一种具有抑膻效果的混合乳酸菌菌株、制备方法及其应用

本发明涉及微生物，具体为一种具有抑膻效果的混合乳酸菌菌株、制备方法及其应用。

背景技术：

1、山羊奶是人体所需蛋白质和矿物质的极好来源，其中钙、钾、磷、镁和维生素a的含量要高于牛乳。山羊奶相较于牛乳更容易被人体吸收，这是因为其乳脂球和酪蛋白分子小于牛乳。然而，山羊奶及其制品（如奶酪、酸奶）普遍存在一种特有的、强烈的膻味，其主要源于山羊奶脂肪中富含的短链脂肪酸（如己酸、辛酸、癸酸）。这种特殊气味严重影响了产品的口感和风味接受度，限制了消费群体的扩大和山羊奶产业的进一步发展。

2、目前，工业生产中为了掩盖或去除山羊奶的膻味，通常采用物理、化学或生物方法。物理方法如脱臭、真空处理等，设备投资大、能耗高，且可能导致热敏性营养物质的损失。化学方法如添加风味掩蔽剂、酸、碱等，则可能引入外来化学物质，不符合现代消费者对“清洁标签”和天然食品的追求。

3、生物方法，特别是利用乳酸菌发酵，被认为是一种更为天然、健康且有效的抑膻手段。目前，已有研究尝试使用单一乳酸菌菌株来改善山羊奶制品的风味，但效果往往有限或不稳定。单一菌株的功能特性通常较为单一，无法全面应对复杂膻味物质的构成，为此，我们提出一种具有抑膻效果的混合乳酸菌菌株、制备方法及其应用。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种具有抑膻效果的混合乳酸菌菌株、制备方法及其应用，以解决上述背景技术中提出的降低山羊奶制品的膻味，提升产品风味的问题。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种具有抑膻效果的混合乳酸菌菌株，所述菌株是由弯曲广布乳杆菌（

latilactobacillus curvatus）和植物乳植杆菌（

lactiplantibacillus plantarum）混合而成；

3、所述弯曲广布乳杆菌（

latilactobacillus curvatus）保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no: m 20251551，保藏日期为2025年7月8日；

4、所述植物乳植杆菌（

lactiplantibacillus plantarum）保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no: m 20251552，保藏日期为2025年7月8日。

5、优选的，所述弯曲广布乳杆菌与植物乳杆菌以1:1比例混合。其中，将所述弯曲广布乳杆菌与所述植物乳植杆菌的过夜培养液调整至相同od600=1.0后，按1:1（v/v）比例混合。

6、一种具有抑膻效果的混合乳酸菌菌株的制备方法，包括以下步骤：

7、s1.取手工山羊奶酪与新鲜山羊奶样品，经无菌均质、梯度稀释后涂布于mrs固体培养基，培养后挑取单菌落进行纯化，革兰氏染色及过氧化氢酶实验筛选出疑似乳酸菌，并于-20℃保存；

8、s2.将步骤s1中筛选出的菌株接种在种子培养基中培养至对数期，使用细菌基因组dna抽提试剂盒提取其中总dna；

9、s3.乳酸菌16s rdna片段的pcr扩增与鉴定；

10、s31.使用引物27f和1492r进行pcr扩增；

11、其中，反应体系包括模板、引物、2×taq pcr mix和dd h2o；

12、s32.pcr产物经琼脂糖凝胶进行电泳检测并在在凝胶成像系统中观察并拍照，同时检测是否含有约1500 bp的荧光条带；

13、s33.将最终的pcr结果呈现阳性的扩增产物进行分析测序；

14、s34.以16s rdna的序列同源性大于99%以上作为标准进行属种归类，然后对乳酸菌待测菌株以及相关的模式菌株进行16s rdna序列分析。

15、优选的，在步骤s1中，所述手工山羊奶酪样品在无菌条件下研钵研碎。

16、优选的，在步骤s1中，将革兰氏染色呈阳性，过氧化氢酶呈阴性的疑似乳酸菌用50%的无菌甘油溶液保藏于-20℃冰箱保藏备用；

17、其中，保藏时无菌甘油溶液：菌液=1:1，v/v。

18、优选的，在步骤s31中，所述引物包括上游引物和下游引物，上游引物为27f（5'-agagtttgatcmtggtcag-3'），下游引物为1492r（5'-tacggytaccttgttacgactt-3'）。

19、其中，pcr反应程序为94℃预变性5 min，94℃变性1 min，53℃退火1 min，72℃延伸2 min，设置30个循环。

20、优选的，在步骤s32中，筛选条带在1500 bp左右的菌种，将其扩增产物进行碱基序列检测。

21、一种具有抑膻效果的混合乳酸菌菌株在制备山羊奶酪方面的应用。

22、一种具有抑膻效果的混合乳酸菌菌株在制作山羊发酵乳方面的应用。

23、本发明至少具备以下有益效果：

24、本发明通过对手工山羊奶酪和鲜山羊奶中乳酸菌进行分离鉴定，从中筛选出具有潜在益生性且发酵性能强的乳酸菌cs0002和cs0020，并将其按照比例复配作为复配发酵剂，应用于山羊乳制品的制备，能够明显降低山羊奶酪和酸奶中的不良膻味，改善产品风味。

25、本发明通过菌株抑膻的同时，可通过正常发酵生成风味物质，赋予山羊奶酪、酸奶更柔和的酸感与醇厚的风味，避免了传统抑膻方法可能导致的风味单一或异味问题，实现去膻与提香的双重效果。

26、本发明所选菌株均分离自天然山羊乳制品，经16s rdna测序精准鉴定，保藏于中国典型培养物保藏中心（cctcc），菌种身份清晰、遗传稳定性高，具备工业化应用的安全性与可追溯性。

27、本发明菌株在制备过程中通过多步筛选，精准排除杂菌，确保最终获得的菌株纯度高、身份准确，同时，50%甘油在-20℃条件下的保藏方法可有效维持菌株活性，便于长期储存与后续生产调用，降低菌株保存成本。

28、通过添加本专利菌株，普通山羊乳制品可升级为低膻的特色产品，形成差异化竞争优势，帮助企业提升产品溢价空间，同时，乳酸菌本身为食品级微生物，符合消费者对天然、健康食品的需求，可进一步强化产品的健康属性，提升市场竞争力。

1.一种具有抑膻效果的混合乳酸菌菌株，其特征在于：所述菌株是由弯曲广布乳杆菌（latilactobacillus curvatus）和植物乳植杆菌（lactiplantibacillus plantarum）混合而成；

2.根据权利要求1所述的一种具有抑膻效果的混合乳酸菌菌株，其特征在于：所述弯曲广布乳杆菌与植物乳杆菌以1:1比例混合。

3.一种具有抑膻效果的混合乳酸菌菌株的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的具有抑膻效果的混合乳酸菌菌株的制备方法，其特征在于：在步骤s1中，所述手工山羊奶酪样品在无菌条件下研钵研碎。

5.根据权利要求3所述的具有抑膻效果的混合乳酸菌菌株的制备方法，其特征在于：在步骤s1中，将革兰氏染色呈阳性，过氧化氢酶呈阴性的疑似乳酸菌用50%的无菌甘油溶液保藏于-20℃冰箱保藏备用；

6.根据权利要求3所述的具有抑膻效果的混合乳酸菌菌株的制备方法，其特征在于：在步骤s31中，所述引物包括上游引物和下游引物，上游引物为27f（5'-agagtttgatcmtggtcag-3'），下游引物为1492r（5'-tacggytaccttgttacgactt-3'）；

7.根据权利要求3所述的具有抑膻效果的混合乳酸菌菌株的制备方法，其特征在于：在步骤s32中，筛选条带在1500 bp左右的菌种，将其扩增产物进行碱基序列检测。

8.一种权利要求1-3任一项所述的具有抑膻效果的混合乳酸菌菌株在制备山羊奶酪方面的应用。

9.一种权利要求1-3任一项所述的具有抑膻效果的混合乳酸菌菌株在制作山羊发酵乳方面的应用。