mll1抑制剂及抗癌剂
技术领域
1.本发明关于用于抑制混合系白血病1的化合物、组合物及方法(mll1)。
背景技术：
2.染色质是真核细胞核中的遗传信息的主要储存库，其包括由一组小型基本组蛋白和非组蛋白染色体蛋白将dna压缩而形成的核小体结构。组蛋白可以通过加入乙酰基、甲基或磷酸基团进行酶修饰。组蛋白-赖氨酸n-甲基转移酶2(kmt2)家族蛋白组蛋白h3尾部(h3k4)的甲基化赖氨酸4在基因组的重要调控区域，从而通过调节染色质结构和dna可及性来传递关键功能。
3.kmt2家族突变是人类癌症中最常见的改变(kandoth等人,nature[自然]502:333-339(2013))。最突出的实施例是混合型白血病(mll或mll-r)，它呈现出aml(急性髓性白血病)和all(急性淋巴母细胞白血病)的异质特征组。这种类型的疾病的标志是mll1基因(也称为kmt2a、mll、all-1和hrx)的染色体重排(krivtsov等人,nature rev.cancer[自然评论:癌症]7:823-833(2007)；liedtke等人,blood[血液]113:6061-6068(2009)。
[0004]
在mll1重排的白血病中，mll1基因的相互易位导致5'-端mll1与融合伴侣基因的3'-端的框内融合，其可以异常地招募其他因子，如dot1l。mll-r白血病中mll1异常的共同特征是保存一个野生型mll1等位基因。据报导，mll1-af9诱导的白血病发生需要野生型mll1等位基因的共表达，因为mll1-af9鼠白血病细胞中mll1的基因缺失降低克隆形成潜力和白血病进展。mll1区域的突变在很多种实体瘤中也普遍存在，包括例如大肠癌、肺癌、膀胱癌、子宫内膜癌和乳癌(ding等人,nature[自然]455:1069-1075(2008)；wood等人,science[科学]318:1108-1113(2007)；giu等人,genetics[遗传学]43:875-878(2011)；kandoth等人,nature[自然]497:67-73(2013))。
[0005]
mll1是mll-r aml、all和其他癌症的有希望的治疗靶标；并且对mll1选择性抑制剂有需求。
技术实现要素：
[0006]
本发明提供了抑制mll1的新化合物；和用于治疗或预防由mll1介导的疾病或病症的组合物和方法。
[0007]
在一个方面，本发明提供了式(i)的化合物：
[0008]
[0009]
或其对映异构体、对映异构体混合物或药学上可接受的盐；
[0010]
其中w选自：
[0011][0012]
a是n或cr9，其中r9是氢或卤素；
[0013]
r、r1和r2独立地是h或c
1-4
烷基；
[0014]
r3是氢或选自由以下组成的组：
[0015]
(i)-c
1-6
烷基、-卤代c
1-6
烷基、-羟基c
1-6
烷基、-c
1-6
烷氧基c
1-6
烷基、-c
3-8
环烷氧基(c
1-6
烷基)、氰基、-氰基c
1-6
烷基、-c
1-6
烷硫基c
1-6
烷基、-c
2-6
烯基、-卤代c
2-6
烯基、-c
2-6
炔基、-c
1-4
烷基-s-c
1-4
烷基、-c
1-4
烷基so2c
1-4
烷基、-so2(c
1-4
烷基)或-c(c
1-4
烷基)＝n-o(c
1-4
烷基)；
[0016]
(ii)-c
1-4
烷基羰基、-(crarb)
p-c(＝o)-or
10a
或-c(＝o)-(crarb)
qr11
；
[0017]
其中r
11
是-c
3-7
环烷基、5-6元杂环基或5-6元杂芳基，所述-c
3-7
环烷基、5-6元杂环基或5-6元杂芳基各自独立地未被取代或被-c
1-6
烷基或-c
1-6
烷氧基取代；并且所述5-6元杂环基或5-6元杂芳基独立地包含1-3个选自氮、氧和硫的杂原子；
[0018]
(iii)-(crarb)
r-c(＝o)-nr
12r13
、-(crarb)
s-nr
12r13
、-(crarb)
1-4-o-(crarb)
1-4-or
10a
或-(crarb)
1-4-o-(crarb)
1-4-c(＝o)-nr
12r13
；
[0019]
其中r
12
是氢或-c
1-6
烷基；
[0020]r13
是氢、-c
1-6
烷基、-c
1-6
烷氧基c
1-6
烷基、-氰基c
1-6
烷基；-c
0-4
烷基so2r
10b
，其中r
10b
是-c
1-6
烷基或苯基；c
3-10
单环或双环环烷基c
0-6
烷基、苯基、5-10元单环或双环杂环或5-9元杂芳基c
0-6
烷基；
[0021]
所述5-10元单环或双环杂环或5-9元杂芳基基团独立地包含1-4个选自氮、氧和硫的杂原子；并且
[0022]
所述c
3-10
单环或双环环烷基、苯基、5-10元单环或双环杂环或5-9元杂芳基基团独立地未被取代或被以下取代：1-2个-c
1-4
烷基、-羟基c
1-6
烷基、-c
1-4
烷氧基、卤素、羟基、苯基或-s(c
1-4
烷基)；
[0023]
或r
12
和r
13
一起形成5-10元单环或双环杂环，其包含1-4个选自氮、氧和硫的杂原子；并且未被取代或被以下取代：-c
1-4
烷基、羟基、氰基、-氰基c
1-6
烷基、-so2或-c
2-4
烯基羰基；
[0024]
(v)5-6元杂环基c
0-6
烷基或5-6元杂环基(卤代c
1-4
烷基)，其中每个所述杂环基基团未被取代或被氧代(oxo)取代；并且其中每个所述杂环基基团包含1-3个选自氮、氧和硫的杂原子；和
[0025]
(vi)苯基、5-9元杂芳基c
0-6
烷基或5-9元杂芳基(卤代c
1-4
烷基)，其中每个所述苯基或杂芳基基团独立地未被取代或被以下取代：-c
1-4
烷基、-卤代c
1-4
烷基、-羟基c
1-4
烷基、-c
1-4
烷氧基、-卤代c
1-4
烷氧基、卤素、羟基、氰基、氧(oxido)、氨基、-c
1-4
烷基氨基、-c
1-4
二烷基氨基、-氨基羰基c
0-6
烷基、-c
1-4
烷基氨基羰基c
0-6
烷基、-二c
1-4
烷基氨基羰基c
0-6
烷基或c3-7
环烷基；
[0026]
其中每个所述杂芳基基团包含1-4个选自氮、氧和硫的杂原子；
[0027]
r4、r5、r6和r7独立地是氢、卤素、-c
1-4
烷基、-卤代c
1-6
烷基、-羟基c
1-6
烷基、氰基、-氰基c
1-6
烷基、-c
2-6
烯基、-c
2-6
炔基、-c
1-6
烷硫基、-(crarb)
1-4-nr
14r15
、-(crarb)
1-4
nr
14-c(o)-or
15
、-(crarb)
1-4-or
16
、c
3-8
环烷基、苯基或包含1-3个选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元杂芳基；其中所述c
3-8
环烷基、苯基或5-6元杂芳基独立地被1-2个r
17
取代；
[0028]
或者，r4和r5、r5和r6以及r6和r7与它们所连接的苯环一起形成包含1-3个选自氮、氧和硫的杂原子的9-10元苯并稠合碳环或苯并稠合杂环；其中所述苯并稠合碳环或苯并稠合杂环独立地未被取代或被1-2个卤素或c
1-4
烷基取代；
[0029]
r8是氢、-c
1-4
烷基或-c
1-4
烷氧基；
[0030]
ra、rb、r
c r
10a
和r
14
独立地是氢或-c
1-4
烷基；
[0031]r15
是氢、-c
1-4
烷基、-卤素c
1-6
烷基或-c
3-6
环烷基；
[0032]
或者，r
14
和r
15
与-nr
14r15
部分中的n一起形成4-10元单环或双环杂环，其包含1-3个选自氮、氧和硫的杂原子；其中所述4-10元单环或双环杂环未被取代或被1-2个卤素或-c
1-4
烷基取代；
[0033]r16
是氢、-c
1-4
烷基、-卤素c
1-6
烷基、-c
3-6
环烷基、苯基、5-6元杂环基或5-6元杂芳基；其中所述5-6元杂环基或5-6元杂芳基独立地包含1-3个选自氮、氧和硫的杂原子；
[0034]r17
是-c
1-4
烷基、卤素或-c
3-6
环烷基；或两个r
20
一起形成5-6元环；
[0035]
m是1、2、3或4；并且
[0036]
p、q、r和s独立地是0、1、2、3或4。
[0037]
在另一方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的式(i)或其子式的化合物或其药学上可接受的盐；以及一种或多种药学上可接受的载体。
[0038]
在又另一方面，本发明提供了一种组合，特别是药物组合，所述组合包含治疗有效量的式(i)或其子式的化合物或其药学上可接受的盐；以及一种或多种治疗活性剂。
[0039]
本发明的化合物，单独或与一种或多种治疗活性剂组合，可用于治疗或预防由mll1介导的疾病或病症；并且更特别地，其中所述疾病或病症的特征在于mll1的过表现或不希望的上调。
具体实施方式
[0040]
本发明提供了用于治疗或预防由mll1介导的疾病或病症的组合物及方法。
[0041]
定义
[0042]
出于解释本说明书的目的，将应用以下定义，并且在适宜的情况下，以单数形式使用的术语还包括复数形式，并且反之亦然。
[0043]
如本文所用，术语
“‑c1-6
烷基”是指仅由碳和氢原子组成的直链或支链烃链基团，该基团没有不饱和度，具有从一至六个碳原子，并且通过单键连接到分子的其余部分。术语“c
1-4
烷基”应相应地解释。c
1-6
烷基的实施例包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、1-甲基乙基(异丙基)、正丁基、正戊基和1,1-二甲基乙基(叔丁基)。
[0044]
如本文所用，术语
“‑c2-6
烯基”是指仅由碳和氢原子组成的直链或支链烃链基团，该基团含有至少一个双键，具有两个至六个碳原子，通过单键连接到分子的其余部分。术语
“c2-4
烯基”应相应地解释。c
2-6
烯基的实施例包括但不限于乙烯基、丙-1-烯基、丁-1-烯基、戊-1-烯基、戊-4-烯基和戊-1,4-二烯基。
[0045]
如本文所使用的，术语
“‑c2-6
炔基”是指仅由碳和氢原子组成的直链或支链烃链基团，该基团包含至少一个三键，具有两个至六个碳原子，并且通过单键连接到分子的其余部分。术语“c
2-4
炔基”应相应地解释。c
2-6
炔基的实施例包括但不限于乙炔基、丙-1-炔基、丁-1-炔基、戊-1-炔基、戊-4-炔基和戊-1,4-二炔基。
[0046]
如本文所用，术语
“‑c1-6
烷氧基”是指具有式-ora的基团，其中ra是如以上通常所定义的c
1-6
烷基基团。c
1-6
烷氧基的实施例包括但不限于：甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、戊氧基和己氧基。
[0047]
如本文所用，术语
“‑c1-6
烷氧基c
1-6
烷基”是指具有式-r
a-o-ra的基团，其中ra各自独立地是如以上所定义的c
1-6
烷基基团。氧原子可以与任一烷基基团中的任何碳原子键合。c
1-6
烷氧基c
1-6
烷基的实施例包括但不限于：甲氧基-甲基、甲氧基-乙基、乙氧基-乙基、1-乙氧基-丙基和2-甲氧基-丁基。
[0048]
如本文所使用的，术语
“‑c1-4
烷基羰基”是指式-c(＝o)-ra的基团，其中ra是如以上所定义的c
1-4
烷基基团。
[0049]
本文所用，术语
“‑c1-6
烷硫基c
1-6
烷基”是指具有式-r
a-s-ra的基团，其中ra各自独立地是如以上所定义的c
1-4
烷基基团。
[0050]
如本文所用，术语
“‑
羟基c
1-6
烷基”是指如以上所定义的c
1-6
烷基基团，其中c
1-6
烷基基团的一个氢原子被oh替换。羟基c
1-6
烷基的实施例包括但不限于：乙-1-醇基、2-甲基丙-1-醇基、羟甲基、2-羟乙基、2-羟丙基、3-羟丙基、和5-羟戊基。
[0051]
如本文所用，术语
“‑
氨基羰基c
0-6
烷基”是指具有下式的基团：-r
a-c(＝o)-nh2，其中ra是如上所定义的单键或c
1-6
烷基基团。
[0052]
如本文所用，术语
“‑c1-4
烷基氨基羰基c
0-6
烷基”是指具有下式的基团：-r
a1-c(＝o)-nh-r
a2
，其中r
a1
是如上所定义的单键或c
1-6
烷基基团；并且r
a2
是如上所定义的c
1-6
烷基基团。
[0053]
如本文所用，术语
“‑
二c
1-4
烷基氨基羰基c
0-6
烷基”是指具有式-r
a1-c(＝o)-n(r
a2
)-r
a2
的基团，其中r
a1
是单键或如上所定义的c
1-6
烷基基团；并且每个r
a2
是如上所定义的c
1-4
烷基基团，并且可以相同或不同。
[0054]
如本文所用，术语“c
3-10
单环或双环环烷基c
0-6
烷基”是指仅由碳和氢原子组成的稳定的单环或双环饱和烃基团，该基团具有三至十个碳原子，并且通过单键(即c
3-8
环烷基)或通过如以上所定义的c
1-6
烷基基团连接至分子的其余部分。术语“c
3-7
环烷基”和“c
3-6
环烷基”应相应地进行解释。实施例包括例如环丙基、环丙基-甲基、环丁基、环丁基-乙基、环戊基、环戊基-丙基、环己基、环庚基和环辛基。
[0055]
如本文所用，术语
“‑c3-8
环烷氧基c
1-6
烷基”是指具有式-r
a-o-rb的基团，其中ra独立地是如上所定义的c
1-6
烷基基团，并且rb是如上所定义的c
3-8
环烷基。c
3-8
环烷氧基c
1-6
烷基的实施例包括但不限于环丙氧基甲基和环丁氧基甲基。
[0056]“卤素”是指溴、氯、氟或碘。
[0057]
如本文所用，术语
“‑
卤代c
1-6
烷基”是指被一个或多个如以上所定义的卤素基团取代的如以上所定义的c
1-6
烷基基团。卤代c
1-6
烷基的实施例包括但不限于：三氟甲基、二氟甲
基、氟甲基、三氯甲基、2,2,2-三氟乙基、1,3-二溴丙-2-基、3-溴-2-氟丙基、和1,4,4-三氟丁-2-基。术语“卤代c
1-4
烷基”应相应地解释。
[0058]
如本文所使用的，术语
“‑
氰基c
1-6
烷基”是指具有式-r
a-cn的基团，其中ra是如以上所定义的c
1-4
烷基基团。
[0059]
如本文所用，术语“卤代c
2-6
烯基”是指被一个或多个如以上所定义的卤素基团取代的如以上所定义的c
2-6
烯基基团。
[0060]
如本文所用，术语“杂环基”或“杂环的”是指包含1、2或3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的稳定的4-7元非芳族单环基团。杂环基基团可以经由碳原子或杂原子键合。术语“5-6元杂环基”应相应地进行解释。杂环基的实施例包括但不限于：氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、吡咯啉基、吡咯啶基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、哌啶基、哌嗪基、四氢哌喃基或吗啉基或过氢氮基。
[0061]
如本文所用，术语“杂环基c
0-6
烷基”是指如以上所定义的杂环，该杂环通过单键或通过如以上所定义的c
1-6
烷基基团连接至分子的其余部分。
[0062]
如本文所用，术语“杂芳基”是指包含1、2、3或4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-9元芳族单环或稠合环基团。杂芳基基团可以经由碳原子或杂原子键合。术语“5-6元杂芳基”应相应地进行解释。5-6元单环杂芳基的实施例包括但不限于呋喃基、吡咯基、噻吩基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、异噻唑基、恶恶唑基、异恶恶唑基、三唑基、四唑基、吡嗪基、哒嗪基、嘧啶基或吡啶基。稠合杂芳基的实施例包括但不限于9元杂芳基，诸如苯并呋喃基；2,3-二氢苯并呋喃基、1,3-二氢异苯并呋喃基；苯并[d][1,3]二氧杂环戊二烯-5-基(benzo[d][1,3]dioxol-5-yl)；咪唑并[1,2-a]吡啶基；吡唑并[1,5-a]吡啶基；1h-吲唑基和1h-苯并[d]-咪唑基。
[0063]
如本文所用，术语“杂芳基c
0-6
烷基”是指如以上所定义的杂芳基环，该杂芳基环通过单键或通过如以上所定义的c
1-6
烷基基团连接至分子的其余部分。
[0064]
如本文所用，术语“杂芳基(卤代c
1-4
烷基)”是指如以上所定义的杂芳基环，该杂芳基环通过如以上所定义的卤素c
1-4
烷基连接至分子的其余部分。杂芳基(卤代c
1-4
烷基)的说明性实施例是氟(吡啶-2-基)甲基。
[0065]
如本文所用，术语“ic
50”是指产生50％抑制的抑制剂或调节剂的摩尔浓度。
[0066]
如本文所用，术语“被保护的衍生物”是指抑制剂的衍生物，其中一个或多个反应性位点被保护基封闭。被保护的衍生物可用于制备抑制剂，或者它们自身可以具有抑制剂的活性。被保护的基团的实施例包括但不限于乙酰基、四氢哌喃、甲氧基甲基醚、β-甲氧基乙氧基甲基醚、对甲氧基苄基、甲硫基甲基醚、新戊酰、硅基醚、苄氧羰基、苄基、叔丁氧羰基、对甲氧基苯基、9-氟基甲基氧基羰基、缩醛、缩酮、缩羰酯(acylal)、二噻烷、甲基酯、苄基酯、叔丁基酯和硅gui基酯。合适的保护基团的全面清单参见t.w.greene,protecting groups in organic synthesis[有机合成中的保护基]，第3版，约翰威利父子出版社(john wiley&sons,inc.)1999。
[0067]
如本文所用，术语“受试者”是指哺乳动物、灵长类动物(例如，人(男性或女性))、狗、兔、豚鼠、猪、大鼠和小鼠。在某些实施方式中，受试者为灵长类。在其他的实施方式中，受试者是人。
[0068]
如本文所用，术语“抑制(inhibit、inhibition或inhibiting)”是指减少或抑制给
定的病症、症状或障碍、或疾病，或在生物活性或过程中的基线活性的显著降低。
[0069]
如本文所用，术语任何疾病或障碍的“治疗(treat、treating或treatment)”是指缓解或改善疾病或障碍(即，减慢或阻止疾病或其至少一种临床症状的发展)；或缓解或改善与该疾病或障碍相关的至少一种物理参数或生物标记，包括患者可能无法辨别的那些物理参数或生物标记。
[0070]
如本文所用，术语任何疾病或障碍的“预防(prevent、preventing或prevention)”是指疾病或障碍的预防性治疗；或延迟疾病或障碍的发作或进展
[0071]
如本文所用，如果受试者将在生物学上、在医学上或在生活品质上从治疗中获益，则这样的受试者是“需要”这种治疗的。
[0072]
如本文所用，术语本发明的化合物的“治疗有效量”是指将引起受试者的生物或医学响应(例如，酶或蛋白活性的减小或抑制，或改善症状、缓解病症、减慢或延迟疾病进展或预防疾病等)的本发明的化合物的量。
[0073]
如本文所用，术语“抗癌剂”或抗肿瘤剂，是指用于治疗或控制癌细胞生长的治疗剂。
[0074]
如本文所用，术语“抗炎剂”是指减少体内炎症(发红、肿胀和/或疼痛)的治疗剂。抗炎剂阻断了身体中导致炎症的某些物质。
[0075]
如本文所用，术语“药物组合物”是指适合于口服或肠胃外施用的本发明化合物、或其药学上可接受的盐，以及至少一种药学上可接受的载体。
[0076]
如本文使用的，术语“药学上可接受的载体”是指可用于制备或使用药物组合物的物质，并且包括例如适合的稀释剂、溶剂、分散介质、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂、等渗剂、缓冲剂、乳化剂、吸收延迟剂、盐、药物稳定剂、黏合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、润湿剂、甜味剂、调味剂、染料及其组合，如本领域技术人员所知的(参见，例如，remington the science and practice of pharmacy[雷明顿：药物科学与实践]，第22版，pharmaceutical press[药物出版社]，2013，第1049-1070页)。
[0077]
如本文所用，术语“一个/种(a，an)”，“该(the)”以及在本发明的上下文中使用的类似术语(尤其是在权利要求的上下文中)应被解释为涵盖单数和复数两者，除非本文中另有指示或与上下文明显相矛盾。
[0078]
较佳的实施方式的说明
[0079]
本发明提供了抑制mll1的新化合物；和用于治疗或预防由mll1介导的病症的组合物和方法。
[0080]
本文描述了本发明的各种列举的实施方式。每个实施方式中指定的特征可以与其他指定特征组合以提供本发明的另外实施方式。
[0081]
实施方式1.一种式(i)的化合物或其对映异构体、对映异构体混合物或药学上可接受的盐；如上所述。
[0082]
实施方式2.根据实施方式1所述的化合物，其中所述化合物是式(ii)：
[0083][0084]
或其对映异构体、对映异构体混合物或药学上可接受的盐。
[0085]
实施方式3.根据实施方式1所述的化合物，其中所述化合物是式(iii)：
[0086][0087]
或其对映异构体、对映异构体混合物或药学上可接受的盐。
[0088]
实施方式4.根据实施方式1所述的化合物，其中所述化合物是式(iv)：
[0089][0090]
或其对映异构体、对映异构体混合物或药学上可接受的盐。
[0091]
实施方式5.根据实施方式1所述的化合物，其中所述化合物是式(v)：
[0092][0093]
或其对映异构体、对映异构体混合物或药学上可接受的盐。
[0094]
实施方式6.根据实施方式1-5中任一项所述的化合物或其对映异构体、对映异构体混合物或药学上可接受的盐；
[0095]
其中r3是氢、-羟基c
1-6
烷基、-c
1-6
烷氧基c
1-6
烷基、-c
1-4
烷基-s-c
1-4
烷基、-c(＝o)-or
10a
、-c(＝o)-nr
12r13
、-(crarb)-nr
12r13
、-(crarb)-o-(crarb)
2-o-c
1-6
烷基或5-9元杂芳基c
0-6
烷基，其中所述杂芳基基团未被取代或被-c
1-4
烷基取代；
[0096]
ra、rb、r
10a
和r
12
独立地是氢或c
1-4
烷基；
[0097]r13
是氢、-c
1-6
烷基、-c
1-6
烷氧基c
1-6
烷基、-so
2-(c
1-4
烷基)或-环丙基；并且
[0098]
m是1、2、3或4。
[0099]
实施方式7.根据实施方式1-5中任一项所述的化合物或其对映异构体、对映异构体混合物或药学上可接受的盐；
[0100]
其中r3是未被取代的或被-c
1-4
烷基取代的-c
1-6
烷氧基c
1-6
烷基、-c(＝o)-or
10a
、-c(＝o)-nr
12r13
、三唑基或噻二唑基；
[0101]r10a
和r
12
独立地是氢或c
1-4
烷基；
[0102]r13
是氢、-c
1-6
烷氧基c
1-6
烷基、-so
2-(c
1-4
烷基)或-环丙基；并且
[0103]
m是1、2或3。
[0104]
实施方式8.根据实施方式1-7中任一项所述的化合物或其对映异构体、对映异构体混合物或药学上可接受的盐；其中：
[0105]
r4和r5是卤素；并且
[0106]
r6和r7是氢。
[0107]
实施方式9.根据实施方式1-7中任一项所述的化合物或其对映异构体、对映异构体混合物或药学上可接受的盐；其中：
[0108]
r4是卤素或-c
1-4
烷基；
[0109]
r6是卤素；并且
[0110]
r5和r7是氢。
[0111]
实施方式10.根据实施方式1-7中任一项所述的化合物或其对映异构体、对映异构体混合物或药学上可接受的盐；其中r4和r5与它们所连接的苯环一起形成9-10元苯并稠合碳环；其中所述苯并稠合碳环未被取代或被卤素取代；并且
[0112]
r6和r7是氢。
[0113]
实施方式11.根据实施方式1-7中任一项所述的化合物或其对映异构体、对映异构体混合物或药学上可接受的盐，其中：
[0114]
r4和r7是氢；并且
[0115]
r5和r6与它们所连接的苯环一起形成9-10元苯并稠合碳环。
[0116]
实施方式12.根据实施方式1-7中任一项所述的化合物或其对映异构体、对映异构体混合物或药学上可接受的盐，其中r4、r5、r6和r7是氢；或其中r4、r5、r6和r7之一是卤素，并且其他的是氢。
[0117]
实施方式13.根据实施方式1-12中任一项所述的化合物，其中所述化合物是(r)构型、(s)构型或其混合物。
[0118]
实施方式14.根据实施方式1所述的化合物，其中所述化合物选自表1中的化合物或其药学上可接受的盐。
[0119]
实施方式15.根据实施方式1所述的化合物，其中所述化合物选自：
[0120]
(r)-9-(6-((4-氨基-5-甲氧基戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-胺；
[0121]
(s)-9-((2-(2-氨基-3-甲氧基丙氧基)萘-1-基)甲基)-9h-嘌呤-6-胺；
[0122]
(r)-9-((2-((4-氨基-5-甲氧基戊基)氧基)-6-溴萘-1-基)甲基)-9h-嘌呤-6-胺；
[0123]
(r)-2-氨基-5-(2-((6-氨基-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊酸；
[0124]
乙基(r)-2-氨基-5-(2-((6-氨基-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊酸酯；
[0125]
乙基(2r)-2-氨基-5-(2-((6-氨基-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)己酸酯；
[0126]
甲基2-氨基-5-(2-((4-氨基-7-氯-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)甲基)-3,5-二氯苯氧基)戊酸酯；
[0127]
乙基(r)-2-氨基-5-(2-((6-氨基-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,5-二氯苯氧基)戊酸酯；
[0128]
甲基(r)-2-氨基-5-(2-((6-氨基-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊酸酯；
[0129]
甲基(r)-2-氨基-5-(2-((4-氨基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊酸酯；
[0130]
(r)-2-氨基-5-(2-((4-氨基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-n-环丙基戊酰胺；
[0131]
(r)-2-氨基-5-(2-((6-氨基-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊酰胺；
[0132]
(r)-2-氨基-5-(2-((6-氨基-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-n-(2-甲氧基乙基)戊酰胺；
[0133]
(r)-2-氨基-5-(2-((6-氨基-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-n-环丙基戊酰胺；
[0134]
(r)-2-氨基-5-(2-((6-氨基-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-n-(甲基磺酰基)戊酰胺；
[0135]
(r)-9-(6-(4-氨基-4-(1h-1,2,4-三唑-3-基)丁氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-胺；
[0136]
(r)-9-(6-((4-氨基-5-(1h-吡唑-1-基)戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-胺；
[0137]
(r)-9-(6-(4-氨基-4-(5-甲基-1,3,4-噻二唑-2-基)丁氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-胺；
[0138]
或其药学上可接受的盐。
[0139]
实施方式16.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据实施方式1-15中任一项所述的化合物、以及一种或多种药学上可接受的载体。
[0140]
实施方式17.一种组合，所述组合包含根据实施方式1-15中任一项所述的化合物、以及一种或多种另外的治疗活性剂。
[0141]
实施方式18.根据实施方式17所述的组合，其中所述一种或多种另外的治疗活性剂是抗癌剂、镇痛药、抗炎剂或其组合。
[0142]
实施方式19.根据实施方式1-15中任一项所述的化合物，任选地，与第二治疗剂组合，用于治疗由混合系白血病1(mll1)介导的疾病或病症。
[0143]
实施方式20.根据实施方式19所述的化合物，其中所述第二治疗剂是抗癌剂、镇痛药、抗炎剂或其组合。
[0144]
实施方式21.根据实施方式1-15中任一项所述的化合物，任选地，与第二治疗剂组合，在制备用于治疗由混合系白血病1(mll1)介导的疾病或病症的药物中的用途。
[0145]
实施方式22.一种用于治疗由混合系白血病1(mll1)介导的疾病或病症的方法，所述方法包括向有需要的受试者投与治疗有效量的根据实施方式1-15中任一项所述的化合物，任选地，与第二治疗剂组合；由此治疗所述由mll1介导的疾病或病症。
[0146]
实施方式23.一种用于治疗通过抑制混合系白血病1(mll1)而获益或能够治疗的疾病或病症的方法，所述方法包括向有需要的受试者投与治疗有效量的根据实施方式1-15中任一项所述的化合物，任选地，与第二治疗剂组合；由此治疗所述通过抑制mll1而获益或能够治疗的疾病或病症。
[0147]
实施方式24.根据实施方式21所述的化合物用途或根据实施方式22或23所述的方法，其中所述由mll1介导的疾病或病症或者所述通过抑制mll1而获益或能够治疗的疾病或病症是乳癌、子宫颈癌、皮肤癌、卵巢癌、胃癌、前列腺癌、胰脏癌、肺癌、肝细胞癌、头颈癌、周边神经鞘瘤、骨肉瘤、骨髓瘤、神经母细胞瘤、白血病、淋巴瘤或肺动脉高压。
[0148]
实施方式25.根据实施方式24所述的化合物用途或根据实施方式24所述的方法，其中所述由mll1介导的疾病或病症或者所述通过抑制mll1而获益或能够治疗的疾病或病症是白血病。
[0149]
实施方式26.根据实施方式25所述的化合物用途或根据实施方式25所述的方法，其中所述白血病是急性淋巴母细胞白血病(all)、急性髓性白血病(aml)、慢性髓性白血病(cml)或慢性髓单核细胞白血病(cmml)。
[0150]
实施方式27.根据实施方式24所述的化合物用途或根据实施方式24所述的方法，其中所述由mll1介导的疾病或病症或者所述通过抑制mll1而获益或能够治疗的疾病或病症是乳癌。
[0151]
实施方式28.根据实施方式24所述的化合物用途或根据实施方式24所述的方法，其中所述由mll1介导的疾病或病症或者所述通过抑制mll1而获益或能够治疗的疾病或病症是肺癌。
[0152]
实施方式29.根据实施方式28所述的化合物用途或根据实施方式28所述的方法，其中所述肺癌是小细胞肺癌或非小细胞肺癌。
[0153]
实施方式30.根据实施方式24所述的化合物用途或根据实施方式24所述的方法，其中所述由mll1介导的疾病或病症或者所述通过抑制mll1而获益或能够治疗的疾病或病症是皮肤癌。
[0154]
实施方式31.根据实施方式30所述的化合物用途或根据实施方式30所述的方法，其中所述皮肤癌是黑素瘤、基底细胞癌或鳞状细胞癌。
[0155]
实施方式32.根据实施方式24所述的化合物用途或根据实施方式24所述的方法，其中所述由mll1介导的疾病或病症或者所述通过抑制mll1而获益或能够治疗的疾病或病症是淋巴瘤。
[0156]
实施方式33.根据实施方式32所述的化合物用途或根据实施方式32所述的方法，其中所述淋巴瘤是霍奇金氏淋巴瘤或非霍奇金氏淋巴瘤。
[0157]
实施方式34.根据实施方式32所述的化合物用途或根据实施方式32所述的方法，其中所述淋巴瘤是套细胞淋巴瘤或弥漫性大b细胞淋巴瘤。
[0158]
实施方式35.根据实施方式24所述的化合物用途或根据实施方式24所述的方法，其中所述由mll1介导的疾病或病症或者所述通过抑制mll1而获益或能够治疗的疾病或病症是多发性骨髓瘤。
[0159]
实施方式36.根据实施方式22-35中任一项所述的方法，其中所述化合物是口服施用的。
[0160]
除非另有指明，否则术语“本发明的化合物”是指式(i)的化合物、其子式的化合物及示例化合物、及其盐，以及所有的立体异构体(包括非对映异构体和对映异构体)、旋转异构体、互变异构体和同位素标记的化合物(包括氘取代物)以及固有形成的部分。
[0161]
根据起始材料和程序的选择，该化合物能够以可能的立体异构体形式或作为其混合物(例如作为纯的旋光异构体或作为立体异构体混合物，如外消旋体和非对映异构体混合物)存在，这取决于不对称碳原子的数目。本发明旨在包括所有该等可能的立体异构体，包括外消旋混合物、非对映异构体混合物和光学纯形式。光学活性(r)-和(s)-立体异构体可以通过手性合成或手性试剂制备，或使用常规技术解决。如果可能，在具有不饱和双键的原子上的取代基可以以顺式-(z)-或反式-(e)-形式存在。如果化合物含有双取代的环烷基，则环烷基取代基可以具有顺式或反式构型。
[0162]
本发明的一种或多种化合物的任何非对称原子(例如，碳等)可以以外消旋或对映异构体富集的形式存在，例如，(r)-、(s)-或(r,s)-构型。在某些实施方式中，每个非对称原子具有至少50％对映异构体过量、至少60％对映异构体过量、至少70％对映异构体过量、至少80％对映异构体过量、至少90％对映异构体过量、至少95％对映异构体过量、或至少99％对映异构体过量的(r)-或(s)-构型。
[0163]
因此，如本文所用，本发明的化合物可以是以下形式之一：可能的立体异构体、旋转异构体、阻转异构体、互变异构体或其混合物，例如，作为基本纯几何(顺式或反式)立体异构体、非对映异构体、旋光异构体(对映异构体)、外消旋体或其混合物。
[0164]
任何得到的立体异构体混合物可以基于成分的物理化学差异分离成纯的或基本上纯的几何或旋光异构体、非对映异构体、外消旋体，例如通过色谱法和/或分级结晶法。
[0165]
本发明化合物或中间体的任何所得外消旋体可通过已知方法拆分成旋光对映异构体，例如通过分离其用旋光酸或碱获得的非对映异构体盐，并释放旋光酸性或碱性化合物。特别地，因此可以使用碱性基团来将本发明的化合物拆分成它们的光学对映异构体，例如，通过分步结晶与光学活性酸形成的盐，例如酒石酸、二苯甲酰酒石酸、二乙酰酒石酸、二-o,o'-对甲苯甲酰酒石酸、扁桃酸、苹果酸或樟脑-10-磺酸。本发明的外消旋化合物或外消旋中间体也可以通过手性色谱法拆分，例如使用含手性吸附剂的高压液相色谱法(hplc)。
[0166]
本文给出的任何化学式也旨在表示化合物的未标记形式以及同位素标记形式。同位素标记的化合物具有由本文给出的化学式描绘的结构，除了一个或多个原子被具有选定原子质量或质量数的原子替代。可掺入本发明化合物中的同位素包括例如氢的同位素。
[0167]
此外，掺入某些同位素，特别是氘(即2h或d)可以通过提供更高代谢稳定性来提供某些治疗优势，例如增加体内半衰期或减少剂量需求或改善治疗指数或耐受性。应理解，在此上下文中的氘被认为是具有式(i)或其子式的化合物的取代基。氘的浓度可以由同位素富集因子定义。如本文所用的术语“同位素富集因子”是指同位素丰度与指定同位素的天然丰度之间的比值。如果本发明化合物中的取代基为氘，则这种化合物具有的针对每个指定的氘原子的同位素富集因子为至少3500(在每个指定的氘原子上有52.5％氘掺入)、至少4000(60％氘掺入)、至少4500(67.5％氘掺入)、至少5000(75％氘掺入)、至少5500(82.5％氘掺入)、至少6000(90％氘掺入)、至少6333.3(95％氘掺入)、至少6466.7(97％氘掺入)、至少6600(99％氘掺入)、或至少6633.3(99.5％氘掺入)。应理解，术语“同位素富集因子”可以以与对氘描述的相同方式应用于任何同位素。
[0168]
可以掺入本发明的化合物的同位素的其他实施例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，如分别是3h、
11
c、
13
c、
14
c、
15
n、
18
f、
31
p、
32
p、
35
s、
36
cl、
123
i、
124
i、
125
i。因此，应当理解，本发明包括掺入任何上述一种或多种同位素的化合物，包括例如放射性同位素，例如3h和
14
c，或也包括掺入非放射性同位素例如2h和
13
c的部分。所述同位素标记的化合物可用于代谢研究(用
14
c)、反应动力学研究(例如用2h或3h)、检测或成像技术(如包括药物或底物组织分布测定的正电子发射断层扫描(pet)或单光子发射电脑断层扫描(spect))，或用于患者的放射性治疗。特别地，
18
f或标记的化合物对于pet或spect研究可能是特别有希望的。同位素标记的式(i)或其子式的化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与所附实施例中所述的类似的方法，使用适当的同位素标记的试剂代替先前使用的未标记试剂来制备。
[0169]
本发明的化合物是以游离形式、作为其盐形式获得的。如本文所用，术语“盐(salt或salts)”是指本发明化合物的酸加成盐或碱加成盐。“盐”特别包括“药学上可接受的盐”。术语“药学上可接受的盐”是指保留本发明的化合物的生物有效性和特性，并且通常不是生物学上或其他方面不需要的盐。在许多情况下，由于氨基和/或羧基基团或与其类似的基团的存在，本发明的化合物能够形成酸盐和/或碱盐。
[0170]
可以用无机酸和有机酸形成药学上可接受的酸加成盐。可以衍生出盐的无机酸包括，例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。可以衍生出盐的有机酸包括，例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水杨酸等。
[0171]
可以用无机碱和有机碱形成药学上可接受的碱加成盐。可以衍生出盐的无机碱包括例如铵盐和来自元素周期表第i至xii列的金属。在某些实施方式中，盐衍生自钠、钾、铵、钙、镁、铁、银、锌和铜；优选的盐包括铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。可以衍生出盐的有机碱包括例如一级胺、二级胺和三级胺；取代胺(包括天然存在的取代胺)；环胺；碱性离子交换树脂等。某些有机胺包括异丙胺、苄星、胆碱盐、二乙醇胺、二乙胺、离胺酸、葡甲胺、哌嗪和氨丁三醇。
[0172]
在另一个方面，本发明提供了以下形式的本发明的化合物：乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、氯茶碱酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸盐、马尿酸盐、氢碘
酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、十二烷基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘液酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八烷酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、三苯乙酸盐(trifenatate)、三氟乙酸盐或昔萘酸盐形式。
[0173]
用于制备本发明的化合物的方法
[0174]
在本文描述的所有方法能够以任何合适顺序进行，除非另有指示或另外与上下文明显相矛盾。
[0175][0176]
方案1
[0177]
在方案1中，化合物a中的oh首先被二甲基氨基甲酸酯b保护。在α-去质子化和用dmf烷基化之后，用naoh水解以获得化合物c。化合物c的游离oh再次被保护形成烯丙基醚，还原醛基生成化合物d。化合物d与中间体e通过光延反应得到化合物f，其在phsih3/pd(pph3)4的作用下生成化合物g。随后烷基化g的游离oh且对侧链进行反应，去除nboc保护基团，提供产物h。
[0178][0179]
方案2
[0180]
或者，在一些情况下，可以根据方案2制备本发明的化合物。首先将化合物c中的游离oh侧链烷基化，得到化合物i，将其还原，获得化合物j。化合物j与e通过光延反应得到中间体，如果需要，可以将该中间体的侧链部分进一步转化。后续去除nhboc保护基团获得终产物h。
[0181][0182]
方案3
[0183]
在方案3中，将中间体k连接到化合物i的醛基中，生成化合物l。去除化合物l的羟基基团，随后去保护，获得终产物m。
[0184][0185]
方案4
[0186]
如方案4所示，与方案3类似，中间体o可以通过将中间体n添加到化合物i中制备。去除o的羟基基团并去除nhboc保护基团，得到化合物p，将其用nh3处理，生成终产物q。
[0187]
本发明进一步包括本发明方法的任何变体；例如，其中将在其任何阶段可获得的中间体产物用作起始材料，并进行其余步骤；其中起始材料在反应条件下原位形成；或其中将反应组分以其盐或光学纯物质的形式使用。本发明的化合物及中间物还可根据本领域技术人员通常已知的方法相互转化。
[0188]
药理学及效用
[0189]
在一方面，本发明提供了对治疗有效的式(i)或其子式的化合物或其药学上可接受的盐；特别地，用于治疗或预防由mll1介导的疾病或病症。
bogatox)、西妥木单抗、泰坦-利伐珠单抗(clivatuzumab tetraxetan)、坎妥木单抗、达塞珠单抗、达克珠单抗(daclizumab)、地莫单抗、依美昔单抗、依决洛单抗、埃罗珠单抗、依帕珠单抗、厄妥索单抗、伊瑞西珠、法妥珠单抗、非格单抗(figitumumab)、夫苏木单抗、加利昔单抗、格巴妥木单抗(gembatumumab vedotin)、吉妥珠单抗、替伊莫单抗、奥英妥珠单抗、英妥木单抗、伊匹单抗、伊拉土木单抗、拉贝珠单抗、来沙木单抗、林妥珠单抗、鲁卡木单抗、卢米单抗(lumilisimab)、马帕木单抗、马妥珠单抗、米拉图珠单抗、米妥莫单抗、他那可单抗、他那莫单抗、奈昔木单抗(necitumumab)、尼妥珠单抗、奥美单抗、奥拉妥单抗(olaratumab)、莫妥组单抗(oportuzumab monatox)、奥戈伏单抗、帕尼单抗、喷托莫单抗、培妥珠单抗、平妥单抗、普立木单抗、雷米珠单抗、利妥木单抗(rilotumumab)、罗妥木单抗(robatumumab)、利妥昔单抗、西罗珠单抗、他珠单抗、帕他普莫单抗、替妥莫单抗(tenatumomab)、替西木单抗、替加妥珠单抗(tigatuzumab)、托西莫单抗或131i-托西莫单抗、曲妥珠单抗、托眉力木单抗(tremelimumab)、西莫白介素单抗(tuocotuzumab celmoleukin)、维妥珠单抗、维西珠单抗、沃洛昔单抗(volocixumab)、伏妥莫单抗、扎鲁木单抗、扎木单抗、ign-101、mdx-010、abx-egr、emd72000、ior-t1、mdx-220、mra、h-11scfv、huj591、trigem、triab、r3、mt-201、g-250、aca-125、onyvax-105、cd:-960、cea-vac、brevarex ar54、imc-1c11、gliomab-h、ing-1、抗lcg mab、mt-103、ksb-303、therex、kw2871、抗hmi.24、抗pthrp、2c4抗体、sgn-30、trail-ri mab、前列腺癌抗体、h22xki-r、abx-mai、imuteran、monopharm-c)以及包含任何以上药剂的抗体-药物偶联物(尤其奥瑞斯他汀mmae和mmaf、美登木素生物碱如dm-1、卡奇霉素或各种细胞毒)。
[0202]
在另一个实施方式中，将本发明的化合物与另一种选自以下的治疗剂组合：阿那曲唑比卡鲁胺硫酸博莱霉素白消安白消安注射液卡培他滨n4-戊氧羰基-5-去氧-5-氟胞苷、卡铂卡莫司汀苯丁酸氮芥顺铂克拉屈滨环磷酰胺(或)、阿糖胞苷、胞嘧啶阿拉伯糖苷阿糖胞苷脂质体注射液达卡巴达卡巴更生霉素(放线菌素d、)、盐酸柔红霉素柠檬酸柔红霉素脂质体注射液地塞米松、多西他赛盐酸阿霉素盐酸阿霉素依托泊苷磷酸氟达拉滨5-氟尿嘧啶氟尿嘧啶氟他胺替扎他滨(tezacitibine)、吉西他滨(双氟去氧胞苷)、羟基脲伊达比星异环磷酰胺伊立替康l-天冬酰胺酶亚叶酸钙、美法仑6-巯嘌呤甲氨蝶呤米托蒽醌吉妥单抗(mylotargtm)、紫杉醇白蛋白结合型紫杉醇phoenix(yttrium90/mx-dtpa)、喷司他丁(pentostatin)、聚苯丙生(polifeprosan)20与卡莫司汀的植入物枸橼酸它莫西芬
替尼泊苷6-硫代鸟嘌呤、噻替派、替拉扎明注射用盐酸托泊替康长春花碱长春新碱和长春瑞滨
[0203]
在另一个实施方式中，可以将本发明的化合物与另一种治疗剂组合，所述另一种治疗剂能够抑制braf、mek、cdk4/6、shp-2、hdac、egfr、met、mtor、pi3k或akt或其组合。在特定实施方式中，可以将本发明的化合物与另一种治疗剂组合，所述另一种治疗剂选自维莫非尼、达拉非尼、lgx818、曲美替尼、mek162、lee011、pd-0332991、帕比司他、伏立诺他、罗米地辛、西妥昔单抗、吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、帕尼单抗、凡德他尼、inc280、依维莫司、西罗莫司、bmk120、byl719或clr457或其组合。
[0204]
在另一个实施方式中，基于正在治疗的疾病或病症选择与本发明化合物一起使用的治疗剂。例如，在黑素瘤的治疗中，其他治疗剂可以选自阿地白介素(例如，)、达拉菲尼(例如，)、达卡巴嗪、重组干扰素α-2b(例如，a)、伊匹单抗、曲美替尼(例如，)、聚乙二醇干扰素α-2b(例如，sylatrontm)、威罗菲尼(例如，))和伊匹单抗(例如，)。
[0205]
对于治疗卵巢癌，其他治疗剂可以选自多柔比星盐酸盐卡铂环磷酰胺顺铂顺铂多柔比星盐酸盐脂质体吉西他滨盐酸盐拓扑替康盐酸盐和紫杉醇
[0206]
对于治疗甲状腺癌，其他治疗剂可以选自多柔比星盐酸盐卡博替尼-s-苹果酸酯和凡德他尼
[0207]
对于治疗大肠癌，其他治疗剂可以选自氟尿嘧啶(例如，其他治疗剂可以选自氟尿嘧啶(例如，)、贝伐珠单抗伊立替康盐酸盐卡培他滨西妥昔单抗奥沙利铂亚叶酸钙瑞格非尼帕尼单抗和ziv-阿柏西普
[0208]
对于治疗肺癌，其他治疗剂可以选自甲氨蝶呤、甲氨蝶呤lpf(例如，对于治疗肺癌，其他治疗剂可以选自甲氨蝶呤、甲氨蝶呤lpf(例如，)、紫杉醇紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒配制物马来酸阿法替尼培美曲塞二钠贝伐珠单抗卡铂顺铂克唑替尼厄洛替尼盐酸盐吉非替尼和吉西他滨盐酸盐
[0209]
对于治疗胰脏癌，其他治疗剂可以选自氟尿嘧啶对于治疗胰脏癌，其他治疗剂可以选自氟尿嘧啶厄洛替尼盐酸盐吉西他滨盐酸盐和丝
裂霉素或丝裂霉素c(mitozytrextm、)。
[0210]
对于治疗子宫颈癌，其他治疗剂可以选自博莱霉素顺铂和拓扑替康盐酸盐
[0211]
对于治疗头颈癌，其他治疗剂可以选自甲氨蝶呤、甲氨蝶呤lpf(例如，folex)、氟尿嘧啶)、氟尿嘧啶博莱霉素西妥昔单抗顺铂和多西紫杉醇
[0212]
对于治疗白血病，包括慢性髓单核细胞白血病(cmml)，其他治疗剂可以选自博舒替尼环磷酰胺阿糖胞苷(tarabine)、达沙替尼伊马替尼甲磺酸酯帕纳替尼尼禄替尼和高三尖杉酯碱(omacetaxine mepesuccinate)
[0213]
在另一方面，本发明提供了药物组合物，所述药物组合物包含至少一种本发明的化合物(例如，式(i)或其子式的化合物)或其药学上可接受的盐以及适于向人或动物受试者施用的药学上可接受的载体，单独地或与其他抗癌剂组合用药。
[0214]
在组合疗法中，组合物将作为组合治疗剂或作为分开的组合物配制在一起。本发明化合物和其他治疗剂可以由相同或不同的制造商制造和/或配制。由编号、通用名或商品名识别的治疗剂的结构可以取自标准纲要“默克索引(the merck index)”或数据库(例如，国际专利(例如ims世界出版物))的实际版本。可以与本发明化合物组合使用的其他治疗剂可以通过本领域所述的方法(如在上面引用的文献中)制备和施用。
[0215]
任选地，药物组合物可以包含如上所述的药学上可接受的载体。本发明的药物组合物或组合对于约50-70kg的受试者可以给与约0.5mg至1000mg的一种或多种活性成分的单位剂量。
[0216]
在另一方面，本发明提供了治疗患有细胞增殖性疾病(如癌症)的人或动物受试者的方法，所述方法包括向所述受试者单独地或与其他抗癌剂组合施用治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐。在组合疗法中，本发明化合物和一种或多种其他抗癌剂可以同时、并行或依序(没有特定的时间限制)施用，其中这种施用方式在患者的体内提供了这两种化合物的治疗有效水平的。此外，还可以以下述方式将本发明化合物和其他治疗剂一起形成组合疗法：(i)在将组合产品发放给医师之前(例如在包括本发明化合物和其他治疗剂的试剂盒情况下)；(ii)在施用前不久，由医师自己(或在医师的指导下)进行；(iii)由患者自己、例如在依次施用本发明的化合物和其他治疗剂期间进行。
[0217]
在一个实施方式中，本发明化合物和一种或多种其他抗癌剂通常通过输注或口服以任何顺序依序施用。施用方案可以根据疾病的阶段、患者的身体健康、单个药物的安全性、单个药物的耐受性、以及施用该组合的主治医师和一个或多个执业医师熟知的其他标准而变化。本发明化合物和一种或多种其他抗癌剂可以在彼此数分钟、数小时、数天或甚至数周内施用，这取决于治疗的特定周期。另外，该周期可包括在治疗周期期间比另一种药物
更频繁地施用一种药物，并且每次施用的剂量不同。
[0218]
在又另一方面，可以将本发明化合物与以下组合：其他抗癌剂、抗过敏剂、止吐剂(或镇吐药)、镇痛药、细胞保护剂及其组合。
[0219]
在一些情况下，一些患者在施用期间或之后可能对本发明化合物和/或一种或多种其他抗癌剂产生过敏反应。因此，可施用抗过敏剂以将过敏反应的风险降到最低。合适的抗过敏剂包括皮质类固醇，如地塞米松(例如，)、倍氯米松(例如，)、氢化可的松(也称为可的松、氢化可的松琥珀酸钠、氢化可的松磷酸钠；例如，氢化可的松磷酸盐，hydrocort和)、泼尼松龙(例如，和)、泼尼松(例如，liquid和)、甲基强的松龙(也称为6-甲基强的松龙、甲基强的松龙乙酸盐、甲基强的松龙琥珀酸钠；例如，和)；抗组胺药，如苯海拉明(例如，)、羟和赛庚啶；和支气管扩张剂，如β-肾上腺素能受体促效剂、沙丁胺醇(例如，)、和特布他林
[0220]
在其他情况下，一些患者在施用本发明的化合物和/或一种或多种其他抗癌剂期间和之后可能会出现恶心。因此，可以在预防恶心(上胃)和呕吐方面施用止吐药。合适的止吐药包括阿瑞匹坦昂丹司琼hcl格拉司琼劳拉西泮地塞米松丙氯拉嗪卡索匹坦(casopitant)(和)、及其组合。
[0221]
在其他情况下，缓解治疗期间疼痛的药物可以使患者更舒适。通常使用常见的非处方镇痛药，如阿片类镇痛药如氢可酮/对乙酰氨基酚或氢可酮/醋胺酚(例如，)、吗啡(例如，或)、羟考酮(例如，或)、盐酸羟吗啡酮和芬太尼(例如，)也可用于中度或重度疼痛。
[0222]
此外，细胞保护剂(如神经保护剂、基团清除剂、心脏保护剂、蒽环霉素外渗中和剂、营养素等)可用作辅助疗法以保护正常细胞免受治疗毒性并限制器官毒性。合适的细胞保护剂包括胺磷汀谷氨酰胺、地美司钠(dimesna)美司纳(mesna)右丙亚胺(dexrazoxane)(或)、扎利罗登(xaliproden)和甲酰四氢叶酸(也称为甲酰四氢叶酸钙、嗜橙菌(citrovorum)因子和亚叶酸)。
[0223]
在又另一方面，本发明化合物可以与已知治疗方法组合使用，例如，用于激素或放射疗法。在某些情况下，本发明的化合物可以用作放射增敏剂，尤其用于治疗对放射疗法表现出低敏感性的肿瘤。
[0224]
在又另一方面，本发明提供了包含一种或多种本发明化合物和如上所述的另一种
治疗剂的套组。代表性套组包括(a)式(i)或其子式的化合物或其药学上可接受的盐；和(b)例如如上所示的至少一种其他治疗剂；所述套组可以进一步包含包装说明书或包含施用说明的其他标签。本发明的套组可用于不同的施用剂型(例如，口服及肠胃外施用)，用于以不同剂量间隔施用两种或更多种分开的药物组合物、或用于相对彼此滴定分开的组合物；其中至少一种药物组合物包含式(i)或其子式的化合物。
[0225]
实施例
[0226]
温度以摄氏度给出。终产物、中间体和起始物质的结构通过标准分析方法(例如，微量分析和光谱特征(例如，ms、ir、nmr))确认。使用的缩写是本领域常规的缩写。
[0227]
用于合成本发明的化合物的所有起始材料、结构单元、试剂、酸、碱、脱水剂、溶剂和催化剂是可商购获得的或可通过本领域技术人员已知的有机合成方法合成(houben-weyl第4版1952,methodsoforganicsynthesis[有机合成方法],thieme[蒂梅出版社],第21卷)。除非另有说明，否则起始材料通常可从商业来源获得。
[0228]
以下实施例仅是说明本发明并且不限制另外要求保护的本发明的范围。此外，本发明的化合物可以通过本领域技术人员已知的有机合成方法生产，如以下实施例所示。需要时，根据标准惯例，使用常规保护基来保护反应性官能基团，例如，参见t.w.greene和p.g.m.wuts约翰威利父与子1991(johnwileyandsons,1991)的“有机合成中的保护基”。
[0229]
缩写
[0230]
如本文所用的缩写定义如下：“1x”代表一次，“2x”代表两次，“3x”代表三次，“℃”代表摄氏度，“aq”代表水相，“fcc”代表快速柱层析法，“eq”表示当量(equivalent或equivalents)，“g”表示克(gram或grams)，“mg”表示毫克(milliliter或milliliters)，“l”表示升(liter或liters)，“ml”表示毫升(milliliter或milliliters)，“μl”表示微升(microliter或microliters)，“n”正常，“m”为摩尔，“nm”为纳摩尔，“mol”为摩尔(mole或moles)，“mmol”为毫摩尔(millimole或millimoles)，“min”为分钟(minute或minutes)，“h”或“hrs”为小时,“rt”表示室温，“on”表示过夜，“atm”表示大气，“psi”表示磅/平方英寸，“conc.”表示浓度，“sat”或“sat'd”表示饱和，“mw”表示分子量，“mw”或“μwave”表示微波，“mp”表示熔点，“wt”表示重量，“ms”或“massspec”表示质谱分析法，“esi”表示电喷雾离子质谱，“hr”表示高分辨率，“hrms”表示高分辨率质谱，“lcms”或“lc-ms”表示液相色谱质谱，“hplc”表示高压液相色谱，“rphplc”表示反相hplc，“tlc”或“tlc”表示薄层色谱，“nmr”表示核磁共振光谱，“noe”表示核欧沃豪斯效应光谱，“1h”表示质子，“δ”表示delta，“s”代表单峰，“d”代表双峰，“t”代表三重峰，“q”代表四重峰，“m”代表多重峰，“br”代表宽峰，“hz”代表赫兹，“ee”代表“对映异构体过量”和“α”、“β”、“r”、“r”、“s”、“s”、“e”和“z”是本领域技术人员熟悉的立体化学名称。
[0231]
下文使用的以下缩写具有对应的含义：
[0232]
δ加热boc叔丁氧羰基
[0233]
boc2o二碳酸二叔丁酯
[0234]
bpo过氧化苯甲酰
[0235]
bsa牛血清白蛋白
[0236]
cdcl3氯仿-d
[0237]
cd3od甲醇-d4
[0238]
dd双二重峰
[0239]
dcm二氯甲烷
[0240]
dead偶氮二甲酸二乙酯
[0241]
diad偶氮二甲酸二异丙酯
[0242]
dibal-h二异丁基氢化铝
[0243]
diean,n-二异丙基乙胺
[0244]
dmap4-二甲基氨基吡啶
[0245]
dmf二甲基甲酰胺
[0246]
dmf-dma二甲基甲酰胺二甲基缩醛
[0247]
dmhan,o-二甲基羟胺
[0248]
dmso二甲亚碸
[0249]
dtad偶氮二甲酸二叔丁酯
[0250]
ea乙醇
[0251]
edc，edc.hcln-(3-二甲基氨基丙基)-n'-乙基碳二亚胺盐酸盐
[0252]
eti乙基碘
[0253]
etoac乙酸乙酯
[0254]
etoh乙醇
[0255]
fbs胎牛血清
[0256]
hatu六氟磷酸氮杂苯并三唑四甲基脲
[0257]
hoac乙酸
[0258]
hobt羟基苯并三唑
[0259]
ipa异丙醇
[0260]
isco原位化学氧化
[0261]
lah氢化铝锂
[0262]
lda二异丙基氨基锂
[0263]
meoh甲醇
[0264]
mscl甲磺酰氯
[0265]
mtbe甲基叔丁醚
[0266]
mhz兆赫
[0267]
min分钟
[0268]
m/z质荷比
[0269]
nbsn-溴代琥珀酰亚胺
[0270]
ncsn-氯琥珀酰亚胺
[0271]
nmmn-甲基吗啉
[0272]
pbu3三丁基膦
[0273]
pe石油醚
[0274]
ppm百万分率
[0275]
rac外消旋的
[0276]
sfc超临界流体色谱
[0277]
丙基磷酸酐溶液
[0278]
tbaf四正丁基氟化铵
[0279]
tbai四正丁基碘化铵
[0280]
tbdpscl叔丁基(氯)二苯基硅烷
[0281]
tbscl叔丁基二甲基硅基氯化物
[0282]
tea三乙胺
[0283]
tfa三氟乙酸
[0284]
thf四氢呋喃
[0285]
tmscl三甲基硅基氯化物
[0286]
uv紫外线
[0287]
使用agilent1260hplc系统(圣克拉拉，加利福尼亚州)进行高效液相色谱(hplc)。分析柱是反相phenomenexkinetexc18-2.6μm,4.6x50mm。使用梯度洗脱(流速2ml/min)，从5％甲醇/95％水开始，并在10分钟的时间段内替换为95％甲醇/5％水。所有溶剂都含有0.1％甲酸(fa)。通过214、254和300nm处的紫外光(uv)吸收来检测化合物。hplc溶剂购自西格玛奥德里奇公司(sigmaaldrich)(圣路易斯，密苏里州)。
[0288]
在agilentsystem中进行质谱分析(agilent1260hplc和agilent6130质谱检测器；色谱柱：phenomenexkinetex2.6umc18，柱尺寸4.6x50mm；柱温40℃；梯度：在2min周期内含0.1％fa的水中595％甲醇；流速2ml/min(或经过2min极性梯度5％-50％，或经过2min非极性梯度50％-95％)；质谱仪分子量扫描范围1001000；或100-1500；毛细管电压4000v。除非另有指示，所有质量都被报告为质子化母体离子的质量。
[0289]
使用bruker400mhznmr进行核磁共振(nmr)分析。参照光谱是tms或该溶剂的已知化学位移。
[0290]
实施例纯化中使用的手性制备hplc方法
[0291]
sfc手性筛选是在tharinstrumentsinvestigator系统上进行的。thar观察仪系统由以下组成：
[0292]
·
alias自动进样器
[0293]
·
thar流体递送模组(0至10ml/min)
[0294]
·
tharsfc10位柱温箱
[0295]
·
waters2998pda
[0296]
·
thar自动背压调节器
[0297]
所有的thar组件皆为superpurediscovery系列产品线的一部分。该系统以3ml/min的流速流动并保持在38℃。系统背压设置为100巴(bar)。每个样本通过具有十个5μm的色谱柱组合进行筛选：
[0298]
·
5μm4.6x150mmchiralpakad
[0299]
·
5μm4.6x150mmchiralcelod
[0300]
·
5μm4.6x150mmchiralceloj
[0301]
·
5μm4.6x150mmchiralpakas
[0302]
·
5μm4.6x250mmchiralpakay
[0303]
·
5μm4.6x250mmchiralceloz
[0304]
·
5μm 4.6x150mm chiralpak ic
[0305]
·
5μm 4.6x150mm chiralpak ig
[0306]
·
5μm 4.6x250mm regis whelk-o1
[0307]
·
5μm 4.6x250mm chromegachiral cc4
[0308]
该系统在9分钟内从5％混合溶剂运行到50％混合溶剂的梯度，然后在50％混合溶剂下保持10分钟，切换回5％混合溶剂并在初始条件下保持0.5分钟。在每个梯度之间有4分钟的平衡方法，使5％混合溶剂流过下一个有待筛选的色谱柱。筛选的典型溶剂是meoh、etoh、ipa、meoh 0.5％nh3、etoh 0.5％nh3、ipa 0.1％nh3。一旦使用其中一种梯度方法检测到分离，就可以开发出等度方法，并在必要时，在thar prep80系统上扩大分离规模。
[0309]
中间体
[0310]
中间体a：2,3-二氯-6-羟基苯甲醛
[0311][0312]
步骤1.3,4-二氯苯基二乙基氨基甲酸酯(a-2)
[0313][0314]
在室温下向a-1(500g，3.1mol)和k2co3(847.9g，6.1mol)的乙腈(2l)混合物中添加二乙基氯甲酰胺(623.8g，4.60mol)。然后将反应混合物在80℃下搅拌2h。向反应中添加水(1l)，并用etoac萃取反应混合物。将有机层经na2so4干燥并滤出。将滤液在真空下浓缩，获得粗产物。通过快速层析法纯化粗产品，获得无色油状的化合物a-2。1h nmr(400mhz,cdcl3)：δ7.41(d,j＝9.20hz,1h),7.28(d,j＝3.20hz,1h),7.01(dd,j＝8.60,2.40hz,1h),3.40(dq,j＝7.20hz,4h),1.18-1.26(m,6h)。
[0315]
步骤2.2,3-二氯-6-羟基苯甲醛(a)
[0316][0317]
在n2下，在-78℃下向a-2(145g，553.2mmol)的四氢呋喃(2l)溶液中逐滴添加lda(331.9ml，663.8mmol)。1h后，在-78℃下逐滴添加二甲基甲酰胺(86ml，1110mmol)，并将混合物搅拌1.5h后加热至0℃。用1n naoh(1l)淬灭混合物。将混合物搅拌1h，然后用1n hcl酸
化至ph＝2。将混合物用etoac萃取。将有机层经na2so4干燥并滤出。将滤液在真空下浓缩，得到粗产物。通过快速层析法纯化粗产物，获得黄色固体中间体a。1h nmr(400mhz,cdcl3)：δ11.98(s,1h),10.44(s,1h),7.56(d,j＝9.20hz,1h),6.90(d,j＝9.20hz,1h)。
[0318]
中间体b：叔丁基(叔丁氧基羰基)(9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯
[0319][0320]
步骤1.6-氯-5-碘吡嗪-2-胺
[0321][0322]
向9h-嘌呤-6-胺(100g，740mmol)和dmap(9.04g，74mmol)的thf(2l)溶液中逐滴添加boc2o(647g，2.96mol)，并将反应混合物在10℃-15℃下搅拌16小时。将混合物在真空下浓缩，得到粗产物，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。1h nmr(400mhz,cdcl3)：δ9.01(s,1h)8.51(s,1h),1.71(s,9h),1.43(s,18h)。
[0323]
步骤2.叔丁基(叔丁氧基羰基)(9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯
[0324][0325]
向6-氯-5-碘吡嗪-2-胺(500g，1.15mol)的meoh(1.5l)溶液中添加饱和溶液nahco3(0.5l)，并将反应混合物在40℃-50℃下搅拌2h。在减压下除去meoh。添加水(1l)并滤出混合物。将粗产物固体用mtbe(0.5l)洗涤并在真空下干燥，得到呈白色固体的叔丁基(叔丁氧基羰基)(9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ8.85(s,1h),8.41(s,1h),1.52(s,18h)。
[0326]
中间体c：叔丁基(r)-(叔丁氧基羰基)(9-(6-羟基-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯
[0327][0328]
步骤1.6-(烯丙基氧基)-2,3-二氯苯甲醛(c-2)
[0329][0330]
在室温下向2,3-二氯-6-羟基苯甲醛(中间体a)(11g，57.6mmol)和k2co3(15.9g，115.2mmol)的ch3cn(200ml)混合物中添加烯丙基溴(13.9g，115.2mmol)。然后将反应混合物在40℃下搅拌12小时。在冷却至室温后，将反应混合物用h2o淬灭并用etoac萃取。将有机层经无水na2so4干燥并在真空下浓缩，得到粗产品混合物。将粗产物通过快速层析法纯化，得到呈无色固体的c-2。1h nmr(400mhz,cdcl3)：δ10.49(s,1h),7.54(d,j＝8.8hz,1h),6.88(d,j＝9.2hz,1h),6.07-5.97(m,1h),5.48-5.33(m,2h),4.65-4.63(m,2h)。
[0331]
步骤2.(6-(烯丙基氧基)-2,3-二氯苯基)甲醇(c-3)
[0332][0333]
向c-2(12g，51.9mmol)的thf(200ml)溶液中按小份添加nabh4(5.9g，155.8mmol)。在添加后，将反应混合物在8℃-10℃下搅拌2小时。然后将反应混合物用饱和nh4cl(50ml)淬灭并且用etoac萃取。将有机层用盐水洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并浓缩，获得呈无色油的c-3。1h nmr(400mhz,cdcl3)：δ7.35(d,j＝8.8hz,1h),6.78(d,j＝8.8hz,1h),6.08-6.00(m,1h),5.44-5.40(m,1h),5.33-5.35(m,1h),4.93(d,j＝7.2hz,2h),4.60-4.59(m,2h),2.36(t,j＝7.0hz,1h)
[0334]
步骤3.叔丁基(r)-(叔丁氧基羰基)(9-(6-(烯丙基氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯
[0335][0336]
在0℃下向c-3(11g，47.2mmol)、中间体b(16.6g，49.6mmol)和pph3(24.8g，17.2mmol)的无水thf(350ml)溶液中逐滴添加diad(19.1g，17.2mmol)。在添加后，将反应混合物在30℃下搅拌12小时。将混合物在真空下浓缩，得到粗产物。通过快速层析法纯化残余物，获得呈黄色固体的c-4。1h nmr(400mhz,cdcl3)：δ8.90(s,1h),7.97(s,1h),7.46(d,j＝9.2hz,1h),6.84d,j＝8.8hz,1h),5.93-5.85(m,1h),5.34-5.26(m,2h),4.56-4.55(m,2h),
3。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ5.14-5.16(m,1h),4.18-4.20(m,1h),3.63-3.66(m,2h),1.85-1.87(m,1h),1.54-1.63(m,3h),1.48(s,9h),1.46(s,9h),0.91(s,9h),0.07(s,6h)。lc-ms：[m na]
＝425.9。
[0348]
步骤3.(r)-叔丁基5-(叔丁基二甲基硅基氧基)-1-羟基戊-2-基氨基甲酸酯(d-4).
[0349][0350]
在-5℃下向d-3(10.0g，25mmol)的thf(200ml)溶液中添加lah(2.7g，71mmol)thf(100ml)溶液，并在0℃下搅拌4小时。将反应混合物用水(3ml)小心淬灭，随后用15％naoh(3ml)和水(9ml)淬灭。将混合物搅拌20min，并通过celite垫过滤。将滤液在真空下浓缩，并通过快速柱层析法纯化，得到呈无色粘稠油状的d-4。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ4.84(m,1h),3.54-3.68(m,5h),2.00(bs,1h),1.48-1.65(m,4h),1.45(s,9h),0.90(s,9h),0.06(s,6h)。lc-ms：[m na] ＝355.9。
[0351]
步骤4.叔丁基(r)-(5-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-1-甲氧基戊-2-基)氨基甲酸酯(d-5)
[0352][0353]
在0℃下向d-4(4.9g，15mmol)和甲基碘(2.5g，18mmol)的thf(200ml)溶液中添加nah(1.1g，28mmol)。将混合物在0℃下搅拌2小时。在反应中添加h2o(100ml)并用etoac萃取。将有机层用盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩，以获得残余物。通过快速柱层析法纯化残余物，得到呈无色油状的d-5。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ4.74(s,1h),3.69(s,1h),3.62(t,j＝6.0hz,2h),3.43-3.33(m,5h),1.65-1.53(m,4h),1.46-1.44(m,9h),0.90(s,9h),0.05(s,6h)。lc-ms：[m na]
＝369.9。
[0354]
步骤5.叔丁基(r)-(5-羟基-1-甲氧基戊-2-基)氨基甲酸酯(d-6)
[0355][0356]
向d-5(3.8g，11mmol)的丙酮(35ml)和水(1.5ml)混合溶液中添加cucl2(0.25g，1.9mmol)。将混合物在80℃下搅拌2小时。将反应混合物直接浓缩，给出粗产物。通过快速柱层析法纯化粗残余物，得到呈棕色粘稠油状的d-6。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ4.76(m,1h),3.69-3.3.67(m,3h),3.35-3.39(m,5h),1.59-1.65(m,5h),1.44(s,9h)。lc-ms：[m na] ＝256.0。
[0357]
步骤6.叔丁基(r)-(5-碘-1-甲氧基戊-2-基)氨基甲酸酯(d)
干燥，并过滤。将滤液在真空下浓缩，提供粗产物f-3，其不经进一步纯化即用于下一步骤。1h nmr(400mhz,cdcl3)：δ10.46(s,1h),7.55(d,j＝9.20hz,1h),6.88(d,j＝9.20hz,1h),5.07-5.22(m,1h),4.19-4.29(m,1h),4.06-4.12(m,2h),1.81-2.01(m,4h),1.47(s,9h),1.45(s,9h)。
[0368]
步骤2：叔丁基(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(3,4-二氯-2-(羟基甲基)苯氧基)戊酸酯(f-4)
[0369][0370]
在0℃下向f-3(各270g，1.2mol)的thf溶液(1.5l)中间隔0.5h分次添加硼氢化钠(26.5g，1.4mmol)。将混合物在0℃下搅拌1h。将混合物用10％nh4cl淬灭并用乙酸乙酯萃取。将有机层经na2so4干燥并滤出。将滤液在真空下浓缩，并将粗品通过硅胶柱层析法纯化(在hex中7％至20％ea)，获得呈黄色油状的f-4。1h nmr(400mhz,cdcl3)：δ7.31-7.37(m,1h),6.75(d,j＝8.40hz,1h),5.18(d,j＝7.60hz,1h),4.89(s,2h),4.26(d,j＝6.00hz,1h),4.05(t,j＝5.60hz,2h),2.50-2.74(m,1h),1.75-2.02(m,4h),1.47(s,9h),1.43(s,9h)。
[0371]
步骤3：叔丁基(r)-5-(2-((6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸酯(f-5)
[0372][0373]
向f-4(120.0g，258.4mmol)和中间体b(104g，310.1mmol)的thf溶液(1.5l)中逐滴添加nbu3p(140ml，516.8mmol)和dtad(120g，516.8mmol)。将混合物在7℃-14℃下搅拌18hr。将混合物在真空下浓缩，并将粗品通过硅胶柱层析法纯化(己烷中含有25％ea)，得到叔丁基(r)-5-(2-((6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸酯f-5。1h nmr(400mhz,cdcl3)：δ8.91(s,1h),7.97(s,1h),7.45(d,j＝8.80hz,1h),6.82(d,j＝9.20hz,1h),5.65(s,2h),5.20(d,j＝7.60hz,1h),4.18(d,j＝5.60hz,1h),4.01(t,j＝5.40hz,2h),1.89-1.99(m,1h),1.70-1.82(m,3h),1.43(s,36h)。
[0374]
步骤4：(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(2-((6-((叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊酸(f)
[0375][0376]
在9℃-14℃下向叔丁基(r)-5-(2-((6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸酯(f-5)(20g，25.6mmol)的meoh和thf(200ml，1:1)溶液中添加的lioh(10.7g，255.8mmol)水(100ml)溶液，并将溶液搅拌60hr。在真空下除去溶剂。添加乙酸乙酯(500ml)，并使用6n hcl将混合物调节至ph 7。将有机层经na2so4干燥并在真空下浓缩，得到呈粉红色胶状的中间体f。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.07(s,1h),8.57(s,1h),8.28(s,1h),7.61(d,j＝8.80hz,1h),7.08(d,j＝9.20hz,1h),6.23(s,1h),5.57(s,2h),4.06-4.01(m,3h),3.65-3.58(m,1h),1.99-1.67(m,4h),1.47(s,9h),1.36(s,9h)。
[0377]
中间体g：7-溴-4-(甲硫基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪
[0378][0379]
将4-(甲硫基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪(3.5g，21.1mmol)和nbs(5.6g，31.6mmol)的dmf(60ml)混合物在室温下搅拌2hr。将反应混合物用etoac稀释，用饱和nahco3水溶液和盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩。通过isco(硅胶，己烷中含有0-30％etoac)得到呈白色固体的7-溴-4-(甲硫基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪。lcms esi m/z m/m 2＝245.0/247.0。
[0380]
中间体h：甲基(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(3,4-二氯-2-甲酰基苯氧基)戊酸酯
[0381][0382]
步骤1.甲基(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-碘戊酸酯
[0383]
[0384]
在0℃下，向三苯基膦(2.5g，9.7mmol)和咪唑(0.66g，9.71mmol)的dcm(25ml)溶液中添加碘(2.463g，9.71mmol)。将所得混合物在室温下搅拌15min并冷却至0℃。在反应液中加入甲基(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-羟基戊酸酯(1.2g，4.85mmol)的dcm(5ml)溶液，并将反应混合物在室温下搅拌3hr。将反应混合物用醚稀释，在室温下搅拌30min，过滤。将滤液浓缩。通过isco(硅胶，己烷中含有0-30％etoac)得到呈无色油状的甲基(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-碘戊酸酯。lcms esi m/z m 1(-100)＝257.9。
[0385]
步骤2.甲基(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(3,4-二氯-2-甲酰基苯氧基)戊酸酯
[0386]
将甲基(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-碘戊酸酯(1.4g，3.8mmol)、碳酸钾(1.1g，7.6mmol)和2,3-二氯-6-羟基苯甲醛(中间体a)(0.87g，4.6mmol)的dmf(15ml)混合物在60℃下搅拌过夜。将反应混合物用etoac稀释，用水和盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩。通过isco(硅胶，己烷中含有0-30％etoac)提供呈无色油状的甲基(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(3,4-二氯-2-甲酰基苯氧基)戊酸酯。lcms esi m/z m/m 2＝319.9/321.9。
[0387]
中间体i：叔丁基(r)-(5-((6-溴-1-(羟基甲基)萘-2-基)氧基)-1-甲氧基戊-2-基)氨基甲酸酯
[0388][0389]
步骤1.6-溴-2-羟基-1-萘醛
[0390][0391]
将ticl4(1.2ml，10.5mmol)和cl2chome(575mg，5.5mmol)的dcm(5ml)溶液在0℃下搅拌15min。然后在0℃下逐滴添加6-溴萘-2-醇(1.1g，5mmol)dcm(15ml)溶液。将混合物在25℃下搅拌12h。lcms检测到一个所希望的ms主峰。添加hcl(30ml，1n)。用ea(100ml)萃取混合物。将有机层经na2so4干燥，过滤和浓缩，得到呈灰色固体的6-溴-2-羟基-1-萘醛。lc-ms(esi)m/z 251[m h]
。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ13.12(s,1h),10.78(s,1h),8.24(d,j＝8.8hz,1h),7.97(d,j＝2.0hz,1h),7.91(d,j＝8.8hz,1h),7.70(dd,j＝8.8,2.0hz,1h),7.19(d,j＝9.2hz,1h)。
[0392]
步骤2.叔丁基(r)-(5-((6-溴-1-甲酰基萘-2-基)氧基)-1-甲氧基戊-2-基)氨基
甲酸酯
[0393][0394]
将6-溴-2-羟基-1-萘醛(0.11g，0.46mmol)、叔丁基(r)-(5-碘-1-甲氧基戊-2-基)氨基甲酸酯(0.19g，0.55mmol)和k2co3(0.19g，1.38mmol)的dmf(2ml)混合物在80℃下搅拌1h。lcms显示检测到约40％的所希望的ms。将反应物倒入ea(20ml)中并用h2o(15ml
×
2)和盐水(15ml
×
2)洗涤。将有机层经na2so4干燥，过滤和浓缩，得到呈棕色油状的叔丁基(r)-(5-((6-溴-1-甲酰基萘-2-基)氧基)-1-甲氧基戊-2-基)氨基甲酸酯。lc-ms(esi)m/z 488.1[m h]
。
[0395]
步骤3.叔丁基(r)-(5-((6-溴-1-(羟基甲基)萘-2-基)氧基)-1-甲氧基戊-2-基)氨基甲酸酯
[0396][0397]
在28℃下向叔丁基(r)-(5-((6-溴-1-甲酰基萘-2-基)氧基)-1-甲氧基戊-2-基)氨基甲酸酯(0.16g，0.34mmol)的thf(2ml)溶液中添加nabh4(16mg，0.41mmol)。将混合物在28℃下搅拌3h。lcms显示检测到约35％的所希望的ms。用nh4cl(水性，5ml)淬灭反应，用ea(10ml
×
2)提取。将有机层用盐水(10ml
×
2)洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩，得到残余物。将残余物通过快速柱层析纯化，得到呈无色油状的叔丁基(r)-(5-((6-溴-1-(羟基甲基)萘-2-基)氧基)-1-甲氧基戊-2-基)氨基甲酸酯。lc-ms(esi)m/z 492.0[m h]
。
[0398]
中间体j：叔丁基(叔丁氧基羰基)(7-氯-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基)氨基甲酸酯
[0399][0400]
步骤1.1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺
[0401][0402]
将4-氯-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶(10g，65.1mmol)的nh2nh2·
h2o(200ml，85％)和异
丙醇(142.5ml)混合溶液在100℃下搅拌和回流36hr。在真空下去除溶剂。然后在粗品中添加h2o(400ml)和雷尼镍(raney ni)(20.0g)并在100℃下搅拌3hr。将混合物在垫上过滤，浓缩滤液，得到1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺。1h nmr(400mhz,d2o):δ＝8.07(s,1h),7.34(d,j＝6.8hz,1h),6.87(d,j＝7.2hz,1h)。
[0403]
步骤2.叔丁基4-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-甲酸酯
[0404][0405]
在0℃下向化合物1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺(26g，111mmol)的thf(280ml)溶液中添加dmap(5.42g，44.4mmol)，随后缓慢添加boc2o(242.3g，116.4mol)。将混合物在25℃下搅拌48hr。lcms显示，起始材料反应完全，并且检测到所希望的ms主峰。将混合物倒入1l水中，用mtbe(1l
×
2)萃取。将合并的有机相用盐水(1l)洗涤，经无水na2so4干燥，在真空下浓缩，得到呈黄色油状的叔丁基4-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-甲酸酯。lc-ms(esi)m/z 435.4[m h]
。1h nmr(cdcl
3 400mhz):δ＝8.47-8.41(m,2h),7.87-7.82(m,1h),1.40(s,18h),1.26(s,9h)。
[0406]
步骤3.叔丁基(叔丁氧基羰基)(1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基)氨基甲酸酯
[0407][0408]
将水性nahco3(饱和，500ml)添加到叔丁4-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-甲酸酯(63g，粗)的meoh(1.5l)溶液中。将反应混合物在15℃下搅拌16hr。lcms显示，起始材料反应完全，并且检测到所希望的ms主峰。浓缩反应混合物以除去meoh，将混合物用水(1.5l)稀释。将混合物过滤，并将滤饼用正己烷(200ml)洗涤，得到呈白色固体的叔丁基(叔丁氧基羰基)(1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基)氨基甲酸酯。lc-ms(esi)m/z 335.4[m h]
。1h nmr(400mhz,meod):δ＝8.39(s,1h),8.23(d,j＝5.6,1h),7.67(d,j＝5.6,1h),1.32(s,18h)。
[0409]
步骤4.叔丁基(叔丁氧基羰基)(7-氯-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基)氨基甲酸酯
[0410][0411]
向叔丁基(叔丁氧基羰基)(1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基)氨基甲酸酯(42.6g，127.4mmol)的dcm(852ml)溶液中添加ncs(34g，254.8mmol)。将混合物在60℃下搅拌16hr。lcms显示检测到38％所希望的质量。将混合物浓缩，并通过快速柱层析纯化(pe/ea＝1/1)，得到呈黄色固体的叔丁基(叔丁氧基羰基)(7-氯-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基)氨基甲酸酯。lc-ms(esi)m/z 369.3[m h]
。
[0412]
中间体k：叔丁基(2r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-碘己酸酯
[0413][0414]
步骤1.叔丁基n
2-(叔丁氧基羰基)-n
5-甲氧基-n
5-甲基-d-谷氨酰胺酯
[0415][0416]
向(r)-5-(叔丁氧基)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氧代戊酸(5.0g，16.5mmol，1当量)、hobt(2.4g，18.1mmol，1.1当量)、edc.hcl(3.5g，18.1mmol，1.1当量)和tea(6.9ml，49.4mmol，3当量)的二氯甲烷(100ml)溶液中添加dmha(1.7g，18.1mmol，1.1当量)。将反应混合物在22℃-26℃下搅拌18小时。tlc(pe/etoac＝1/1，pf＝0.8)显示反应完成。将混合物浓缩，并将残余物通过硅胶柱纯化(pe中的30％etoac)，得到呈无色油状的叔丁基n
2-(叔丁氧基羰基)-n
5-甲氧基-n
5-甲基-d-谷氨酰胺酯。1h nmr(cdcl
3 400mhz):δ5.18(d,j＝8.0hz,1h),4.15-4.25(m,1h),3.67(s,3h),3.17(s,3h),2.41-2.63(m,2h),2.08-2.22(m,1h),1.88-1.97(m,1h),1.46(s,9h),1.44(s,9h)。
[0417]
步骤2叔丁基(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氧代己酸酯
[0418][0419]
在n2下，在-78℃下向叔丁基n
2-(叔丁氧基羰基)-n
5-甲氧基-n
5-甲基-d-谷氨酰胺酯(1g，2.9mmol，1当量)的甲苯(15ml)溶液中经15min添加甲基溴化镁(2.9ml，己烯中3m溶液，8.7mmol，3当量)。将反应加热并在-5℃-0℃下搅拌3.5小时。tlc(pe中的30％etoac，rf＝0.75)显示反应完成。将反应混合物用水性hcl(1m)淬灭并用乙酸乙酯(3*50ml)萃取。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶柱层析法纯化(石油醚中15％乙酸乙酯)，得到呈无色油状的叔丁基(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氧代己酸酯。1h nmr(cdcl
3 400mhz):δ5.06(d,j＝7.6hz,1h),4.10-4.20(m,1h),2.39-2.63(m,2h),2.15(s,3h),2.03-2.12(m,1h),1.74-1.89(m,1h),1.46(s,9h),1.44(s,9h)。
[0420]
步骤3叔丁基(2r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-羟基己酸酯
[0421][0422]
将nabh4(230mg，6.0mmol，1.5当量)添加到叔丁基(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氧代己酸酯(1.2g，4mmol，1当量)的thf(10ml)溶液中。将反应混合物加热并在50℃下搅拌2.5小时。tlc(pe中30％etoac，rf＝0.25)显示反应完成。将所得混合物用水性nh4cl(30ml)淬灭并用乙酸乙酯(3*50ml)萃取。将有机层用盐水(3*30ml)洗涤，经na2so4干燥，过
滤和浓缩，得到呈无色油状的叔丁基(2r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-羟基己酸酯。1h nmr(cdcl
3 400mhz):δ5.04-5.24(m,1h),4.13-4.27(m,1h),3.78-2.88(m,1h),1.59-1.90(m,4h),1.47(s,9h),1.44(s,9h),1.20(dd,j＝6.4,2.0hz,3h)。
[0423]
步骤4叔丁基(2r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-碘己酸酯
[0424][0425]
将碘(502mg，2mmol，1.2当量)添加到叔丁基(2r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-羟基己酸酯(500mg，1.6mmol，1当量)、pph3(518.7mg，2mmol，1.2当量)和咪唑(224.4mg，3mmol，2当量)的甲苯(5ml)溶液中，将其用n2吹扫。将反应混合物加热并在80℃下搅拌18h。tlc(pe中20％etoac，rf＝0.7，发烟i2)显示反应完成。将混合物冷却至室温并浓缩。将残余物通过制备型tlc纯化(pe中20％etoac)，得到呈黄色油状的叔丁基(2r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-碘己酸酯。1h nmr(cdcl3400mhz):δ5.06(d,j＝6.4hz,1h),4.08-4.29(m,2h),1.67-2.06(m,7h),1.48(d,j＝2.0hz,9h),1.44(s,9h)。
[0426]
中间体l.(r)-叔丁基(5-(3-溴-5-氯-2-(羟基甲基)苯氧基)-1-甲氧基戊-2-基)氨基甲酸酯
[0427][0428]
步骤1.向2-溴-4-氯-6-羟基苯甲醛(330mg，1.4mmol)和叔丁基(r)-(5-碘-1-甲氧基戊-2-基)氨基甲酸酯(中间体d)(600mg，1.7mmol)dmf(10ml)溶液中添加k2co3(580mg,4.2mmol)。将混合物在室温下搅拌16h。将溶剂在真空下去除，并将残余物通过硅胶柱层析法纯化(用pe:ea＝2:1洗脱)，得到呈无色粘稠油状的(r)-叔丁基(5-(3-溴-5-氯-2-甲酰基苯氧基)-1-甲氧基戊-2-基)氨基甲酸酯(3)。ms(esi)m/z:c
18h25
brclno5计算质量449.06,发现值471.6,473.6,475.7[m na,br,cl]
.1h nmr(400mhz,cdcl3)δ10.34(s,1h),7.25(s,1h),6.93(s,1h),4.81(d,j＝8hz,1h),4.10-4.04(m,2h),3.74(s,1h),3.43-3.36(m,2h),3.34(s,3h),1.95-1.86(m,2h),1.79-1.73(m,1h),1.67-1.63(m,1h),1.43(s,9h)。
[0429]
步骤2.在室温下向(r)-叔丁基(5-(3-溴-5-氯-2-甲酰基苯氧基)-1-甲氧基戊-2-基)氨基甲酸酯(3)(360mg，0.8mmol)thf(10ml)溶液中添加nabh4(36mg，0.96mmol)。将混合物在室温下搅拌3h。用nh4cl(水性，5ml)淬灭反应，并用ea(30ml
×
2)萃取。将合并的有机层用盐水(20ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤和浓缩，得到呈淡黄色固体的(r)-叔丁基(5-(3-溴-5-氯-2-(羟基甲基)苯氧基)-1-甲氧基戊-2-基)氨基甲酸酯。ms(esi)m/z:c
18h27
brclno5计算质量451.08,发现值473.6,475.7,477.6[m na,br,cl]
.1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.28(s,1h),7.21(s,1h),6.82(s,1h),4.81(s,2h),4.12(dd,j＝12,8hz,1h),4.06-3.99(m,2h),3.82-3.73(m,1h),3.45-3.33(m,5h),1.92-1.85(m,2h),1.79-1.62(m,2h),1.43(s,9h)。
[0430]
中间体m.甲基o-(2-((6-氨基-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氟苯基)-l-高丝氨酸酯
[0431]
将cs2co3(123mg，0.377mmol)、四正丁基碘化铵(139mg，0.38mmol)、叔丁基(叔丁氧基羰基)(9-(2,3-二氟-6-羟基苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯(150mg，0.31mmol)和甲基(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-碘丁酸盐(162mg，0.47mmol)的丙酮(3ml)溶液加热至50℃持续3hr。lc-ms指示反应完成。将混合物冷却并浓缩。将混合物用ea(20ml)和h2o(20ml)处理。用ea(10ml*3)萃取混合物。将合并的有机层用盐水洗涤，经nas2so4干燥，过滤并蒸发至干燥。将残余物通过biotage纯化，用正己烷ea洗脱(0至50％)，得到呈浅黄色固体的甲基o-(2-((6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氟苯基)-n-(叔丁氧基羰基)-l-高丝氨酸酯。lcms esi m/z m 1＝692.7。
[0432]
向甲基o-(2-((6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氟苯基)-n-(叔丁氧基羰基)-l-高丝氨酸酯(167mg，0.43mmol)在dcm(3ml)的溶液中添加tfa(0.66ml，8.5mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1hr，蒸发溶剂，得到残余物，将其不经纯化即用于下一步骤。lcms esi m/z m 1＝392.8。
[0433]
实施例
[0434]
实施例1.(r)-9-(6-((4-氨基-5-甲氧基戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-胺
[0435][0436]
步骤1.叔丁基(r)-(叔丁氧基羰基)(9-(6-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-甲氧基戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯(1-1)
[0437][0438]
向叔丁基(r)-(5-碘-1-甲氧基戊-2-基)氨基甲酸酯(中间体d)(1.9g，5.5mmol)和叔丁基(r)-(叔丁氧基羰基)(9-(6-羟基-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯(中间体c)(2g，3.9mmol)的dmf(20ml)混合物中添加k2co3(1.5g，11.1mmol)。将混合物在室温下搅拌12小时。将反应混合物用h2o稀释并用etoac萃取。将有机层经na2so4干燥，并且在减压下浓缩，得到粗产物。将粗产物通过快速柱层析法纯化，得到油状的叔丁基(r)-(叔丁氧基羰基)(9-(6-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-甲氧基戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯(1-1)。lc-ms：[m h]
＝725.3。
[0439]
步骤2.(r)-9-(6-((4-氨基-5-甲氧基戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-胺
[0440][0441]
向1-1(2.5g，4.1mmol)的ch2cl2(20ml)溶液中添加tfa(5ml)。将所得混合物搅拌2小时。将反应混合物在真空下浓缩，给出粗产物。将粗产物通过制备型hplc纯化(柱：boston green ods 150*30 5u，梯度：15％-45％b(a＝水(0.1％tfa)，b＝乙腈)，流速：30ml/min)，得到tfa固体，将其通过制备型hplc进一步纯化(柱子：boston green ods 150*30 5u，梯度：25％-55％b(水(0.05％氢氧化铵v/v)-ch3cn)，流速：25ml/min)，得到呈白色粉末的实施例1。1h nmr(400mhz,meoh-d4):δ8.25(s,1h),7.78(s,1h),7.56(d,j＝8.8hz,1h),7.06(d,j＝9.2hz,1h),5.58(s,2h),4.04(t,j＝6.0hz,2h),3.31(s,3h),3.27-3.24(m,1h),3.13-3.08(m,1h),2.87-2.85(m,1h),1.82-1.63(m,2h),1.44-1.35(m,2h)。lc-ms：[m h]
＝425.0。
[0442]
遵循与实施例1类似的程序，从相应的中间体制备以下实施例。
[0443][0444]
实施例5.(r)-7-(6-((4-氨基-5-甲氧基戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
[0445][0446]
步骤1.叔丁基(r)-(5-(3,4-二氯-2-甲酰基苯氧基)-1-甲氧基戊-2-基)氨基甲酸酯
[0447]
将叔丁基(r)-(5-碘-1-甲氧基戊-2-基)氨基甲酸酯(中间体d)(620mg，1.8mmol)、2,3-二氯-6-羟基苯甲醛(中间体a)(414mg，2.2mmol)和碳酸钾(499mg，3.6mmol)在dmf(10ml)混合物在60℃下搅拌过夜。将反应混合物用etoac稀释，用水和盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩。通过isco(硅胶，己烷中0-30％etoac)得到呈无色油状的叔丁基(r)-(5-(3,4-二氯-2-甲酰基苯氧基)-1-甲氧基戊-2-基)氨基甲酸酯。lcms esi m/z m/m 2(-100)＝306.0/308.0。
[0448]
步骤2.叔丁基((2r)-5-(3,4-二氯-2-(羟基(4-(甲硫基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]
7-(6-((4-氨基-5-甲氧基戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺。lcms esi m/z m/m 2＝424.9/427.0。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.11(s,1h),7.46(d,j＝8.9hz,1h),7.00(d,j＝8.6hz,1h),6.92(s,1h),4.44(s,2h),4.06-3.95(m,2h),3.29(s,3h),3.22-3.15(m,1h),3.08-2.99(m,1h),2.89-2.76(m,1h),1.83-1.62(m,2h),1.40-1.18(m,2h)。
[0457]
遵循与实施例5类似的程序，从相应的中间体制备以下实施例。
[0458][0459]
实施例8.(r)-8-(6-((4-氨基-5-甲氧基戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-胺
[0460][0461]
步骤1.叔丁基((2r)-5-(3,4-二氯-2-(羟基(4-(甲基(苯基)氨基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)苯氧基)-1-甲氧基戊-2-基)氨基甲酸酯
[0462][0463]
在-78℃下，向8-碘-n-甲基-n-苯基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-胺(519mg，1.5mmol)的thf(12ml)溶液中添加正丁基锂(0.96ml，1.9mmol)。将所得混合物在-78℃下搅拌15min，并将溶液在-78℃下转移到叔丁基(r)-(5-(3,4-二氯-2-甲酰基苯氧基)-1-甲氧
基戊-2-基)氨基甲酸酯(300mg，0.74mmol)在5ml thf的预冷溶液中。将反应混合物在-78℃下搅拌10min，加热至室温。将反应混合物用饱和nh4cl水溶液淬灭并用etoac萃取。将有机层用盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩。通过isco(硅胶，己烷中0-70％etoac)获得叔丁基((2r)-5-(3,4-二氯-2-(羟基(4-(甲基(苯基)氨基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)苯氧基)-1-甲氧基戊-2-基)氨基甲酸酯。lcms esi m/z m/m 2＝631.9/633.9。
[0464]
步骤2.(r)-8-(6-((4-氨基-5-甲氧基戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-n-甲基-n-苯基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-胺
[0465][0466]
将碘化钠(487mg，3.2mmol)和tmscl(0.41ml，3.2mmol)的乙腈(10ml)混合物在室温下搅拌15min，随后添加3ml叔丁基((2r)-5-(3,4-二氯-2-(羟基(4-(甲基(苯基)氨基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)苯氧基)-1-甲氧基戊-2-基)氨基甲酸酯(205mg，0.32mmol)乙腈溶液。将所得混合物在室温下搅拌2hr。将反应混合物用饱和na2so3水溶液淬灭，并用etoac萃取。将有机层用盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩。将粗产物不经纯化即用于下一步骤。lcms esi m/z m/m 2＝515.4/517.3
[0467]
步骤3.(r)-8-(6-((4-氨基-5-甲氧基戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-胺
[0468][0469]
将(r)-8-(6-((4-氨基-5-甲氧基戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-n-甲基-n-苯基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-胺(167mg，0.32mmol)在氨(3ml，21mmol)(在meoh中7n)中的混合物在密封管中在100℃下加热过夜。将反应混合物浓缩。将粗产物通过制备型hplc纯化(c18，氨碱性条件)，得到呈白色粉末状的(r)-8-(6-((4-氨基-5-甲氧基戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-胺。lcms esi m/z m/m 2＝425.1/427.1。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.07(s,1h),7.60(s,1h),7.39(d,j＝8.9hz,1h),6.96(d,j＝8.9hz,1h),4.23(s,2h),4.03(t,j＝6.1hz,2h),3.31(s,3h),3.28-3.24(m,1h),3.13-3.06(m,1h),2.93-2.87(m,1h),1.90-1.71(m,2h),1.49-1.30(m,2h)。
[0470]
遵循与实施例8类似的程序，从相应的中间体制备以下实施例。
[0471]
[0472]
[0473][0474]
实施例18.(r)-1-(6-((4-氨基-5-甲氧基戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-7-氯-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺
[0475][0476]
步骤1.叔丁基(r)-(1-(6-((4-氨基-5-甲氧基戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-7-氯-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯
[0477][0478]
在0℃下向叔丁基(叔丁氧基羰基)(7-氯-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基)氨基甲酸酯(中间体j)(400mg，0.98mmol)、叔丁基(r)-(5-(3,4-二氯-2-(羟基甲基)苯氧基)-1-甲氧基戊-2-基)氨基甲酸酯(434mg，1.2mmol)和dtad(903mg，3.9mmol)的thf(8ml)溶液中添加bu3p(793mg，3.9mmol)。将混合物在25℃下搅拌16小时。lcms(c-07037-068-1a)显示出一个所希望的ms主峰。将反应通过快速柱层析纯化，得到呈无色油状的叔丁基(r)-(1-(6-((4-氨基-5-甲氧基戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-7-氯-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯。lcms esi m/z m 1＝760.4。
[0479]
步骤2.(r)-1-(6-((4-氨基-5-甲氧基戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-7-氯-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺
[0480][0481]
使叔丁基(r)-(1-(6-((4-氨基-5-甲氧基戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-7-氯-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯(580mg，0.76mmol)的tfa/dcm(10ml，vtfa/vdcm＝2/5)溶液在25℃下反应4小时。将反应混合物用nh3
·
h2o调节至ph＝8。浓缩反应混合物，得到残余物。将残余物通过制备型hplc纯化，得到(r)-1-(6-((4-氨基-5-甲氧基戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-7-氯-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺。lcms esi m/z m 1＝460.3。1h nmr：(400mhz,meod)δ＝7.71(s,1h),7.64-7.57(m,2h),7.09(d,j＝9.0hz,1h),5.96(s,2h),4.08-3.97(m,2h),3.29(s,3h),3.25-3.07(m,1h),3.05-2.94(m,1h),2.81-2.64(m,1h),1.81-1.69(m,1h),1.68-1.57(m,1h),1.32-1.21(m,1h),1.18-1.06(m,1h)。
[0482]
实施例19.(s)-9-((2-(2-氨基-3-甲氧基丙氧基)萘-1-基)甲基)-9h-嘌呤-6-胺
[0483][0484]
步骤1.叔丁基(叔丁氧基羰基)(9-((2-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲氧基丙氧基)萘-1-基)甲基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯
[0485][0486]
叔丁基(1-((1-(羟基甲基)萘-2-基)氧基)-3-甲氧基丙-2-基)氨基甲酸酯，遵循类似于中间体i的步骤制备。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.17-8.14(d,j＝8.6hz,1h),7.85-7.81(t,j＝8.6hz,2h),7.56-7.53(t,j＝7.7hz,1h),7.41-7.37(t,j＝7.5hz,1h),7.32-7.30(d,j＝9.2hz.1h),5.21-5.18(m,3h),4.29-4.24(m,3h),3.73-3.69(dd,j＝9.5,3.1hz,1h),3.63-3.59(dd,j＝9.4,4.9hz,1h),3.42(s,3h),1.75(bs,1h),1.47(s,9h)。ms(esi)m/z:c
20h27
no5的计算值361.2；发现值383.9[m na]
。
[0487]
在0℃下向叔丁基(1-((1-(羟基甲基)萘-2-基)氧基)-3-甲氧基丙-2-基)氨基甲酸酯(0.35g，0.96mmol)、叔丁基(叔丁氧基羰基)(9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯(中间体b)(0.39g，1.2mmol)和dtad(0.89g，3.8mmol)的thf(20ml)溶液中添加bu3p(0.78g，3.6mmol)。将混合物在室温下搅拌16h。将反应浓缩得到残余物，并将残余物通过快速柱层析纯化，得到呈黄色油状的叔丁基(叔丁氧基羰基)(9-((2-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲氧基丙氧基)萘-1-基)甲基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯。ms(esi)m/z:c
35h46
n6o8的计算值678.3；发现值678.8[m h]
.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.02(s,1h),8.16-8.14(d,j＝8.3hz,1h),7.97-7.94(d,j＝9.1hz,1h),7.86-7.84(d,j＝8.1hz,1h),7.55-7.51(m,2h),7.43-7.39(t,j＝8.0hz,2h),5.95(s,2h),5.41-5.43(m,1h),4.39-4.25(m,3h),3.60-3.57(dd,j＝9.3,3.2hz,1h),3.51-3.43(m,1h),3.34(s,3h),1.47(s,18h),1.45(s,9h)。
[0488]
步骤2. 9-((2-(2-氨基-3-甲氧基丙氧基)萘-1-基)甲基)-9h-嘌呤-6-胺
[0489][0490]
在室温下向叔丁基(叔丁氧基羰基)(9-((2-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲氧基丙氧基)萘-1-基)甲基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯(0.22g，0.32mmol)的dcm(7ml)溶液中添加hcl/二恶烷(7ml)。将混合物在室温下搅拌16h。浓缩反应混合物，得到残余物。将残余物通过制备型hplc纯化，得到呈白色固体状的9-((2-(2-氨基-3-甲氧基丙氧基)萘-1-基)甲基)-9h-嘌呤-6-胺。ms(esi)m/z:c
20h22
n6o2的计算值378.2；发现值378.9[m h]
.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.33(s,1h),8.18-8.15(d,j＝8.7hz,1h),8.00-7.97(d,j＝9.3hz,1h),7.89-7.86(d,j＝8.2hz,1h),7.67(s,1h),7.58-7.44(m,2h),7.41-7.36(t,j＝7.5hz,1h),5.87(s,2h),4.26-4.10(m,2h),3.43-3.34(m,2h),3.32-3.29(m,4h)。
[0491]
步骤3.(s)-9-((2-(2-氨基-3-甲氧基丙氧基)萘-1-基)甲基)-9h-嘌呤-6-胺
[0492][0493]
将对映异构体的混合物通过手性sfc分离，得到两种产物。lcms esi m/z m 1＝379.2。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δppm 3.30(s,3h)3.35-3.41(m,2h)4.13-4.26(m,2h)5.89(s,2h)7.40(ddd,j＝8.04,6.97,0.88hz,1h)7.48(d,j＝9.13hz,1h)7.54(ddd,j＝8.51,6.94,1.31hz,1h)7.67(s,1h)7.88(d,j＝8.13hz,1h)8.00(d,j＝9.13hz,1h)8.18(d,j＝8.63hz,1h)8.32-8.36(m,1h)。
[0494]
从对应中间体(例如，叔丁基(r)-(5-((6-溴-1-(羟基甲基)萘-2-基)氧基)-1-甲氧基戊-2-基)氨基甲酸酯(实施例20的中间体i)，遵循与实施例19类似的程序，制备以下实施例。
[0495][0496]
实施例22.(r)-9-(2-溴-4-氯-6-((5-甲氧基-4-(甲基氨基)戊基)氧基)苄基)-9h-嘌呤-6-胺
[0497][0498]
步骤1.(r)-叔丁基(9-(2-溴-6-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-甲氧基戊基)氧基)-4-氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯
[0499]
在0℃下向(r)-叔丁基(5-(3-溴-5-氯-2-(羟基甲基)苯氧基)-1-甲氧基戊-2-基)氨基甲酸酯(中间体l)(300mg，0.66mmol)、叔丁基(叔丁氧基羰基)(9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯(中间体b)(270mg，0.79mmol)和dead(350mg，2mmol)的thf(15ml)溶液中添加pph3(520mg，2mmol)。将混合物在30℃下搅拌16h。浓缩反应混合物，得到残余物。将残余物通过硅胶柱层析法纯化(pe/ea＝10/1至5/1)，得到呈无色粘稠油状的(r)-叔丁基(9-(2-溴-6-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-甲氧基戊基)氧基)-4-氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯。ms(esi)m/z:c
33h46
brcln6o8的质量计算值768.22，发现值768.7[m h]
。
[0500]
步骤2.叔丁基(r)-(9-(2-溴-6-((4-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-5-甲氧基戊基)氧基)-4-氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯
[0501]
在5℃下向(r)-叔丁基(9-(2-溴-6-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-甲氧基戊基)氧基)-4-氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯(135mg，0.18mmol)的dmso(10ml)溶液中添加nah(22mg，0.53mmol)。将反应混合物在5℃下搅拌0.5h，然后添加mei(50mg，0.35mmol)。将混合物缓慢加热至室温，并在室温下搅拌2h。将混合物用ea(20ml)和水(10ml)稀释，将分离的有机层经无水na2so4干燥，过滤并浓缩，得到残余物。将残余物通过硅胶柱层析法纯化(dcm/meoh＝10:1)，得到呈无色油状的叔丁基(r)-(9-(2-溴-6-((4-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-5-甲氧基戊基)氧基)-4-氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯。ms(esi)m/z:c34h48brcln6o8的质量计算值782.24，发现值782.5[m h]
。
[0502]
步骤3.(r)-9-(2-溴-4-氯-6-((5-甲氧基-4-(甲基氨基)戊基)氧基)苄基)-9h-嘌呤-6-胺
[0503]
在0℃下向叔丁基(r)-(9-(2-溴-6-((4-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-5-甲氧基戊基)氧基)-4-氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯(93mg，0.12mmol)的dcm(5ml)溶液中添加hcl/二恶烷(4m，0.6ml)。将混合物在30℃下搅拌3h。将反应混合物浓缩得到残余物，并将残余物通过制备型hplc纯化(gemin-c18x21.2mm，5μm，流动相是ch3cn％(ch3cn/h2o，含0.5％nh3·
h2o)，经0.5h从10％至50％)并用饱和水性nahco3/h2o中
和，给出呈白色固体的(r)-9-(2-溴-4-氯-6-((5-甲氧基-4-(甲基氨基)戊基)氧基)苄基)-9h-嘌呤-6-胺。1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.27(s,1h),7.77(s,1h),7.39(s,1h),7.17(s,1h),5.54(s,2h),4.04(t,j＝5.5hz,2h),3.33(s,3h),3.28-3.21(m,2h),2.66-2.55(m,1h),2.32(s,3h),1.73-1.63(m,2h),1.52-1.32(m,2h)。ms(esi)m/z:c19h24brcln6o2的计算值482.08；发现值482.6 484.7[m
h,br]
。
[0504]
实施例23.(r)-2-氨基-5-(2-((6-氨基-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊酸
[0505][0506]
向叔丁基(r)-5-(2-((6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸酯(中间体f-5)(0.26g，0.41mmol)的二氯甲烷(5ml)中的逐滴添加三氟乙酸(5ml)，并将混合物在1℃-5℃下搅拌18hr。将混合物浓缩并通过制备型hplc纯化[柱：boston green ods:150*30mm*5um，梯度11％-41％b(a：水(0.1％tfa)，b(乙腈))]，得到呈白色固体状的(r)-2-氨基-5-(2-((6-氨基-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊酸(tfa盐)。1h nmr(400mhz,meoh-d4):δ8.34(s,1h),8.05(brs.,1h),7.58(d,j＝9.20hz,1h),7.09(d,j＝9.20hz,1h),5.66(s,2h),4.14(brs.,2h),4.00(brs.,1h),1.85-2.09(m,4h)。lc-ms：[m h]
＝424.9。lcms esi m/z m 1＝459.0。
[0507]
实施例24.(r)-2-氨基-5-(2-((4-氨基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊酸
[0508][0509]
将甲基(r)-2-氨基-5-(2-((4-氨基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊酸酯(25mg，0.057mmol)的氢氧化锂(0.28ml，0.28mmol)和thf(2ml)混合物在室温下搅拌2hr。将反应混合物用1n hcl中和并浓缩以除去thf。将在水中的粗混合物用meoh稀释并转移至制备型hplc，得到呈白色粉末状的(r)-2-氨基-5-(2-((4-氨基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊酸。lcms esi m/z m/m 2＝424.9/426.9。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.11(s,1h),7.45(d,j＝8.9hz,1h),7.03(d,j＝9.0hz,1h),6.96(s,1h),4.45(s,2h),4.09-4.00(m,2h),3.42-3.35(m,1h),1.87-1.73(m,4h)。
[0510]
遵循与实施例24类似的程序，从相应的中间体制备以下实施例。
[0511][0512]
实施例29.乙基(r)-2-氨基-5-(2-((6-氨基-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊酸酯
[0513][0514]
向叔丁基(r)-5-(2-((6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸酯(中间体f-5)(120g，153.5mmol)的etoh溶液(1.2l)中逐滴添加亚硫酰氯(120ml，1.5mol)，并将混合物在70℃下搅拌24hr。将混合物浓缩并将粗品溶解于水(500ml)中。将混合物用饱和nahco3溶液碱化至ph 8。滤出悬浮液，并将固体溶解于dcm/tfa溶液中(10:1v/v)。将反应混合物在真空下浓缩，并将粗品通过制备型hplc纯化[柱：phenomenex synery:max-rp 250*80mm 10um，梯度20％-50％b(a：水(0.1％tfa)，b(乙腈))]，得到呈白色固体状的乙基(r)-2-氨基-5-(2-((6-氨基-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊酸酯(tfa盐)。1h nmr(400mhz,meoh-d4):δ8.41(s,1h),8.17(s,1h),7.59(d,j＝8.8hz,1h),7.11(d,j＝8.80hz,1h),5.71(s,2h),4.33-4.27(m,
2h),4.16(t,j＝6.0hz,2h),4.11(t,j＝6.2hz,2h),2.12-1.90(m,4h),1.29(t,j＝7.2hz,3h)。lc-ms：[m h]
＝453.1。
[0515]
实施例30.乙基(2r)-2-氨基-5-(2-((6-氨基-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)己酸酯
[0516][0517]
步骤1.叔丁基(2r)-5-(2-((6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)己酸酯
[0518][0519]
将碳酸钾(135.4mg，979μmol，2.5当量)添加到叔丁基(2r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-碘己酸酯(中间体k)(200mg，392μmol，1当量)和叔丁基(叔丁氧基羰基)(9-(2,3-二氯-6-羟基苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯(162mg，392μmol，1当量)的dmf(15ml)溶液中。将反应混合物在40℃下搅拌18小时。lcms显示观察到所希望的产物。将混合物用水(20ml)稀释并且用乙酸乙酯(3*20ml)萃取。将有机层用盐水(3*50ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并在真空下浓缩，得到呈黄色胶状的叔丁基(2r)-5-(2-((6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)己酸酯。lcms(esi)m/z 795.3[m h]
。
[0520]
步骤2.(2r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(2-((6-((叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)己酸
[0521][0522]
向叔丁基(2r)-5-(2-((6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)己酸酯(250mg，314μmol，1当量)的thf(5ml)中的添加lioh(0.2g，8.35mmol)、meoh(5ml)和h2o(5ml)。将混合物在24℃-31℃下搅拌14h。lcms显示反应完成。将溶液使用1m盐酸调节至ph＝3。添加水(10ml)并用二氯甲烷(2*10ml)萃取。
将有机层用盐水(10ml)洗涤，经na2so4干燥，并过滤。将混合物在真空下浓缩，得到呈白色固体状的(2r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(2-((6-((叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)己酸。lc-ms(esi)m/z 639.0[m h]
。
[0523]
步骤3.乙基(2r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(2-((6-((叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)己酸酯
[0524][0525]
向(2r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(2-((6-((叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)己酸(200mg，270.4μmol，1当量)的dmf(10ml)溶液中的添加nahco3(68.15mg 811.2umol，3当量)和eti(46.39mg，297.44umol，1.1当量)。将混合物在24℃-31℃下搅拌14h。lcms显示反应完成。将混合物用水(10ml)淬灭并用乙酸乙酯(3*10ml)萃取。将有机层用盐水(10ml)洗涤，经na2so4干燥，并过滤。将混合物在真空下浓缩，提供粗产物。将残余物通过硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝2:3)，得到呈无色油状的乙基(2r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(2-((6-((叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)己酸酯。lc-ms(esi)m/z 667.1[m h]
。
[0526]
步骤4.乙基(2r)-2-氨基-5-(2-((6-氨基-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)己酸酯
[0527][0528]
向乙基(2r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(2-((6-((叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)己酸酯(200mg，270.4μmol，1当量)的二氯甲烷(5ml)溶液中添加tfa(5ml)并在25℃-31℃下搅拌4h。lcms显示反应完成。将混合物通过制备型hplc纯化(柱：boston green ods150*30 5u.梯度26％-36％b(a：水(0.1％tfa)，b：ch3cn))，得到呈白色固体状的乙基(2r)-2-氨基-5-(2-((6-氨基-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)己酸酯。1h nmr(meod 400mhz):8.38(s,1h),8.09(s,1h),7.57(d,j＝9.20hz,1h),7.09(d,j＝9.20hz,1h),5.67(s,2h),4.59-4.67(m,1h),4.22-4.31(m,2h),4.01-4.07(m,1h),1.68-2.03(m,4h),1.2-1.3(m,3h),1.19(d,j＝5.60hz,3h)。lc-ms(esi)m/z 467.1.0[m h]
。
[0529]
遵循与实施例31类似的程序，从相应的中间体制备以下实施例。
[0530][0531][0532]
实施例34.甲基(r)-2-氨基-5-(2-((4-氨基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊酸酯
[0533][0534]
将甲基(r)-2-氨基-5-(3,4-二氯-2-((4-(甲硫基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)苯氧基)戊酸酯(35mg，0.074mmol)在氨(2ml，14mmol)(meoh中的7n)中的混合物密封在微波管中并在100℃下加热2hr。将反应混合物浓缩。将粗产物通过isco纯化(硅胶，dcm中0-15％meoh)，以除去一级酰胺副产物，然后转移至制备型hplc，得到甲基(r)-2-氨基-5-(2-((4-氨基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊酸酯。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.11(s,1h),7.46(d,j＝8.9hz,1h),7.00(d,j＝9.0hz,1h),6.94(s,1h),4.45(s,2h),4.01(t,j＝5.8hz,2h),3.63(s,3h),3.38-3.32(m,1h),1.81-1.60(m,3h),1.60-1.47(m,1h)。lcms esi m/z m/m 2＝438.9/440.9。
[0535]
实施例35.(r)-2-氨基-5-(2-((4-氨基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊酰胺
[0536][0537]
步骤1.甲基(2r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(3,4-二氯-2-(羟基(4-(甲硫基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)苯氧基)戊酸酯
[0538][0539]
在-78℃下，向7-溴-4-(甲硫基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪(中间体g)(467mg，1.9mmol)的thf(15ml)溶液中逐滴添加正丁基锂(1.1ml，2.3mmol)，并将所得混合物在-78℃下搅拌15min。将碳负离子溶液在-78℃下快速转移到甲基(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(3,4-二氯-2-甲酰基苯氧基)戊酸酯(中间体h)(400mg，0.95mmol)的5ml thf预冷溶液中。将反应混合物在-78℃下搅拌10min，加热至室温并搅拌15min。将反应混合物用饱和nh4cl水溶液淬灭并用etoac萃取。将有机层用盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩。通过isco(硅胶，己烷中的0-70％etoac)得到呈黄色油状的甲基(2r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(3,4-二氯-2-(羟基(4-(甲硫基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)苯氧基)戊酸酯。lcms esi m/z m/m 2＝585.8/587.8。
[0540]
步骤2.甲基(r)-2-氨基-5-(3,4-二氯-2-((4-(甲硫基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)苯氧基)戊酸酯
[0541][0542]
将甲基(2r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(3,4-二氯-2-(羟基(4-(甲硫基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)苯氧基)戊酸酯(315mg，0.54mmol)、tfa(2.2ml，26.9mmol)和三乙基硅烷(4.3ml，26.9mmol)的chcl3(8ml)混合物在40℃下搅拌过夜。浓缩反应混合物，将残余物用etoac稀释，用饱和nahco3水溶液和盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩。将粗产物不经纯化即用于下一步骤。lcms esi m/z m/m 2＝467.8/469.8。
[0543]
步骤3.(r)-2-氨基-5-(2-((4-氨基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊酰胺
[0544][0545]
将甲基(r)-2-氨基-5-(3,4-二氯-2-((4-(甲硫基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)苯氧基)戊酸酯(50mg，0.11mmol)在氨(2ml，14mmol)中的混合物密封在微波管中并在100℃下加热过夜。将反应混合物浓缩。将粗产物通过isco纯化(硅胶，dcm0-20％meoh)，然后转移至制备型hplc，得到呈白色粉末状的(r)-2-氨基-5-(2-((4-氨基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊酰胺。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.11(s,1h),7.45(d,j＝8.9hz,1h),7.01(d,j＝9.0hz,1h),6.96(s,1h),4.45(s,2h),4.02(t,j＝6.1hz,2h),3.28-3.24(m,1h),1.82-1.61(m,3h),1.61-1.49(m,1h)。lcms esi m/z m/m 2＝423.9/425.9。
[0546]
实施例36.(r)-2-氨基-5-(2-((4-氨基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-n-环丙基戊酰胺
[0547][0548]
步骤1.叔丁基((2r)-1-(环丙基氨基)-5-(3,4-二氯-2-(羟基(4-(甲硫基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)苯氧基)-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸酯
[0549][0550]
将甲基(2r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(3,4-二氯-2-(羟基(4-(甲硫基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)苯氧基)戊酸酯(90mg，0.15mmol)的氢氧化锂(3ml，3mmol)和thf(5ml)混合物在室温下搅拌2hr。将反应混合物用1n hcl酸化至ph 3-4并用etoac萃取。将有机层用盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩。将残余物与环丙基胺(0.016ml，0.23mmol)、diea(0.080ml，0.46mmol)和丙基膦酸酐溶液(195mg，0.31mmol)在etoac(5ml)中混合并在室温下搅拌3hr。将反应混合物用etoac稀释，用饱和nahco3水溶液、柠檬酸水溶液和盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩。将粗产物不经纯化即用于下一步骤。lcms esi m/z m/m 2＝610.9/612.9。
[0551]
步骤2.(r)-2-氨基-n-环丙基-5-(3,4-二氯-2-((4-(甲硫基)咪唑并[2,1-f][1,
2,4]三嗪-7-基)甲基)苯氧基)戊酰胺
[0552][0553]
将叔丁基((2r)-1-(环丙基氨基)-5-(3,4-二氯-2-(羟基(4-(甲硫基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)苯氧基)-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸酯(80mg，0.13mmol)、tfa(0.50ml，6.5mmol)和三乙基硅烷(1ml，6.5mmol)的chcl3(2ml)混合物在40℃下搅拌过夜。浓缩反应混合物，将残余物在etoac和水之间分配。将有机层用盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩。将粗产物不经纯化即用于下一步骤。lcms esi m/z m/m 2＝494.9/496.9。
[0554]
步骤3.(r)-2-氨基-5-(2-((4-氨基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-n-环丙基戊酰胺
[0555][0556]
将(r)-2-氨基-n-环丙基-5-(3,4-二氯-2-((4-(甲硫基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)苯氧基)戊酰胺(60mg，0.10mmol)在氨(2ml，14mmol)中的混合物密封在微波管中并在100℃下加热2hr。将反应混合物浓缩。将粗产物转移至制备型hplc，得到(r)-2-氨基-5-(2-((4-氨基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-n-环丙基戊酰胺。lcms esi m/z m/m 2＝463.9/465.9。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.11(s,1h),7.45(d,j＝8.9hz,1h),7.00(d,j＝9.0hz,1h),6.94(s,1h),4.44(s,2h),4.01(t,j＝6.0hz,2h),3.16(t,j＝6.3hz,1h),2.64-2.57(m,1h),1.77-1.60(m,3h),1.59-1.48(m,1h),0.72-0.63(m,2h),0.50-0.35(m,2h)。
[0557]
实施例37.(r)-2-氨基-5-(2-((4-氨基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-n-环丙基戊酰胺
[0558][0559]
步骤1.n-甲基-n-苯基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-胺
[0560][0561]
将吡唑并[1,5-a][1,3,5]三唑-4(1h)-酮(2g，14.7mmol)、dmap(5.4g，44.1mmol)和pocl3(15.1ml，162mmol)的混合物在120℃下搅拌4hr。将所得混合物浓缩，并将残余物溶解于dcm(50ml)中并用n-甲基苯胺(6.4ml，58.8mmol)和tea(12.3ml，88mmol)处理。将反应混合物在室温下搅拌2hr。将反应混合物用dcm稀释，用水和盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩(如果存在不溶性材料，通过celite垫过滤)。通过isco(己烷0-50％etoac)，得到呈白色固体状的n-甲基-n-苯基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-胺。lcms esi m/z m 1＝226.0。
[0562]
步骤2. 8-碘-n-甲基-n-苯基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-胺
[0563][0564]
将n-甲基-n-苯基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-胺(1.5g，6.7mmol)和nis(1.9g，8.7mmol)的氯仿(30ml)混合物在80℃下搅拌1hr。将反应混合物用1n na2s2o3水溶液淬灭并用dcm萃取。将有机层用盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩。通过isco(硅胶，己烷0-30％etoac)得到呈浅棕色固体状的8-碘-n-甲基-n-苯基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-胺。lcms esi m/z m 1＝351.9。
[0565]
步骤3.甲基(2r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(3,4-二氯-2-(羟基(4-(甲基(苯基)氨基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)苯氧基)戊酸酯
[0566][0567]
在-78℃下，向8-碘-n-甲基-n-苯基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-胺(284mg，0.81mmol)的thf(10ml)溶液中添加正丁基锂(0.61ml，1.2mmol)。将所得混合物在-78℃下搅拌15min，并将溶液在-78℃下转移到甲基(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(3,4-二氯-2-甲酰基苯氧基)戊酸酯(中间体h)(170mg，0.404mmol)的4ml thf预冷溶液中。将反应混合物在-78℃下搅拌10min，加热至室温。将反应混合物用饱和nh4cl水溶液淬灭并用etoac萃取。将有机层用盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩。通过isco(硅胶，己烷0-50％etoac)得到甲基(2r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(3,4-二氯-2-(羟基(4-(甲基(苯基)氨基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)苯氧基)戊酸酯。lcms esi m/z m/m 2＝644.9/646.9。
[0568]
步骤4.叔丁基((2r)-1-(环丙基氨基)-5-(3,4-二氯-2-(羟基(4-(甲基(苯基)氨基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)苯氧基)-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸酯
[0569][0570]
将甲基(2r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(3,4-二氯-2-(羟基(4-(甲基(苯基)氨基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)苯氧基)戊酸酯(86mg，0.13mmol)的氢氧化锂(4ml，4mmol)和thf(6ml)混合物在室温下搅拌2hr。将反应混合物用1n hcl酸化至ph 3-4并用etoac萃取。将有机层用盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩。将残余物与环丙基胺(0.014ml，0.20mmol)、diea(0.14ml，0.80mmol)和丙基膦酸酐溶液(170mg，0.27mmol)在etoac(6ml)中混合，在室温下搅拌3hr。将反应混合物用etoac稀释，用饱和nahco3水溶液、柠檬酸水溶液和盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩。将粗产物不经纯化即用于下一步骤。lcms esi m/z m/m 2＝669.9/671.9。
[0571]
步骤5.(r)-2-氨基-n-环丙基-5-(3,4-二氯-2-((4-(甲基(苯基)氨基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)苯氧基)戊酰胺
[0572][0573]
将碘化钠(268mg，1.8mmol)和碘化钠(268mg，1.8mmol)的乙腈(2ml)混合物在室温下搅拌15min，之后添加叔丁基((2r)-1-(环丙基氨基)-5-(3,4-二氯-2-(羟基(4-(甲基(苯基)氨基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)苯氧基)-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸酯的乙腈(约1ml)溶液。将所得混合物在室温下搅拌1hr。将反应用饱和na2so3水溶液淬灭，并用etoac萃取。将有机层用盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩。通过isco(硅胶，dcm 0-10％meoh)得到(r)-2-氨基-n-环丙基-5-(3,4-二氯-2-((4-(甲基(苯基)氨基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)苯氧基)戊酰胺。lcms esi m/z m/m 2＝553.9/555.9。
[0574]
步骤6.(r)-2-氨基-5-(2-((4-氨基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-n-环丙基戊酰胺
[0575][0576]
将(r)-2-氨基-n-环丙基-5-(3,4-二氯-2-((4-(甲基(苯基)氨基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)苯氧基)戊酰胺(60mg，0.11mmol)在氨(2ml，14mmol)中的混合物密封在微波管中并在100℃下加热过夜。将反应混合物浓缩。将粗产物通过制备型hplc纯化，得到呈白色粉末状的(r)-2-氨基-5-(2-((4-氨基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-n-环丙基戊酰胺。lcms esi m/z m/m 2＝463.9/465.9。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.08(s,1h),7.62(s,1h),7.39(d,j＝9.6hz,1h),6.96(d,j＝8.9hz,1h),4.23(s,2h),4.03(t,j＝5.6hz,2h),3.22(t,j＝6.3hz,1h),2.65-2.57(m,1h),1.84-1.67(m,3h),1.67-1.57(m,1h),0.75-0.64(m,2h),0.49-0.36(m,2h)。
[0577]
遵循与实施例37类似的程序，从相应的中间体制备以下实施例。
[0578][0579]
[0580]
实施例44.(r)-2-氨基-5-(2-((4-氨基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊-1-醇
[0581][0582]
步骤1.甲基(2r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(3,4-二氯-2-(羟基(4-(甲基(苯基)氨基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)苯氧基)戊酸酯
[0583][0584]
在-78℃下，向8-碘-n-甲基-n-苯基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-胺(167mg，0.48mmol)的thf(4ml)溶液中添加正丁基锂(0.31ml，0.62mmol)。将所得混合物在-78℃下搅拌15min，并将溶液在-78℃下转移到甲基(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(3,4-二氯-2-甲酰基苯氧基)戊酸酯(100mg，0.24mmol)的2ml thf预冷溶液中。将反应混合物在-78℃下搅拌10min，加热至室温。将反应混合物用饱和nh4cl水溶液淬灭并用etoac萃取。将有机层用盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩。通过isco(硅胶，己烷0-70％etoac)得到甲基(2r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(3,4-二氯-2-(羟基(4-(甲基(苯基)氨基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)苯氧基)戊酸酯。lcms esi m/z m/m 2＝645.1/647.1。
[0585]
步骤2.甲基(r)-2-氨基-5-(3,4-二氯-2-((4-(甲基(苯基)氨基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)苯氧基)戊酸酯
[0586][0587]
将tms-cl(0.44ml，3.5mmol)和nai(522mg，3.5mmol)的乙腈(5ml)混合物在室温下搅拌10min，随后添加2ml甲基(2r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(3,4-二氯-2-(羟基(4-(甲基(苯基)氨基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)苯氧基)戊酸酯(225mg，0.35mmol)的乙腈溶液。将反应混合物在室温下搅拌3hr。将反应混合物用饱和na2so3水溶液淬灭，并用etoac萃取。将有机层用盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩。粗产物不经纯化即用于下一步骤。lcms esi m/z m/m 2＝529.1/531.1。
[0588]
步骤3.甲基(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(3,4-二氯-2-((4-(甲基(苯基)氨
基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)苯氧基)戊酸酯
[0589][0590]
将甲基(r)-2-氨基-5-(3,4-二氯-2-((4-(甲基(苯基)氨基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)苯氧基)戊酸酯(185mg，0.35mmol)、boc-酐(203μl，0.87mmol)和tea(146μl，1mmol)的dcm混合物在室温下搅拌2hr。将反应混合物用dcm稀释，用水和盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩。通过isco(硅胶，己烷0-50％etoac)得到甲基(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(3,4-二氯-2-((4-(甲基(苯基)氨基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)苯氧基)戊酸酯。lcms esi m/z m/m 2＝629.1/631.2。
[0591]
步骤4.叔丁基(r)-(5-(3,4-二氯-2-((4-(甲基(苯基)氨基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)苯氧基)-1-羟基戊-2-基)氨基甲酸酯
[0592][0593]
在0℃下，向甲基(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(3,4-二氯-2-((4-(甲基(苯基)氨基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)苯氧基)戊酸酯(150mg，0.24mmol)的dcm(5ml)溶液中添加dibal-h(1.2ml，1.2mmol)，并将反应混合物在0℃下搅拌15min。将反应混合物用饱和na2co3水溶液淬灭，并用etoac萃取。将有机层用盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩。通过isco(硅胶，己烷0-70％etoac)得到叔丁基(r)-(5-(3,4-二氯-2-((4-(甲基(苯基)氨基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)苯氧基)-1-羟基戊-2-基)氨基甲酸酯。lcms esi m/z m/m 2＝601.1/603.1。
[0594]
步骤5.(r)-2-氨基-5-(2-((4-氨基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊-1-醇
[0595][0596]
将叔丁基(r)-(5-(3,4-二氯-2-((4-(甲基(苯基)氨基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)苯氧基)-1-羟基戊-2-基)氨基甲酸酯(25mg，0.042mmol)的tfa(2ml，
26mmol)和dcm(5ml)混合物在室温下搅拌2hr，并将所得混合物浓缩。将残余物溶解于氨(2ml，14mmol)中并在100℃下在微波管中加热过夜。将反应混合物浓缩。将粗产物通过制备型hplc纯化(氨碱性条件)，得到(r)-2-氨基-5-(2-((4-氨基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊-1-醇。lcms esi m/z m/m 2＝411.1/413.1。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.07(s,1h),7.62(s,1h),7.39(d,j＝8.9hz,1h),6.97(d,j＝8.9hz,1h),4.23(s,2h),4.03(t,j＝6.1hz,2h),3.52-3.47(m,1h),3.30-3.26(m,1h),2.85-2.77(m,1h),1.93-1.72(m,2h),1.60-1.50(m,1h),1.42-1.33(m,1h)。
[0597]
实施例45.(r)-2-氨基-5-(2-((6-氨基-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊-1-醇
[0598][0599]
遵循与实施例45类似的程序，从相应的中间体制备实施例46。1h nmr(400mhz,meoh-d4):δ8.40(s,1h),8.13(s,1h),7.59(d,j＝7.2hz,1h),7.10(d,j＝7.2hz,1h),5.69(s,2h),4.14(t,j＝4.4hz,2h),3.78-3.75(m,1h),3.58-3.56(m,1h),3.28-3.24(m,1h),1.89-1.71(m,4h)。lcms esi m/z m/m 2＝411.1/423.1。
[0600]
实施例46. 1-(2-(4-氨基丁氧基)-4,6-二氯苄基)-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺
[0601][0602]
步骤1.叔丁基(1-(2-(烯丙基氧基)-4,6-二氯苄基)-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯
[0603][0604]
在n2下，在0℃下向(2-(烯丙基氧基)-4,6-二氯苯基)甲醇(500mg，2.1mmol)、叔丁基(叔丁氧基羰基)(1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基)氨基甲酸酯(719mg，2.1mmol)、ph3p(1125mg，4.3mmol)的thf(10ml)溶液中逐滴添加dead(0.849ml，4.29mmol)。将混合物加热至室温持续12hr，lc-ms指示反应完成。将混合物用ea(30ml)和h2o(50ml)处理。分离各层，并且将水层用ea(30ml*3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经na2so4干燥并过滤。将滤液浓缩。将残余物通过biotage纯化，用正己烷和ea(20％至50％)洗脱，得到呈浅黄色浆体状
的1-(2-(4-氨基丁氧基)-4,6-二氯苄基)-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺。lcms esi m/z m/m 2＝549.7/551.7。
[0605]
步骤2.叔丁基(叔丁氧基羰基)(1-(2,4-二氯-6-羟基苄基)-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基)氨基甲酸酯
[0606][0607]
在n2下，向叔丁基(1-(2-(烯丙基氧基)-4,6-二氯苄基)-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯(992mg，1.8mmol)和phsih3(390mg，3.6mmol)的dcm(5ml)溶液中添加pd(ph3p)4(208mg，0.180mmol)。在n2下，将混合物在25℃下搅拌1hr。lc-ms指示反应完成。用h2o(20ml)和dcm(20ml)处理混合物。分离各层，并且将水层用dcm(20ml*2)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经na2so4干燥并过滤。将滤液浓缩。将残余物通过biotage纯化，用正己烷和ea(0至70％)，洗脱，得到呈浅黄色固体状的叔丁基(叔丁氧基羰基)(1-(2,4-二氯-6-羟基苄基)-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基)氨基甲酸酯。lcms esi m/z m/m 2＝509.7/511.7。
[0608]
步骤3.叔丁基(叔丁氧基羰基)(1-(2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁氧基)-4,6-二氯苄基)-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基)氨基甲酸酯
[0609][0610]
将叔丁基(叔丁氧基羰基)(1-(2,4-二氯-6-羟基苄基)-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基)氨基甲酸酯(0.36g，0.71mmol)、叔丁基(4-溴丁基)氨基甲酸酯(0.27g，1.1mmol)、nai(0.21g，1.4mmol)和k2co3(0.20g，1.4mmol)的乙腈(3ml)混合物加热至50℃持续24hr。lc-ms指示反应完成。将混合物冷却至室温。将混合物用ea(20ml)和h2o(20ml)处理。分离各层，并且将水层用ea(20ml*3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经na2so4干燥并过滤。滤液不经纯化即用于下一步骤。lcms esi m/z m/m 1＝681.3/683.3。
[0611]
步骤4. 1-(2-(4-氨基丁氧基)-4,6-二氯苄基)-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺
[0612][0613]
向叔丁基(叔丁氧基羰基)(1-(2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁氧基)-4,6-二氯苄基)-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基)氨基甲酸酯(485mg，0.71mmol)的thf(5ml)和水(0.5ml)
溶液中添加tfa(1.1ml，14.3mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1hr，在25℃下蒸发溶剂。lcms显示产物产生。将残余物混合物通过hplc纯化，得到1-(2-(4-氨基丁氧基)-4,6-二氯苄基)-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺。lcms esi m/z m/m 2＝381.1/383.1。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.36(s,1h),8.10(s,1h),7.20(d,j＝1.9hz,1h),7.12(d,j＝2.0hz,1h),5.60(s,2h),4.29-4.06(m,3h),2.98(t,j＝7.1hz,2h),1.87-1.73(m,4h),1.30(dd,j＝7.8,5.7hz,1h)。
[0614]
实施例47.(r)-9-(6-((4-氨基-5-(2-甲氧基乙氧基)戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-胺
[0615][0616]
步骤1.叔丁基(9-(6-(烯丙基氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯
[0617][0618]
向冷却至0℃的(6-(烯丙基氧基)-2,3-二氯苯基)甲醇(11g，47.2mmol，1当量)、叔丁基(叔丁氧基羰基)(9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯(中间体b)(16.6g，49.5mmol，1.1当量)和pph3(24.8g，17.2mmol，2当量)的无水thf(350ml)溶液中逐滴添加diad(19.1g，17.2mmol，2当量)，在添加后，将反应混合物在30℃下搅拌12小时。lcms显示起始材料完全消耗，然后将混合物在真空下浓缩。将粗品通过硅胶柱层析法纯化(柱：石油醚:etoac，从0％至35％)，得到呈黄色固体状的叔丁基(9-(6-(烯丙基氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯。1h nmr(cdcl3 400mhz):δ8.90(s,1h),7.97(s,1h),7.46(d,j＝9.2hz,1h),6.84d,j＝8.8hz,1h),5.93-5.85(m,1h),5.34-5.26(m,2h),4.56-4.55(m,2h),4.15-4.10(m,2h),1.44(s,18h)。
[0619]
步骤2.叔丁基(叔丁氧基羰基)(9-(2,3-二氯-6-羟基苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯
[0620][0621]
将反应混合物在9℃-15℃下搅拌5min，用n2气保护，向叔丁基(9-(6-(烯丙基氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯(23g，41.2mmol，1当量)和phsih3(13.53g，126.2mmol，3当量)的dcm(300ml)溶液中添加pd(pph3)4(1.4g，1.2mmol，0.03当量)，将反应混合物在9℃-15℃下搅拌30min，lcms显示起始材料完全消耗，然后将混合物在真空下浓缩，得到呈棕色油状的叔丁基(叔丁氧基羰基)(9-(2,3-二氯-6-羟基苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯，将其不经进一步纯化即用于下一步骤。
[0622]
步骤3.叔丁基(r)-5-(2-((6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸酯
[0623][0624]
将叔丁基(叔丁氧基羰基)(9-(2,3-二氯-6-羟基苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯(23g，47mmol，1当量)、叔丁基(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-碘戊酸酯(中间体e)(18g，47mmol，1当量)和k2co3(12.5g，2.7mmol，2当量)的dmf(250ml)溶液在9℃-15℃下搅拌12小时。添加h2o(200ml)并用乙酸乙酯(3*200ml)萃取。将有机层经na2so4干燥并滤出。将滤液在真空下蒸发。将粗品通过硅胶柱层析法纯化(洗脱液：己烷:乙酸乙酯＝4:1)，得到呈黄色油状的叔丁基(r)-5-(2-((6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸酯。1h nmr(cdcl3400mhz):δ8.94(s,1h),7.99(s,1h),7.48(d,j＝8.80hz,1h),6.85(d,j＝9.20hz,1h),5.67(s,2h),5.23-5.21(m,1h),4.22-4.20(m,1h),4.05-4.02(m,2h),1.99-1.71(m,4h),1.46(s,36h)。
[0625]
步骤4.(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(2-((6-((叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊酸
[0626][0627]
将叔丁基(r)-5-(2-((6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸酯(20g，25.6mmol，1当量)和氢氧化锂(10.7g，256mmol，10当量)的水(100ml)、thf(100ml)和meoh(100ml)溶液在9℃-14℃下搅拌60小时。在真空下去除溶剂。添加乙酸乙酯(500ml)，使用hcl(6n)将混合物调节至ph＝7。将有机层分离，并将水层用乙酸乙酯(3*500ml)萃取，经na2so4干燥并在真空下蒸发，得到呈粉色胶状的(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(2-((6-((叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊酸。1h nmr(dmso 400mhz):δ10.07(s,1h),8.57(s,1h),6.28(s,1h),7.61(d,j＝8.80hz,1h),7.08(d,j＝9.20hz,1h),6.23(s,1h),5.57(s,2h),4.06-4.01(m,3h),3.65-3.58(m,1h),1.99-1.67(m,4h),1.47(s,9h),1.36(s,9h)。
[0628]
步骤5.叔丁基(r)-(9-(6-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-羟基戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯
[0629][0630]
在0℃下向(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(2-((6-((叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊酸(0.66g，0.91mmol，1当量)和tea(0.28g，2.7mmol，3当量)的thf(20ml)溶液中逐滴添加clcooet(0.15g，1.4mmol，1.5当量)。将混合物搅拌10min并滤出。在0℃下向滤液中添加nabh4(52mg，1.36mmol，1.5当量)水溶液(0.5ml)。将混合物在5℃-10℃下搅拌1h。添加etoac(50ml)并用10％nahco3(20ml)、1m naoh(10ml)和盐水(20ml)洗涤。将有机层经硫酸钠干燥并滤出。将滤液在真空下蒸发。将粗品通过硅胶柱层析法纯化(etoac)，得到呈无色油状的叔丁基(r)-(9-(6-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-羟基戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯。1h nmr(cdcl 400mhz):δ8.81(s,1h),8.01(brs.,1h),7.80(s,1h),7.47(d,j＝9.20hz,1h),6.81(d,j＝9.20hz,1h),5.55-5.69(m,2h),4.81(brs.,1h),3.97(d,j＝8.40hz,2h),3.51-3.62(m,3h),2.78(brs.,1h),1.72(d,j＝5.60hz,4h),1.56(s,9h),1.43(s,9h)。
[0631]
步骤6.叔丁基(4r)-4-(3-(2-((6-((叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)丙基)-1,2,3-恶四氢噻唑-3-甲酸酯2-氧化物
[0632][0633]
在10℃下向亚硫酰氯(14.6mg，0.12mmol，1.5当量)乙腈(1ml)溶液中逐滴添加在叔丁基(r)-(9-(6-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-羟基戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯(50mg，0.08mmol，1当量)乙腈(1ml)溶液。在5℃-11℃下逐滴添加吡啶(19.4mg，0.24mmol，3当量)。将混合物在5℃-11℃下搅拌0.5h。添加10％nahco3(2ml)并除去溶剂。用dcm(2*5ml)萃取水层。将有机层经硫酸钠干燥并滤出。将滤液在真空下蒸发，获得呈黄色油状的叔丁基(4r)-4-(3-(2-((6-((叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)丙基)-1,2,3-恶四氢噻唑-3-甲酸酯2-氧化物。lc-ms(esi)m/z 657[m h] 。
[0634]
步骤7.叔丁基(r)-4-(3-(2-((6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)丙基)-1,2,3-恶四氢噻唑-3-甲酸酯2,2-二氧化物
[0635][0636]
在8℃-16℃下向叔丁基(4r)-4-(3-(2-((6-((叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)丙基)-1,2,3-恶四氢噻唑-3-甲酸酯2-氧化物(50mg，0.076mmol，1当量)和naio4(17.9mg，0.084mmol，1.1当量)的乙腈(1ml)溶液中添加rucl3(0.16mg，0.008mmol，0.1当量)。将混合物在8℃-16℃下搅拌2h。添加水(5ml)并用乙酸乙酯(2*5ml)萃取。将有机层经硫酸钠干燥并滤出。将滤液在真空下蒸发。将粗品通过硅胶柱层析法纯化，得到呈棕色油状的叔丁基(r)-4-(3-(2-((6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)丙基)-1,2,3-恶四氢噻唑-3-甲酸酯2,2-二氧化物。1h nmr(cdcl3 400mhz):δ8.80(s,1h),7.81(s,1h),7.50(d,j＝8.80hz,1h),6.83(d,j＝8.80hz,1h),5.63(s,2h),4.69-4.65(m,1h),4.36-4.34(m,1h),4.28(d,j＝9.20hz,1h),4.01(t,j＝6.00hz,2h),1.87-1.95(m,2h),1.79-1.76(m,2h),1.58(s,9h),1.54(s,9h)。
[0637]
步骤8.(r)-(5-(2-((6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-1-(2-甲氧基乙氧基)戊-2-基)(叔丁氧基羰基)氨基磺酸
[0638]
[0639]
向叔丁基(r)-4-(3-(2-((6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)丙基)-1,2,3-恶四氢噻唑-3-甲酸酯2,2-二氧化物(26mg，0.3mmol，2当量)的四氢呋喃(2ml)溶液中添加氢化钠(11mg，0.45mmol，3当量)，并将混合物在16℃-20℃下搅拌30min。添加2-甲氧基乙-1-醇(0.15mmol，1当量)，并将混合物在16℃-20℃下再搅拌12h。将混合物用10％nh4cl(5ml)淬灭并用乙酸乙酯(2*10ml)萃取。收集水层不经进一步纯化即用于下一步骤。lc-ms(esi)m/z 649.1[m h]
。
[0640]
步骤9.(r)-9-(6-((4-氨基-5-(2-甲氧基乙氧基)戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-胺
[0641][0642]
将(r)-(5-(2-((6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-1-(2-甲氧基乙氧基)戊-2-基)(叔丁氧基羰基)氨基磺酸(母液，0.15mmol，1当量)的浓hcl(2ml)和水(2ml)溶液在80℃下搅拌4h。将混合物在真空下蒸发并通过制备型hplc纯化获得呈白色固体状的(r)-9-(6-((4-氨基-5-(2-甲氧基乙氧基)戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-胺。lc-ms(esi)m/z 491.1[m na]
。1h nmr(甲醇-d4 varian 400):δ8.36(s,1h),8.08(s,1h),7.58(d,j＝9.20hz,1h),7.09(d,j＝9.20hz,1h),5.67(s,2h)4.12(t,j＝5.60hz,2h),3.65(dd,j＝6.00,3.20hz,3h),3.48-3.58(m,3h),3.39(brs.,1h),3.37(s,3h),1.70-1.92(m,4h)。
[0643]
实施例48.(r)-9-(6-(4-氨基-4-(1h-1,2,4-三唑-3-基)丁氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-胺
[0644][0645]
步骤1.叔丁基(r)-(9-(6-((5-氨基-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氧代戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯
[0646][0647]
向(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(2-((6-((叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊酸(500mg，799μmol，1当量)、nh4cl(214mg，4.0mmol，5当量)、
hatu(608mg，1.6mmol，2当量)和et3n(162mg，1.6mmol，3当量)的dmf(20ml)溶液在14℃-22℃下搅拌1h。lcms显示起始材料完全消耗。将反应混合物用h2o(200ml)稀释并用etoac(100ml*3)萃取。将萃取物合并，干燥(naso4)，并将溶剂去除，将粗产物通过硅胶柱层析法纯化(洗脱液:己烷:乙酸乙酯＝5:1)，得到叔丁基(r)-(9-(6-((5-氨基-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氧代戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯。lc-ms(esi)m/z 624.1[m h]
。
[0648]
步骤2.叔丁基(r,e)-(9-(6-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(((二甲基氨基)亚甲基)氨基)-5-氧代戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯
[0649][0650]
将叔丁基(r)-(9-(6-((5-氨基-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氧代戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯(100mg，160.1μmol，1当量)和dmf-dma(57.2mg，480μmol，3当量)的ch2cl2(15ml)溶液在40℃下搅拌2h。lcms显示起始材料完全消耗。将反应混合物在真空下浓缩，得到呈无色油状的叔丁基(r,e)-(9-(6-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(((二甲基氨基)亚甲基)氨基)-5-氧代戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯。lc-ms(esi)m/z 701.2[m na]
。
[0651]
步骤3.叔丁基(r)-(9-(6-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(1h-1,2,4-三唑-3-基)丁氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯
[0652][0653]
向叔丁基(r,e)-(9-(6-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(((二甲基氨基)亚甲基)氨基)-5-氧代戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯(108mg，159μmol，1当量)的hoac(2ml)溶液中缓慢添加nh2nh2.h2o。将混合物在90℃-100℃下搅拌2h。lcms显示起始材料完全消耗。将反应混合物在真空下浓缩，得到呈无色油状的叔丁基(r)-(9-(6-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(1h-1,2,4-三唑-3-基)丁氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯。lc-ms(esi)m/z 548.1[m h]
。
[0654]
步骤4.(r)-9-(6-(4-氨基-4-(1h-1,2,4-三唑-3-基)丁氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-胺
[0655][0656]
将叔丁基(r)-(9-(6-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(1h-1,2,4-三唑-3-基)丁氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯(100mg，154μmol，1当量)的tfa/dcm(4ml)溶液在8℃-15℃下搅拌2h。lcms显示起始材料完全消耗。将反应混合物在真空下浓缩得到呈油状的粗产物(100mg)，将其溶解于meoh(3ml)中，将混合物调节至ph＝7并通过制备型hplc纯化，得到呈白色固体状的(r)-9-(6-(4-氨基-4-(1h-1,2,4-三唑-3-基)丁氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-胺。lc-ms(esi)m/z 448.0[m h]
。1h nmr(meoh400mhz):δ8.24(s,1h),8.22(s,1h),7.57(d,j＝9.2hz,1h),7.06(d,j＝9.2hz,1h),5.60(s,2h),4.08-4.04(m,3h),1.94-1.66(m,4h)。
[0657]
实施例49.(r)-9-(6-((4-氨基-5-(1h-吡唑-1-基)戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-胺
[0658][0659]
将叔丁基(r)-4-(3-(2-((6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)丙基)-1,2,3-恶四氢噻唑-3-甲酸酯2,2-二氧化物(60mg，0.089mmol，1当量)和1h-吡唑(24mg，0.36mmol，4当量)的四氢呋喃(5ml)溶液搅拌并回流2h。将混合物在真空下蒸发，提供粗中间体(80mg)。在17℃-26℃下向粗中间体(80mg，0.089mmol，1当量)二氯甲烷(1ml)溶液中添加三氟乙酸(1ml)。将混合物在17℃-26℃下搅拌2h。将混合物在真空下蒸发。将粗品通过制备型hplc纯化，得到呈白色固体状的(r)-9-(6-((4-氨基-5-(1h-吡唑-1-基)戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-胺。lc-ms(esi)m/z461.1[m h]
。1h nmr(甲醇-d4 varian 400):δ8.26(s,1h),7.77(s,1h),7.49-7.65,(m,2h),7.44(d,j＝1.6hz,1h),7.06(d,j＝9.20hz,1h),6.21(d,j＝2.00hz,1h),5.49-5.60(m,2h),3.89-4.11(m,4h),3.10-3.21(m,1h),1.66-1.90(m,2h),1.25-1.47(m,2h)。
[0660]
实施例50.(r)-9-(6-(4-氨基-4-(5-甲基-1,3,4-噻二唑-2-基)丁氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-胺
[0661][0662]
步骤1：叔丁基(r)-(9-(6-((5-(2-乙酰基肼基)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氧代戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯
[0663][0664]
向(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(2-((6-((叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊酸(中间体f)(250mg，0.4mmol)的thf溶液(2ml)中缓慢添加tea(121mg，1.2mmol)。在10min后，将所得混合物在0℃下缓慢添加到clcooet(87mg，0.8mmol)的无水thf(2ml)溶液中。在滤出盐后，在0℃下将滤液缓慢添加到nh2nhac(148mg，2mmol)的无水thf(2ml)溶液中。将混合物加热至室温并搅拌2hr。在真空下去除溶剂，得到呈无色油状的粗叔丁基(r)-(9-(6-((5-(2-乙酰基肼基)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氧代戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯。lc-ms：[m h]
＝681.1。
[0665]
步骤2：叔丁基(r)-(9-(6-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(5-甲基-1,3,4-噻二唑-2-基)丁氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯
[0666][0667]
向叔丁基(r)-(9-(6-((5-(2-乙酰基肼基)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氧代戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯(0.1g，0.15mmol)的无水thf(10ml)溶液中添加劳氏试剂，并将反应混合物回流12hr。在除去溶剂之后，将残余物通过硅胶柱层析法纯化，得到呈固体状的粗叔丁基(r)-(9-(6-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(5-甲基-1,3,4-噻二唑-2-基)丁氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯(80mg)。lc-ms：[m h]
＝679.0。
[0668]
步骤3：(r)-9-(6-(4-氨基-4-(5-甲基-1,3,4-噻二唑-2-基)丁氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-胺
[0669][0670]
向叔丁基(r)-(9-(6-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(5-甲基-1,3,4-噻二唑-2-基)丁氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯(100mg，0.14mmol)的ch2cl2(5ml)溶液中添加tfa(1ml)。将所得混合物在0℃下搅拌2hr。在反应完成后，添加tea以中和反应。将反应混合物在真空下浓缩给出粗产物，将其通过制备型hplc纯化(柱：waters xbridge 150*25 5u，梯度：20％-50％b(a＝水/10mm nh4hco3，b＝乙腈)，流速：25ml/min)，得到呈白色固体状的(r)-9-(6-(4-氨基-4-(5-甲基-1,3,4-噻二唑-2-基)丁氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-胺。1h nmr(400mhz,meoh-d4):δ8.23(s,1h),7.78(s,1h),7.56(d,j＝9.2hz,1h),7.05(d,j＝9.2hz,1h),5.58(s,2h),4.31(t,j＝6.4hz,1h),4.08(t,j＝5.6hz,2h),1.89-1.73(m,4h)。lc-ms：[m h]
＝479.0。
[0671]
实施例51.(r)-9-(6-(4-氨基-4-(1,3,4-恶二唑-2-基)丁氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-胺
[0672][0673]
步骤1.叔丁基(r)-(9-(6-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-肼基-5-氧代戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯
[0674][0675]
向(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(2-((6-((叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)戊酸(500mg，0.8mmol，1当量)的无水thf(10ml)搅拌溶液中缓慢添加tea(121mg，1.2mmol，1.5当量)。在10分钟后，将所得混合物在0℃下缓慢添加到clcooet(113mg，1mmol，1.3当量)的无水thf(10ml)溶液中。然后滤出et3n.hcl，并将滤液缓慢添加到0℃的水合肼(1ml)溶液中。将混合物加热至室温，并搅拌2小时。将反应混合物直接在减压下浓缩提供油，将其通过制备型hplc纯化为呈白色固体状的叔丁基(r)-(9-(6-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-肼基-5-氧代戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯。1h nmr(meod 400mhz):δ8.60(s,1h),8.07(s,1h),7.55(d,j＝8.8hz,1h),
7.04(d,j＝9.2hz,1h),5.68(s,2h),4.05-3.98(m,3h),1.75-1.62(m,4h),1.58(s,9h),1.41(s,9h)。
[0676]
步骤2.叔丁基(r)-(9-(6-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(1,3,4-恶二唑-2-基)丁氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯
[0677][0678]
向叔丁基(r)-(9-(6-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-肼基-5-氧代戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯(60mg，0.09mmol，1当量)的hc(ome)3(2ml)搅拌溶液中添加hoac(0.1ml)。然后将混合物在90℃下搅拌2小时。将反应混合物直接在减压下浓缩，得到呈无色油状的叔丁基(r)-(9-(6-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(1,3,4-恶二唑-2-基)丁氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯。lc-ms(esi)m/z 549.1[m h] 。
[0679]
步骤3.(r)-9-(6-(4-氨基-4-(1,3,4-恶二唑-2-基)丁氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-胺
[0680][0681]
向叔丁基(r)-(9-(6-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(1,3,4-恶二唑-2-基)丁氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯(40mg，0.06mmol，1当量)在ch2cl2(1ml)溶液中添加tfa(1ml)。将所得混合物在0℃下搅拌2小时。lcms显示起始材料完全消耗。添加tea直至ph＝8。然后将混合物在真空下浓缩。将粗品通过制备型hplc纯化，得到呈白色固体状的(r)-9-(6-(4-氨基-4-(1,3,4-恶二唑-2-基)丁氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-胺。lc-ms(esi)m/z 448.9[m h] 。1h nmr(meod 400mhz):δ8.87(s,1h),8.24(s,1h),7.80(s,1h),7.56(d,j＝8.8hz,1h),7.06(d,j＝9.2hz,1h),5.59(s,2h),4.15(t,j＝6.4hz,1h),4.08(t,j＝6.0hz,2h),1.91-1.72(m,4h)。
[0682]
实施例52.(r)-9-(6-((4-氨基-5-(甲硫基)戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-胺
[0683]
[0684]
步骤1.叔丁基(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-((叔丁基二苯基硅基)氧基)戊酸酯
[0685][0686]
向叔丁基(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-羟基戊酸酯(2g，6.9mmol，1当量)的ch2cl2(40ml)溶液中添加咪唑(1.1g,15mmol，2.2当量)和tbdpscl(3.72g，13.53mmol，1.96当量)，在添加后，将反应混合物在18℃下搅拌11小时。lcms显示起始材料完全消耗。然后将反应混合物用水(40ml)淬灭，将混合物分离，并将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩给出粗产物，将其通过制备型hplc纯化，得到呈白色固体状的叔丁基(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-((叔丁基二苯基硅基)氧基)戊酸酯。1h nmr(cdcl3400mhz):δ7.66-7.64(m,4h),7.45-7.36(m,6h),5.08(d,j＝8.0hz,1h),4.22-4.15(m,1h),3.67(t,j＝6.0hz,2h),1.96-1.90(1h,m),1.77-1.63(1h,m),1.62-1.55(m,2h),1.46(s,9h),1.44(s,9h),1.05(s,9h)。
[0687]
步骤2.叔丁基(r)-(5-((叔丁基二苯基硅基)氧基)-1-羟基戊-2-基)氨基甲酸酯
[0688][0689]
在氮气气氛下，在0℃下将叔丁基(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-((叔丁基二苯基硅基)氧基)戊酸酯(2.3g，4.4mmol，1当量)的无水thf(50ml)溶液逐滴添加到lialh4(0.66g，17.4mmol，4当量)的无水thf(100ml)悬浮液中。当添加完成时，除去冷却浴，将混合物在室温下搅拌。在16小时后，tlc显示起始材料被完全消耗。将混合物冷却至0℃，用水(3ml)、15％水性氢氧化钠(3ml)和水(9ml)小心淬灭反应。在搅拌30min之后，将混合物用etoac(100ml)稀释，通过过滤并在减压下浓缩以提供油，将其通过快速柱层析法纯化，得到呈无色油状的叔丁基(r)-(5-((叔丁基二苯基硅基)氧基)-1-羟基戊-2-基)氨基甲酸酯。1h nmr(cdcl
3 400mhz):δ7.70-7.61(m,4h),7.44-7.36(m,6h),4.71(brs,1h),3.69-3.53(m,5h),2.45(brs,1h),1.65-1.57(m,3h),1.51-1.47(m,1h),1.44(s,9h),1.05(s,9h)。
[0690]
步骤3.(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-((叔丁基二苯基硅基)氧基)戊基甲磺酸酯
[0691][0692]
在氮气气氛下，在0℃下向叔丁基(r)-(5-((叔丁基二苯基硅基)氧基)-1-羟基戊-2-基)氨基甲酸酯(1.7g，3.7mmol，1当量)的无水dcm(50ml)溶液中添加mscl(510.6mg，4.5mmol，1.2当量)和tea(564mg，5.6mmol，1.5当量)。然后将混合物在室温下搅拌12小时。tlc显示起始材料被完全消耗。将反应混合物在减压下浓缩，提供油，在通过快速柱层析法
纯化后得到无色油状的(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-((叔丁基二苯基硅基)氧基)戊基甲磺酸酯。1h nmr(cdcl
3 400mhz):δ7.66-7.64(m,4h),7.43-7.37(m,6h),4.67(d,j＝7.2hz,1h),4.26-4.09(m,2h),3.90-3.82(m,1h),3.68(t,j＝5.6hz,2h),3.01(s,3h),1.63-1.59(m,4h),1.44(s,9h),1.05(s,9h)。
[0693]
步骤4.叔丁基(r)-(5-((叔丁基二苯基硅基)氧基)-1-(甲硫基)戊-2-基)氨基甲酸酯
[0694][0695]
将(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-((叔丁基二苯基硅基)氧基)戊基甲烷磺酸酯(800mg，1.5mmol，1当量)溶解于dmf(10ml)中。然后添加nasch3(420mg，4当量)并将混合物在5℃-15℃下搅拌2.5小时。tlc显示反应完成。将混合物用水(20ml)处理并且用etoac(3*30ml)萃取。将有机层用盐水(3*30ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩，得到呈无色胶状的叔丁基(r)-(5-((叔丁基二苯基硅基)氧基)-1-(甲硫基)戊-2-基)氨基甲酸酯。lc-ms(esi)m/z 510.6[m na]
。1h nmr(cdcl
3 400mhz):δ7.66(dd,j＝8.0,1.6hz,4h),7.46-7.35(m,6h),4.65(d,j＝7.6hz,1h),3.74(br.s.,1h),3.67(t,j＝6.2hz,2h),2.70-2.55(m,2h),2.14(s,3h),1.82-1.70(m,1h),1.67-1.52(m,3h),1.44(s,9h),1.05(s,9h)。
[0696]
步骤5.叔丁基(r)-(5-羟基-1-(甲硫基)戊-2-基)氨基甲酸酯
[0697][0698]
将tbaf.3h2o(1.9g，4当量)添加到叔丁基(r)-(5-((叔丁基二苯基硅基)氧基)-1-(甲硫基)戊-2-基)氨基甲酸酯(750mg，1.5mmol，1当量)和乙酸(0.18ml，3.1mmol，2当量)的thf(15ml)溶液中。将混合物在10℃-20℃下搅拌18小时。tlc显示反应完成。将反应混合物在真空下浓缩。将残余物通过硅胶柱层析法纯化(pe/etoac＝1/1)，得到呈无色胶状的叔丁基(r)-(5-羟基-1-(甲硫基)戊-2-基)氨基甲酸酯。1h nmr(cdcl3400mhz):δ4.71(d,j＝8.4hz,1h),3.79(brs.,1h),3.66(t,j＝6.0hz,2h),2.70-2.53(m,2h)2.13(s,3h),1.79-1.48(m,4h),1.43(s,9h)。
[0699]
步骤6.叔丁基(r)-(叔丁氧基羰基)(9-(6-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(甲硫基)戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯
[0700]
[0701]
在冰-水浴下，将diad(600mg，5当量)thf(1ml)溶液逐滴添加到叔丁基(r)-(5-羟基-1-(甲硫基)戊-2-基)氨基甲酸酯(300mg，0.6mmol，1当量)、pbu3(600mg，5当量)和叔丁基(叔丁氧基羰基)(9-(2,3-二氯-6-羟基苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯(150mg，1当量)的thf(15ml)溶液中。将混合物加热并在30℃下搅拌19小时。lcms显示反应完成。蒸发溶剂，将残余物溶解于ch2cl2(30ml)中。将有机层用水(2*20ml)和盐水(1*20ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗产物通过硅胶柱层析法纯化(pe/etoac＝5/1至1/1)，得到呈白色固体的叔丁基(r)-(叔丁氧基羰基)(9-(6-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(甲硫基)戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯。lc-ms(esi)m/z 763.2[m na]
。
[0702]
步骤7.(r)-9-(6-((4-氨基-5-(甲硫基)戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-胺
[0703][0704]
将tfa(4ml)缓慢添加到叔丁基(r)-(叔丁氧基羰基)(9-(6-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(甲硫基)戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-基)氨基甲酸酯(90mg，0.12mmol，1当量)的ch2cl2(4ml)溶液中。将所得混合物在5℃-15℃下搅拌2.5小时。lcms显示反应完成。将混合物用ch2cl2(15ml)稀释，用饱和nahco3碱化。萃取所得混合物。将有机层用水(2*20ml)和盐水(1*20ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并在真空下浓缩。将残余物通过制备型hplc纯化，得到呈白色固体状的(r)-9-(6-((4-氨基-5-(甲硫基)戊基)氧基)-2,3-二氯苄基)-9h-嘌呤-6-胺。lc-ms(esi)m/z 441.1[m h]
。1h nmr(meod varian 400):δ8.25(s,1h),7.78(s,1h),7.57(d,j＝8.8hz,1h),7.07(d,j＝9.2hz,1h),5.59(s,2h)4.06(t,j＝6.2hz,2h)2.92-2.77(m,1h),2.55(dd,j＝13.6,4.8hz,1h),2.33(dd,j＝13.6,8.0hz,1h),2.05(s,3h),1.86-1.64(m,2h),1.41-1.57(m,1h),1.29-1.37(m,1h)。
[0705]
实施例53.(r)-5-(2-((6-氨基-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-n1,n1-二甲基戊烷-1,2-二胺
[0706][0707]
步骤1.(r)-(5-(2-((6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-1-(二甲基氨基)戊-2-基)(叔丁氧基羰基)氨基磺酸
[0708][0709]
将叔丁基(r)-4-(3-(2-((6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)丙基)-1,2,3-恶四氢噻唑-3-甲酸酯2,2-二氧化物(200mg，0.26mmol，1当量)的甲胺一水合物(2ml)和四氢呋喃(2ml)溶液在3℃-11℃下搅拌2小时。将有机层在真空下蒸发，得到(r)-(5-(2-((6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-1-(二甲基氨基)戊-2-基)(叔丁氧基羰基)氨基磺酸，将其不经进一步纯化即用于下一步骤。lc-ms(esi)m/z 738.2[m h]
。
[0710]
步骤2.(r)-5-(2-((6-氨基-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-n1,n1-二甲基戊烷-1,2-二胺
[0711][0712]
将(r)-(5-(2-((6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-1-(二甲基氨基)戊-2-基)(叔丁氧基羰基)氨基磺酸(200mg，0.28mmol，1当量)的hcl/二恶烷(4m，2ml)溶液在3℃-11℃下搅拌2h。将混合物在真空下蒸发，溶解于乙腈(5ml)中并用nh3h2o碱化。将混合物通过制备型hplc纯化，得到呈白色固体状的(r)-5-(2-((6-氨基-9h-嘌呤-9-基)甲基)-3,4-二氯苯氧基)-n1,n1-二甲基戊烷-1,2-二胺。lc-ms(esi)m/z 438.1[m h]
。1h nmr(甲醇-d4 varian 400):δ8.26(s.,1h),7.77(s.,1h),7.56(d,j＝9.2hz,1h),7.06(d,j＝8.80hz,1h),5.58(s.,1h),4.04(t,j＝6.4hz,1h),2.77-2.81(m,1h),2.20(s.,6h),2.01-2.16(m,2h),1.67-1.78(m,2h),1.19-1.32(m,2h)。
[0713]
生物学测定
[0714]
使用下面描述的测定以及本领域已知的其他测定方法，可以评估本发明的化合物抑制混合系白血病1(mll1)的能力。
[0715]
mll1 lc-ms测定
[0716]
将本公开的化合物在dmso中连续且分开稀释3倍，以获得总计8种或12种浓度。然后将每种浓度的测试化合物(各120nl)通过mosquito转移到白色proxiplate plus 384孔微孔板(珀金埃尔默公司(perkinelmer))中。将60nm野生型mll1四元复合物(mll1-4c)和5μm sam的反应缓冲液(20mm tris-hcl，ph 8.0，0.01％tween 20，1mm dtt，10mm mgcl2，0.01％bsa)溶液(6μl)添加到各孔中，然后将其用测试化合物孵育20min。添加6μl的20μm肽底物h3k4me0(组蛋白h3[1-21]-生物素)反应缓冲液以触发每个反应。反应溶液中的最终组分包含30nm mll1-4c、2.5μm sam和10μm h3k4me0与不同浓度的化合物。阳性对照由30nm mll1-4c、2.5μm sam和10μm底物组成，不包括测试化合物，并且阴性对照仅由2.5μm sam和
10μm底物组成。将每种反应物在室温下孵育120min，然后通过添加3μl淬灭溶液(含有320nm d4-sah的2.5％tfa)终止。将反应混合物在2000rmp下离心(eppendorf离心机5810，转子a-4-62)2min。在耦合prominenece uflc(岛津公司(shimazu))的具有turboion spray的api 4000三重四极杆质谱仪(应用生物系统公司(applied biosystem))上通过lc-ms/ms监测来自酶测定的sah的生成。然后基于阳性和阴性的对照值归一化sah的产生水平，给出百分比酶活性。然后使用helios程序(诺华公司)将数据拟合为剂量反应方程以获得测试化合物的ic
50
值。
[0717]
mll1闪板(flashplate)测定
[0718]
为了评估mll1闪板测定中的化合物效力，将化合物在dmso中连续稀释3倍以获得总计12种浓度。然后将每种浓度的测试化合物(各250nl)通过mosquito转移到corning#3675 384孔板中。将4.2nm野生型mll1五元复合物(mll1-5c)的测定缓冲液(20mm tris-hcl，ph 8.0，0.01％tween 20，1mm dtt，0.01％bsa)溶液(15μl)添加到各孔中。然后添加10μl的2.5μm肽底物h3k4me0(组蛋白h3[1-21]-生物素)和1.25μm 3h-sam的反应缓冲液溶液以触发每个反应。反应溶液中的最终组分包含2.5nm mll1-5c、0.5μm 3h-sam和1μm h3k4me0与不同浓度的化合物。阳性对照由2.5nm mll1-5c、0.5μm 3h-sam和1μm底物组成，不包括测试化合物，并且阴性对照仅由0.5μm 3h-sam和1μm底物组成。将每种反应物在室温下孵育90min，然后通过添加5μl淬灭溶液(测定缓冲液中的0.5mm sam)终止。
[0719]
将25μl每种反应溶液转移到闪板链酶亲和素384孔微孔板(珀金埃尔默公司)中。在室温下孵育至少1h后，通过biotek洗板机用0.1％tween-20的dh2o溶液洗涤各孔三次。然后在microbeta(珀金埃尔默公司)中读取板。基于阳性和阴性的对照值来归一化放射性读数，给出百分比酶活性。然后使用helios程序将数据拟合为剂量反应方程以获得测试化合物的ic
50
值。
[0720]
mv4-11 h3k4me3细胞elisa测定
[0721]
将mv4-11(crl-9591
tm
)与补充有10％fbs(赛默飞世尔科技公司，目录号10099141)和50u/ml青霉素-链霉素(赛默飞世尔科技公司，目录号10378016)的rpmi1640培养基(赛默飞世尔科技公司，目录号11875)一起在37℃、5％co2的潮湿培养箱中培养。
[0722]
将溶解于dmso中的200nl化合物自10mm开始以1:3比率连续稀释得到12个点，并加入到细胞培养板(pdl涂覆的viewplate-384黑色，ftc，珀金埃尔默公司，#6007710)的每个孔中。将40μl培养基中的3,750个mv4-11细胞接种到每个孔中，并用所希望的浓度处理48小时。在处理后，用冷的磷酸盐缓冲液(pbs，ph 7.4)洗涤细胞并抽吸出剩余的pbs缓冲液。在4℃下，利用40μl 0.5m hcl萃取粗组蛋白裂解物1小时，通过在每个孔中添加32μl中和缓冲液(0.5m磷酸氢二钠，ph约12.5，1.25mm二硫苏糖醇，promega#v3151，蛋白酶抑制剂混合物，sigma#8340)对粗组蛋白裂解物进行中和。将5μl和20μl组蛋白裂解物加入到elisa板(384孔板，pe hb，白色，6005620)中，分别用于检测总h3和h3k4me3。将板在4℃下轻轻摇动过夜。在组蛋白结合后，将各板用80μl pbs/t(含0.05％tween-20的pbs)洗涤，并且各孔用50μl在pbs/t中稀释的3％bsa封闭1小时。使用在3％bsa中以1:2000稀释的抗h3k4me3(cst#9727)和抗总h3(cst#9715)，在室温下将各孔用一抗孵育1小时。然后将各板用pbs/t洗涤3次，并在室温下用辣根过氧化物酶(hrp)偶联的二抗(cst#7074，1:5000)孵育1小时。在读板器(珀金埃尔默公司envison 2104多标记读取器)上通过ecl底物的化学发光(皮尔斯(pierce)，#
34080)测量h3k4me3和总h3的丰度。将单个样本的h3k4me3信号相对于h3信号归一化后，计算针对dmso对照的抑制百分比。然后使用graphpad prism将数据拟合为剂量反应曲线以计算ic
50
。
[0723]
mv4-11 6天细胞生长ctg(celltiter-glo)分析
[0724]
将急性髓性白血病细胞mv4-11(crl-9591
tm
)与补充有10％fbs(赛默飞世尔科技公司，目录号10099141)的rpmi 1640培养基(赛默飞世尔科技公司，目录号11875)一起在37℃、5％co2的潮湿培养箱中培养。为了评估mll1抑制对细胞生长的影响，将本发明的化合物溶解于dmso中，并自10mm开始以1:3连续稀释得到12个点，然后以每孔重复200nl的剂量加入至viewplate-384black(珀金埃尔默公司)中。将40μl300个细胞/孔的密度的指数生长mv4-11细胞接种于平板，因此终产物的工作浓度从50μm开始。6天后，向细胞培养孔中添加40μl celltiter-glo(普洛麦格公司(promega)，目录号g7573)，并且用envision(perkin elmer)读取荧光值以测定活细胞数量。针对仅用dmso处理的样本计算抑制百分比，并且将数据用graphpad prism进行剂量反应曲线拟合，以得到本发明的代表性化合物的ic
50
，其反映了对mll1活性的抑制。
[0725]
表1中总结了本发明的化合物在不同测定形式和细胞系中的活性。
[0726]
表1
[0727]
[0728]
[0729][0730]
图例：" "" "" "lcms《0.05μm0.05-0.10μm》0.10μmmll1闪板《0.06μm0.06-0.10μm》0.10μmelisa《1.9μm1.9-3.0μm》3.0μmctg mv4:11《2.0μm2.0-3.0μm》3.0μm
[0731]
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