包含抗-多巴胺转运蛋白抗体和Bcl-2蛋白的融合蛋白及其应用

本发明是有关于一种包含抗-多巴胺转运蛋白抗体和bcl-2蛋白的融合蛋白及其应用。

背景技术：

1、帕金森氏症(parkinson’s disease)属于运动疾患，好发于五、六十岁以上的人口，表现的症状以肢体静止型颤抖、肌肉僵硬、动作迟缓、姿态不稳导致平衡失调为主。早期症状常出现有单手规律性颤抖，动作变慢，肌肉僵硬逐渐地蔓延全身，到了末期几乎都要靠轮椅才能行动。帕金森氏症是由于位在中脑的黑质致密部(substantia nigra parscompacta)释放多巴胺作为神经传导因子的神经元死亡而导致多巴胺缺乏，进而使得基底核(basal ganglia)中仰赖黑质细胞提供多巴胺做为神经传导物质的纹状体(striatum)受到影响，无法调节大脑皮质、视丘(thalamus)与锥体外系统(extrapyramidal system)的信息，因而引起各肌肉之间协调运作功能上的障碍。如同阿兹海默症，帕金森氏症亦无法可治愈。目前临床上以补充左旋多巴胺对帕金森氏症患者进行症状缓解，但左旋多巴胺的使用经常造成副作用；症状更严重药物无法控制时也可以考虑在脑部植入电极进行深层脑部刺激(deep brain stimulation)，但此为脑部手术而具高度侵入性与不确定性。而因为神经元持续死亡，故不论药物或手术最多仅能减轻某些症状，但无治疗功能。

2、目前临床上帕金森氏症药物治疗效果有限且具有严重副作用，许多患者无法持续治疗。更重要的是，药物仅缓解症状，但未能根本解决神经退化和死亡的问题，所以如何开发出一种可以真正治疗帕金森氏症的新药物是本发明在此希望解决的重要课题。

3、为了解决上述问题，本领域的技术人员亟需研发出新颖的用于治疗帕金森氏症的医药组合物以造福有此需求的广大人群。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的为提供一种融合蛋白(fusion protein)，包含抗-多巴胺转运蛋白(dopamine transporter, dat)抗体以和bcl-2蛋白。

2、在本发明的实施例中，该抗-多巴胺转运蛋白抗体为单链可变片段(single chainvariable fragment, scfv)或纳米抗体(nanobody, nb)。

3、在本发明的实施例中，该抗-多巴胺转运蛋白抗体包含如序列识别号：2所示氨基酸序列。

4、在本发明的实施例中，该bcl-2蛋白包含如序列识别号：3所示氨基酸序列。

5、在本发明的实施例中，该融合蛋白的氨基酸序列是如序列识别号：1或序列识别号：6所示。

6、在本发明的实施例中，该融合蛋白进一步包含绿色荧光蛋白，其中该绿色荧光蛋白是澳洲多管水母(aequorea australis)绿色荧光蛋白1 (aausfp1)，该aausfp1与该bcl-2蛋白的n-端连接。

7、在本发明的实施例中，该aausfp1的氨基酸序列是如序列识别号：4或序列识别号：7所示。

8、在本发明的实施例中，该融合蛋白进一步包含gs连接子(gs linker)，其中该gs连接子包含如序列识别号：5所示氨基酸序列，该gs连接子连接该抗-多巴胺转运蛋白抗体的c-端和该aausfp1的n-端。

9、在本发明的实施例中，该融合蛋白表达于线粒体的外膜。

10、在本发明的实施例中，该融合蛋白是通过将表达该融合蛋白的载体以人类胚肾细胞产生的慢病毒颗粒包覆，经由慢病毒转导而从脐带间充质干细胞(umsc)被分离。

11、在本发明的实施例中，该纳米抗体包含互补决定区1 (complementaritydetermining region 1, cdr1)、互补决定区2 (complementarity determining region2, cdr2)和互补决定区3 (complementarity determining region 3, cdr3)。

12、在本发明的实施例中，该cdr1的氨基酸序列是如序列识别号：8所示，该cdr2的氨基酸序列是如序列识别号：9所示，和该cdr3的氨基酸序列是如序列识别号：10所示。

13、本发明的另一目的为提供一种医药组合物，包含如前所述的融合蛋白和医药学上可接受的载剂。

14、本发明的另一目的为提供一种如前所述的融合蛋白用于制备治疗帕金森氏症的医药品的用途。

15、在本发明的实施例中，该融合蛋白保留过度表达α-突触核蛋白(α-synuclein, α-syn)的人类神经母细胞瘤细胞中的神经突。

16、在本发明的实施例中，该医药品改善患有帕金森氏症的个体的运动功能和存活率。

17、综上所述，本发明融合蛋白通过下面实施例所例示的结果，达到治疗帕金森氏症的功效。

18、以下将进一步说明本发明的实施方式，下述所列举的实施例是用以阐明本发明，并非用以限定本发明的范围，任何本领域技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，当可做些许更动与润饰，因此本发明的保护范围当视后附的权利要求书所界定的内容为准。

1.一种融合蛋白，包含抗-多巴胺转运蛋白抗体以及bcl-2蛋白。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述抗-多巴胺转运蛋白抗体为单链可变片段或纳米抗体。

3.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述抗-多巴胺转运蛋白抗体包含如序列识别号：2所示胺基酸序列。

4.根据权利要求3所述的融合蛋白，其中所述bcl-2蛋白包含如序列识别号：3所示氨基酸序列。

5.根据权利要求1所述的融合蛋白，其氨基酸序列是如序列识别号：1或序列识别号：6所示。

6.根据权利要求1所述的融合蛋白，进一步包含绿色荧光蛋白，其中所述绿色荧光蛋白是澳洲多管水母(aequorea australis)绿色荧光蛋白1 (aausfp1)，所述aausfp1与所述bcl-2蛋白的n-端连接。

7.根据权利要求6所述的融合蛋白，其中所述aausfp1的氨基酸序列是如序列识别号：4或序列识别号：7所示。

8.根据权利要求6所述的融合蛋白，进一步包含gs连接子，其中所述gs连接子包含如序列识别号：5所示氨基酸序列，所述gs连接子连接所述抗-多巴胺转运蛋白抗体的c-端和所述aausfp1的n-端。

9.根据权利要求1所述的融合蛋白，其表达于线粒体的外膜。

10.根据权利要求1所述的融合蛋白，其是通过将表达所述融合蛋白的载体以人类胚肾细胞产生的慢病毒颗粒包覆，经由慢病毒转导而从脐带间充质干细胞(umsc)被分离。

11.根据权利要求2所述的融合蛋白，其中所述纳米抗体包含互补决定区1 (cdr1)、互补决定区2 (cdr2)和互补决定区3 (cdr3)。

12.根据权利要求11所述的融合蛋白，其中所述cdr1的氨基酸序列是如序列识别号：8所示，所述cdr2的氨基酸序列是如序列识别号：9所示，和所述cdr3的氨基酸序列是如序列识别号：10所示。

13.一种医药组合物，包含根据权利要求1至12中任一项所述的融合蛋白和医药学上可接受的载剂。

14.一种根据权利要求1至12中任一项所述的融合蛋白用于制备治疗帕金森氏症的医药品的用途。

15.根据权利要求14所述的用途，其中所述融合蛋白保留过度表达α-突触核蛋白(α-syn)的人类神经母细胞瘤细胞中的神经突。

16.根据权利要求14所述的用途，其中所述医药品改善患有帕金森氏症的个体的运动功能和存活率。