纳米疫苗及其制备方法和应用

本申请涉及生物，尤其涉及一种纳米疫苗及其制备方法和应用。

背景技术：

1、纳米疫苗免疫治疗已经在多种慢性感染性疾病和肿瘤等的治疗方面纳米疫苗表现出了巨大的潜力。核酸类药物，特别是mrna疫苗，已被广泛研究和应用，通过体内转染并表达抗原蛋白，诱导体液尤其是细胞免疫水平，达到免疫治疗的效果。利用mrna携带的抗原编码信息，引导人体细胞自主合成抗原蛋白以启动免疫应答，其研发和生产速度快，能迅速响应新发病原体威胁，且不含活病毒安全性较高，但mrna分子不稳定，易降解，需递送载体保护。

2、慢性乙肝是肝纤维化、肝硬化和肝癌的主要原因之一，对公共健康构成重大威胁，目前的慢性乙型肝炎治疗，主要是依靠基于核苷类药物和干扰素-α治疗，但都无法实现足够的病毒清除。治疗性乙肝疫苗已有过多次实践，包括基于重组蛋白、腺病毒载体以及dna技术的疫苗，能够实现hbsag的有效血清清除和抗hbs抗体(ab)的血清转化。新一代的mrna疫苗在引发抗体和细胞免疫反应方面表现出优于传统疫苗，其强大的内在佐剂特性还可激活先天免疫系统，为慢性乙肝的彻底治愈提供希望。但对于mrna疫苗而言，选择合适的递送载体是非常必要的。

技术实现思路

1、有鉴于此，为了至少部分地解决上述提及的技术问题中的至少之一，本申请提供了一种纳米疫苗及其制备方法和应用。

2、根据本申请一个方面的实施方式，提供了一种聚合物脂质纳米疫苗的制备方法，包括：将脂质材料和聚合物材料分别溶于有机溶剂中，混合均匀作为油相，将含10%~50%乙醇的水溶液为水相；将油相在第一搅拌转速下缓慢滴加到水相中，滴加完毕后将搅拌转速调整为第二搅拌转速，得到混合相；将混合相固化1h至12h去除有机溶剂，清洗和冻干得到聚合物脂质纳米粒；将聚合物脂质纳米粒和编码乙肝病毒抗原蛋白的mrna在室温下孵育20min至120min，得到聚合物脂质mrna纳米疫苗。

3、根据本申请另一个方面的实施方式，提供了一种纳米疫苗，根据上述制备方法得到。

4、根据本申请再一个方面的实施方式，提供了一种上述纳米疫苗在制备乙肝相关疾病的mrna疫苗中的应用。

5、根据本申请的实施方式，将脂质材料与聚合物材料共同溶于有机溶剂形成油相，并以含10%～50%乙醇的水溶液为水相，通过第一搅拌转速下缓慢滴加油相、滴加完毕后调整至第二搅拌转速继续搅拌，可使聚合物与脂质自组装形成粒径均一、分散性良好且表面带正电荷的聚合物脂质纳米粒；含乙醇水相的引入改善了界面性质，有利于有机溶剂的扩散和纳米粒的均匀成核，有效避免颗粒团聚。固化1h～12h可确保有机溶剂充分去除，洗涤和冻干步骤则除去游离材料及残余溶剂，提高了纳米粒的纯度与储存稳定性，冻干后复溶性能良好。将所得聚合物脂质纳米粒与编码乙肝病毒抗原蛋白的mrna在室温下孵育20min～120min，即可通过静电吸附作用高效携载mrna，形成结构稳定、生物安全性高的聚合物脂质mrna纳米疫苗。

6、进一步地，上述制备方法制得的聚合物脂质纳米疫苗能够保护mrna免受酶降解，可以提高mrna在树突状细胞（dcs）等抗原提呈细胞中的摄取效率，促进抗原蛋白的表达，同时具有良好的肝脏靶向递送能力，能够提升肝脏局部及脾脏系统的乙肝病毒特异性体液免疫和细胞免疫应答水平，并诱导免疫记忆。

1.一种聚合物脂质纳米疫苗的制备方法，包括：

2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，

3.根据权利要求1所述的制备方法，其中，

4.根据权利要求1所述的制备方法，其中，

5.根据权利要求1所述的方法，其中，还包括：

6.根据权利要求1所述的方法，其中，

7.根据权利要求1所述的方法，其中，

8.根据权利要求1所述的方法，其中，满足以下条件至少之一：

9.一种纳米疫苗，根据权利要求1~8任一项所述的制备方法得到。

10.一种权利要求9所述的纳米疫苗在制备乙肝相关疾病的mrna疫苗中应用。