一种小分子鱼皮胶原蛋白肽及其制备方法和在制备抗皮肤光老化产品中的应用与流程

本发明涉及生物活性肽，尤其涉及一种小分子鱼皮胶原蛋白肽及其制备方法和在制备抗皮肤光老化产品中的应用。

背景技术：

1、皮肤老化是内源性自然衰老与外源性因素长期共同作用的结果，其中紫外线辐射诱导的光老化是导致皮肤结构与功能退化的主要外源性因素。紫外辐射可促使皮肤组织内活性氧过量生成，打破氧化还原稳态，诱发持续性氧化应激，进而引起胶原降解、黑色素沉积、炎症反应加剧及皮肤屏障功能受损，临床表现为皮肤干燥、松弛、皱纹加深及色斑形成等典型光老化表型。因此，开发兼具抗氧化与抗炎功能的天然活性物质，成为延缓皮肤光老化的重要研究方向。

2、完整天然大分子胶原（三螺旋结构）几乎不直接做成口服产品，分子太大，口服很难吸收；市面上99%口服产品，是明胶、水解胶原蛋白（胶原蛋白肽）、非变性ⅱ型胶原三类，全部由动物天然胶原加工而来。天然胶原蛋白具有稳定的三螺旋刚性结构，不易被人体消化吸收，而通过酶解等方法将其降解为低分子量胶原肽后，可显著提高其易吸收性与生物活性。低分子量胶原肽因具有良好的生物相容性、易吸收性及多种生物活性而备受关注，在功能食品、保健品及化妆品领域具有广阔的应用前景。

3、利用大量利用水产加工下脚料（鱼皮、鱼鳞）制备的鱼源胶原蛋白肽是当前研发热点，具有环保经济的优势。目前公开报道了多种鱼源胶原蛋白肽的制备方法，例如：cn103992385b公开了一种大黄鱼鱼鳔抗氧化胶原肽的制备方法，包括如下步骤：预处理、调ph值后40~50℃保温10~15 min、中性蛋白酶一次酶解、胰蛋白酶二次酶解、离心、超滤收集分子量小于3 kda组分、离子交换和凝胶柱层析及rp-hplc纯化等。cn116284341b公开了一种低免疫原性、降血压、抗氧化的深海鱼皮小分子胶原蛋白肽的制备方法，包括物理预处理、脱脂与去除杂蛋白、去除端肽、中性蛋白酶与木瓜蛋白酶复合酶解、超滤、分子筛层析及反相色谱纯化等步骤。

4、但上述现有方法或存在工艺步骤繁琐、纯化成本高、难以规模化等问题，或主要着眼于降低肽段分子量或分离单一功效组分，且现有报道多集中于体外抗氧化活性，而鲜有针对抗皮肤光老化功效的报道。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种小分子鱼皮胶原蛋白肽及其制备方法和在制备抗皮肤光老化产品中的应用，本发明提供的小分子鱼皮胶原蛋白肽，具有抗皮肤光老化功效，且原料来源丰富，制备工艺简单温和，易于操作。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种小分子鱼皮胶原蛋白肽，所述小分子鱼皮胶原蛋白肽中，相对分子质量为100~1000 da的肽段相对含量≥85%，相对分子质量为100~500 da的肽段相对含量为53.12%~57.64%，相对分子质量为500~1000 da的肽段相对含量为30.12%~33.45%；

4、所述小分子鱼皮胶原蛋白肽中，含有的氨基酸序列为trp-phe的二肽的浓度为0.22~0.45 g/100 g，含有的氨基酸序列为leu-leu-tyr的三肽的浓度为为0.35~0.67 g/100 g。

5、本发明还提供了一种上述技术方案所述小分子鱼皮胶原蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：

6、（1）将罗非鱼鱼皮依次进行预处理、nacl溶液浸泡、石油醚浸泡和干燥，得到鱼皮干料；

7、（2）将所述步骤（1）得到的鱼皮干料依次进行水浸泡、炖煮和匀浆，得到鱼皮匀浆液；

8、（3）将所述步骤（2）得到的鱼皮匀浆液依次进行酶解、灭酶、离心和冷冻干燥，得到小分子鱼皮胶原蛋白肽。

9、优选地，所述步骤（1）中nacl溶液浸泡包括：采用质量体积浓度为0.2%~0.4%的nacl溶液按料液比1:10~1:15浸泡24~48 h，浸泡期间更换nacl溶液2~3次；所述石油醚浸泡的时间为24~48 h。

10、优选地，所述步骤（2）中炖煮的温度为90~100℃，所述炖煮的时间为15~20 min。

11、优选地，所述步骤（3）中酶解包括：将所述鱼皮匀浆液进行调节ph，加入蛋白酶，在30~50℃、酶用量1500~3000 u/ml的条件下进行酶解3~6 h；所述蛋白酶为水解蛋白酶、碱性蛋白酶和风味蛋白酶中的任意一种。

12、优选地，当所述步骤（3）中酶解所用蛋白酶为水解蛋白酶时，所述酶解包括：先调节鱼皮匀浆液的ph值至6.5~7.5，然后加入水解蛋白酶，在30~40℃、酶用量1500~2000 u/ml的条件下进行酶解3~4 h。

13、优选地，当所述步骤（3）中酶解所用蛋白酶为碱性蛋白酶，所述酶解包括：先调节鱼皮匀浆液的ph值至8.0~9.0，然后加入碱性蛋白酶，在30~45℃、酶用量2500~3000 u/ml的条件下进行酶解5~6 h。

14、优选地，当所述步骤（3）中酶解所用蛋白酶为风味蛋白酶，所述酶解包括：先调节鱼皮匀浆液的ph值至7.0~9.0，然后加入风味蛋白酶，在40~50℃、酶用量2000~2500 u/ml的条件下进行酶解4~5 h。

15、优选地，所述步骤（3）中冷冻干燥包括：将所述离心得到的上清液，先于-80℃进行预冻4~6 h，再于-50~-40℃进行真空冷冻干燥24~48 h。

16、本发明还提供了一种上述技术方案所述的小分子鱼皮胶原蛋白肽或所述制备方法制备的小分子鱼皮胶原蛋白肽在制备抗皮肤光老化产品中的应用，所述抗皮肤光老化产品为食品、保健品、化妆品和药物中的至少一种。

17、本发明提供了一种小分子鱼皮胶原蛋白肽，包括：相对分子质量为100~1000 da的肽段相对含量≥85%，相对分子质量为100~500 da的肽段相对含量为53.12%~57.64%，相对分子质量为500~1000 da的肽段相对含量为30.12%~33.45%；且所述小分子鱼皮胶原蛋白肽中，含有的氨基酸序列为trp-phe的二肽的浓度为0.22~0.45 g/100 g，含有的氨基酸序列为leu-leu-tyr的三肽的浓度为为0.35~0.67 g/100 g。本发明中上述特定组成的小分子鱼皮胶原蛋白肽具有优异的抗皮肤光老化功能，能够清除自由基、提高机体抗氧化能力，降低皮肤组织中促炎因子tnf-α、il-1β、il-6水平以缓解紫外诱导的皮肤炎症反应，下调黑色素代谢相关基因mitf、tyr、tyrp1的表达以抑制黑色素生成、减少皮肤黑色素沉积，可用于制备食品、保健食品、化妆品或药品等抗皮肤光老化类产品。

1.一种小分子鱼皮胶原蛋白肽，其特征在于，包括：相对分子质量为100~1000 da的肽段相对含量≥85%，相对分子质量为100~500 da的肽段相对含量为53.12%~57.64%，相对分子质量为500~1000 da的肽段相对含量为30.12%~33.45%；

2.一种权利要求1所述小分子鱼皮胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中nacl溶液浸泡包括：采用质量体积浓度为0.2%~0.4%的nacl溶液按料液比1:10~1:15浸泡24~48 h，浸泡期间更换nacl溶液2~3次；所述石油醚浸泡的时间为24~48 h。

4.权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中炖煮的温度为90~100℃，所述炖煮的时间为15~20 min。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中酶解包括：将所述鱼皮匀浆液进行调节ph，加入蛋白酶，在30~50℃、酶用量1500~3000 u/ml的条件下进行酶解3~6h；所述蛋白酶为水解蛋白酶、碱性蛋白酶和风味蛋白酶中的任意一种。

6.根据权利要求2或5所述的制备方法，其特征在于，当所述步骤（3）中酶解所用蛋白酶为水解蛋白酶时，所述酶解包括：先调节鱼皮匀浆液的ph值至6.5~7.5，然后加入水解蛋白酶，在30~40℃、酶用量1500~2000 u/ml的条件下进行酶解3~4 h。

7.根据权利要求2或5所述的制备方法，其特征在于，当所述步骤（3）中酶解所用蛋白酶为碱性蛋白酶，所述酶解包括：先调节鱼皮匀浆液的ph值至8.0~9.0，然后加入碱性蛋白酶，在30~45℃、酶用量2500~3000 u/ml的条件下进行酶解5~6 h。

8.根据权利要求2或5所述的制备方法，其特征在于，当所述步骤（3）中酶解所用蛋白酶为风味蛋白酶，所述酶解包括：先调节鱼皮匀浆液的ph值至7.0~9.0，然后加入风味蛋白酶，在40~50℃、酶用量2000~2500 u/ml的条件下进行酶解4~5 h。

9.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中冷冻干燥包括：将所述离心得到的上清液，先于-80℃进行预冻4~6 h，再于-50~-40℃进行真空冷冻干燥24~48 h。

10.一种权利要求1所述的小分子鱼皮胶原蛋白肽或权利要求2~8任一项所述制备方法制备的小分子鱼皮胶原蛋白肽在制备抗皮肤光老化产品中的应用，其特征在于，所述抗皮肤光老化产品为食品、保健品、化妆品和药物中至少一种。