一种可协同麦角硫因抗氧化的燕窝肽及其制备方法和应用与流程

本发明属于食品加工及生物活性肽制备，具体涉及一种可协同麦角硫因抗氧化的燕窝肽及其制备方法和应用。

背景技术：

1、麦角硫因是一种主要由微生物合成的天然氨基酸，具有清除自由基、螯合二价金属阳离子等抗氧化功能，相较于常见抗氧化剂，麦角硫因稳定性更强、靶向性好，可被人体特异性转运蛋白octn1富集于皮肤等组织，在皮肤抗氧化领域具有突出的应用优势。然而，口服麦角硫因存在明显短板：麦角硫因水溶性强、脂溶性差，口服后肠道跨膜吸收效率有限；虽有专属转运蛋白octn1，但单次摄入后真正入血并到达靶组织的比例不高，需要持续足量长期服用才能见效，导致使用成本较高。此外，维持线粒体正常形态与生理功能是延缓皮肤老化的内在关键，而麦角硫因对维持线粒体形态和功能的作用较弱、起效较慢，难以高效修复受损线粒体，抗氧化效果欠佳。

2、燕窝作为一种传统名贵滋补品，含有唾液酸、糖蛋白、胶原蛋白及其水解产物等活性成分，具有促进细胞增殖、修复细胞外基质、改善皮肤状态等功效。目前对燕窝的加工处理以炖煮为主，所得产品基本保持大分子蛋白质结构，难以被人体充分吸收利用。虽然有研究尝试通过蛋白酶水解制备燕窝肽，但现有方法主要采用单一或双酶酶解结合水提工艺，存在提取效率低、活性成分损失大等不足。同时，现有技术中燕窝肽的氨基酸序列及功效尚不明确，产品多为分子量范围的混合物，难以实现质量标准化。

3、更重要的是，目前市面上尚无将燕窝肽与麦角硫因复配的产品，关于燕窝肽与麦角硫因复配后是否在抗氧化方面存在协同增效作用，以及燕窝肽能否促进麦角硫因的肠道吸收和转运效率，尚缺乏实验证据支撑。

4、因此，本领域亟需开发一种能够与麦角硫因协同增效的燕窝肽，通过优化提取工艺获得具有明确氨基酸序列的高活性燕窝肽，改善麦角硫因口服吸收差、转运效率低的问题，提高线粒体功能，强化抗氧化功效。

技术实现思路

1、针对上述现有技术中燕窝肽提取效率低、活性成分保留不充分、肽段序列不明确，以及麦角硫因口服吸收效率有限、与燕窝肽协同作用缺乏研究等问题，本发明提供了一种可协同麦角硫因抗氧化的燕窝肽及其制备方法和应用，以解决上述技术缺陷。

2、本发明提出的解决其技术问题所采用的技术方案是：

3、一种可协同麦角硫因抗氧化的燕窝肽的制备方法，该方法由以下步骤组成：

4、s1、将干燕窝泡发后炖煮，获得炖煮燕窝浆液；

5、s2、将炖煮燕窝浆液冷却，加入木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和复合风味蛋白酶进行酶解，再用沸水灭酶10min，获得酶解液；

6、s3、将氯化胆碱、乳酸和甘油按质量比3∶1∶1混合，加入占氯化胆碱、乳酸和甘油总质量30%的水，加热搅拌至形成清澈透明的低共熔溶剂；

7、s4、将酶解液与低共熔溶剂按体积比30∶40混合，于65℃超声处理，分离纯化后获得含燕窝肽的滤液；

8、s5、将含燕窝肽的滤液进行冷冻干燥，然后粉碎、过筛，获得燕窝肽粉；

9、s6、对燕窝肽粉进行肽结构鉴定，确定氨基酸序列为pssiatt的燕窝肽1号；

10、s7、按照燕窝肽1号的氨基酸序列，采用固相法合成燕窝肽1号。

11、根据上述的可协同麦角硫因抗氧化的燕窝肽的制备方法制得的燕窝肽。

12、一种协同麦角硫因抗氧化的组合物，该组合物包含麦角硫因和上述方法制得的燕窝肽，麦角硫因与燕窝肽的质量比为7.6:1，组合物中麦角硫因的质量百分比浓度为0.00025%，燕窝肽的质量百分比浓度为0.000033%。

13、与现有技术相比，本发明提供的一种可协同麦角硫因抗氧化的燕窝肽及其制备方法和应用，具有以下有益效果：

14、（1）本发明采用先酶解后低共熔溶剂提取的联合工艺制备燕窝肽，酶解步骤利用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和复合风味蛋白酶三种酶进行复配酶解，通过不同酶切位点的协同作用充分释放燕窝中的活性肽段，后续低共熔溶剂提取体系环境友好、选择性强，可进一步富集释放出的活性肽段。相较于传统水提制备燕窝肽，本发明的联合提取工艺能够显著提升燕窝肽的提取率，并有效保留唾液酸等功效成分。

15、（2）本发明通过对燕窝肽粉进行质谱鉴定和数据库比对，从复杂酶解物中筛选确定了氨基酸序列为pssiatt的燕窝肽1号，并经固相合成获得高纯度肽段。该燕窝肽1号能够显著提升人真皮成纤维细胞线粒体atp生成恢复率，具有优异的线粒体能量代谢改善功能，能够作为与麦角硫因协同增效的核心活性成分。

16、（3）本发明将燕窝肽1号与麦角硫因按特定质量比进行复配，在极低剂量下即产生了显著的协同增效作用，能够显著提升人真皮成纤维细胞线粒体atp生成恢复率和ros清除率，以远低于单用最优浓度的剂量实现了远超单用最优效果的抗氧化能力。

17、（4）本发明首次揭示了燕窝肽1号可上调麦角硫因专属转运蛋白octn1的表达，同时可促进肠道对麦角硫因的吸收。燕窝肽1号一方面通过上调octn1转运蛋白的表达增强细胞对麦角硫因的特异性转运能力，另一方面通过促进肠道吸收提高麦角硫因的生物利用度，从吸收和转运两个环节协同提升麦角硫因的抗氧化效率。

18、（5）本发明提供的燕窝肽1号与麦角硫因的组合物能够协同维持线粒体形态完整性，改善因氧化应激导致的线粒体碎片化损伤，从细胞能量代谢和结构保护两个层面共同发挥抗氧化作用。

1.一种可协同麦角硫因抗氧化的燕窝肽的制备方法，其特征在于，由以下步骤组成：

2.根据权利要求1所述的可协同麦角硫因抗氧化的燕窝肽的制备方法，其特征在于，在步骤s1中，所述泡发的料液质量体积比为干燕窝：纯水=1：12，泡发温度为20～30℃，泡发时间为4h；所述炖煮的温度为115℃，炖煮时间为15min；将炖煮后的燕窝浆液于60～85℃保温2h。

3.根据权利要求1所述的可协同麦角硫因抗氧化的燕窝肽的制备方法，其特征在于，在步骤s2中，将所述炖煮燕窝浆液冷却至50℃，加入所述木瓜蛋白酶、所述胰蛋白酶和所述复合风味蛋白酶，于50℃、ph值为7.5的条件下酶解6h，再用沸水灭酶10min；其中，所述木瓜蛋白酶的添加量为所述炖煮燕窝浆液质量的0.5%，酶活力为15万iu；所述胰蛋白酶的添加量为所述炖煮燕窝浆液质量的0.3%，酶活力为25万iu；所述复合风味蛋白酶的添加量为所述炖煮燕窝浆液质量的0.1%，酶活力为2万iu。

4.根据权利要求1所述的可协同麦角硫因抗氧化的燕窝肽的制备方法，其特征在于，在步骤s3中，所述氯化胆碱、乳酸和甘油按质量比3∶1∶1充分混合后，加入占所述氯化胆碱、乳酸和甘油总质量30%的水，于65℃水浴加热，搅拌30～60min至液体呈清澈透明状，获得所述低共熔溶剂。

5.根据权利要求1所述的可协同麦角硫因抗氧化的燕窝肽的制备方法，其特征在于，步骤s4具体包括以下子步骤：

6.根据权利要求1所述的可协同麦角硫因抗氧化的燕窝肽的制备方法，其特征在于，步骤s5具体包括以下子步骤：

7.根据权利要求1所述的可协同麦角硫因抗氧化的燕窝肽的制备方法，其特征在于，在步骤s6中，所述肽结构鉴定采用液相色谱-串联质谱法，通过数据库比对筛选匹配得分≥40、假阳性率＜1%、质谱相对信号强度＞109的肽段，确定所述氨基酸序列为pssiatt的燕窝肽1号。

8.根据权利要求1所述的可协同麦角硫因抗氧化的燕窝肽的制备方法，其特征在于，步骤s7具体包括以下子步骤：

9.根据权利要求1至8中任一项所述的可协同麦角硫因抗氧化的燕窝肽的制备方法制得的燕窝肽。

10.一种协同麦角硫因抗氧化的组合物，其特征在于，包含麦角硫因和权利要求9所述的燕窝肽，所述麦角硫因与所述燕窝肽的质量比为7.6:1，所述组合物中所述麦角硫因的质量百分比浓度为0.00025%，所述燕窝肽的质量百分比浓度为0.000033%。