一种识别1型单纯疱疹病毒的脱氧核酶探针
本发明属于脱氧核酶探针,具体涉及一种识别1型单纯疱疹病毒的脱氧核酶探针。
背景技术:
1、功能核酸(functional nucleic acids, fnas)作为一种新兴的分子探针,包括脱氧核酶(dnazymes)、适配体(aptamers)、适体核酶(aptazymes)等,能够特异性识别特定的生物标志物,核酸分子与目标物之间不同的结合与识别机制能够产生不同的响应信号,从而实现不同目标物的分析检测。以功能核酸作为分子识别元件的生物传感器在核酸、蛋白、金属离子等检测领域广受关注,与抗体相比,功能核酸具有易于合成和修饰、靶标范围广、生物稳定性强等优势,有利于构建荧光、比色、电化学等不同响应机制及信号输出的生物传感器。
2、脱氧核酶中最常见的一类是rna切割型脱氧核酶(rna-cleaving dnazymes,rcds),rcds是经过体外筛选过程获得的具有催化功能的单链dna分子,根据其裂解机制,与目标物结合后能够以荧光信号的形式反应靶标分子的存在水平,进而衍生出了针对不同目标物的多种检测分析策略。
3、致病病毒的潜伏传播与反复感染是威胁人类健康的重要公共卫生风险,实现病毒快速、灵敏检测,对源头防控、阻断传播链条具有重要意义。开发高性能、操作简便的病毒检测平台,是实现病原体精准监测与感染防控的关键手段。1型单纯疱疹病毒(herpessimplex virus type 1,hsv-1)是临床常见的嗜神经性双链dna病毒,可引发社区及院内感染,人群感染率极高,严重威胁人体皮肤黏膜与神经系统健康。
4、hsv-1主要通过黏膜接触、唾液及密切接触传播,传播隐匿性强、感染范围广。该病毒感染人体后不会被彻底清除,可长期潜伏于三叉神经节等神经组织中,在机体免疫力下降、应激刺激等条件下被激活复制,造成病情反复发作。临床轻症多表现为口唇疱疹、黏膜炎症,反复发作严重影响患者生活质量;重症可诱发疱疹性角膜炎、病毒性脑炎、脑膜炎等危重病症,致残率与致死率较高。同时,潜伏性hsv-1感染与神经系统慢性病变密切相关,存在长期健康隐患。目前临床尚无根治hsv-1的药物,常规抗病毒药物仅能缓解急性期症状,无法清除潜伏病毒。加之抗病毒药物的不规范使用,hsv-1耐药毒株逐年增多,大幅提升临床治疗难度,已成为全球公共卫生领域的突出问题。
5、现阶段hsv-1主流检测技术均存在明显短板,难以满足快速检测需求。传统病毒培养法准确度高,但检测周期长、灵敏度低、操作繁琐,无法适配早期快速筛查。基因检测技术检测速度较快,但选择性不足、易出现非特异性扩增,且高度依赖精密仪器与专业操作,难以实现现场即时检测。免疫分析法反应条件严苛,易发生交叉污染,检测稳定性较差。因此,开发快速、灵敏、高特异性的hsv-1检测技术尤为关键。
6、基于功能核酸的生物传感技术凭借特异性强、灵敏度高、操作简便、可现场检测等优势,在病原体检测领域应用广泛,目前已有多种病原靶向脱氧核酶被成功开发并应用于传感检测。但现阶段针对hsv-1的特异性脱氧核酶仍较为匮乏。因此,亟需开发靶向识别hsv-1的脱氧核酶,构建简易高效的生物传感检测平台,实现该病毒的快速、灵敏检测,为临床早期诊断与公共卫生防控提供技术支撑。
技术实现思路
1、鉴于此,本发明的目的是提供一种识别1型单纯疱疹病毒的脱氧核酶探针。
2、为了实现上述目的,本发明提供如下技术方案:
3、第一方面,本发明提供了一种识别1型单纯疱疹病毒的脱氧核酶探针,所述脱氧核酶探针的核苷酸序列为如下序列(1)~(5)中的任一个:
4、(1)5'-ctatgaactgacqrfgacctcactaccaaggatagagtggatgcgatgggagatggtaggcagaccattgaaagttagactacctctaactctcacat-3';
5、(2)5'-ctatgaactgacqrfgacctcactaccaaggatagagtggatgcgatggtactgtctggtaagtcggctcatgtgtgaactacctctaactctcacat-3';
6、(3)5'-ctatgaactgacqrfgacctcactaccaaggatagagtggatgcgatgactaaggagatggtaggcagttattgcgagactacctctaactctcacat-3';
7、(4)5'-ctatgaactgacqrfgacctcactaccaaggatagagtggatgcgatgactagggacacggcctgtaagaatgtaagaactacctctaactctcacat-3';
8、(5)5'-ctatgaactgacqrfgacctcactaccaaggatagagtggatgcgatgggagcaggaagtcagacagtttattgtgagactacctctaactctcacat-3';
9、其中,序列(1)、序列(2)、序列(3)或序列(4)构成顺式结构脱氧核酶;
10、其中,r表示rna碱基a,f表示含有荧光基团的t碱基,q表示含有淬灭基团的t碱基。
11、基于上述技术方案,进一步地,所述荧光基团为fam。
12、基于上述技术方案,进一步地,所述淬灭基团为dabcyl。
13、第二方面,本发明提供上述的脱氧核酶探针在生物传感方面的应用,用于特异性识别ⅰ型单纯疱疹病毒。
14、基于上述技术方案,进一步地,所述应用的具体过程为:将所述的脱氧核酶探针和含待测的病毒裂解液的缓冲溶液混合均匀,反应0.1~4h,检测反应液的荧光强度。
15、基于上述技术方案,进一步地,所述脱氧核酶探针在特异性识别ⅰ型单纯疱疹病毒的条件为:ph为4.5~5.5,室温,na+作为辅助因子。
16、基于上述技术方案,进一步地,na+的浓度为80~120 mm。
17、基于上述技术方案,进一步地,所述ⅰ型单纯疱疹病毒的响应浓度≥反应体系。
18、第三方面,本发明提供一种识别1型单纯疱疹病毒的试剂盒,所述试剂盒中包括所述脱氧核酶探针。
19、基于上述技术方案,进一步地,所述试剂盒中包括辅助因子和ph缓冲试剂。
20、基于上述技术方案,进一步地,所述辅助因子为na+。
21、与现有技术相比,本发明具有如下有益效果:
22、1.本发明获得了多条脱氧核酶探针,脱氧核酶探针信号随时间的延长而增加。
23、2.本发明提供的脱氧核酶探针稳定性好,灵敏度高,特异性好,可以在生物传感应用方面发挥优势。
1.一种识别1型单纯疱疹病毒的脱氧核酶探针,其特征在于,所述脱氧核酶探针的核苷酸序列为如下序列(1)~(5)中的任一个:
2.根据权利要求1所述的脱氧核酶探针,其特征在于,所述荧光基团为6-羧基荧光素(6-fam)。
3.根据权利要求1所述的脱氧核酶探针,其特征在于,所述淬灭基团为4-(4-二甲氨基苯基偶氮)苯甲酸(dabcyl)。
4.根据权利要求1~3任一项所述脱氧核酶探针在生物传感方面的应用,其特征在于,用于特异性识别ⅰ型单纯疱疹病毒。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,具体过程为:将所述的脱氧核酶探针和含待测的病毒裂解液的缓冲溶液混合均匀,反应0.1~4h,检测反应液的荧光强度。
6.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述脱氧核酶探针在特异性识别ⅰ型单纯疱疹病毒的条件为:ph为4.5~5.5,室温,na+作为辅助因子。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,na+的浓度为80~120 mm。
8.一种识别1型单纯疱疹病毒的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒中包括所述脱氧核酶探针。
9.根据权利要求8所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒中包括辅助因子和ph缓冲试剂。
10.根据权利要求9所述的试剂盒,其特征在于,所述辅助因子为na+。