一种抗人Claudin18.2特异性抗体及其应用的制作方法

本技术涉及生物医药，具体涉及一种特异性结合claudin 18.2的抗体及其应用。

背景技术：

1、近年来全球癌症的发病率和死亡率呈不断上升趋势，癌症已经成为严重威胁人类生命健康和社会发展的重大疾病。根据国际癌症研究机构（iarc）数据，全球每年新发癌症病例已超过1900万，预计到2030年将达到2300万。

2、癌症的攻克一直是人类为之努力奋斗的目标，其的治疗手段包括三大传统技术：手术治疗、化疗和放疗。手术以及放化疗手段在杀灭肿瘤细胞、缩小瘤体方面，作用直接，效果快，但对绝大多数肿瘤的复发和转移却无能为力。依托肿瘤分子生物学与基因组学的发展，人类对肿瘤分子表型的认识不断加深，癌症治疗策略从既往围绕发病部位和形态病理为核心的系统放化疗等手段，逐渐转变为针对驱动基因突变的精准靶向治疗和免疫治疗。

3、在过去的十年里，免疫疗法和靶向药物如帕博利珠单抗、曲妥珠单抗和酪氨酸激酶抑制剂等已经逐步改变了各种癌症的治疗方法。典型的例如曲妥珠单抗，其结合化疗具有相对较好的疗效，但其也存在一定的局限性，具体的，曲妥珠单抗可特异性结合her2，但仅15％胃癌患者表现为her2阳性，而非小细胞肺癌her2阳性仅占2-4%。因此，寻找更有效的方法来治疗恶性肿瘤迫在眉睫。

4、claudin蛋白在调节细胞间隙通透性和维护上皮和内皮细胞层的细胞间黏附方面发挥着至关重要的作用。claudin 18.2（又称cldn 18.2）是claudin 18（又称cldn 18）的一种亚型，是一种高选择性的生物标志物，在正常组织中表达具有高度组织特异性，仅在埋藏于胃粘膜上已分化的上皮细胞中表达，故单克隆抗体检测不到正常组织中的claudin18.2。但是，恶性肿瘤的发生会导致肿瘤细胞表面claudin 18.2表达上调，并且细胞间的紧密连接被破坏，使肿瘤细胞表面的claudin18.2表位暴露出来，成为特定的靶点，针对claudin18.2的治疗性抗体具有更大的抗癌潜力和更低的毒性，以及针对claudin18.2的检测性抗体具有更好的实际应用。claudin18.1与claudin18.2结构相似，仅仅在胞外结构域ecl1序列上有7个氨基酸残基的差异，所以要开发只特异性识别claudin18.2，而不识别claudin18.1的抗体成为了claudin18.2抗体开发的难点所在。

5、目前在胃癌细胞系（50-80%）中，claudin18.2已被证明参与了肿瘤细胞的增殖和趋化。此外，在胰腺癌（50％）、食道癌（30％）和非小细胞肺癌（25％）中也经常观察到异常激活的claudin18.2。因此claudin18.2被认为是多种恶性肿瘤的潜在治疗和/或检测靶点，此靶点的发现也为恶性肿瘤的检测和/或治疗提供了一种新的选择。

技术实现思路

1、为了解决上述任一问题，本技术提供了一种特异性结合claudin 18.2的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段对claudin 18.2具有较好的结合作用。进一步地，包括所述抗体或抗原结合片段的抗体偶联物，例如抗体药物偶联物（adc），具有较好的claudin 18.2靶向性和较好的细胞毒活性，在治疗claudin 18.2高表达恶性肿瘤方面具有广阔的应用前景。

2、第一方面，本技术提供了一种结合claudin 18.2的抗体或其抗原结合片段，抗体或其抗原结合片段包括重链互补决定区（hcdr）1、hcdr2和hcdr3，轻链互补决定区（lcdr）1、lcdr2和lcdr3，其中，

3、hcdr1的氨基酸序列包括gx1tfx2sfgmn，其中x1为f或a，x2为n、a或s；

4、hcdr2的氨基酸序列包括sisx3gsx4x5x6x7yx8dx9x10x11g，其中x3为s、a或g，x4为s或n，x5为t、c、s或n，x6为i或a，x7为y或a，x8为a、s或g，x9为t或a，x10为v或a，x11为k或a；

5、hcdr3的氨基酸序列包括x12x13yx14x15x16fx17y，其中x12为s或a，x13为y或a，x14为g或a，x15为n、a或y，x16为s或a，x17为a、s或g；

6、lcdr1的氨基酸序列包括kx18sx19x20lx21x22sx23x24x25kx26yx27x28，其中x18为s或a，x19为q或a，x20为s或a，x21为l或a，x22为n或a，x23为g或a，x24为n或a，x25为q或a，x26为n或a，x27为l或a，x28为t或a；

7、lcdr2的氨基酸序列包括wx29sx30rx31x32，其中x29为a或s，x30为t或a，x31为e、a或q，x32为s或a；以及，

8、lcdr3的氨基酸序列包括qndx33syx34fx35，其中x33为y或a，x34为p或a，x35为t或a。

9、本技术提供的结合claudin 18.2的抗体或其抗原结合片段对claudin 18.2具有特异性良好，亲和力良好的优点。

10、第二方面，本技术提供了一种多核苷酸，多核苷酸编码本技术第一方面的抗体或其抗原结合片段。

11、第三方面，本技术提供了一种重组载体，重组载体包括本技术第二方面的多核苷酸。

12、第四方面，本技术提供了一种宿主细胞，宿主细胞包括本技术第二方面的多核苷酸、和/或本技术第三方面的重组载体。

13、第五方面，本技术提供了一种抗体偶联物或其互变异构体、立体异构体、对映异构体、非对映异构体、外消旋体、溶剂合物、同位素衍生物、药学上可接受的盐或其药学上可接受的盐的溶剂合物，抗体偶联物包括本技术第一方面的抗体或其抗原结合片段，连接单元和荷载，可选地，抗体或其抗原结合片段和荷载通过连接单元连接。

14、本技术提供的抗体偶联物，例如抗体药物偶联物，展示出杀伤claudin 18.2高表达肿瘤细胞的效果，发挥了抗肿瘤作用。

15、第六方面，本技术提供了一种嵌合抗原受体，嵌合抗原受体包括本技术第一方面的抗体或其抗原结合片段。

16、第七方面，本技术提供了一种药物组合物，药物组合物包括本技术第一方面的抗体或其抗原结合片段、本技术第二方面的多核苷酸、本技术第三方面的重组载体、本技术第四方面的宿主细胞、本技术第五方面的抗体偶联物、和/或本技术第六方面的嵌合抗原受体，以及至少一种药学上可接受的辅料。

17、第八方面，本技术提供了一种试剂盒，试剂盒包括本技术第一方面的抗体或其抗原结合片段、本技术第二方面的多核苷酸、本技术第三方面的重组载体、本技术第四方面的宿主细胞、本技术第五方面的抗体偶联物、本技术第六方面的嵌合抗原受体，和/或本技术第七方面的药物组合物。

18、第九方面，本技术提供了本技术第一方面的抗体或其抗原结合片段、本技术第二方面的多核苷酸、本技术第三方面的重组载体、本技术第四方面的宿主细胞、本技术第五方面的抗体偶联物、本技术第六方面的嵌合抗原受体、本技术第七方面的药物组合物，和/或本技术第八方面的试剂盒在制备用于检测、预防、缓解和/或治疗疾病的药物或试剂中的用途，可选地，疾病包括癌症，更可选地，疾病包括胃癌、胰腺癌、食道癌、非小细胞肺癌和结肠癌。

19、第十方面，本技术提供了一种检测、预防、缓解和/或治疗疾病的方法，方法包括向有此需要的受试者施用有效剂量的本技术第一方面的抗体或其抗原结合片段、本技术第二方面的多核苷酸、本技术第三方面的重组载体、本技术第四方面的宿主细胞、本技术第五方面的抗体偶联物、本技术第六方面的嵌合抗原受体、本技术第七方面的药物组合物，和/或本技术第八方面的试剂盒，可选地，疾病包括癌症，更可选地，疾病包括胃癌、胰腺癌、食道癌、非小细胞肺癌和结肠癌。

20、应当理解，本部分所描述的内容并非旨在标识本技术的实施例的关键或重要特征，也不用于限制本技术的范围。本技术的其它特征将通过以下的说明书而变得容易理解。