具有聚集诱导发光特性的TP荧光标记探针及其制备方法与可视化标记策略

技术特征：
1.一种具有聚集诱导发光特性的tp荧光标记探针，其特征在于：其结构式如下所示：2.一种如权利要求1所述的具有聚集诱导发光特性的tp荧光标记探针的制备方法，其特征在于：步骤包括：将化合物1于干燥的ch2cl2中溶解，冰浴情况下用bbr3处理反应，得化合物2；将化合物2、dbco-nhs和4-二甲氨基吡啶溶于thf溶液中，加热搅拌，得到终产物dbco-tpe；所述化合物1结构如式(ⅰ)所示：所述化合物2结构如式(ⅱ)所示：3.如权利要求2所述的一种具有聚集诱导发光特性的tp荧光标记探针的制备方法，其特征在于：详细步骤包括：将化合物1于干燥的ch2cl2中溶解，冰浴情况下用bbr3处理反应2h，加水
猝灭反应并用ch2cl2萃取、干燥、柱色谱提纯得化合物2，将化合物2、dbco-nhs和4-二甲氨基吡啶溶于thf溶液中，并加热至40℃搅拌24h，除去溶剂并进行柱层析得到终产物二苯基环辛炔-四苯乙烯dbco-tpe。4.一种使用权利要求1-3任一所述具有聚集诱导发光特性的tp荧光标记探针标记的活tp的重悬培养基，其特征在于：所述重悬培养基是tpcm-2培养基，其成分包括：不含谷胱甘肽的cmrl1066、丙酮酸钠、刃天青、吗啉基丙磺酸、碳酸氢钠、谷酰胺、葡萄糖、组氨酸、二硫苏糖醇、灭活胎牛血清。5.如权利要求4所述一种使用具有聚集诱导发光特性的tp荧光标记探针标记的活tp的重悬培养基，其特征在于：按tpcm-2培养基体积为100ml计，所述tpcm-2培养基成分包括：0.7mm丙酮酸钠、质量分数0.1％刃天青、1m吗啉基丙磺酸、质量分数7.5％碳酸氢钠、200mm谷酰胺、17.6mm葡萄糖、0.52mm组氨酸、0.52mm二硫苏糖醇、体积分数5-20％灭活胎牛血清、不含谷胱甘肽的cmrl1066余量。6.一种使用权利要求1-3任一所述具有聚集诱导发光特性的tp荧光标记探针的活tp可视化标记策略，其特征在于：步骤包括：先将tp与叠氮-d-丙氨酸孵育，使叠氮-d-丙氨酸通过肽聚糖代谢掺入到tp的肽聚糖骨架中；再将tp和dbco-tpe孵育，通过荧光标记探针二苯基环辛炔-四苯乙烯dbco-tpe与叠氮-d-丙氨酸发生点击化学反应，实现对活tp的荧光标记。7.如权利要求6所述一种使用所述具有聚集诱导发光特性的tp荧光标记探针的活tp可视化标记策略，其特征在于：详细步骤包括：于1.5ml ep管中将1ml 107条/ml tp菌液与终浓度250μm叠氮-d-丙氨酸于三气培养箱孵育48h；然后14000g离心5min沉淀tp，去除未利用的azda，再1ml pbs清洗离心，用终浓度10μm二苯基环辛炔-四苯乙烯dbco-tpe与上述所得tp于34℃三气培养箱孵育15min，高速离心沉淀tp，1ml pbs清洗离心，用500μl tpcm-2培养基重悬，实现对tp可视化标记。8.一种如权利要求1所述的具有聚集诱导发光特性的tp荧光标记探针在制备用于活tp的示踪成像的药物中的应用。9.一种如权利要求1所述的具有聚集诱导发光特性的tp荧光标记探针在制备用于活tp的示踪成像的试剂盒中的应用。

技术总结
本发明公开了具有聚集诱导发光特性的TP荧光标记探针及其制备方法与可视化标记策略，TP是梅毒螺旋体英文简称，本发明合成DBCO-TPE，以DBCO-TPE为TP荧光标记探针，利用肽聚糖代谢并结合生物正交反应，实现活TP的可视化标记；另外，能够实现活TP荧光标记的探针具有聚集诱导发光特性，可解决传统荧光染料聚集诱导淬灭、光漂白、不利于长时间成像等问题。不利于长时间成像等问题。不利于长时间成像等问题。


技术研发人员：廖玉辉 郑举敦 杨斌 岳锐 江银波 林伟强 黄佳林
受保护的技术使用者：南方医科大学皮肤病医院（广东省皮肤病医院、广东省皮肤性病防治中心、中国麻风防治研究中心）
技术研发日：2021.12.30
技术公布日：2022/4/12