煮沸法提基因组DNA在浸矿菌中的应用的制作方法

技术特征：
1.一种煮沸法提基因组dna在浸矿菌中的应用，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、对浸矿菌进行培养：通过利用9k培养基加入相应的培养物质，然后通过稀硫酸调节ph值，121℃灭菌20分钟，将浸矿菌放入培养基中，在合适的温度下进行培养；步骤二、对浸矿菌进行收集：当浸矿菌涨到对数期时，收集菌液，在12000r/min的条件下离心3分钟，收集菌体，进行洗涤，然后用无菌水悬浮各菌液，以血球计数板计数，选取两份，每份含菌量为108个；步骤三、清洗：取得到的浸矿菌，加入到1，5ml的离心管中，进行离心，然后吸取上清液；步骤四、进行煮沸处理：向步骤三中的细胞中加入60μlte缓冲液，将细胞悬浮起来，在100℃的沸水中水浴2分钟；步骤五、进行提取dna：将水浴后的细胞液在13000r/min高速下离心1分钟，提取上清液，在零下20℃保存备用；步骤六、进行测定：对内部浓度、pcr扩增、灵敏度进行测定。2.根据权利要求1所述的一种煮沸法提基因组dna在浸矿菌中的应用，其特征在于：所述步骤1中的浸矿菌包括嗜酸氧化亚铁硫杆菌、嗜酸氧化硫硫杆菌、嗜铁钩端螺旋菌、喜温硫杆菌、嗜热硫氧化硫化杆菌、嗜热嗜酸铁质菌。3.根据权利要求1所述的一种煮沸法提基因组dna在浸矿菌中的应用，其特征在于：所述9k培养基包括：(nh4)2so43g/l，kcl0.1g/l，k2hpo40.5g，mgso4·
7h2o0.5g/l，ca(no3)20.01g/l。4.根据权利要求2所述的一种煮沸法提基因组dna在浸矿菌中的应用，其特征在于：所述嗜酸氧化亚铁硫杆菌、嗜酸氧化硫硫杆菌的培养条件为温度30℃、ph2.0，所述嗜铁钩端螺旋菌的培养条件为温度40℃、ph1.6，所述喜温硫杆菌的培养条件为温度40℃、ph2.0，所述嗜热硫氧化硫化杆菌的培养条件为温度40℃、ph1.5，所述嗜热嗜酸铁质菌的培养条件为温度40℃、ph1.0。5.根据权利要求1所述的一种煮沸法提基因组dna在浸矿菌中的应用，其特征在于：所述步骤二中洗涤的顺序为：先用ph2.0的无菌水洗涤两次，然后再用ph7.0的无菌水洗涤两次。6.根据权利要求1所述的一种煮沸法提基因组dna在浸矿菌中的应用，其特征在于：所述步骤三中离心的转速为12000r/min，离心时间为3分钟。7.根据权利要求1所述的一种煮沸法提基因组dna在浸矿菌中的应用，其特征在于：所述步骤六中浓度采用微量分光光度计，pcr扩增采用eb染色、凝胶成像，灵敏度采取扩增反应制取相应反应曲线。8.根据权利要求1所述的一种煮沸法提基因组dna在浸矿菌中的应用，其特征在于：所述步骤四中进行水浴的仪器为超级恒温水浴槽。

技术总结
本发明提供一种煮沸法提基因组DNA在浸矿菌中的应用，涉及浸矿菌基因提取领域。该煮沸法提基因组DNA在浸矿菌中的应用，包括以下步骤：步骤一、对浸矿菌进行培养；步骤二、对浸矿菌进行收集；步骤三、清洗；步骤四、进行煮沸处理；步骤六、进行测定。通过合理的提取步骤，使步骤简化，节约提取的时间，提取迅速，且成本消耗低，通过煮沸水浴裂解，可以有效使内部的DNA提取率较高，使得其可以确保低丰度的微生物被检测到，得到的DNA较为灵敏、保真，整个提取步骤在一个试管中完成，可以有效避免在转移的过程中被污染，提高了内部的纯度，同时减少了操作上的失误。作上的失误。作上的失误。


技术研发人员：开雷 孙文娟
受保护的技术使用者：江苏赛索飞生物科技有限公司
技术研发日：2021.08.13
技术公布日：2021/11/8