用于从通过注射递送的合成mRNA表达蛋白质的方法与流程

本公开文本涉及寡糖或葡糖苷酶增强通过注射递送的合成rna的蛋白质表达的用途。特别地，本公开文本涉及壳聚糖或透明质酸酶转染骨骼肌或皮肤细胞的用途。可以用合成rna/壳聚糖混合物有效转染的其他细胞包括骨髓细胞、腹膜腔细胞和眶后窦细胞。

背景技术：

1、合成信使rna（synrna）现在经常用于治疗性产品以及生物医学研究的通用工具。通常，synrna在注射前被包封在脂质纳米颗粒（lnp）中，以保护synrna免于降解并且增强synrna向靶细胞的细胞质的转移。然而，已知lnp对哺乳动物细胞是有毒的并且在体内诱导炎症反应。这限制了局部（例如，通过注射到组织/器官中）或全身（例如，通过静脉内注射）递送的配制品中synrna/lnp的剂量。

2、因此，本领域需要用于从通过注射施用的synrna有效表达目的外源蛋白质的工具。用于在施用部位实现外源蛋白质在体内持续表达的方法是尤其期望的。

技术实现思路

1、本公开文本涉及寡糖或葡糖苷酶增强通过注射递送的合成rna的蛋白质表达的用途。特别地，本公开文本涉及壳聚糖或透明质酸酶转染骨骼肌或皮肤细胞的用途。可以用合成rna/壳聚糖混合物有效转染的其他细胞包括骨髓细胞、腹膜腔细胞和眶后窦细胞。

1.一种在哺乳动物受试者的组织中表达蛋白质的方法，所述方法包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其中在注射后第二天和/或第三天所述蛋白质的表达水平高于注射后第一天所述蛋白质的表达水平。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，所述方法进一步包括在施用前，在-4ºc至25ºc下孵育所述药物组合物至多20分钟。

4.一种在哺乳动物受试者的组织中表达蛋白质的方法，所述方法包括：

5.根据权利要求1或权利要求4所述的方法，所述方法进一步包括在步骤 (i) 后：

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述带正电荷的聚合物包含壳聚糖。

7.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述带正电荷的聚合物包括聚-l-赖氨酸。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述药物组合物的n/p比率为约0.03至约100。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述药物组合物的n/p比率为约0.03至约1。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述药物组合物不含脂质转染试剂。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述注射是肌内注射。

12.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述注射是皮内注射。

13.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述注射是骨内注射。

14.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述注射是腹膜内注射。

15.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述注射是眶后注射。

16.根据权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述组织中所述蛋白质的表达在注射后至少10天内，任选地在注射后约两周至三周内可检测到。

17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中注射后第三天的所述蛋白质的表达水平为注射后第一天的所述蛋白质的表达水平的约30%至约300%。

18.一种在哺乳动物受试者的肌肉中表达蛋白质的方法，所述方法包括：

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述肌肉中所述蛋白质的表达在注射后至少十四天内，任选地在注射后约三周或更长时间内可检测到。

20.根据权利要求18或权利要求19所述的方法，其中所述肌肉中所述蛋白质的表达水平高于通过肌内注射施用的来自比较组合物的所述蛋白质的表达水平，所述比较组合物包含在所述生理学上可接受的溶液中与所述转染试剂混合的相同量的所述synrna，其中所述比较组合物不含壳聚糖。

21.根据权利要求18-20中任一项所述的方法，其中所述肌肉中所述蛋白质的表达持续时间长于来自通过肌内注射施用的比较组合物的所述蛋白质的表达持续时间，所述比较组合物包含在所述生理学上可接受的溶液中与所述转染试剂混合的相同量的所述synrna，其中所述比较组合物不含壳聚糖。

22.一种在哺乳动物受试者的肌肉中表达蛋白质的方法，所述方法包括：

23.根据权利要求22所述的方法，其中在所述synrna注射前一段时间，进行所述透明质酸酶注射。

24.根据权利要求22所述的方法，其中并行进行所述透明质酸酶注射和所述synrna注射。

25.根据权利要求22所述的方法，其中所述透明质酸酶和所述synrna都存在于通过单次注射递送到所述肌肉的包含生理学上可接受的溶液的药物组合物中。

26.根据权利要求22-25中任一项所述的方法，其中将所述synrna与脂质转染试剂复合。

27.根据权利要求18-26中任一项所述的方法，其中所述肌肉是骨骼肌。

28.根据权利要求27所述的方法，其中所述生理学上可接受的溶液是盐水溶液。

29.根据权利要求28所述的方法，其中所述盐水溶液选自林格氏乳酸盐溶液、磷酸盐缓冲盐水、tris缓冲盐水及其组合。

30.根据权利要求18-29中任一项所述的方法，其中所述synrna包含至少一种经修饰的核苷。

31.根据权利要求30所述的方法，其中所述至少一个经修饰的核苷包含“5mc + ψ”、“m1ψ”、“5mou”或“ψ”，任选地其中所述至少一个经修饰的核苷包含“m1ψ”，任选地其中所述至少一个经修饰的核苷包含“5mc + ψ”。

32.一种组合物，所述组合物包含合成rna（synrna）和带正电荷的聚合物的混合物，其中所述synrna包含磷酸（p）并且所述聚合物包含氮（n），并且其中所述组合物的n/p比率为约0.03至约100。

33.根据权利要求32所述的组合物，其中所述组合物的n/p比率为约0.03至约1。

34.根据权利要求32或权利要求33所述的组合物，其中所述带正电荷的聚合物包含壳聚糖。

35.根据权利要求32或权利要求33所述的组合物，其中所述带正电荷的聚合物包含聚-l-赖氨酸。

36.根据权利要求32-35中任一项所述的组合物，其中所述组合物不含脂质转染试剂。

37.根据权利要求32-36中任一项所述的组合物，其中所述混合物存在于生理学上可接受的溶液中。