颗粒、DNA和RNA的制作方法

技术特征：
1.一种用于施用于人或动物受试者以治疗受试者的病毒感染或降低其风险的颗粒，其中所述病毒包含rna基因组，(a)其中所述病毒能够感染所述受试者的宿主细胞，所述病毒基因组包含rna序列(l)，其中l包含第一转录调控序列核心元件(trs-ce1)，其中所述病毒的复制包含第一亚基因组rna(sgrna1)的转录，(b)其中sgrna1包含第二转录调控序列核心元件(trs-ce2)，其中trs-ce1能够在所述宿主细胞中与trs-ce2杂交；(c)其中所述颗粒包含rna，其中所述颗粒能够将所述颗粒rna引入所述受试者的宿主细胞中用于转录所述颗粒rna，其中所述颗粒rna或其转录物包含trs-ce；(d)其中当病毒rna与所述颗粒rna或所述转录物一起存在于宿主细胞中时，所述颗粒rna或转录物的所述trc-ce能够与所述病毒rna所包含的trs-ce杂交，其中所述杂交减少了病毒复制。2.根据权利要求1所述的颗粒，其中所述颗粒rna或其转录物(i)包含(a)trs-ce1或(b)能够在所述宿主细胞中与trs-ce1杂交的序列；和/或(ii)包含(a)trs-ce2或(b)能够在所述宿主细胞中与trs-ce2杂交的序列；其中当所述病毒rna与所述颗粒rna或所述转录物一起存在于宿主细胞中时，(iii)组分(i)(a)与由所述病毒rna编码的sgrna1所包含的trs-ce2杂交；(iv)组分(i)(b)与所述病毒rna所包含的trs-ce1杂交；(v)组分(ii)(a)与所述病毒rna所包含的trs-ce1杂交；和/或(vi)组分(ii)(b)与由所述病毒rna编码的sgrna1所包含的trs-ce2杂交；其中(iii)至(vi)中任一项所述的杂交减少了病毒复制。3.根据权利要求2所述的颗粒，其中(a)所述颗粒rna(任选地( )ss rna)包含可操作用于蛋白质翻译的调控元件，其中所述调控元件可操作地连接组分(i)(a)或(ii)(b)的5
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；(b)所述颗粒rna(任选地( )ss rna)包含组分(i)(a)或(ii)(b)，并且所述颗粒rna不含rna序列，所述rna序列是所述组分的3
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并且可表达以产生所述病毒复制、增殖或感染性所需的蛋白质的氨基酸序列；或(c)颗粒rna(任选地(-)ss rna)包含组分(i)(b)或(ii)(a)，并且所述颗粒rna不含rna序列，所述rna序列是所述组分的5
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并且可表达以产生编码所述病毒复制、增殖或感染性所需的蛋白质的氨基酸序列的rna序列。4.根据前述权利要求中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒rna(任选地(-)ss rna)或其转录物包含trs-ce的多个拷贝，每个拷贝能够在宿主细胞中与trs-ce1杂交，其中所述trs-ce的拷贝中没有一个可操作地连接到rna序列，所述rna序列可表达以产生编码所述病毒复制或增殖所必需的蛋白质的rna序列。5.根据前述权利要求中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒rna包含(a)由所述病毒基因组编码的rna依赖性rna聚合酶(rdrp)识别和结合所需的调控元件(任选地，其中所述调控元件与所述病毒基因组所包含的调控元件相同)；和/或(b)能够被病毒包装机器识别以将颗粒rna包装到能够感染宿主细胞的病毒衣壳的包装信号。
6.根据从属于权利要求2的前述权利要求中任一项所述的颗粒，其中由(iii)至(vi)中任一项产生的rna杂交体能够是由所述宿主细胞延伸的3
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以产生rna产物，其中所述rna产物在所述细胞中对于所述病毒复制、增殖或感染性所需蛋白质的表达是非生产性的。7.根据前述权利要求中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒包含所述宿主细胞的受体或配体，所述受体或配体与所述病毒用于结合所述宿主细胞的所述受体或配体相同；任选地，其中所述配体是病毒刺突糖蛋白和/或所述配体能够结合所述宿主细胞的表面上的ace2蛋白或所述宿主细胞的所述表面上的dpp4蛋白。8.根据前述权利要求中任一项所述的颗粒，其中(a)所述病毒的复制包含第一和第二亚基因组rna(sgrna)的转录，其中每个sgrna包含转录调控序列核心元件(trs-ce)，其中所述sgrna的每个trs-ce能够与宿主细胞中的所述颗粒rna所包含的trs-ce1的序列杂交；或(b)所述颗粒rna的转录产生第一和第二亚基因组rna(sgrna)，其中每个sgrna包含转录调控序列体核心元件(trs-b ce)，其中所述sgrna的每个trs-ce能够与宿主细胞中所述病毒rna所包含的转录调控序列前导核心元件(trs-l ce)的序列杂交。9.根据前述权利要求中任一项所述的颗粒，其中所述病毒的所述rna基因组是正链rna基因组并且所述颗粒rna是正链rna。10.根据前述权利要求中任一项所述的颗粒，其中(a)所述颗粒rna是包含一个或多个序列的( )ss rna，其中每个序列包含5
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acgaac-3
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；并且所述病毒是( )ss rna，如cov，其rna基因组包含一个或多个5
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acgaac-3
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序列；(b)所述颗粒rna可在宿主细胞中转录以产生包含一个或多个序列的( )ss rna，其中每个序列包含5
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acgaac-3
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；并且所述病毒是( )ss rna，如cov，其rna基因组包含一个或多个5
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acgaac-3
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序列；(c)所述颗粒rna可在宿主细胞中转录以产生包含一个或多个序列的(-)ss rna，其中每个序列包含5
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guucgu-3
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；并且所述病毒是( )ss rna，如cov，其rna基因组包含一个或多个5
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acgaac-3
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序列；或(d)所述颗粒rna是包含一个或多个序列的(-)ss rna，其中每个序列包含5
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guucgu-3
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；并且所述病毒是( )ss rna，如cov，其rna基因组包含一个或多个5
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acgaac-3
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序列。11.根据前述权利要求中任一项所述的颗粒，其中trs-ce1包含在8至25个连续核苷酸的第一病毒转录调控序列(trs1)中，并且其中trs1在5
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至3
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方向上包含uaa-ce1、ucucuaa-ce1、agu-ce1、ugagu-ce1、ce1-uu、ce1-uuu、ce1-uaa、ce1-uaacu、ce1-uaaau、ce1-uu、uaa-ce1-uu、uaa-ce1-uuu、ucucuaa-ce1-uuu、ggucuaa-ce1-uaacu、ggucuaa-ce1-uaaau、agu-ce1-uu、ugagu-ce1-uu、cuaa-ce1、uaa-ce1或ucuaa-ce1。和/或trs-ce2包含在8至30个连续核苷酸的第二病毒trs(trs2)中，并且其中trs2在5
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至3
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方向上为uaa-ce2、ucucuaa-ce2、agu-ce2、ugagu-ce2、ce2-uu、ce2-uuu、ce2-uaa、ce2-uaacu、ce2-uaaau、ce2-uu、uaa-ce2-uu、uaa-ce2-uuu、ucucuaa-ce2-uuu、ggucuaa-ce2-uaacu、ggucuaa-ce2-uaaau、agu-ce2-uu或ugagu-ce2-uu。12.根据前述权利要求中任一项所述的颗粒，其中所述病毒选自套式病毒(nidovirus)；冠状病毒亚科(coronavirinae)或环曲病毒亚科(torovirinae)病毒；sars或
mers病毒；或sars-cov、sars-cov-2或mers-cov病毒。13.根据前述权利要求中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒rna(i)包含trs-ce1；和/或(ii)能够在宿主细胞中与trs-ce2杂交的序列；其中当所述病毒rna与所述颗粒rna一起存在于宿主细胞中时，(iii)组分(i)能够与由所述病毒rna编码的sgrna1所包含的trs-ce2杂交；和/或(iv)组分(ii)的互补序列能够与所述病毒rna所包含的trs-ce1杂交；其中(iii)和/或(iv)的所述杂交减少了病毒复制。14.根据从属于权利要求2的前述权利要求中任一项所述的颗粒，其中(a)所述颗粒rna的ce1或所述颗粒的组分(ii)(b)包含在trs-l序列中，如与所述病毒的trs-l序列相同或至少90、95、96、97、98或99％相同的trs-l序列；和/或(b)所述颗粒rna的ce2或所述颗粒的组分(i)(b)包含在trs-b序列中，如与所述病毒的trs-b序列相同或至少90、95、96、97、98或99％相同的trs-b序列。15.根据前述权利要求中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒rna不大于所述病毒rna基因组长度的120％。16.根据前述权利要求中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒rna可通过用rna序列替换所述病毒rna基因组的每个可读框(orf)的部分或全部所述序列而获得，所述rna序列不超过它替换的所述orf序列大小的120％(优选100％)，其中使所述病毒的每个orf都变成无功能的，但所述病毒rna的所述trs序列保留在所述颗粒rna中。17.一种( )ssrna，其用于前述权利要求中任一项所述的颗粒中，所述rna包含多个序列，所述每个序列包含由感染人或动物受试者的宿主细胞的病毒产生的sgnra的trs-b ce的互补序列(cs)，其中所述( )ssrna不含所述病毒的一个、多个或所有可读框(orf)序列并且可在宿主细胞中转录以产生一个或多个转录物，所述每个转录物包含trs-b ce；其中每个trs-b ce能够与所述病毒的trs-lce杂交，由此每个转录物能够抑制一种或多种病毒orf蛋白产物的表达。18.根据权利要求17所述的rna，其中所述病毒是使用不连续rna转录进行复制的类型的( )ss rna病毒。19.一种组合物，其包含多个根据前述权利要求中任一项所述的颗粒或rna，任选地，其中所述组合物用于施用于人或动物受试者以治疗所述受试者的病毒感染或降低其风险，或治疗所述受试者的所述病毒感染的症状或降低其风险。20.一种抑制病毒在宿主细胞中复制的体外方法，其中所述病毒包含( )ss rna基因组，其中所述病毒基因组包含trs-l ce并且编码包含trs-b ce(ce2)的sgrna转录物，所述方法包含a)使所述宿主细胞与根据权利要求1至16中任一项所述的颗粒或根据权利要求17和18中任一项所述的rna接触，并将所述颗粒rna或根据权利要求17和18中任一项所述的rna(第一rna)引入所述宿主细胞，其中所述第一rna是( )ss rna，所述( )ss rna包含是所述ce2的互补序列(任选地至少80％互补序列)的序列；b)与步骤(a)同时地、在步骤(a)之后或在步骤(a)之前将所述病毒rna基因组引入所述宿主细胞；以及
c)进行转录过程，其中所述第一rna在所述细胞中转录以产生包含ce2或能够与病毒trs-l ce杂交的序列的rna转录物，其中所述转录物与病毒的( )ss rna所包含的trs-l ce杂交以形成rna杂交体，并且所述杂交体用于产生包含前导序列(l)的mrna，其中所述前导不可操作地连接到编码所述病毒复制、增殖或感染性所需的蛋白质的氨基酸序列(a)的rna序列。21.根据权利要求20所述的方法，其中在所述转录物或所述序列中能够与病毒trs-l ce杂交的ces2紧接以下序列的3
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：(a)编码mrna序列的rna序列，所述mrna序列可在宿主细胞中表达以产生所述病毒复制、增殖或感染性所不需要的蛋白质；或(b)rna序列，所述rna序列不包含可读框(orf)的互补序列；或(c)rna序列，所述rna序列不包含所述病毒的可读框(orf)的互补序列。22.一种产生多个颗粒的方法，所述方法包含将多个颗粒(任选地，病毒样颗粒(vlp)、脂质体、纳米颗粒、外来体或微泡)与多个rna组合，其中每个rna是根据权利要求1至18中任一项所述的rna，其中将至少一种rna掺入所述多个颗粒的相应颗粒中和/或上；并且任选地配制所述颗粒以产生用于施用于人或动物受试者以治疗或预防病毒感染的药物组合物。23.一种检测样品中病毒rna的方法，其中所述病毒使用不连续rna转录过程进行复制，所述不连续rna转录过程包含使第一trs-ce(ce1)与第二trs-ce(ce2)杂交，所述方法包含使所述样品与根据权利要求1至18中任一项所述的rna(第一rna)接触并检测在所述第一rna和所述样品所包含的病毒rna之间形成的杂交体。24.一种包含dna序列的dna，所述dna序列是根据权利要求1至18中任一项所述的rna的互补序列；任选地，其中所述dna序列可操作地连接到用于在宿主细胞中转录所述rna的启动子。25.根据权利要求1至18中任一项所述的rna或根据权利要求24所述的dna在诊断人或动物受试者中的病毒感染中的用途，其中所述病毒使用不连续rna转录过程进行复制。

技术总结
本发明提供了用于治疗或预防病毒感染的竞争性颗粒(如病毒样颗粒、RNA和DNA)以及使用此类颗粒治疗或预防受试者(如人或动物受试者)的病毒感染(或其症状)或降低其风险的方法。例如，本文的方法是一种减少动物，如家畜或野生动物(例如蝙蝠、骆驼科动物或鳞甲目(例如穿山甲))中病毒的人畜共患病群体或减少所述群体的建立的方法。群体的建立的方法。


技术研发人员：J
受保护的技术使用者：诺瓦斯科普知识产权有限公司
技术研发日：2021.04.03
技术公布日：2023/2/3