、db 67(ar67)和/或st 1481。在一个实施方案中，ii型拓扑异构酶抑制剂是(但不限于)表鬼臼毒素。在另一实施方案中，表鬼臼毒素是(但不限于)安吖啶、依托泊苷、磷酸依托泊苷和/或替尼泊苷。在另一实施方案中，拓扑异构酶是合成物、半合成物或衍生物，包括自然界中发现者，诸如(但不限于)表鬼臼毒素，其是天然存在于美国鬼臼(american mayapple)(盾叶鬼臼(podophyllum peltatum))的根中的物质。
[0188]
在某些实施方案中，另外化学治疗剂是芪类(stilbenoid)。在另一实施方案中，芪类包括但不限于白藜芦醇(resveratrol)、四羟反式芪(piceatannol)、赤松素(pinosylvin)、紫檀芪(pterostilbene)、α-葡萄素(alpha-viniferin)、白蔹素a(ampelopsin a)、白蔹素e、diptoindonesin c、diptoindonesin f、ε-葡萄素、flexuosol a、买麻藤素(gnetin)h、hemsleyanol d、霍毕酚(hopeaphenol)、trans-diptoindonesin b、葡萄糖苷(astringin)、云杉新甙(piceid)及diptoindonesin a。在另一实施方案中，芪类是合成物、半合成物或衍生物。
[0189]
在某些实施方案中，另外化学治疗剂是细胞毒性抗生素。在一实施方案中，细胞毒性抗生素是(但不限于)放线菌素、蒽二酮、蒽环霉素、沙立度胺(thalidomide)、二氯乙酸、烟酸、2-脱氧葡萄糖和/或氯苯吩嗪。在一实施方案中，放线菌素是(但不限于)放线菌素d、杆菌肽、可利斯汀(colistin)(多粘菌素e)和/或多粘菌素b。在另一实施方案中，蒽二酮是(但不限于)米托蒽醌(米托蒽醌)和/或匹蒽醌(pixantrone)。在另一实施方案中，蒽环霉素是(但不限于)博莱霉素、多柔比星(阿德力霉素(adriamycin))、柔红霉素(道诺霉素)、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素、普卡霉素和/或戊柔比星。在另一实施方案中，细胞毒性抗生素是合成物、半合成物或衍生物。
[0190]
在某些实施方案中，另外化学治疗剂是选自内皮生长抑素、血管生成素、血管生长抑素、趋化因子、血管抑素、血管生长抑素(纤维蛋白溶酶原片段)、基底膜胶原蛋白衍生的抗血管生成因子(肿瘤抑制素、血管能抑制素或抑制蛋白)、抗血管生成抗凝血酶iii、信号转导抑制剂、软骨源抑制剂(cdi)、cd59补体片段、纤维结合蛋白片段、gro-β、肝素酶、肝素六醣片段、人绒膜促性腺激素(hcg)、干扰素α/β/γ、干扰素诱导型蛋白质(ip-10)、白介素-12、半光氨酸卷曲区5(纤维蛋白溶酶原片段)、金属蛋白酶抑制剂(timp)、2-甲氧雌二醇、胎盘核糖核酸酶抑制剂、纤维蛋白溶酶原活化剂抑制剂、血小板因子-4(pf4)、促乳素16kd片段、增殖蛋白相关蛋白质(prp)、各种类视黄素、四氢皮质醇-s、血小板反应蛋白-1(tsp-1)、转型生长因子-β(tgf-β)、血管抑制素、血管新生抑制素(钙网蛋白片段)等。
[0191]
在某些实施方案中，另外化学治疗剂是选自乙酸阿比特龙(abiraterone acetate)、六甲蜜胺(altretamine)、脱水长春花碱(anhydrovinblastine)、奥瑞他汀(auristatin)、贝瑟罗汀(bexarotene)、比卡鲁胺(bicalutamide)、bms 184476、2,3,4,5,6-五氟-n-(3-氟-4-甲氧基苯基)苯磺酰胺、博莱霉素、n,n-二甲基-l-缬胺酰基-l-缬胺酰基-n-甲基-l-缬胺酰基-l-脯胺酰基-1-脯氨酸-叔丁基酰胺、恶病质素、西马多丁(cemadotin)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、环磷酰胺、3',4'-二去氢-4'-脱氧-8'-诺维斯汀(3',4'-didehydro-4'-deoxy-8'-norvin-caleukoblastine)、多烯紫杉醇(docetaxol)、多西他赛、环磷酰胺、卡铂、卡莫司汀(carmustine)、顺铂、念珠藻环肽(cryptophycin)、环
磷酰胺、阿糖胞苷(cytarabine)、达卡巴嗪(dacarbazine)(dtic)、放线菌素d、柔红霉素、地西他滨、多拉司他汀、多柔比星(阿德力霉素)、依托泊苷、5-氟尿嘧啶、非那雄胺(finasteride)、氟他胺(flutamide)、羟基脲(hydroxyurea)及羟基脲紫杉烷(hydroxyureataxanes)、异环磷酰胺、利阿唑(liarozole)、氯尼达明(lonidamine)、洛莫司汀(lomustine)(ccnu)、mdv3100、氮芥(氮芥)、美法仑(melphalan)、羟乙基磺酸米伏布尔(mivobulin isethionate)、根霉素(rhizoxin)、塞尼氟(sertenef)、链佐星(streptozocin)、丝裂霉素、甲胺喋呤(methotrexate)、紫杉烷、尼鲁米特(nilutamide)、奥那司酮(onapristone)、紫杉醇、泼尼莫司汀(prednimustine)、甲基苄肼(procarbazine)、rpr109881、磷酸斯穆斯汀(stramustine phosphate)、他莫昔芬(tamoxifen)、他索纳明(tasonermin)、泰素、维甲酸(tretinoin)、长春碱、长春新碱、硫酸长春地辛及长春氟宁(vinflunine)。
[0192]
在某些实施方案中，另外化学治疗剂是铂、顺铂、卡铂、奥沙利铂、氮芥、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、硫唑嘌呤、巯基嘌呤、长春新碱、长春碱、长春瑞滨、长春地辛、依托泊苷及替尼泊苷、紫杉醇、多西他赛、伊立替康、拓扑替康、安吖啶、依托泊苷、磷酸依托泊苷、替尼泊苷、5-氟尿嘧啶、甲酰四氢叶酸、甲胺喋呤、吉西他滨(gemcitabine)、紫杉烷、甲酰四氢叶酸(leucovorin)、丝裂霉素c、喃氟啶-尿嘧啶(tegafur-uracil)、伊达比星、氟达拉滨(fludarabine)、米托蒽醌、异环磷酰胺及多柔比星。另外活性剂包括哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mtor)的抑制剂，包括但不限于雷帕霉素、依维莫司(everolimus)、坦罗莫司(temsirolimus)及德佛利姆(deforolimus)。
[0193]
在另其他实施方案中，另外化学治疗剂可选自叙述于美国专利7,927,613中的那些治疗剂。
[0194]
在又一实施方案中，所述方法可进一步包括施用以下中的一或两者：(i)一或多种抗真菌剂(例如，选自以下的群：联苯苄唑(bifonazole)、布康唑(butoconazole)、克霉唑(clotrimazole)、益康唑(econazole)、酮康唑(ketoconazole)、卢立康唑(luliconazole)、咪康唑(miconazole)、奥莫康唑(omoconazole)、奥昔康唑(oxiconazole)、舍他康唑(sertaconazole)、硫康唑(sulconazole)、噻康唑(tioconazole)、阿巴康唑(albaconazole)、艾菲康唑(efinaconazole)、氟环唑(epoxiconazole)、氟康唑(fluconazole)、艾沙康唑(isavuconazole)、伊曲康唑(itraconazole)、泊沙康唑(posaconazole)、丙环唑(propiconazole)、拉夫康唑(ravusconazole)、特康唑(terconazole)、伏立康唑(voriconazole)、阿巴芬净(abafungin)、阿莫罗芬(amorolfin)、布替萘芬(butenafine)、萘替芬(naftifine)、特比萘芬(terbinafine)、阿尼芬净(anidulafungin)、卡泊芬净(caspofungin)、米卡芬净(micafungin)、苯甲酸、环吡酮、氟胞嘧啶、5-氟胞嘧啶、灰黄霉素(griseofulvin)、卤普罗近(haloprogin)、托萘酯(tolnaflate)、十一碳烯酸及秘鲁香脂(balsam of peru))，及(ii)一或多种抗生素(例如，选自以下的群：阿米卡星(amikacin)、庆大霉素(gentamicin)、卡那霉素(kanamycin)、新霉素(neomycin)、奈替米星(netilmicin)、妥布霉素(tobramycin)、巴龙霉素(paromomycin)、链霉素(streptomycin)、大观霉素(spectinomycin)、格尔德霉素(geldanamycin)、除莠霉素(herbimycin)、利福昔明(rifaximin)、氯碳头孢(loracarbef)、厄他培南(ertapenem)、多利培南(doripenem)、亚胺培南(imipenem)、西司他汀(cilastatin)、美罗培南
(meropenem)、头孢羟氨苄(cefadroxil)、头孢唑林(cefazolin)、头孢噻吩(cefalotin)、头孢噻吩(cefalothin)、头孢氨苄(cefalexin)、头孢克洛(cefaclor)、头孢孟多(cefamandole)、头孢西丁(cefoxitin)、头孢丙烯(cefprozil)、头孢呋辛(cefuroxime)、头孢克肟(cefixime)、头孢地尼(cefdinir)、头孢托仑(cefditoren)、头孢哌酮(cefoperazone)、头孢噻肟(cefotaxime)、头孢泊肟(cefpodoxime)、头孢他啶(ceftazidime)、头孢布坦(ceftibuten)、头孢唑肟(ceftizoxime)、头孢曲松(ceftriaxone)、头孢吡肟(cefepime)、头孢洛林酯(ceftaroline fosamil)、头孢比罗(ceftobiprole)、替考拉宁(teicoplanin)、万古霉素(vancomycin)、替拉凡星(telavancin)、达巴万星(dalbavancin)、奥利万星(oritavancin)、克林霉素(clindamycin)、林可霉素(lincomycin)、达托霉素(daptomycin)、阿奇霉素(azithromycin)、克拉霉素(clarithromycin)、地红霉素(dirithromycin)、红霉素(erythromycin)、罗红霉素(roxithromycin)、醋竹桃霉素(troleandomycin)、泰利霉素(telithromycin)、螺旋霉素(spiramycin)、氨曲南(aztreonam)、呋喃唑酮(furazolidone)、呋喃妥因(nitrofurantoin)、利奈唑胺(linezolid)、泊斯唑胺(posizolid)、雷德唑胺(radezolid)、特地佐利(torezolid)、阿莫西林(amoxicillin)、氨苄西林(ampicillin)、阿洛西林(azlocillin)、羧苄西林(carbenicillin)、氯唑西林(cloxacillin)、双氯西林(dicloxacillin)、氟氯西林(flucloxacillin)、美洛西林(mezlocillin)、甲氧西林(methicillin)、萘夫西林(nafcillin)、苯唑西林(oxacillin)、青霉素g、青霉素v、哌拉西林(piperacillin)、青霉素g、替莫西林(temocillin)、替卡西林(ticarcillin)、阿莫西林(amoxicillin)、克拉维酸(calvulanate)、氨苄西林(ampicillin)、舒巴克坦(subbactam)、哌拉西林(piperacillin)、他唑巴坦(tazobactam)、替卡西林、克拉维酸盐(clavulanate)、枯草菌素、可利斯汀(colistin)、多粘菌素b、环丙沙星(ciprofloxacin)、依诺沙星(enoxacin)、加替沙星(gatifloxacin)、吉米沙星(gemifloxacin)、左氧氟沙星(levofloxacin)、洛美沙星(lomefloxacin)、莫西沙星(moxifloxacin)、萘啶酸、诺氟沙星(norfloxacin)、氧氟沙星(ofloxacin)、曲伐沙星(trovafloxacin)、格帕沙星(grepafloxacin)、司帕沙星(sparfloxacin)、替马沙星(temafloxacin)、磺胺米隆(mafenide)、磺胺醋酰(sulfacetamide)、磺胺嘧啶(sulfadiazine)、磺胺嘧啶银、磺胺二甲氧嗪、磺胺甲基异噁唑、胺苯磺胺、柳氮磺胺吡啶、磺胺异噁唑、三甲氧苄二胺嘧啶(trimethoprim)-磺胺甲基异噁唑、磺酰胺基柯衣定(sulfonamideochrysoidine)、地美环素(demeclocycline)、二甲胺四环素(minocycline)、土霉素(oytetracycline)、四环素、氯苯吩嗪、氨苯砜(dapsone)、达普瑞霉素(dapreomycin)、环丝氨酸、乙胺丁醇、乙硫异烟胺、异烟肼、吡嗪酰胺、立复霉素(立复霉素)、利福布汀(rifabutin)、利福喷丁(rifapentine)、链霉素、胂凡纳明(arsphenamine)、氯霉素(chloramphenicol)、磷霉素(fosfomycin)、梭链孢酸(fusidic acid)、甲硝唑(metronidazole)、莫匹罗星(mupirocin)、平板霉素(platensimycin)、奎奴普丁(quinupristin)、达勒普丁(dalopristin)、甲砜霉素(thiamphenicol)、替加环素(tigecycyline)、替硝唑(tinidazole)、三甲氧苄二胺嘧啶及特巴汀(teixobactin)。
[0195]
在某些实施方案中，第二治疗剂或方案在与化学实体接触或施用该化学实体之前(例如，约一小时之前，或约6小时之前，或约12小时之前，或约24小时之前，或约48小时之
前，或约1周之前，或约1个月之前)施用至个体。
[0196]
在其他实施方案中，第二治疗剂或方案在约与化学实体接触或施用该化学实体相同的时间施用至个体。借助于实例，第二治疗剂或方案及化学实体以同一剂型同时提供至个体。作为另一实例，第二治疗剂或方案及化学实体以独立剂型同时提供至个体。
[0197]
在另其他实施方案中，第二治疗剂或方案在与化学实体接触或施用该化学实体后(例如，约一小时后，或约6小时后，或约12小时后，或约24小时后，或约48小时后，或约1周后，或约1个月后)施用至个体。
[0198]
患者选择
[0199]
在一些实施方案中，本文所描述的方法进一步包括鉴别需要此类治疗的个体(例如，患者)的步骤(例如，通过切片检查、内视镜检法或本领域中已知的其他常规方法)。在某些实施方案中，nlrp3蛋白质可用作某些癌症类型的生物标记物。
[0200]
在一些实施方案中，本文所描述的化学实体、方法及组合物可施用至某些治疗抗性患者群体(例如，对检查点抑制剂具有抗性的患者)。
[0201]
在一些实施方案中，本发明化合物可用于疗法中。在某些实施方案中，本发明提供本发明化合物或其药学上可接受的盐及另外治疗剂的组合制剂以同时、分开或依序用于疗法中。
[0202]
在一些实施方案中，本发明化合物或其药学上可接受的盐或含有其的药物组合物可用作药物。在某些实施方案中，本发明化合物可用于制备用于治疗癌症的药物。在某些实施方案中，本发明化合物可用于制备调节nlrp3活性的药物。在某些实施方案中，所述调节包括激动nlrp3。
[0203]
制备方法
[0204]
如本领域技术人员可以理解的，合成本文通式的化合物的方法对于本领域普通技术人员而言将是明显可见的。举例而言，本文所描述的化合物可例如使用本文所描述的一或多种方法和/或使用描述于例如，us 2015/0056224中的方法来合成。适用于合成本文所描述的化合物的合成化学转换及保护基方法(保护及脱保护)是本领域已知的，且包括例如诸如描述于以下中的那些：larock,r.c.,comprehensive organic transformations,第2版,wiley-vch,new york,ny(1999)；wuts,p.g.m.,greene’s protective groups in organic synthesis,第5版,wiley(2014)；l.fieser及m.fieser,fieser and fieser's reagents for organic synthesis,john wiley and sons(1994)；以及l.paquette编,encyclopedia of reagents for organic synthesis,john wiley and sons(1995)及其后续版本。用于制备本发明化合物的起始物质是已知的、通过已知方法制备或可商购。本领域技术人员还将认识到，本文所描述的条件及试剂可与备选的本领域认可的等效物互换。举例而言，在许多反应中，三乙胺可与其他碱诸如非亲核碱(例如，二异丙胺、1,8-二氮杂双环十一-7-烯、2,6-二叔丁基吡啶或四丁基膦腈)互换。
[0205]
本领域技术人员将认识到可用以表征本文所描述的化合物的各种分析方法，包括例如1h nmr、杂核nmr、质谱法、液相色谱及红外光谱法。以上所列是可供本领域技术人员使用的表征方法的亚组且不是限制性的。
[0206]
以下缩写具有指定含义
[0207]
acn＝乙腈
[0208]
acoh＝乙酸
[0209]
bop＝(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐
[0210]
cdcl3＝氯仿-d
[0211]
cd3od＝甲醇-d4[0212]
ch2cl2＝二氯甲烷
[0213]
ch3reo3＝甲基三氧合铼
[0214]
cs2co3＝碳酸铯
[0215]
cui＝碘化铜(i)
[0216]
d＝双峰
[0217]
dbu＝1,8-二氮杂双环十一碳-7-烯
[0218]
dcm＝二氯甲烷
[0219]
diea＝n,n-二异丙基乙胺
[0220]
dmf＝n,n-二甲基甲酰胺
[0221]
dmso＝二甲基亚砜
[0222]
es＝电喷雾电离
[0223]
et2o＝乙醚
[0224]
etoac＝乙酸乙酯
[0225]
etoh＝乙醇
[0226]
equiv＝当量
[0227]
g＝克
[0228]
h＝小时
[0229]
hcl＝氯化氢(通常作为溶液)
[0230]
h2o＝水
[0231]
h2o2＝过氧化氢
[0232]
hatu＝1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1h-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐hplc＝高效液相色谱法
[0233]
hunig碱＝n,n-二异丙基乙胺
[0234]
i2＝碘
[0235]
k2co3＝碳酸钾
[0236]
k2hpo4＝磷酸氢二钾
[0237]
ki＝碘化钾
[0238]
kg＝千克
[0239]
lc/ms＝液相色谱质谱仪
[0240]
libh4＝硼氢化锂
[0241]
m＝多重峰
[0242]
m/z＝质荷比
[0243]
m＝摩尔
[0244]
m-cpba＝间氯过氧苯甲酸
[0245]
mg＝毫克
[0246]
meoh＝甲醇
[0247]
mhz＝兆赫
[0248]
ml＝毫升
[0249]
mmol＝毫摩尔
[0250]
min＝分钟
[0251]
nahco3＝碳酸氢钠
[0252]
na2co3＝碳酸钠
[0253]
naoh＝氢氧化钠
[0254]
na2so4＝硫酸钠
[0255]
net3和tea＝三乙胺
[0256]
nh4oh或nh3h2o＝氢氧化铵
[0257]
nh4hco3＝碳酸氢铵
[0258]
nm＝纳米
[0259]
pdcl2(pph3)2＝双(三苯基膦)二氯化钯(ii)
[0260]
pd(dppf)cl2＝[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)
[0261]
pd(dppf)cl2dcm＝[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)二氯甲烷络合物
[0262]
pd(oh)2＝氢氧化钯
[0263]
pmb＝对甲氧基苄基
[0264]
pocl3＝磷酰氯
[0265]
ppm＝百万分数
[0266]
pt＝铂
[0267]
pt/c＝碳载铂
[0268]
s＝单峰
[0269]
t＝三重峰
[0270]
t3p＝正丙基膦酸酐
[0271]
tfa＝三氟乙酸
[0272]
tlc＝薄层色谱法
[0273]
tscl＝对甲苯磺酰氯
[0274]
℃＝摄氏度
[0275]
μmol＝微摩尔
[0276]
本发明化合物可以通过有机合成领域技术人员熟知的多种方式制备。本发明化合物可使用下文所描述的方法以及有机合成化学技术中已知的合成方法或如本领域技术人员所了解的其变化形式合成。优选方法包括但不限于下文所描述的方法。
[0277]
本发明化合物可使用本节中所描述的反应及技术来制备。反应在适于所用试剂及物质且适用于实现转化的溶剂中进行。另外，在以下所描述的合成方法的描述中，应理解所提出的所有反应条件(包括溶剂、反应氛围、反应温度、实验持续时间及处理程序选择)均是所选择的、对本领域技术人员而言应当容易识别的该反应的标准条件。有机合成领域技术人员应理解，分子各个部分上所存在的官能团必须与所提出的试剂及反应物兼容。对与反应条件兼容的取代基的这些限制对于本领域技术人员是明显可见的，且于是一定会使用替
代方法。有时需要作出判断以修改合成步骤次序或选择一种特定方法流程而非另一种，从而获得所需本发明化合物。还将认识到，在本领域中，规划任何合成路线中的另一主要考虑因素为审慎选择用于保护本发明所述化合物中存在的反应性官能基的保护基。
[0278]
本发明的化合物可以使用本节和所附流程中描述的反应和技术来制备。
[0279]
可使用流程1中所述的方法进行式(i)化合物的合成。
[0280]
流程1
[0281][0282]
步骤1：流程1的第一步从适当官能化的羟基喹啉(i)开始。如果需要，基团r9、r
10
、r
11
和r
12
可以是式(i)化合物中的基团r2、r3、r4和r5。或者，这些基团中的一个或多个可以是在合成的后期阶段可以被修饰的基团，例如溴。该羟基喹啉可商购获得，或者可通过本领域技术人员已知的方法合成。在流程1的步骤1中，硝化产物(ii)可以通过在合适的溶剂如丙酸中，在合适的温度如120℃下，用合适的硝化试剂如硝酸处理化合物(i)来制备。
[0283]
步骤2：在流程1的步骤2中，化合物(ii)的醇基团可以转化为卤素基团或磺酸酯，例如氯、溴或三氟甲磺酸酯。如果所需的基团y是氯，则该转化可以通过在适当的温度如70℃下，在溶剂如dmf中，用试剂如磷酰氯处理化合物(ii)来完成。或者，如果所需的基团y是溴，该转化可以通过用试剂如三溴化磷在溶剂如dmf中处理化合物(ii)来完成。或者，如果所需基团y是三氟甲磺酸酯，则该转化可以通过在溶剂如二氯甲烷中用试剂如三氟甲磺酰氯、试剂如4-二甲基氨基吡啶和碱如hunig碱处理化合物(ii)来进行。
[0284]
步骤3：在流程1的步骤3中，化合物(iii)的卤素y可转化为化合物(iv)的氮-r
13
基团。基团r
13
可以是最终化合物中所需的基团r1；或者，它可以是在合成的后期可转化为基团r1的基团。本领域技术人员将认识到实现该转化的方法将取决于氮-r
13
基团和y的性质，例如，如果y是氯，则该转化可通过在合适的溶剂如乙腈中将化合物(iii)与合适取代的胺或氢氧化铵加热至合适的温度如40℃来实现。
[0285]
步骤4：在流程1的步骤4中，化合物(iv)的硝基可以用合适的还原剂，例如氯化锡(ii)-二水合物，在合适的溶剂，例如乙酸乙酯中，在合适的温度，例如回流下转化为胺(v)。
[0286]
步骤5：在流程1的步骤5中，z-r
14
基团可以是基团r6。或者，z基团上的r
14
取代可以是保护基，例如boc或cbz，其将允许在随后步骤中进一步修饰。步骤5可以通过在碱(例如吡啶)存在下，在合适的溶剂(例如乙酸乙酯或dmf)中，在合适的温度(例如室温)下，用合适官能化的羧酸、偶联剂(例如1-丙烷膦酸酐)处理化合物(v)来完成，以提供化合物(vi)。
[0287]
步骤6：在流程1的步骤6中，化合物(vi)可以用氢氧化物碱(例如氢氧化钠)在合适的溶剂(例如乙醇)中，在合适的温度(例如80℃)下处理，得到环化的化合物(vii)。
[0288]
步骤7：在流程1的步骤7中，化合物(vii)可以通过用合适的氧化剂(例如间氯过氧苯甲酸)在合适的溶剂(例如dcm)中处理而转化为n-氧化物(viii)。
[0289]
步骤8：在流程1的步骤8中，化合物(viii)可以通过用适当的活化试剂(例如甲苯磺酰氯)和氨源(例如氢氧化铵或氯化铵和三乙胺的混合物)在适当的溶剂(例如dcm)中处理而转化为胺(ix)。
[0290]
步骤9：流程1的步骤9是将化合物(ix)中的r
11
基团转化为分子(x)中的r4基团的一个步骤或一系列步骤。例如，如果r
11
为溴，所需基团r4为芳族或杂芳族基团，则该转化可通过使化合物(ix)与任选保护的芳族或杂芳族硼酸或硼酸酯、催化剂(如pdcl2(dppf)-dcm配合物)和碱(如磷酸三钾)在合适的溶剂混合物(如二噁烷和水)中反应来进行。如果所添加的基团含有保护基团，如果需要，可以进行进一步的任选步骤以在适当条件下除去该保护基团。例如，如果所添加的基团是具有四氢吡喃保护基团的吡唑，则四氢吡喃可以通过与酸如三氟乙酸在溶剂如二氯甲烷中反应而除去。或者，如果r
11
为溴，所需基团r4为芳族或杂芳族基团，则该转化可如下进行：首先使化合物(ix)与化合物(如联硼酸频哪醇酯)、试剂(如乙酸钾)和催化剂(如pdcl2(dppf)-dcm配合物)在溶剂(如二噁烷)中反应，然后使所得硼酸酯与合适的芳基或杂芳基卤化物、碱(如碳酸钠)和催化剂(如四(三苯基膦)钯(0))在合适的溶剂混合物(如二噁烷和水)中反应。或者，如果r
11
为溴，所需基团r4为通过氮原子连接的杂环，则该步骤可通过在铜源如碘化铜(i)、碱如碳酸钠和配体如n,n
’‑
二甲基乙烷-1,2-二胺的存在下，在合适的溶剂如dmso中，使化合物(ix)与合适的杂环反应来进行。
[0291]
步骤10：流程1的步骤10是任选的步骤，其中r
14
是保护基如boc或cbz基团。该转化可以通过在适当的溶剂(例如二噁烷)中用酸(例如三氟乙酸(纯的)或盐酸)处理化合物(x)
来完成，以得到化合物(xi)。
[0292]
步骤11：流程1的步骤11是任选的步骤，其中如果需要进一步修饰，则化合物(xi)的z-h基团可以转化为化合物(xii)中的r6基团。这种转化可以通过在合适的溶剂如dmf中，在合适的温度如室温下，用合适的官能化羧酸，在合适的碱如hunig碱的存在下，用合适的偶联剂如1-丙烷膦酸酐处理化合物(xi)来完成。
[0293]
步骤12：方案1的步骤12是将化合物(xii)中的基团r9、r
10
、r
12
和r
13
转化为式(i)化合物中的基团r2、r3、r5和r1的任选步骤或一系列步骤。
[0294]
本领域技术人员将认识到，根据式(i)化合物中所需的基团，可以以交替的顺序进行许多这些步骤。例如，对于一些分子，步骤9中所述的基团r
11
至r4的转化可在步骤11中所述的基团z-r
14
至基团r6的转化之后进行。
[0295]
生物活性评价
[0296]
测定pma分化的thp-1细胞中的il-1β产生
[0297]
thp-1细胞购自美国典型培养物保藏中心(american type culture collection)且根据供货商的说明书继代培养。在实验之前，将细胞培养在含有10％热灭活的fbs、青霉素(100单位/毫升)及链霉素(100μg/ml)的rpmi 1640中，且在实验设置之前维持在对数期。在实验之前，用佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(pma)(10μg/ml)处理thp-1 24小时。实验当天，移除培养基且用胰蛋白酶处理附着细胞2分钟，接着收集细胞，用磷酸盐缓冲盐水(pbs)洗涤，离心后，以1
×
106个细胞/毫升的浓度再混悬于以rpmi配制的2％热灭活的fbs中，且将100μl接种于96孔培养盘中。将化合物溶解于二甲亚砜(dmso)中且添加至培养基中以实现所需浓度(例如，100、30、10、3、1、0.3或0.1μm)。将细胞与化合物一起孵育4小时。收集无细胞上清液且通过elisa评价il-1β产生。仅媒剂的对照与各实验同时操作。最终dmso浓度是1％。化合物在pma分化的thp-1细胞中展现剂量相关性地增加il-1β产生。
[0298]
pma分化的thp-1细胞中的il-1β产生的测定(备选程序)
[0299]
thp-1细胞购自美国典型培养物保藏中心(american type culture collection)且根据供货商的说明书继代培养。在实验之前，将细胞培养在含有10％热灭活的fbs、青霉素(100单位/毫升)、链霉素(100μg/ml)、hepes(10mm)及丙酮酸钠(1mm)的rpmi 1640中，且在实验设置之前维持在对数期。在实验之前，用佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(pma)(20μg/ml)处理thp-1细胞过夜。实验当天，移除培养基且用胰蛋白酶处理附着细胞2分钟，接着收集细胞，用磷酸盐缓冲盐水(pbs)洗涤，通过离心沉淀，且于384孔盘中以50,000个细胞/孔的浓度再混悬于以rpmi配制的2％热灭活的fbs中。收集无细胞上清液且通过elisa评价il-1β产生。将化合物溶解于二甲亚砜(dmso)中且添加至培养基中以实现所需浓度(例如，100、30、10、3、1、0.3或0.1μm)。将细胞与化合物一起孵育2小时。仅媒剂的对照与各实验同时操作。最终dmso浓度是1％。化合物在pma分化的thp-1细胞中展现剂量相关性地增加il-1β产生。
[0300]
测定il-1β产生-htrf方案(第二备选程序)
[0301]
使用echo 550声波移液器(labcyte)将化合物于dmso中的系列稀释液以100nl/孔添加至小体积384孔盘中，以在测定中实现10μm的最终起始浓度。
[0302]
在37℃下在5％co2下，使用50ng/ml的最终浓度的佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(pma)(sigma，p1585)，将t175烧瓶中密度为1
×
106个细胞/毫升的具有10％fbs的rpmi
(gibco，11875)培养基中的thp-1细胞处理过夜，以用于分化。在用dpbs冲洗孔之后的次日使用0.5％胰蛋白酶收获细胞。在具有2％fbs的rpmi培养基中，以50μl/孔对50,000个细胞制备1x106个细胞/ml的细胞溶液。在greiner 384孔黑色透明底部的组织培养处理板(781090)中，使用多通道式移液管将细胞接种于化合物稀释液上。在37℃孵育箱中在5％co2下将所述板孵育2小时。
[0303]
2小时孵育之后，在离心机中将细胞盘以1200rpm旋转5分钟。使用felix(cybio)，将8μl上清液转移至小体积384孔白色代用板。(perkin elmer，6008230)。使用人类il1βhtrf试剂盒来分析上清液(cisbio，62hil1bpeg)。根据试剂盒说明书制备il1β标准曲线，且接着如试剂盒指示，将来自试剂盒的抗体按1:40而非1:20稀释。一旦组合，在整个板中以5μl/孔添加抗体。密封所述板且在4℃下孵育过夜。接着在perkin elmer envision上使用htrf激光以665/615nm读板。化合物展现剂量相关性地增加il-1β产生。
[0304]
测定il-1β产生-人类全血测定
[0305]
使用echo 550声波移液器(labcyte)将化合物于dmso中的系列稀释液以100nl/孔添加至小体积384孔板中，以在测定中实现10um的最终起始浓度。
[0306]
在潮湿的95％空气/5％co2孵育箱中在37℃下，用1ng/ml的lps(invivogen，目录号tlrl-eblps)预处理获自健康供体的人类静脉全血四小时。将预刺激的血液添加至化合物板中且在37℃下再孵育4小时。根据制造商的说明书使用alphlisa试剂盒(cat#al220)来测定上清液中的il-1β。化合物展现剂量相关性地增加il-1β产生。使用预刺激但未处理的血液作为基线来确定ec50。
[0307]
测定il-1β产生-小鼠htrf方案
[0308]
来源于c57bl/6小鼠的永生化小鼠巨噬细胞获自ericke latz，波恩大学(university of bonn)/马萨诸塞州(ma)的麻省大学沃斯特分校(university of massachusetts worchester)。使用0.05％胰蛋白酶收获细胞且用pbs洗涤。以25ul以30,000个细胞/孔将细胞接种于补充有2％fbs的dmem(gibco，11965)中，且在37℃下在5％co2下孵育10分钟。以5μl/孔添加lps-eb(invivogen，tlr-eblps)至200ng/ml的最终浓度，且在37℃下在5％co2下将细胞孵育2小时。
[0309]
使用echo 550声波移液器(labcyte)将化合物于dmso中的系列稀释液以60nl/孔添加至小体积384孔板中的细胞中，以在测定中实现50um的最终起始浓度，且在37℃下在5％co2下与化合物一起再孵育2小时。
[0310]
2小时孵育之后，在离心机中将细胞板以1200rpm离心5分钟。使用felix(cybio)，将8ul上清液转移至小体积384孔白色代用板。(perkin elmer，6008230)。使用人类il1βhtrf试剂盒来分析上清液(cisbio，62mil1bpeh)。根据试剂盒说明书制备il1β标准曲线(如试剂盒指示，将来自试剂盒的抗体按1:40而非1:20稀释)。一旦组合，在整个板中以5μl/孔添加抗体。密封所述板且在4℃下孵育过夜。在perkin elmer envision上使用htrf激光以665/615nm读板。接着将数据转化成pg/ml的il1β。化合物展现剂量相关性地增加il-1β产生。
[0311]
体外人类tlr7及tlr8结合报告子测定
[0312]
将共表达tlr7或tlr8基因及nf-kb/ap1-诱导型seap(分泌性胚胎碱性磷酸酶；invivogen,san diego,ca)报导基因的对数生长的人类hek-bule细胞添加至384孔板的各
个孔(15,000个细胞/20μl/孔)中，且在37℃、5％co2下维持24小时。次日，使用声学液体操作技术将测试化合物或dmso分布至独立的孔(100nl/孔)，且随后在37℃、5％co2下将细胞孵育18小时。在将新鲜制备的quanti-blue试剂(通过以下制造商说明书制备；invivogen,san diego,ca)添加至hek-blue tlr nf-kb-seap细胞反应物中后三十分钟，使用envision读板仪器来测定细胞seap产生。使用专属数据分析软件确定所有ec
50
值(半数最大有效浓度)。标准化ec
50
值＝通过使用来自用50μm参考标准物处理的细胞的参考标准物rlu(相对光单位)值设定100％ymax来确定的绝对值。
实施例
[0313]
为进一步说明前述内容，纳入了以下非限制性示例性合成流程。这些实施例在权利要求的范畴内的变化形式在本领域技术人员的知识范围内，且视为属于如本文描述及主张的本发明范围内。阅读者将认识到，在提供了本公开内容的情况下，本领域技术人员不需穷尽的实施例即能够制备及使用本发明。
[0314]
实施例的鉴定或纯化中采用的hplc/ms和制备/分析hplc方法
[0315]
分析hplc/ms使用以下方法进行:
[0316]
方法a:柱:waters xbridge c18,2.1mm x 50mm,1.7μm颗粒；流动相a:5:95乙腈:水(含0.1％三氟乙酸)；流动相b:95:5乙腈:水(含0.1％三氟乙酸)；温度:50℃；梯度:0％b至100％b，经3分钟，然后0.50分钟保持在100％b；流速：1ml/min；检测:ms和uv(220nm)。
[0317]
方法b:柱:waters xbridge c18,2.1mm x 50mm,1.7μm颗粒；流动相a:5:95乙腈:水(含有10mm乙酸铵)；流动相b:95:5乙腈:水(含有10mm乙酸铵)；温度:50℃；梯度:0％b至100％b，经3分钟，然后0.50分钟保持在100％b；流速：1ml/min；检测:ms和uv(220nm)。
[0318]
方法c:柱:waters acquity uplc beh c18,2.1x 50mm,1.7-μm颗粒；流动相a:水(含有0.05％tfa)；流动相b:乙腈(含0.05％tfa)；温度:50℃；梯度:2-98％b，经1.0分钟，然后0.50-分钟保持在98％b；流速：0.80ml/min；检测:uv在254nm。
[0319]
核磁共振(nmr)波谱
[0320]
化学位移以相对于内部四甲基硅烷(tms)或相对于通过氘化nmr溶剂推断的tms位置的低场百万分数(ppm)报告。表观峰裂数报告为：单峰-s、双峰-d、三重峰-t、四重峰-q或多重峰-m。显示加宽的峰进一步表示为br。积分是近似的。应当注意，积分强度、峰形、化学位移和偶联常数可取决于溶剂、浓度、温度、ph和其它因素。此外，在nmr谱中与水或溶剂峰重叠或交换的峰可能不提供可靠的积分强度。在一些情况下，使用水峰抑制获得nmr光谱，这可能导致重叠峰不可见或具有改变的形状和/或积分。
[0321]
实施例1.(s)-3-(4-氨基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯
[0322]
[0323]
1a.7-溴-3-硝基喹啉-4-醇
[0324][0325]
在120℃搅拌下以50ul/5min的速度向7-溴喹啉-4-醇(2.00g，8.93mmol)在丙酸(15.36ml，205mmol)中的均相溶液中加入硝酸(750ul)。加完后，将该多相反应混合物在120℃搅拌2小时。冷却至室温后，加入乙醇(30ml，200proof)，并将该混悬液搅拌20分钟。真空过滤收集固体，用乙醇(3x 15ml)洗涤，并减压干燥，得到7-溴-3-硝基喹啉-4-醇(1.87g，6.95mmol，78％收率)，为褐色固体。lc/ms[m h]

＝269.1和271.1。
[0326]
1b.7-溴-4-氯-3-硝基喹啉
[0327][0328]
7-溴-3-硝基喹啉-4-醇(4.00g，14.87mmol)、pocl3(21ml，223mmol)和n,n-二甲基甲酰胺(1.0ml)的非均相混合物在氮气下浸入加热至70℃的油浴中。将所得的均相反应混合物在70℃搅拌4小时。通过真空过滤收集所得沉淀。更换收集烧瓶，并用水洗涤固体。将固体溶解在二氯甲烷中，用饱和碳酸钠水溶液洗涤，并经无水硫酸钠干燥。用二氯甲烷萃取(3x)水洗液，将合并的有机层用碳酸钠饱和水溶液洗涤，并经无水硫酸钠干燥。将合并的有机层减压浓缩，得到7-溴-4-氯-3-硝基喹啉(3.06g，10.64mmol，72％收率)，为米白色固体。lc/ms[m h]

＝287.0和289.0。
[0329]
1c.7-溴-3-硝基喹啉-4-胺
[0330][0331]
将在密封管中的7-溴-4-氯-3-硝基喹啉(1.50g，5.22mmol)和氢氧化铵(2.18ml，15.7mmol)在乙腈(15ml)中的溶液浸入40℃油浴中并搅拌3小时，在此期间反应混合物固化。将该混合物用甲醇稀释，并用超声分散。真空过滤收集固体，并用甲醇洗涤。将滤液浓缩，并与固体合并，得到7-溴-3-硝基喹啉-4-胺(1.40g，5.17mmol，99％收率)，为黄色固体。lc/ms[m h]

＝268.0和270.0。
[0332]
1d.7-溴喹啉-3,4-二胺
[0333][0334]
将7-溴-3-硝基喹啉-4-胺(1.40g，5.22mmol)和氯化锡(ii)二水合物(4.24g，18.8mmol)在乙酸乙酯(30ml)中的非均相混合物加热回流3小时。反应保持非均相，但当分析时反应完成。将该反应混合液用乙酸乙酯稀释，用2.5n氢氧化钠水溶液洗涤直至水层澄
清(3x)，并用盐水洗涤。收集有机层，并且将水层依次用乙酸乙酯(3
×
)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到7-溴喹啉-3,4-二胺(1.21g，5.08mmol，97％收率)，为黄色固体。lc/ms[m h]

＝238.1和240.1。
[0335]
1e.(s)-3-((4-氨基-7-溴喹啉-3-基)氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯
[0336][0337]
在室温向7-溴喹啉-3,4-二胺(0.665g，2.79mmol)和(s)-1-(叔丁氧基羰基)哌啶-3-甲酸(0.813g，3.55mmol)在乙酸乙酯(15ml)中的混悬液中加入吡啶(1.13ml，14.0mmol)，随后加入1-丙烷膦酸酐(50wt％，在dmf中)(3.33ml，5.59mmol)。在加入过程中，形成胶质，但其随着时间的推移溶解。将该混合物用乙酸乙酯稀释，用1n无水氢氧化钠(2x)洗涤，用10％氯化锂(2x)洗涤，并用盐水洗涤。收集有机层，并且将水层依次用乙酸乙酯(3
×
)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到(s)-3-((4-氨基-7-溴喹啉-3-基)氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(1.26g，2.80mmol，100％收率)，为褐色固体。lc/ms[m h]

＝449.2和451.2。
[0338]
1f.(s)-3-(7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯
[0339][0340]
将(s)-3-((4-氨基-7-溴喹啉-3-基)氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(1.26g，2.80mmol)和氢氧化钠(1.12g，28.0mmol)在乙醇(20ml)中的混合物浸入80℃油浴中。将该反应混合液加热2小时。将该反应混合液减压浓缩，并将残余物溶于乙酸乙酯和水中。收集有机层，用水洗涤，并用盐水洗涤。将水层依次用乙酸乙酯萃取(3x)，并将合并的有机层经无水硫酸钠干燥。在减压下浓缩，得到(s)-3-(7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(1.21g，2.81mmol，100％收率)，为黄色固体。lc/ms[m h]

＝431.2和433.2。
[0341]
1g.(s)-3-(4-氨基-7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯
[0342][0343]
将(s)-3-(7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(1.21g，2.81mmol)和mcpba(1.29g，5.61mmol)在二氯甲烷(15ml)中的溶液在室温搅拌3小时。向该反应混合液中滴加氢氧化铵(5.0ml)，随后是甲苯磺酰基-cl(1.07g，5.61mmol)。将生成的反应混合物搅拌60分钟。将均相反应混合物用二氯甲烷萃取，并收集有机层。将将小氢氧化
铵层用二氯甲烷萃取(2x)。将水层用水稀释，将ph用6n无水盐酸调节至～5，并用乙酸乙酯萃取(3x)。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物经isco快速硅胶色谱纯化(40g柱；0％-10％在二氯甲烷中的甲醇)，得到(s)-3-(4-氨基-7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(0.728g，1.60mmol，57％收率)，为褐色固体。lc/ms[m h]

＝446.2和448.2。
[0344]
实施例1
[0345]
将(s)-3-(4-氨基-7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(0.728g，1.63mmol)、3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1h-吡唑(0.633g，3.26mmol)和磷酸三钾(2m，在水中)(2.45ml，4.89mmol)在二噁烷(10ml)中的混合物脱气(3x；真空/氮气)。向该混合液中加入1,1'-双(二-叔丁基膦基)二茂铁二氯化钯(0.133g，0.163mmol)，并将该混合液脱气(3x；真空/氮气)。将该反应混合液浸入85℃油浴中，并搅拌过夜。将该反应混合液用乙酸乙酯稀释，用水洗涤，并用盐水洗涤。收集有机层，并且将水层依次用乙酸乙酯(3
×
)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物经isco快速色谱纯化(40g；1-10％在二氯甲烷中的甲醇)，得到(s)-3-(4-氨基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(0.517g，1.18mmol，72％收率)，为褐色固体。
[0346]
实施例2.(s)-2-(哌啶-3-基)-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺
[0347][0348]
将(s)-3-(4-氨基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(0.517g，1.193mmol，实施例1)和tfa(3ml)的均相混合液在室温搅拌45分钟。减压除去tfa，并将残余物与二噁烷共沸(3x)，得到(s)-2-(哌啶-3-基)-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺(0.395g，1.19mmol，99％收率)，为淡褐色固体。
[0349]
实施例3.(s)-1-(3-(4-氨基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-羰基)环丙烷-1-甲腈
[0350][0351]
向(s)-2-(哌啶-3-基)-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺(0.020g，0.060mmol，实施例2)、1-氰基环丙烷-1-甲酸(10.0mg，0.090mmol)和hunig碱(0.105ml，0.600mmol)在n,n-二甲基甲酰胺(1.9ml)中的混合物中加入1-丙烷膦酸酐(50wt％，在dmf中)(0.039ml，0.066mmol)。将反应物置于摇动板上60分钟。将该反应混合液通过whatman 0.45um ptfe w/gmf滤片过滤，并送至scp进行纯化。将粗制的物质经制备lc/
ms在下列条件下纯化：柱:xbridge c18,200mm x 19mm,5-μm颗粒；流动相a:5:95乙腈:水(含0.1％三氟乙酸)；流动相b:95:5乙腈:水(含0.1％三氟乙酸)；梯度:0-分钟保持在0％b，0-40％b 20分钟，然后100％b保持4分钟；流速:20ml/min；柱温:25c。级分收集由ms信号触发。合并含有所需产物的级分，并通过离心蒸发干燥，得到(s)-1-(3-(4-氨基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-羰基)环丙烷-1-甲腈(9mg，30％收率)，为黄色固体。
[0352]
实施例3的备选制备
[0353]
向(s)-2-(哌啶-3-基)-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺(0.076g，0.228mmol，实施例2)、1-氰基环丙烷-1-甲酸(0.038g，0.342mmol)和hunig碱(0.398ml，2.28mmol)在n,n-二甲基甲酰胺(3ml)中的混合物中加入1-丙烷膦酸酐(50wt％，在dmf中)(0.149ml，0.251mmol)。将该反应在室温搅拌过夜。将该反应混合液用乙酸乙酯稀释，用水洗涤，用1n无水氢氧化钠洗涤，并用盐水洗涤。收集有机层，并将水层依次用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并浓缩。经isco快速硅胶色谱纯化(4g柱；0-10％在二氯甲烷中的甲醇)，得到(s)-1-(3-(4-氨基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-羰基)环丙烷-1-甲腈(0.056g，0.126mmol，55.3％收率)，为黄色固体。
[0354]
实施例4.(s)-1-(3-(4-氨基-1-乙基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-基)丙-1-酮
[0355][0356]
4a.7-溴-n-乙基-3-硝基喹啉-4-胺
[0357][0358]
在密封管中将7-溴-4-氯-3-硝基喹啉(1.50g，5.22mmol，1b)和乙胺(2.0m，在meoh中)(5.22ml，10.4mmol)在乙腈(16ml)中的溶液浸入40℃油浴中，并搅拌3小时，在此期间该反应混合物固化。将该混合物用甲醇稀释，并用超声分散。真空过滤收集固体，并用甲醇洗涤。将滤液浓缩，并与固体合并，得到7-溴-n-乙基-3-硝基喹啉-4-胺(1.55g，5.23mmol，100％收率)，为黄色固体。lc/ms[m h]

＝296.1和298.1。
[0359]
4b.7-溴-n4-乙基喹啉-3,4-二胺
[0360][0361]
将7-溴-n-乙基-3-硝基喹啉-4-胺(1.55g，5.23mmol)和氯化锡(ii)二水合物
(4.25g，18.8mmol)在乙酸乙酯(30ml)中的非均相混合物加热回流3小时。反应保持非均相，但在分析前完成。将该反应混合液用乙酸乙酯稀释，用2.5n氢氧化钠水溶液洗涤直至水层澄清(3x)，并用盐水洗涤。收集有机层，并且将水层依次用乙酸乙酯(3
×
)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到7-溴-n4-乙基喹啉-3,4-二胺(1.27g，4.77mmol，91％收率)，为黄色固体。lc/ms[m h]

＝266.1和268.1。
[0362]
4c.(s)-3-((7-溴-4-(乙基氨基)喹啉-3-基)氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯
[0363][0364]
在室温向7-溴-n4-乙基喹啉-3,4-二胺(1.27g，4.77mmol)和(s)-1-(叔丁氧基羰基)哌啶-3-甲酸(1.31g，5.73mmol)在乙酸乙酯(25ml)中的混悬液中加入吡啶(1.93ml，23.9mmol)，随后加入1-丙烷膦酸酐(50wt％，在dmf中)(5.68ml，9.54mmol)。在加入过程中，形成胶质，但其随着时间的推移溶解。将该混合物用乙酸乙酯稀释，用1n无水氢氧化钠(2x)洗涤，用10％氯化锂(2x)洗涤，并用盐水洗涤。收集有机层，并且将水层依次用乙酸乙酯(3
×
)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到(s)-3-((7-溴-4-(乙基氨基)喹啉-3-基)氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(2.27g，4.75mmol，100％收率)，为褐色固体。lc/ms[m h]

＝477.3和479.3。
[0365]
4d.(s)-3-(7-溴-1-乙基-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯
[0366][0367]
将(s)-3-((7-溴-4-(乙基氨基)喹啉-3-基)氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(2.27g，4.75mmol)和氢氧化钠(1.90g，47.5mmol)在etoh(35ml)中的混合物浸入80℃油浴中。将该反应混合液加热2小时。将该反应混合液减压浓缩，并将残余物溶于乙酸乙酯和水中。收集有机层，用水洗涤，并用盐水洗涤。将水层依次用乙酸乙酯萃取(3x)，并将合并的有机层经无水硫酸钠干燥。在减压下浓缩，随后经isco快速硅胶色谱纯化(80g柱；0-10％在二氯甲烷中的甲醇)，得到(s)-3-(7-溴-1-乙基-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(1.88g，4.09mmol，86％收率)，为淡棕色固体。lc/ms[m h]

＝459.3和461.3。
[0368]
4e.(s)-3-(4-氨基-7-溴-1-乙基-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯
[0369]
[0370]
将(s)-3-(7-溴-1-乙基-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(1.88g，4.09mmol)和mcpba(1.88g，8.18mmol)在二氯甲烷(22ml)中的溶液在室温搅拌3小时。向该反应混合液中滴加氢氧化铵(7.33ml)，随后加入甲苯磺酰基-cl(1.56g，8.18mmol)。将生成的反应混合物搅拌60分钟。将均相反应混合物用二氯甲烷萃取，并收集有机层。将氢氧化铵层用水稀释，并用二氯甲烷萃取(3x)。在减压下浓缩，随后经isco快速硅胶色谱纯化(80g柱；0％-10％在二氯甲烷中的甲醇)，产物未能与杂质分离。再次纯化(0-5％)，得到(s)-3-(4-氨基-7-溴-1-乙基-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(0.412g，0.868mmol，21％收率)，为褐色固体。lc/ms[m h]

＝474.3和476.3。
[0371]
4f.(s)-3-(4-氨基-1-乙基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯
[0372][0373]
将(s)-3-(4-氨基-7-溴-1-乙基-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(0.406g，0.856mmol),3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1h-吡唑(0.332g，1.71mmol)和磷酸三钾(2m，在水中)(1.3ml，2.57mmol)在二噁烷(6ml)中的混合物除气(3x；真空/氮气)。向该混合液中加入1,1'-双(二-叔丁基膦基)二茂铁二氯化钯(0.070g，0.086mmol)，并将该混合液脱气(3x；真空/氮气)。将该反应混合液浸入85℃油浴中，并搅拌过夜。将该反应混合液用乙酸乙酯稀释，用水洗涤，并用盐水洗涤。收集有机层，并且将水层依次用乙酸乙酯(3
×
)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物经isco快速色谱纯化(40g；1-10％在二氯甲烷中的甲醇)，得到(s)-3-(4-氨基-1-乙基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(0.327g，0.701mmol，82％收率)，为褐色固体。lc/ms[m h]

＝＝462.5。
[0374]
4g.(s)-1-乙基-2-(哌啶-3-基)-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺
[0375][0376]
将(s)-3-(4-氨基-1-乙基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(0.327g，0.708mmol)和tfa(3ml)的均相混合液在室温搅拌45分钟。减压除去tfa，并将残余物与二噁烷共沸(3x)，得到(s)-1-乙基-2-(哌啶-3-基)-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺(0.256g，0.708mmol，100％收率)，为淡褐色固体。
[0377]
实施例4
[0378]
向(s)-1-乙基-2-(哌啶-3-基)-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺
(0.021g，0.058mmol)、丙酸(6.51μl，0.087mmol)和hunig碱(0.101ml，0.581mmol)在n,n-二甲基甲酰胺(1.9ml)中的混合物中加入1-丙烷膦酸酐(50wt％，在dmf中)(0.038ml，0.064mmol)。将反应物置于摇动板上60分钟。将该反应混合液通过whatman 0.45um ptfe w/gmf滤片过滤，并送至scp进行纯化。将粗制的物质经制备lc/ms在下列条件下纯化：柱:xbridge c18,200mm x 19mm,5-μm颗粒；流动相a:5:95乙腈:水(含10-mm乙酸铵)；流动相b:95:5乙腈:水(含10-mm乙酸铵)；梯度:0-分钟保持在8％b，8-48％b 23分钟，然后100％b保持6-分钟；流速:20ml/min；柱温:25c。级分收集由ms信号触发。合并含有所需产物的级分，并通过离心蒸发干燥，得到(s)-1-(3-(4-氨基-1-乙基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-基)丙-1-酮(22mg，87％收率)。
[0379]
实施例5.(s)-1-(3-(4-氨基-1-异丙基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-基)丙-1-酮
[0380][0381]
5a.7-溴-n-异丙基-3-硝基喹啉-4-胺
[0382][0383]
在密封管中将7-溴-4-氯-3-硝基喹啉(1.00g，3.48mmol，1b)和异丙基胺(0.596ml，6.96mmol)在乙腈(10ml)中的溶液浸入40℃油浴中，并搅拌3小时，在此期间该反应混合物固化。将该混合物用甲醇稀释，并用超声分散。真空过滤收集固体，并用甲醇洗涤。将滤液浓缩，并与固体合并，得到7-溴-n-异丙基-3-硝基喹啉-4-胺(1.08g，3.48mmol，100％收率)，为黄色固体。lc/ms[m h]

＝310.2和312.2。
[0384]
5b.7-溴-n4-异丙基喹啉-3,4-二胺
[0385][0386]
将7-溴-n-异丙基-3-硝基喹啉-4-胺(1.08g，3.48mmol)和氯化锡(ii)二水合物(2.83g，12.5mmol)在乙酸乙酯(20ml)中的非均相混合物加热回流3小时。反应保持非均相，但通过分析完成。将该反应混合液用乙酸乙酯稀释，用2.5n氢氧化钠水溶液洗涤直至水层澄清(3x)，用水洗涤，并用盐水洗涤。收集有机层，并且将水层依次用乙酸乙酯(3
×
)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到7-溴-n4-异丙基喹啉-3,4-二胺(0.831g，2.97mmol，85％收率)，为黄色固体。lc/ms[m h]

＝280.2和282.2。
[0387]
5c.(s)-3-((7-溴-4-(异丙基氨基)喹啉-3-基)氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯
[0388][0389]
在室温向7-溴-n4-异丙基喹啉-3,4-二胺(0.831g，2.97mmol)和(s)-1-(叔丁氧基羰基)哌啶-3-甲酸(0.816g，3.56mmol)在乙酸乙酯(16ml)中的混悬液中加入吡啶(1.199ml，14.83mmol)，随后加入1-丙烷膦酸酐(50wt％，在dmf中)(3.53ml，5.93mmol)。在加入过程中，形成胶质，但其随着时间的推移溶解。将该混合物用乙酸乙酯稀释，用1n无水氢氧化钠(2x)洗涤，用10％氯化锂(2x)洗涤，并用盐水洗涤。收集有机层，并且将水层依次用乙酸乙酯(3
×
)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到(s)-3-((7-溴-4-(异丙基氨基)喹啉-3-基)氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(1.46g，2.97mmol，100％收率)，为淡棕色固体。lc/ms[m h]

＝491.3和493.3。
[0390]
5d.(s)-3-(7-溴-1-异丙基-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯
[0391][0392]
将(s)-3-((7-溴-4-(异丙基氨基)喹啉-3-基)氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(0.779g，1.585mmol)和氢氧化钠(0.634g，15.85mmol)在乙醇(15ml)中的混合物浸入80℃油浴中，并加热过夜。将该反应混合液减压浓缩，并将残余物溶于乙酸乙酯和水中。收集有机层，用水洗涤，并用盐水洗涤。将水层依次用乙酸乙酯萃取(3x)，并将合并的有机层经无水硫酸钠干燥。在减压下浓缩，随后经isco快速硅胶色谱纯化(80g柱；0-10％在二氯甲烷中的甲醇)，得到(s)-3-(7-溴-1-异丙基-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(0.430g，0.908mmol，57％收率)，为淡棕色固体。lc/ms[m h]

＝473.3和475.3。
[0393]
5e.(s)-3-(4-氨基-7-溴-1-异丙基-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯
[0394][0395]
将(s)-3-(7-溴-1-异丙基-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(0.430g，0.908mmol)和mcpba(0.418g，1.817mmol)在二氯甲烷(5ml)中的溶液在室温搅拌3小时。向该反应混合液中滴加氢氧化铵(1.67ml)，随后加入甲苯磺酰基-cl(0.346g，1.82mmol)。将生成的反应混合物搅拌60分钟。将均相反应混合物用二氯甲烷萃取，并收集有机层。将氢氧化铵层用水稀释，并用二氯甲烷萃取(3x)。在减压下浓缩，随后经isco快速硅胶色谱纯化(40g柱；0％-5％在二氯甲烷中的甲醇)，得到(s)-3-(4-氨基-7-溴-1-异丙
基-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(0.188g，0.385mmol，42％收率)，为褐色固体。lc/ms[m h]

＝488.3和490.3
[0396]
5f.(s)-3-(4-氨基-1-异丙基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯
[0397][0398]
将(s)-3-(4-氨基-7-溴-1-异丙基-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(0.305g，0.624mmol)、3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1h-吡唑(0.242g，1.25mmol)和磷酸三钾(2m，在水中)(0.937ml，1.87mmol)在二噁烷(4ml)中的混合物脱气(3x；真空/氮气)。向该混合液中加入1,1'-双(二-叔丁基膦基)二茂铁二氯化钯(0.051g，0.062mmol)，并将该混合液脱气(3x；真空/氮气)。将该反应混合液浸入85℃油浴中，并搅拌过夜。将该反应混合液用乙酸乙酯稀释，用水洗涤，并用盐水洗涤。收集有机层，并且将水层依次用乙酸乙酯(3
×
)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物经isco快速色谱纯化(40g；1-10％在二氯甲烷中的甲醇)，得到(s)-3-(4-氨基-1-异丙基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(0.236g，0.496mmol，79％收率)，为褐色固体。lc/ms[m h]

＝476.5。
[0399]
5g.(s)-1-异丙基-2-(哌啶-3-基)-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺
[0400][0401]
将(s)-3-(4-氨基-1-异丙基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(0.237g，0.498mmol)和tfa(3ml)的均相混合液在室温搅拌45分钟。减压除去tfa，并将残余物与二噁烷共沸(3x)，得到(s)-1-异丙基-2-(哌啶-3-基)-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺(0.187g，0.488mmol，98％收率)，为淡褐色固体。lc/ms[m h]

＝376.4。
[0402]
实施例5
[0403]
向(s)-1-异丙基-2-(哌啶-3-基)-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺(0.021g，0.056mmol)、丁酸(7.72μl、0.084mmol)和hunig碱(0.098ml，0.559mmol)在n,n-二甲基甲酰胺(1.9ml)中的混合物中加入1-丙烷膦酸酐(50wt％，在dmf中)(0.037ml，0.062mmol)。将反应物置于摇动板上60分钟。将该反应混合液通过whatman 0.45um ptfe w/gmf滤片过滤，并经制备lc/ms在下列条件下纯化：柱:xbridge c18,200mm x 19mm,5-μm颗粒；流动相a:5:95乙腈:水(含10-mm乙酸铵)；流动相b:95:5乙腈:水(含10-mm乙酸铵)；梯
度:0-分钟保持在12％b，12-40％b 35分钟，然后100％b保持4分钟；流速:20ml/min；柱温:25c。级分收集由ms信号触发。合并含有所需产物的级分，并通过离心蒸发干燥，得到s)-1-(3-(4-氨基-1-异丙基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-基)丁-1-酮(10mg，39％收率)。
[0404]
实施例6.(r)-3-(4-氨基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯
[0405][0406]
6a.(r)-3-((4-氨基-7-溴喹啉-3-基)氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯
[0407][0408]
在室温向7-溴喹啉-3,4-二胺(1.0g，4.20mmol)和(r)-1-(叔丁氧基羰基)哌啶-3-甲酸(1.223g，5.33mmol)在乙酸乙酯(21ml)中的混悬液中加入吡啶(1.699ml，21.00mmol)，随后滴加1-丙烷膦酸酐(50wt％，在dmf中)(5.00ml，8.40mmol)。在加入过程中，少量胶形成但其随着时间的推移溶解。将该混合物用乙酸乙酯稀释，用1n无水氢氧化钠(2x)洗涤，用10％氯化锂(2x)洗涤，并用盐水洗涤。收集有机层，并且将水层依次用乙酸乙酯(3
×
)萃取。将合并的有机层经无水硫酸镁干燥，并在减压下浓缩，得到(r)-3-((4-氨基-7-溴喹啉-3-基)氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(1.85g，4.12mmol，98％收率)，为淡米黄色固体。lc/ms[m h]

＝449.2和450.9。1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.51-8.46(m,1h),8.15(d,j＝1.8hz,1h),7.68-7.62(m,1h),7.55(dd,j＝8.9,1.8hz,1h),5.20(br s,2h),3.87-3.70(m,1h),3.57-3.40(m,1h),2.76-2.65(m,1h),2.29-2.12(m,1h),2.00-1.84(m,1h),1.82-1.67(m,1h),1.61-1.53(m,1h),1.48(s,9h)。
[0409]
6b.(r)-3-(7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯
[0410][0411]
将(r)-3-((4-氨基-7-溴喹啉-3-基)氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(2.61g，5.81mmol)和氢氧化钠(2.323g，58.1mmol)在etoh(41.5ml)中的溶液浸入80℃油浴中。将该反应混合液在氮冷凝器下加热2小时，并减压浓缩。将残余物溶于乙酸乙酯和水中。收集有机层，并用水和盐水洗涤。将水层依次用乙酸乙酯萃取(3x)，并将合并的有机层经无水硫酸镁干燥。在减压下浓缩，得到(r)-3-(7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁
基酯(2.39g，5.54mmol，95％收率)，为金色固体。lc/ms[m h]

＝431.3和433.3。
[0412]
6c.(r)-3-(4-氨基-7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯
[0413][0414]
将(r)-3-(7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(1.21g，2.81mmol)和mcpba(1.291g，5.61mmol)在二氯甲烷(15ml)中的溶液在室温搅拌3小时。向该反应混合液中滴加氢氧化铵(5.00ml)，随后加入甲苯磺酰基-cl(1.07g，5.61mmol)。将生成的反应混合物搅拌60分钟。将均相反应混合物用二氯甲烷萃取，并收集有机层。将小氢氧化铵层用二氯甲烷萃取(2x)。将水层用水稀释，将ph用6n无水盐酸调节至～5，并用乙酸乙酯萃取(3x)。将合并的有机层经无水硫酸镁干燥，并在减压下浓缩。将残余物经isco快速硅胶色谱纯化(40g柱；0％-10％在二氯甲烷中的甲醇)，得到(r)-3-(4-氨基-7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(0.70g，1.60mmol，56％收率)，为褐色固体。lc/ms[m h]

＝446.4和448.4。
[0415]
实施例6
[0416]
将(r)-3-(4-氨基-7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(0.67g，1.50mmol)、3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1h-吡唑(0.583g，3.00mmol)和磷酸三钾(2m，在水中)(2.25ml，4.50mmol)在二噁烷(9.2ml)中的混合物脱气(3x；真空/氮气)。向该混合液中加入1,1'-双(二-叔丁基膦基)二茂铁二氯化钯(0.123g，0.150mmol)，并将该混合液脱气(3x；真空/氮气)。将该反应混合液浸入80℃油浴中，并搅拌过夜。将该反应混合液用乙酸乙酯稀释，用水洗涤，并用盐水洗涤。收集有机层，并且将水层依次用乙酸乙酯(3
×
)萃取。将合并的有机层经无水硫酸镁干燥，并在减压下浓缩。将残余物经isco快速色谱纯化(40g；0-20％在二氯甲烷中的甲醇)，并将小样经制备型lc/ms用以下条件纯化。柱:xbridge c18,200mm x 19mm,5-μm颗粒；流动相a:5:95乙腈:水(含10-mm乙酸铵)；流动相b:95:5乙腈:水(含10-mm乙酸铵)；梯度:0-分钟保持在13％b，13-53％b经20分钟，然后100％b保持4分钟；流速:20ml/min；柱温:25℃。级分收集由ms和uv信号触发。合并含有所需产物的级分，并通过离心蒸发干燥，得到(r)-3-(4-氨基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(0.400g，0.92mmol，62％收率)，为褐色固体。
[0417]
实施例7.(r)-2-(哌啶-3-基)-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺
[0418][0419]
将(r)-3-(4-氨基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲
酸叔丁基酯(0.40g，0.923mmol)和tfa(2.31ml)的均相混合液在室温搅拌60分钟。减压除去tfa，并将残余物与二噁烷共沸(3x)。将粗制的物质经制备lc/ms在下列条件下纯化：柱:xbridge c18,200mm x 19mm,5-μm颗粒；流动相a:5:95乙腈:水(含0.1％三氟乙酸)；流动相b:95:5乙腈:水(含0.1％三氟乙酸)；梯度:2-分钟保持在0％b，0-40％b 20分钟，然后100％b保持4分钟；流速:20ml/min；柱温:25℃。级分收集由ms信号触发。合并含有所需产物的级分，并通过离心蒸发干燥，得到(r)-2-(哌啶-3-基)-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺(0.31g，0.71mmol，98％收率)，为淡褐色固体。
[0420]
实施例8.(r)-(3-(4-氨基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-基)(环丁基)甲酮
[0421][0422]
(r)-2-(哌啶-3-基)-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺(0.020g，0.060mmol)、环丁烷羧酸(8.60μl，0.090mmol)和hunig碱(0.105ml，0.600mmol)在n,n-二甲基甲酰胺(1.9ml)向中的混合物中加入1-丙烷膦酸酐(50wt％，在dmf中)(0.039ml，0.066mmol)。将反应物置于摇动板上60分钟。将该反应混合液通过whatman 0.45um ptfe w/gmf滤片过滤。将粗制的物质经制备型lc/ms用以下条件纯化。柱:xbridge c18,200mm x 19mm,5-μm颗粒；流动相a:5:95乙腈:水(含有10mm乙酸铵)；流动相b:95:5乙腈:水(含有10mm乙酸铵)；梯度:0-分钟保持在6％b,6-46％b 20分钟，然后100％b保持4分钟；流速:20ml/min；柱温:25℃。级分收集由ms信号触发。合并含有所需产物的级分，并通过离心蒸发干燥，得到(r)-(3-(4-氨基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-基)(环丁基)甲酮(6mg，22％收率)。
[0423]
实施例9.(s)-1-(3-(4-氨基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)吡咯烷-1-基)丙-1-酮
[0424][0425]
9a.(s)-3-((4-氨基-7-溴喹啉-3-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
[0426][0427]
在室温向7-溴喹啉-3,4-二胺(0.566g，2.38mmol)和(s)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯
烷-3-甲酸(0.650g，3.02mmol)在乙酸乙酯(15ml)中的混悬液中加入吡啶(0.962ml，11.89mmol)，随后加入1-丙烷膦酸酐(50wt％，在etoac中)(2.83ml，4.76mmol)。60分钟后，反应混合物仍然均质。加入二甲基甲酰胺(1ml)，并将该反应混合液搅拌6分钟，在此期间其变为均相，将该混合物用乙酸乙酯稀释，用1n无水氢氧化钠(2x)洗涤，用10％氯化锂(2x)洗涤，并用盐水洗涤。收集有机层，并且将水层依次用乙酸乙酯(3
×
)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到(s)-3-((4-氨基-7-溴喹啉-3-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(1.04g，2.38mmol，100％收率)，为褐色固体。lc/ms[m h]

＝435.2和437.2。
[0428]
9b.(s)-3-(7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
[0429][0430]
将(s)-3-((4-氨基-7-溴喹啉-3-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(1.035g，2.378mmol)和氢氧化钠(0.951g，23.78mmol)在etoh(12ml)中的混合物浸入80℃油浴中。将该反应混合液加热2小时。冷却至室温后，将该反应混合液减压浓缩，并将残余物溶于乙酸乙酯和水中。收集有机层，并用盐水洗涤。将水层依次用用乙酸乙酯萃取(3x)，并将合并的有机层经无水硫酸钠干燥。在减压下浓缩，得到(s)-3-(7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.906g，2.17mmol，91％收率)，为黄色固体。lc/ms[m h]

＝417.2和419.2。
[0431]
9c.(s)-3-(4-氨基-7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
[0432][0433]
将(s)-3-(7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.906g，2.171mmol)和mcpba(0.999g，4.34mmol)在二氯甲烷(12ml)中的溶液在室温搅拌3小时。向该反应混合液中滴加氢氧化铵(4.00ml)，随后加入甲苯磺酰基-cl(0.828g，4.34mmol)。将生成的反应混合物搅拌60分钟。将均相反应混合物用二氯甲烷稀释，并收集有机层。将将小氢氧化铵层用乙酸乙酯萃取(2x)。将水层用水稀释，将ph用6n无水盐酸调节至～5，并用乙酸乙酯萃取(3x)。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物经isco快速硅胶色谱纯化(40g柱；0％-10％在二氯甲烷中的甲醇)，得到(s)-3-(4-氨基-7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.510g，1.17mmol，54％收率)，为褐色固体。lc/ms[m h]

＝432.2和434.2。
[0434]
9d.(s)-3-(4-氨基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
w/gmf滤片过滤，并送至scp进行纯化。将粗制的物质经制备lc/ms在下列条件下纯化：柱:xbridge c18,200mm x 19mm,5-μm颗粒；流动相a:5:95乙腈:水(含0.1％三氟乙酸)；流动相b:95:5乙腈:水(含0.1％三氟乙酸)；梯度:0-分钟保持在0％b，0-40％b 20分钟，然后100％b保持4分钟；流速:20ml/min；柱温:25c。级分收集由ms信号触发。合并含有所需产物的级分，并通过离心蒸发干燥，得到(s)-3-(4-氨基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(5mg，20％收率)。
[0444]
实施例10.(r)-3-(4-氨基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
[0445][0446]
10a.(r)-3-((4-氨基-7-溴喹啉-3-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
[0447][0448]
在室温向7-溴喹啉-3,4-二胺(0.400g，1.680mmol)和(r)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-甲酸(0.470g，2.184mmol)在乙酸乙酯(6.8ml)中的混悬液中加入吡啶(0.679ml，8.40mmol)，随后加入1-丙烷膦酸酐(50wt％，在etoac中)(2.00ml，3.36mmol)(在加入过程中，该反应混合液变成混悬液，几分钟内再溶解)。将均相反应混合物在室温搅拌30分钟。将该混合物用乙酸乙酯稀释，用1n无水氢氧化钠(2x)洗涤，并用盐水洗涤。收集有机层，并将水层依次用乙酸乙酯萃取(2x)。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到(r)-3-((4-氨基-7-溴喹啉-3-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.45g，62％收率)，为褐色固体。lc/ms[m h]

＝435.0。
[0449]
10b.(r)-3-(7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
[0450][0451]
向(r)-3-((4-氨基-7-溴喹啉-3-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.45g，1.034mmol)在etoh(10ml)中的溶液中加入氢氧化钠(0.413g，10.34mmol)。将得到的混合液加热至80℃，并保持搅拌2小时。冷却至室温后，将该反应混合液用二氯甲烷稀释，并用水洗涤。收集有机层，并将水层用二氯甲烷萃取(2x)和乙酸乙酯(2x)。将二氯甲烷和乙酸乙酯层独立地用盐水洗涤，并经无水硫酸钠干燥。将合并的有机层过滤，并在减压下浓缩，得到(r)-3-(7-溴-3h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯，为淡棕色固体。经isco纯化(40g硅胶，10％meoh/ch2cl2)，得到纯产物。lc/ms[m h]

＝417.2.1h-nmr
(400mhz,hdmso)δ9.18-9.14(m,1h),8.34-8.27(m,2h),7.85-7.79(m,1h),3.87-3.78(m,2h),3.71-3.61(m,1h),3.56-3.47(m,1h),3.45-3.39(m,1h),2.44-2.19(m,2h),和1.47-1.38(m,9h)。
[0452]
10c.(r)-3-(4-氨基-7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
[0453][0454]
将(r)-3-(7-溴-3h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.5g，1.198mmol)在二氯甲烷(15ml)中的溶液用mcpba(0.620g，3.59mmol)处理。将得到的混合液在室温搅拌12小时。向该溶液中加入氢氧化铵(0.233ml，5.99mmol)和甲苯磺酰基-cl(0.457g，2.396mmol)。将该反应混合液在室温搅拌2小时。将该反应混合液用二氯甲烷稀释，并用水洗涤。收集有机层，并将水层依次用二氯甲烷萃取(2x)。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并浓缩。经isco快速色谱纯化(24g柱；0％-10％在二氯甲烷中的甲醇)，得到(r)-3-(4-氨基-7-溴-3h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)吡咯烷-1-甲酸酯(400mg，77％收率)，为褐色固体。lc/ms[m h]

＝432.1。
[0455]
实施例10
[0456]
向用氮气惰性气氛吹扫和保持饱和的10ml反应小瓶中加入(r)-3-(4-氨基-7-溴-3h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(350mg，0.810mmol)在二噁烷(10ml)中的溶液。向溶液中加入磷酸三钾(1.21ml，2.43mmol)(2m，在水中)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1h-吡唑(189mg，0.971mmol)和双(三叔丁基膦)钯(0)(21mg，0.040mmol)。将得到的溶液在85℃搅拌12小时。将所得混合物真空浓缩，并将残余物经反相制备性hplc纯化，得到(r)-3-(4-氨基-7-(1h-吡唑-3-基)-3h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯，为淡黄色固体。
[0457]
实施例11.(r)-1-(3-(4-氨基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)吡咯烷-1-基)-2-甲基丙-1-酮
[0458][0459]
将(r)-3-(4-氨基-7-(1h-吡唑-3-基)-3h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(25mg，0.060mmol)在1ml纯tfa中的溶液在室温搅拌15分钟，然后将反应混合液浓缩，并在真空泵上进一步干燥，得到(r)-7-(1h-吡唑-3-基)-2-(吡咯烷-3-基)-3h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺,lc/ms[m 1]

＝320.4。向上述粗品物质的thf(2ml)溶液中加入异丁酸(8.28mg，0.094mmol)和三乙胺(0.017ml，0.125mmol)，然后滴加1-丙烷膦酸酐(59.8mg，0.094mmol)(50wt％，在etoac中)。将得到的混合液在室温搅拌1小时。经反相制备
hplc纯化，得到所需产物(5.7mg，24％收率)。
[0460]
实施例12.4-(4-氨基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯
[0461][0462]
12a.4-((4-氨基-7-溴喹啉-3-基)氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯
[0463][0464]
在室温向7-溴喹啉-3,4-二胺(0.323g，1.357mmol)和1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-甲酸(0.395g，1.723mmol)在乙酸乙酯(12ml)中的混悬液中加入吡啶(0.549ml，6.78mmol)，随后加入1-丙烷膦酸酐(50wt％，在dmf中)(1.62ml，2.71mmol)。在加入过程中，形成胶质，但其随着时间的推移溶解。将该混合物用乙酸乙酯稀释，用1n无水氢氧化钠(2x)洗涤，用10％氯化锂(2x)洗涤，并用盐水洗涤。收集有机层，并且将水层依次用乙酸乙酯(3
×
)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到4-((4-氨基-7-溴喹啉-3-基)氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(0.526g，1.17mmol，86％收率)，为褐色固体。lc/ms[m h]

＝449.2和451.2.。
[0465]
12c.4-(7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯
[0466][0467]
将4-((4-氨基-7-溴喹啉-3-基)氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(0.526g，1.171mmol)和氢氧化钠(0.468g，11.71mmol)在etoh(10ml)中的混合物浸入80℃油浴中。将该反应混合液加热2小时，并在室温搅拌过夜。将该反应混合液减压浓缩，并将残余物溶于乙酸乙酯和水中。收集有机层，用水洗涤，并用盐水洗涤。将水层依次用用乙酸乙酯萃取(3x)，并将合并的有机层经无水硫酸钠干燥。在减压下浓缩，得到4-(7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(0.470g，1.09mmol，93％收率)，为黄色固体。lc/ms[m h]

＝431.2和433.2。
[0468]
12d.4-(4-氨基-7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯
[0469][0470]
将4-(7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(0.470g，1.090mmol)和mcpba(0.501g，2.179mmol)在二氯甲烷(6ml)中的溶液在室温搅拌3小时。向该反应混合液中滴加氢氧化铵(2.00ml)，随后加入甲苯磺酰基-cl(0.415g，2.18mmol)。将生成的反应混合物搅拌60分钟。将均相反应混合物用二氯甲烷萃取，并收集有机层。将将小氢氧化铵层用二氯甲烷萃取(2x)。将水层用水稀释，将ph用6n无水盐酸调节至～5，并用乙酸乙酯萃取(3x)。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物经isco快速硅胶色谱纯化(12g柱；0％-10％在二氯甲烷中的甲醇)，得到4-(4-氨基-7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(0.173g，0.388mmol，50％收率)，为褐色固体。lc/ms[m h]

＝446.2和448.2
[0471]
实施例12
[0472]
将4-(4-氨基-7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(0.181g，0.406mmol)、3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1h-吡唑(0.157g，0.811mmol)和磷酸三钾(2m，在水中)(0.61ml，1.22mmol)在二噁烷(4ml)中的混合物脱气(3x；真空/氮气)。向该混合液中加入1,1'-双(二-叔丁基膦基)二茂铁二氯化钯(0.033g，0.041mmol)，并将该混合液脱气(3x；真空/氮气)。将该反应混合液浸入85℃油浴中，并搅拌1小时。降温度减至95℃，并将该反应搅拌过夜。将该反应混合液用乙酸乙酯稀释，用水洗涤，并用盐水洗涤。收集有机层，并且将水层依次用乙酸乙酯(3
×
)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将生成的残余物经isco快速色谱纯化(12g柱；0-20％在二氯甲烷中的甲醇)，得到4-(4-氨基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(0.138g，0.318mmol，79％收率)，为淡褐色固体。
[0473]
实施例13.(r)-2-((4-氨基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
[0474][0475]
13a.(r)-2-((4-氨基-7-溴喹啉-3-基)氨基)-2-氧代乙基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
[0476][0477]
在室温向7-溴喹啉-3,4-二胺(1.1g，4.62mmol)和(r)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)乙酸(1.38g，6.01mmol)在乙酸乙酯(24ml)中的混悬液中加入吡啶(1.87ml，23.1mmol)，随后滴加1-丙烷膦酸酐(50wt％，在dmf中)(5.50ml，9.24mmol)。在加入过程中，少量胶形成但其随着时间的推移溶解.该反应混合液搅拌2.5小时，并将用乙酸乙酯稀释，用1n无水氢氧化钠(2x)洗涤，用10％氯化锂(2x)洗涤，并用盐水洗涤。收集有机层，并且将水层依次用乙酸乙酯(3
×
)萃取。将合并的有机层经无水硫酸镁干燥，并在减压下浓缩，得到(r)-2-((4-氨基-7-溴喹啉-3-基)氨基)-2-氧代乙基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(2.13g，4.74mmol，100％收率)，为褐色泡沫。lc/ms[m h]

＝449.4和451.4.1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.85-8.62(m,1h),8.56-8.47(m,1h),8.15-8.08(m,1h),7.66(d,j＝9.0hz,1h),7.57-7.49(m,1h),5.74-5.46(m,2h),4.85-4.60(m,1h),4.41-4.26(m,1h),3.42(br d,j＝6.8hz,1h),2.84(br dd,j＝14.2,5.2hz,1h),2.72-2.59(m,1h),2.24-2.07(m,1h),2.03-1.83(m,3h),和1.82-1.57(m,9h)。
[0478]
13b.(r)-2-((7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
[0479][0480]
将(r)-2-(2-((4-氨基-7-溴喹啉-3-基)氨基)-2-氧代乙基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(2.1g，4.67mmol)和氢氧化钠(1.87g，46.7mmol)在etoh(33ml)中的溶液浸入80℃油浴中。将该反应混合液在氮冷凝器下加热1小时，并减压浓缩。将残余物溶于乙酸乙酯和水中。收集有机层，并用水和盐水洗涤。将水层依次用乙酸乙酯萃取(3x)，并将合并的有机层经无水硫酸镁干燥。在减压下浓缩，得到(r)-2-((7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(1.84g，4.27mmol，91％收率)，为light琥珀色泡沫。lc/ms[m h]

＝431.4和433.2。
[0481]
13c.(r)-2-((4-氨基-7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
[0482][0483]
将(r)-2-((7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(1.84g，4.27mmol)和mcpba(1.963g，8.53mmol)在二氯甲烷(23ml)中的溶液在室温搅拌3小
基)甲基)吡咯烷-1-基)丙-1-酮
[0490][0491]
向(r)-7-(1h-吡唑-3-基)-2-(吡咯烷-2-基甲基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺(0.02g，0.060mmol)、丙酸(6.72μl，0.090mmol)和hunig碱(0.105ml，0.600mmol)在n,n-二甲基甲酰胺(1.9ml)中的混合物中加入1-丙烷膦酸酐(50wt％，在dmf中)(0.039ml，0.066mmol)。将反应物置于摇动板上60分钟。将该反应混合液通过whatman 0.45um ptfe w/gmf滤片过滤。将粗制的物质经制备型lc/ms用以下条件纯化。柱:xbridge c18,200mm x 19mm,5μm颗粒；流动相a:5:95乙腈:水(含0.1％三氟乙酸)；流动相b:95:5乙腈:水(含0.1％三氟乙酸)；梯度:1-分钟保持在0％b，0-40％b 25分钟，然后6-分钟保持在100％b；流速:20ml/min；柱温:25℃。级分收集由ms信号触发。合并含有所需产物的级分，并通过离心蒸发干燥得到(r)-1-(2-((4-氨基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)甲基)吡咯烷-1-基)丙-1-酮(4mg，17％收率)。
[0492]
实施例16.(s)-2-((4-氨基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
[0493][0494]
16a.(s)-2-((4-氨基-7-溴喹啉-3-基)氨基)-2-氧代乙基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
[0495][0496]
在室温向7-溴喹啉-3,4-二胺(2.0g，8.40mmol)和(s)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)乙酸(2.22g，9.66mmol)在乙酸乙酯(43ml)中的混悬液中加入吡啶(3.40ml，42.0mmol)，随后滴加(以最小化胶体的形成)1-丙烷膦酸酐(50wt％，在dmf中)(10.00ml，16.8mmol)。该反应混合液搅拌3小时，并用乙酸乙酯稀释，用1n无水氢氧化钠(2x)、10％氯化锂(2x)和盐水洗涤。收集有机层，并且将水层依次用乙酸乙酯(3
×
)萃取。将合并的有机层经无水硫酸镁干燥，并在减压下浓缩，得到(s)-2-((4-氨基-7-溴喹啉-3-基)氨基)-2-氧
代乙基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(4.2g，9.35mmol，100％收率)，为褐色泡沫。lc/ms[m h]

＝449.4和451.4。
[0497]
16b.(s)-2-((7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
[0498][0499]
将(s)-2-(2-((4-氨基-7-溴喹啉-3-基)氨基)-2-氧代乙基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(3.77g，8.39mmol)和氢氧化钠(3.36g，84mmol)在etoh(60ml)中的溶液浸入80℃油浴中。将该反应混合液在氮冷凝器下加热2.5小时，并减压浓缩。将残余物溶于乙酸乙酯和水中。收集有机层，并用水和盐水洗涤。将水层依次用乙酸乙酯萃取(3x)，并将合并的有机层经无水硫酸镁干燥。在减压下浓缩，得到(s)-2-((7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(3.34g，7.74mmol，92％收率)，为浅琥珀色泡沫。lc/ms[m h]

＝431.2和433.2。
[0500]
16c.(s)-2-((4-氨基-7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
[0501][0502]
将(s)-2-((7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(3.34g，7.74mmol)和mcpba(3.56g，15.49mmol)在二氯甲烷(42ml)中的澄清溶液在室温搅拌4小时。向该反应混合液中滴加氢氧化铵(14ml)，随后在0℃加入甲苯磺酰基-cl(2.95g，15.5mmol)。将生成的反应混合物搅拌60分钟。将均相反应混合物用二氯甲烷萃取(3x)，并收集有机层。将水层用水稀释，将ph用6n无水盐酸调节至～5，并用乙酸乙酯萃取(3x)。将合并的有机层经无水硫酸镁干燥，并在减压下浓缩。将残余物经isco快速硅胶色谱纯化(120g柱；0％-10％在二氯甲烷中的甲醇)，得到(s)-2-((4-氨基-7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(2.0g，4.48mmol，58％收率)，为琥珀色泡沫。将粗制物质小样经制备型lc/ms用以下条件纯化。柱:xbridge c18,200mm x 19mm,5μm颗粒；流动相a:5:95乙腈:水(含10-mm乙酸铵)；流动相b:95:5乙腈:水(含有10mm乙酸铵)；梯度:0-分钟保持在20％b，20-60％b 20分钟，然后100％b保持4分钟；流速:20ml/min；柱温:25℃。级分收集由ms和uv信号触发。合并含有所需产物的级分，并通过离心蒸发干燥.lc/ms[m h]

＝446.2和448.2.1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ8.12-7.94(m,1h),7.95-7.87(m,1h),7.71-7.67(m,1h),7.39-7.34(m,1h),6.76-6.63(m,1h),4.27-4.12(m,1h),3.36-3.06(m,3h),2.95-2.70(m,1h),1.97-1.70(m,5h),1.43-1.09(m,9h)。
[0503]
实施例16
[0504]
将(s)-2-((4-氨基-7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.71g，1.59mmol)、3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1h-吡唑
ptfe w/gmf滤片过滤。将粗制的物质经制备型lc/ms用以下条件纯化。柱:xbridge c18,200mm x 19mm,5μm颗粒；流动相a:5:95乙腈:水(含有10mm乙酸铵)；流动相b:95:5乙腈:水(含有10mm乙酸铵)；梯度:0-分钟保持在4％b，4-44％b 20分钟，然后100％b保持4分钟；流速:20ml/min；柱温:25℃。级分收集由ms信号触发。合并含有所需产物的级分，并通过离心蒸发干燥得到(s)-1-(2-((4-氨基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)甲基)吡咯烷-1-基)丙-1-酮(8.3mg，35％收率)。
[0511]
实施例19.3-((4-氨基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸甲酯
[0512][0513]
19a.3-(2-((4-氨基-7-溴喹啉-3-基)氨基)-2-氧代乙基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
[0514][0515]
向用氮气惰性气氛吹扫和保持的250-ml圆底烧瓶中，加入在dcm(120ml)中的7-溴喹啉-3,4-二胺(6g，25.2mmol，1当量)、diea(9.8g，0.08mmol，3当量)、2-[1-[(叔丁氧基)羰基]吡咯烷-3-基]乙酸(11.6g，0.05mmol，2.01当量)和hatu(14.4g，0.04mmol，1.5当量)。将所得溶液在室温搅拌2小时。将所得混合物浓缩。这产生12g(105.97％)3-[[(4-氨基-7-溴喹啉-3-基)氨基甲酰基]甲基]吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯，为黄色粗油。
[0516]
19b.3-((7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
[0517][0518]
向500-ml圆底烧瓶中加入在etoh(120ml)中的3-[[(4-氨基-7-溴喹啉-3-基)氨基甲酰基]甲基]吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(6g，13.4mmol，1当量)和naoh(5.3g，133.53mmol，10当量)。将所得溶液在80℃搅拌30分钟。将所得混合物浓缩。将将该溶液的ph值用hcl(12mol/l)调节至7。将所得溶液用2x200 ml的二氯甲烷萃取，将有机层用1x200 ml的盐水洗涤。合并有机层。将残余物应用至硅胶柱上，采用二氯甲烷/甲醇(30:1)。这产生5.5g(96％)的3-([7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基]甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯，为黄色固体。
[0519]
19c.3-((4-氨基-7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
[0520][0521]
向250-ml圆底烧瓶中加入在dcm(100ml)中的3-([7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基]甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(5g，11.59mmol，1当量)和mcpba(4.0g，23.18mmol，2.00当量)。将所得溶液在室温搅拌2小时。将所得混合物浓缩。将残余物应用至硅胶柱上，采用二氯甲烷/甲醇(10:1)。这产生3.6g(69％)的7-溴-2-([1-[(叔丁氧基)羰基]吡咯烷-3-基]甲基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-5-鎓-5-醇盐，为黄色固体。
[0522]
向250-ml圆底烧瓶中加入在dcm(20ml)中的7-溴-2-([1-[(叔丁氧基)羰基]吡咯烷-3-基]甲基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-5-鎓-5-醇盐(2g，4.47mmol，1当量)、氢氧化铵(10ml)和tscl(1.7g，8.92mmol，1.99当量)。将所得溶液在室温搅拌2小时。将所得混合物浓缩。将残余物应用至硅胶柱上，采用二氯甲烷/甲醇(20:1)。这产生1.6g(80.18％)的3-([4-氨基-7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基]甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯，为黄色固体。
[0523]
19d.3-((4-氨基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
[0524][0525]
向用氮气惰性气氛吹扫和保持的100-ml圆底烧瓶中，加入在二噁烷(30ml)和h2o(5ml)中的3-([4-氨基-7-溴-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基]甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(1.5g，3.36mmol，1当量)、cs2co3(3.3g，10.08mmol，3当量)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1h-吡唑(1.3g，6.72mmol，2当量)和pd(dppf)cl
2-ch2cl2(0.5g，0.61mmol，0.18当量)。将所得溶液在100℃搅拌16小时。将所得混合物浓缩。将残余物应用至硅胶柱上，采用二氯甲烷/甲醇(10:1)。这产生870mg(60％)的3-[[4-氨基-7-(1h-吡唑-5-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基]甲基]吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯，为黄色固体
[0526]
19e.7-(1h-吡唑-3-基)-2-(吡咯烷-3-基甲基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺
[0527][0528]
向50-ml圆底烧瓶中加入在氯化氢的二噁烷溶液(3ml，4n)中的3-[[4-氨基-7-(1h-吡唑-5-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基]甲基]吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(100mg，0.23mmol，1当量)。将所得溶液在室温搅拌2小时。将所得混合物浓缩。将粗制的产物使用以
下条件经反相制备性hplc纯化:柱:xselect csh obd柱30*150mm 5um n；流动相a:水(0.05％tfa)，流动相b:acn；流速:60ml/min；梯度:5％b至15％b，7分钟内；254/210nm；rt:6.95分钟，这产生20mg(26.01％)的7-(1h-吡唑-5-基)-2-[(吡咯烷-3-基)甲基]-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺，为白色固体。lc/ms[m h]

＝334.2。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ:8.06-8.00(m,2h),8.10(s,1h),7.80-7.66(m,2h),6.76(s,1h),3.60-3.30(m,1h),3.25-3.15(m,1h),3.15-3.00(m,3h),2.90-2.70(m,2h),2.20-2.05(m,1h),and1.80-1.65(m,1h)。
[0529]
实施例19
[0530]
向25-ml圆底烧瓶中加入7-(1h-吡唑-5-基)-2-[(吡咯烷-3-基)甲基]-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺(40mg，0.12mmol，1当量)、dmf(2ml)、碳酸二甲酯(21.6mg，0.24mmol，2.00当量)、k2co3(49.7mg，0.36mmol，3当量)。将所得溶液在100摄氏度搅拌16小时。将所得混合物浓缩。将粗制的产物使用以下条件反相制备性hplc纯化:柱：xbridge prep c18obd柱,5um,19*150mm；流动相：水(10mmol/l nh4hco3)和acn(13％相b至36％，7分钟内)；检测器：uv。得到12mg产物。这产生12mg(26％)的3-[[4-氨基-7-(1h-吡唑-5-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基]甲基]吡咯烷-1-甲酸甲酯，为白色固体。
[0531]
实施例20.1-(3-((4-氨基-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)甲基)吡咯烷-1-基)乙-1-酮
[0532][0533]
向50-ml圆底烧瓶中加入在dcm(5ml)中的7-(1h-吡唑-5-基)-2-[(吡咯烷-3-基)甲基]-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺(100mg，0.30mmol，1当量)、tea(151.8mg，1.50mmol，5当量)和乙酸乙酰酯(61.2mg，0.60mmol，2当量)。将所得溶液在室温搅拌2小时。将所得混合物浓缩，并加入meoh(20ml)。将所得溶液在80℃搅拌16小时。将生成的混合物浓缩，并将粗制的产物使用以下条件反相制备性hplc纯化:柱:xbridge prep c18 obd柱,5um,19*150mm；流动相a:水(10mmol/l nh4hco3)，流动相b:acn；流速:25ml/min；梯度:5％b至40％b，7.5分钟内；254/210nm；rt:6.6分钟。这产生20mg(18％)的1-(3-[[4-氨基-7-(1h-吡唑-5-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基]甲基]吡咯烷-1-基)乙-1-酮，为淡黄色固体
[0534]
实施例21.2-((1-乙基吡咯烷-3-基)甲基)-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺
[0535][0536]
向50-ml圆底烧瓶中加入在meoh(3ml)中的7-(1h-吡唑-5-基)-2-[(吡咯烷-3-基)甲基]-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺(19e,100mg，0.30mmol，1当量)、acoh(0.1ml)、乙醛
(26.4mg，0.60mmol，2.00当量)和nabh3cn(37.7mg，0.60mmol，2.00当量)。将所得溶液在室温搅拌2小时。将生成的混合物浓缩，并将粗制的产物使用以下条件反相制备性hplc纯化:柱:xbridge beh130 prep c18 obd柱19*150mm 5um 13nm；流动相a:水(10mmol/l nh4hco3)，流动相b:acn；流速:25ml/min；梯度:30％b至60％b，8分钟内；254/210nm；rt:6.95分钟。这产生29mg(27％)的2-[(1-乙基吡咯烷-3-基)甲基]-7-(1h-吡唑-3-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺，为米白色固体。
[0537]
实施例22.2-((1-乙基吡咯烷-3-基)甲基)-7-(1h-吡唑-1-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺
[0538][0539]
向25-ml圆底烧瓶中加入7-(1h-吡唑-1-基)-2-[(吡咯烷-3-基)甲基]-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺(50mg，0.15mmol，1当量)、meoh(2ml),acoh(0.2ml)、乙醛(9.9mg，0.22mmol，1.50当量)、nabh3cn(14.1mg，0.22mmol，1.5当量)。将所得溶液在室温搅拌2小时。将生成的混合物浓缩，并将粗产物使用以下条件反相制备性hplc纯化:柱：xbridge prep c18obd柱,5um,19*150mm；流动相：水(10mmol/l nh4hco3)和acn(20％相b至22％，10分钟内)；检测器：uv。这产生20mg(37％)的2-[(1-乙基吡咯烷-3-基)甲基]-7-(1h-吡唑-1-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺，为白色固体。
[0540]
实施例23.3-((4-氨基-7-(1h-吡唑-1-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
[0541][0542]
向25-ml圆底烧瓶中加入7-(1h-吡唑-1-基)-2-[(吡咯烷-3-基)甲基]-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺(150mg，0.45mmol，1当量)、dcm(4ml)、氯甲酸甲酯(methyl carbonochloridate)(85.0mg，0.90mmol，2.00当量)、tea(136.6mg，1.35mmol，3当量)。将所得溶液在室温搅拌2小时。将所得混合物浓缩。然后将粗制的产物加入meoh(2ml)、naoh(13.3mg，0.33mmol，2.99当量)。将所得溶液在80℃搅拌2小时。将所得混合物浓缩。将粗制的产物使用以下条件反相制备性hplc纯化:柱:xbridge prep c18 obd柱19*150mm 5um；流动相a:水(10mmol/l nh4hco3 0.1％nh3.h2o)，流动相b:acn；流速:25ml/min；梯度:15％b至45％b，7.5分钟内；254/210nm；rt:6.08分钟。这产生20mg(46％)的3-[[4-氨基-7-(1h-吡唑-1-基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-基]甲基]吡咯烷-1-甲酸甲酯，为白色固体。
[0543]
以适当的起始材料开始，以与实施例3的方法中所述的类似方式制备了实施例24至40；实施例41至50是以与实施例4的方法中所述的类似方式制备的；实施例51至59是以与
实施例5的方法中所述的类似方式制备的；实施例60至70是以与实施例8的方法中所述的类似方式制备的；实施例71至76是以与实施例9的方法中所述的类似方式制备的；且实施例77是以与实施例11的方法中所述的类似方式制备的，实施例78至85是以与实施例15的方法中所述的类似方式制备的，实施例86至8是以与实施例15的方法中所述的类似方式制备的。
[0544]
使用一种或多种上述方法测定了化合物的生物学数据。除非另有说明，测量下列化合物的tlr7激动剂ec
50
和tlr8激动剂ec
50
的值＞100μm。
[0545]
[0546]
[0547]
[0548]
[0549]
[0550]
[0551]
[0552]
[0553]
[0554]
[0555]
[0556]
[0557]
[0558]
[0559][0560]
已描述许多本发明的实施方案。尽管如此，应理解可在不背离本发明的主旨及范围的情况下进行各种修改。相应地，其他实施方案在所附权利要求范围的范围内。