一种抗EZH2蛋白单克隆抗体及其相关产品和用途的制作方法

本发明涉及生物医药，具体涉及一种抗ezh2蛋白单克隆抗体及其用途。

背景技术：

1、zeste基因增强子同源物2（enhancer of zeste homolog 2，ezh2），又称赖氨酸甲基转移酶6，是多梳抑制复合体2（polycomb repressive complex 2，prc2）的核心催化亚基。ezh2主要定位于细胞核，可催化组蛋白h3第27位赖氨酸（h3k27）甲基化，特别是形成h3k27三甲基化（h3k27me3）修饰，从而调控染色质状态和基因转录。ezh2参与胚胎发育、干细胞维持、细胞增殖、分化及免疫调控等多种生物学过程。

2、在肿瘤组织中，ezh2可出现蛋白过表达、基因扩增、功能获得性突变或功能缺失性改变。代表性研究显示，约46%的弥漫性大b细胞淋巴瘤存在ezh2蛋白表达，原发胃肠道弥漫性大b细胞淋巴瘤中的过表达率约为50%；结外nk/t细胞淋巴瘤中的ezh2高表达率约为55.2%，并可与较高增殖指数、进展期疾病及较差生存相关。在实体肿瘤中，约49.8%的浸润性乳腺癌表现为ezh2高表达，部分三阴性乳腺癌队列中的过表达率可超过90%；前列腺癌和结直肠癌中的ezh2阳性率分别可达到约87.5%和69.7%。总体而言，ezh2高表达常与肿瘤细胞增殖、高组织学级别、侵袭性增强及不良预后相关。除蛋白表达升高外，ezh2在部分生发中心来源的b细胞淋巴瘤中还可发生功能获得性突变。研究显示，约21.7%的生发中心b细胞型弥漫性大b细胞淋巴瘤和约7.2%的滤泡性淋巴瘤可出现ezh2 tyr641等位点突变，其他滤泡性淋巴瘤队列中的ezh2突变率约为17%～22%。相关突变可增加h3k27三甲基化水平，促进肿瘤细胞增殖并抑制细胞终末分化；而ezh2蛋白表达水平与基因突变状态并不完全一致，总ezh2蛋白检测通常不能单独替代基因突变检测或h3k27me3检测。

3、随着ezh2在肿瘤发生发展中作用的明确，ezh2及其相关表观遗传通路已成为抗肿瘤药物的重要靶点，目前市场上的兔源或鼠源抗ezh2蛋白单克隆抗体（比如cst公司的d2c9抗体），可用于免疫组织化学、蛋白质免疫印迹、免疫荧光、流式细胞术、免疫沉淀及染色质相关检测。但是现有市售的抗ezh2蛋白单克隆抗体（比如cst公司的d2c9抗体）的检测灵敏度有限，对临床中大量存在的ezh2低表达、异质性表达的淋巴瘤肿瘤样本捕获能力不足，普遍存在染色强度弱、肿瘤阳性细胞检出率低的问题，易发生染色强度降级与信号衰减，造成样本漏检、判读结果失真；此外，市售ezh2抗体对部分真实表达靶抗原的肿瘤样本还容易出现假阴性检测结果，极易导致肿瘤漏诊、分型误判，严重影响诊断准确性，因此，开发一种特异性好、染色稳定、灵敏度高、可有效防止假阴性并适配低表达肿瘤样本检测的新型抗ezh2蛋白单克隆抗体，对提升ezh2相关肿瘤病理诊断的精准度、可靠性具有重要临床价值与应用意义，亟待解决。

技术实现思路

1、本发明第一方面为解决上述技术问题，提供了一种抗ezh2蛋白单克隆抗体，不仅特异性好，能够特异性识别表达ezh2蛋白的细胞，而且具有亲和力高、敏感性和染色强度更高等优势，既有利于防止发生假阴性的问题，又能显著提升低表达肿瘤样本的染色强度与阳性检出率，有效避免染色强度降级导致的漏检问题。

2、一种抗ezh2蛋白单克隆抗体，包含重链和轻链，其中，所述重链包括重链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no:1所示；所述轻链包括轻链可变区，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:3所示。相较于现有的ezh2抗体，本方案所提供的抗ezh2蛋白单克隆抗体，不仅特异性好，能够特异性识别表达ezh2蛋白的细胞，而且抗体自身具有高亲和力特性，抗原结合稳定；相较于市售抗体，本抗体的染色强度和敏感性更高，可显著提升低表达肿瘤样本的染色强度与阳性检出率，有效避免染色强度降级导致的漏检问题，而且有利于防止发生假阴性的问题，使得本抗体具备优异的综合检测性能，有利于进一步提升ezh2相关肿瘤病理检测和诊断的精准度和可靠性，更便于应用于科学研究和非疾病诊断目的检测中。

3、进一步的，抗体的互补决定区cdr按照imgt编号规则定义；所述重链可变区包括hcdr1、hcdr2以及hcdr3，其中，hcdr1的氨基酸序列为：gytftnpy；hcdr2的氨基酸序列为：inpyndey；hcdr3的氨基酸序列为：qwgpiay。

4、进一步的，所述重链的氨基酸序列如seq id no:2所示。

5、进一步的，抗体的互补决定区cdr按照imgt编号规则定义；所述轻链可变区包括lcdr1、lcdr2以及lcdr3，其中，lcdr1的氨基酸序列为：qdinsw；lcdr2的氨基酸序列为：dvs；lcdr3的氨基酸序列为：lagydt。

6、进一步的，所述轻链的氨基酸序列如seq id no:4所示。

7、本发明第二方面还提供了一种用于检测ezh2蛋白的试剂，包含所述抗ezh2蛋白单克隆抗体。由于该抗ezh2蛋白单克隆抗体具有高亲和力、敏感性以及染色强度，能够特异性识别表达ezh2蛋白的细胞，并能够有效防止发生假阴性问题和漏检问题，将其应用到用于检测ezh2蛋白的试剂中，有利于获得更准确的检测结果。

8、本发明第三方面还提供了一种用于检测ezh2蛋白的检测工具，包含所述抗ezh2蛋白单克隆抗体或包含所述试剂。由于该抗ezh2蛋白单克隆抗体具有高亲和力、敏感性以及染色强度，能够特异性识别表达ezh2蛋白的细胞，并能够有效防止发生假阴性问题和漏检问题，将其应用到用于检测ezh2蛋白的试剂中，有利于获得更准确的检测结果。

9、优选的，所述检测工具为试剂盒或试纸条或抗体芯片或检测板。在本方案中，当检测工具为试剂盒时，试剂盒含有所述抗ezh2蛋白单克隆抗体或所述试剂，以便用于检测ezh2蛋白；当检测工具为试纸条时，试纸条含有所述抗ezh2蛋白单克隆抗体或所述试剂，以便用于检测ezh2蛋白；当检测工具为抗体芯片时，抗体芯片含有所述抗ezh2蛋白单克隆抗体或所述试剂，以便用于检测ezh2蛋白；当检测工具为检测板时，检测板含有所述抗ezh2蛋白单克隆抗体或所述试剂，以便用于科学研究和非疾病诊断目的ezh2蛋白检测中。

10、进一步的，所述试剂盒还包括容器，所述抗ezh2蛋白单克隆抗体或试剂设置于所述容器内。

11、本发明第四方面提供了所述抗ezh2蛋白单克隆抗体在制备用于检测ezh2蛋白的工具中的用途。由于该抗ezh2蛋白单克隆抗体具有高亲和力、敏感性以及染色强度，能够特异性识别表达ezh2蛋白的细胞，并能够有效防止发生假阴性问题和漏检问题，将其应用到用于检测ezh2蛋白的工具中，有利于获得更准确的检测结果。

12、进一步的，所述用于检测ezh2蛋白的工具包括试剂或试剂盒或试纸条或抗体芯片或检测板。在本方案中，当所述工具包括试剂时，所述试剂包括所述抗ezh2蛋白单克隆抗体；当所述工具包括试剂盒时，所述抗ezh2蛋白单克隆抗体可以设置于试剂盒内；当所述工具包括试纸条时，所述抗ezh2蛋白单克隆抗体可以设置于试纸条；当所述工具包括抗体芯片时，所述抗ezh2蛋白单克隆抗体可以设置于抗体芯片内；当所述工具包括检测板时，所述抗ezh2蛋白单克隆抗体可以设置于检测板内；都能起到检测ezh2蛋白的功能。

13、与现有技术相比，本发明所提供的一种抗ezh2蛋白单克隆抗体及其相关产品和用途，不仅具有特异性，能够特异性识别表达ezh2蛋白的细胞，而且具有更高的敏感性和染色强度，综合检测性能更优异，不仅能够有效防止发生假阴性的问题，而且能够显著提升低表达肿瘤样本的染色强度与阳性检出率，有效避免染色强度降级导致的漏检问题，从而有利于进一步提升ezh2相关肿瘤病理检测和诊断的精准度和可靠性，更满足市场需求，可广泛应用于科学研究和非疾病诊断目的的检测中。