有机物浓缩方法、有机物检测方法以及有机物浓缩用试剂盒与流程

本发明涉及有机物浓缩方法、有机物检测方法以及有机物浓缩用试剂盒。本申请基于2024年6月21日向日本提出的专利申请“特愿2024-100713号”要求优先权，并且在此引用该申请的内容。

背景技术：

1、以往，已知有通过双水相体系的液-液相分离对核酸、蛋白质等有机物进行浓缩的技术。

2、例如，非专利文献1中记载了如下内容：在分为富含葡聚糖的相与富含聚乙二醇的相的环境中，能够将核酸、蛋白质等有机物浓缩于富含葡聚糖的相中。

3、在该文献中，公开了相对于富含聚乙二醇的相而言在富含葡聚糖的相中能够将alp分子与cas13/rna复合体浓缩30倍以上，通过该浓缩能够提高数字生物检测的检测灵敏度。

4、现有技术文献

5、非专利文献

6、非专利文献1：y. minagawa et al., on-chip enrichment system for digitalbioassay based on aqueous two-phase system. acs nano, 17（1）:212-220, 2022。

技术实现思路

1、发明要解决的问题

2、然而，在样品中包含的检测对象的有机物为极微量的情况下，非专利文献1中记载的基于液-液相分离的浓缩技术无法充分进行浓缩，其结果是存在无法检测到目的有机物的可能性。

3、另外，虽然也可以使用与浓缩的有机物特异性结合的抗体来浓缩有机物，但是也存在抗体成本高这样的问题。

4、本发明是鉴于上述问题而做出的发明，本发明的目的在于提供一种低价且与以往的基于液-液相分离的浓缩技术相比能够高效地对样品中包含的检测对象的有机物进行浓缩的有机物的浓缩技术。

5、用于解决问题的手段

6、为了解决上述问题，本发明的一方面包括如下实施方式。

7、[1] 一种有机物的浓缩方法，其包括：将多糖、聚醚以及包含所述有机物的液体样品混合得到包含所述多糖含量最高的第一相与所述聚醚含量最高的第二相的第一混合液的工序；以及将所述第一相与浓缩用聚合物混合得到第二混合液的工序，所述浓缩用聚合物是在葡聚糖中引入下述式r7所示的基团而成的化合物，除了下述式r7所示的所述基团以外的所述浓缩用聚合物的平均分子量是5千～10万，

8、

9、式中，r8是碳数为1以上且20以下的二价烃基，其任选包含选自由酯键、醚键、羰基键以及酰胺键所组成的组中的一种以上。n2以平均计为2～250。n3表示向葡聚糖引入的上述式r7所示的基团的引入数量，在所述平均分子量中每2万以平均计引入数量大于1且为10以下；在所述平均分子量小于2万的情况下，以平均计引入数量为1以上且10以下。r9为碳数1～5的烃基或氢原子。

10、[2] 如项[1]所述的有机物的浓缩方法，其中所述r8是选自由下述通式（1-1）～（1-9）所组成的组中的基团，

11、

12、式（1-1）～（1-9）中的r10是选自由下述式（2-1）～（2-9）所组成的组中的二价基团。

13、

14、[3] 如项[1]或[2]所述的有机物的浓缩方法，其中所述多糖是选自由葡聚糖、甲壳素、菊糖、肝素、纤维素、甲基纤维素、海藻酸以及它们的盐所组成的组中的至少一种。

15、[4] 如项[1]至[3]中任一项所述的有机物的浓缩方法，其中所述多糖是葡聚糖。

16、[5] 如项[1]至[4]中任一项所述的有机物的浓缩方法，其中所述聚醚是选自由聚乙二醇、聚丙二醇、聚丁二醇以及它们的混合物所组成的组中的至少一种。

17、[6] 如项[1]至[5]中任一项所述的有机物的浓缩方法，其中所述聚醚是聚乙二醇。

18、[7] 如项[1]至[6]中任一项所述的有机物的浓缩方法，其中所述浓缩用聚合物是下述式（3）所示的化合物，

19、

20、在式（3）中，n1以平均计为16～320。n2以平均计为2～250。n3表示所述式r7所示的基团的引入数量，在所述平均分子量中每2万以平均计引入数量大于1且为10以下；在所述平均分子量小于2万的情况下，以平均计引入数量为1以上且10以下。对于所述式r7所示的基团结合的碳原子而言，在未引入所述式r7所示的基团的情况下结合oh基以替代所述式r7所示的基团。r9为氢原子或甲基。

21、[8] 如项[7]所述的有机物的浓缩方法，其中在所述式（3）中n1以平均计为80～180，n2以平均计为60～110，n3以平均计为5～9。

22、[9] 如项[1]至[8]中任一项所述的有机物的浓缩方法，其中所述有机物是选自由核酸、蛋白质以及病毒所组成的组中的有机物。

23、[10] 如项[1]至[9]中任一项所述的有机物的浓缩方法，其还包括：

24、对所述第二混合液进行离心分离处理的工序。

25、[11] 如项[1]至[10]中任一项所述的有机物的浓缩方法，其中，在得到所述第一混合液的工序中，将所述液体样品、所述多糖以及所述聚醚混合，并进行离心分离处理。

26、[12] 如项[1]至[11]中任一项所述的有机物的浓缩方法，其中所述第二混合液中的所述浓缩用聚合物的浓度为1质量%以上。

27、[13] 一种有机物的检测方法，其包括：

28、针对通过项[10]所述的有机物的浓缩方法得到的所述第二混合液经离心分离处理后的多个相中所述浓缩用聚合物含量最高的相内所包含的所述有机物进行检测的工序。

29、[14] 一种有机物浓缩用试剂盒，其具备多糖、聚醚以及项[1]所述的浓缩用聚合物，其中通过项[1]至[12]中任一项所述的有机物的浓缩方法来浓缩有机物。

30、[15] 一种有机物的浓缩方法，其包括：

31、第一浓缩工序，将多糖、聚醚以及包含所述有机物的液体样品混合，生成包含所述多糖（葡聚糖）含量最高的第一相与所述聚醚含量最高的第二相的第一混合液，使所述有机物从所述第二相转移至所述第一相进行浓缩；以及

32、第二浓缩工序，将所述第一相与浓缩用聚合物混合以生成第二混合液，使所述有机物从所述第一相转移至所述浓缩用聚合物而进行浓缩。

33、[16] 如项[15]所述的有机物的浓缩方法，其中，所述浓缩用聚合物是在葡聚糖中引入了上述式r7所示的基团的化合物，除了上述式r7所示的基团以外的所述浓缩用聚合物的平均分子量是5千～10万。

34、发明效果

35、基于本发明，能够在将想要浓缩的有机物浓缩于多糖含量最高的第一相中后，在通过将第一相与浓缩用聚合物混合得到的第二混合液中，将有机物浓缩在通过液-液相分离生成的浓缩用聚合物含量最高的相中。因此，能够提供一种低价且与以往相比能够高效地浓缩样品中包含的检测对象的有机物的浓缩技术。

1.一种有机物的浓缩方法，其中，

2.如权利要求1所述的有机物的浓缩方法，其中，

3.如权利要求1所述的有机物的浓缩方法，其中，

4.如权利要求3所述的有机物的浓缩方法，其中，

5.如权利要求1所述的有机物的浓缩方法，其中，

6.如权利要求5所述的有机物的浓缩方法，其中，

7.如权利要求1所述的有机物的浓缩方法，其中，

8.如权利要求7所述的有机物的浓缩方法，其中，

9.如权利要求1至8中任一项所述的有机物的浓缩方法，其中，

10.如权利要求1至8中任一项所述的有机物的浓缩方法，其还包括：

11.如权利要求1至8中任一项所述的有机物的浓缩方法，其中，

12.如权利要求1至8中任一项所述的有机物的浓缩方法，其中，

13.一种有机物的检测方法，其包括：

14.一种有机物浓缩用试剂盒，其具备多糖、聚醚以及权利要求1所述的浓缩用聚合物，其中通过权利要求1所述的有机物的浓缩方法来浓缩有机物。

15.一种有机物的浓缩方法，其包括：

16.如权利要求15所述的有机物的浓缩方法，其中，