色谱树脂以及其用途的制作方法

技术特征：
1.一种亲和色谱树脂，其包含附接到基础树脂的抗组织因子抗体或其抗原结合片段，所述抗组织因子抗体或其抗原结合片段包含包含seq id no:1、2或9和3的cdr的重链可变结构域和包含seq id no:4、5和6的cdr的轻链可变结构域。2.根据权利要求1所述的亲和色谱树脂，其中所述重链可变结构域包含与seq id no:7至少90％相同的序列，并且所述轻链可变结构域包含与seq id no:8至少90％相同的序列。3.根据权利要求2所述的亲和色谱树脂，其中所述重链可变结构域包含seq id no:7，并且所述轻链可变结构域包含seq id no:8。4.根据权利要求1至3中任一项所述的亲和色谱树脂，其中所述基础树脂为琼脂糖凝胶。5.根据权利要求1至3中任一项所述的亲和色谱树脂，其中所述基础树脂为任何载体材料。6.根据权利要求5所述的亲和色谱树脂，其中所述载体材料为琼脂糖或capto树脂。7.根据权利要求1至6中任一项所述的亲和色谱树脂，其中所述抗组织因子抗体或其抗原结合片段非共价附接到所述基础树脂。8.根据权利要求1至6中任一项所述的亲和色谱树脂，其中所述抗组织因子抗体或其抗原结合片段共价附接到所述基础树脂。9.根据权利要求8所述的亲和色谱树脂，其中所述抗组织因子抗体或其抗原结合片段通过在所述抗组织因子抗体或其抗原结合片段中的半胱氨酸和所述基础树脂上的化学基团之间形成二硫键而共价附接到所述基础树脂。10.根据权利要求8所述的亲和色谱树脂，其中所述抗组织因子抗体或其抗原结合片段通过在所述抗组织因子抗体或抗原结合结构域的游离胺和所述基础树脂上的化学基团之间形成共价键而共价附接到所述基础树脂。11.根据权利要求10所述的亲和色谱树脂，其中所述基础树脂为cnbr活化的或n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)活化的固体载体材料。12.根据权利要求10所述的亲和色谱树脂，其中所述共价键由下式i表示：其中r表示所述抗组织因子抗体或其抗原结合片段。13.一种试剂盒，其包含根据权利要求1至12中任一项所述的亲和色谱树脂。14.一种纯化含有组织因子的蛋白质的方法，其包含使用根据权利要求1至12中任一项所述的亲和色谱树脂。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述方法包含：用包含所述含有组织因子的蛋白质的液体装载所述亲和色谱树脂；使用一种或多种洗涤缓冲液洗涤所述亲和色谱树脂；和使用洗脱缓冲液洗脱所述含有组织因子的蛋白质。16.根据权利要求15所述的方法，其中包含所述含有组织因子的蛋白质的所述液体为澄清的液体培养基。17.根据权利要求15所述的方法，其中包含所述含有组织因子的蛋白质的所述液体包
含细胞裂解物。18.根据权利要求15至17中任一项所述的方法，其中所述一种或多种洗涤缓冲液为：(i)包含磷酸盐缓冲盐水的第一洗涤缓冲液；和(ii)包含约0.01m至约0.2m柠檬酸盐并且ph为约4.5至约5.5的第二洗涤缓冲液。19.根据权利要求18所述的方法，其中：(i)所述第一洗涤缓冲液为磷酸盐缓冲盐水；和(ii)所述第二洗涤缓冲液为ph为5.0的0.1m柠檬酸盐。20.根据权利要求15至19中任一项所述的方法，其中所述洗脱缓冲液包含0.01m至约0.2m乙酸盐并且ph为约2.5至约3.5。21.根据权利要求20所述的方法，其中所述洗脱缓冲液包含0.1m乙酸盐并且ph为约2.9。22.一种制造含有组织因子的蛋白质的方法，其包含：(i)使用根据权利要求14至21中任一项所述的方法纯化含有组织因子的蛋白质；和(ii)对从步骤(i)获得的洗脱液执行一个或多个另外的单元操作。23.根据权利要求22所述的方法，其中所述一个或多个另外的单元操作按顺序包含：执行低ph病毒灭活；执行深层过滤；执行精制色谱；执行纳滤；和执行超滤和渗滤(uf/df)。24.根据权利要求14至23中任一项所述的方法，其中所述含有组织因子的蛋白质为单链嵌合多肽。25.根据权利要求24所述的方法，其中所述单链嵌合多肽包含：(i)第一靶标结合结构域；(ii)可溶性组织因子结构域；和(iii)第二靶标结合结构域。26.根据权利要求25所述的方法，其中所述第一靶标结合结构域和所述可溶性组织因子结构域彼此直接邻接。27.根据权利要求25所述的方法，其中所述单链嵌合多肽另外包含介于所述第一靶标结合结构域与所述可溶性组织因子结构域之间的接头序列。28.根据权利要求25至27中任一项所述的方法，其中所述可溶性组织因子结构域和所述第二靶标结合结构域彼此直接邻接。29.根据权利要求25至27中任一项所述的方法，其中所述单链嵌合多肽另外包含介于所述可溶性组织因子结构域与所述第二靶标结合结构域之间的接头序列。30.根据权利要求25至29中任一项所述的方法，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域特异性结合到相同的抗原。31.根据权利要求30所述的方法，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。32.根据权利要求31所述的方法，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合
结构域包含相同的氨基酸序列。33.根据权利要求25至29中任一项所述的方法，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。34.根据权利要求25至33中任一项所述的方法，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域中的一个或两个为抗原结合结构域。35.根据权利要求25至34中任一项所述的方法，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域中的一个或两个结合到选自由以下组成的组的靶标：cd16a、cd28、cd3、cd33、cd20、cd19、cd22、cd123、il-1r、il-1、vegf、il-6r、il-4、il-10、pdl-1、tigit、pd-1、tim3、ctla4、mica、micb、il-6、il-8、tnfα、cd26、cd36、ulbp2、cd30、cd200、igf-1r、muc4ac、muc5ac、trop-2、cmet、egfr、her1、her2、her3、psma、cea、b7h3、epcam、bcma、p-钙粘素、ceacam5、ul16结合蛋白、hla-dr、dll4、tyro3、axl、mer、cd122、cd155、pdgf-dd、tgf-β受体ii(tgf-βrii)的配体、tgf-βriii的配体、dnam-1的配体、nkp46的配体、nkp44的配体、nkg2d的配体、nkp30的配体、scmhci的配体、scmhcii的配体、sctcr的配体、il-1的受体、il-2的受体、il-3的受体、il-7的受体、il-8的受体、il-10的受体、il-12的受体、il-15的受体、il-17的受体、il-18的受体、il-21的受体、pdgf-dd的受体、干细胞因子(scf)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(flt3l)的受体、mica的受体、micb的受体、ulp16结合蛋白的受体、cd155的受体、cd122的受体和cd28的受体。36.根据权利要求25至34中任一项所述的方法，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域中的一个或两个为可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。37.根据权利要求36所述的方法，其中所述可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自由以下组成的组：il-1、il-2、il-3、il-7、il-8、il-10、il-12、il-15、il-17、il-18、il-21、pdgf-dd、scf、flt3l、mica、micb和ulp16结合蛋白。38.根据权利要求25至34中任一项所述的方法，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域中的一个或两个为可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体。39.根据权利要求38所述的方法，其中所述可溶性白介素受体、所述可溶性细胞因子受体或所述可溶性细胞表面受体为可溶性tgf-β受体ii(tgf-βrii)、可溶性tgf-βriii、可溶性nkg2d、可溶性nkp30、可溶性nkp44、可溶性nkp46、可溶性dnam-1、scmhci、scmhcii、sctcr、可溶性cd155或可溶性cd28。40.根据权利要求25至39中任一项所述的方法，其中所述可溶性组织因子结构域为可溶性人组织因子结构域。41.根据权利要求40所述的方法，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与seq id no:10至少80％相同的序列。42.根据权利要求25至39中任一项所述的方法，其中所述可溶性组织因子结构域不包含以下中的任一个：在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；
在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。43.根据权利要求25至39中任一项所述的方法，其中所述可溶性组织因子结构域包含以下中的一个或多个：在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。44.根据权利要求25至43中任一项所述的方法，其中所述单链嵌合多肽另外包含在所述单链嵌合多肽的n和/或c端的一个或多个另外的靶标结合结构域。45.根据权利要求14至23中任一项所述的方法，其中所述含有组织因子的蛋白质为多链嵌合多肽。46.根据权利要求45所述的方法，其中所述多链嵌合多肽包含：(a)第一嵌合多肽，其包含：(i)第一靶标结合结构域；(ii)可溶性组织因子结构域；和(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；(b)第二嵌合多肽，其包含：(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和(ii)第二靶标结合结构域，其中所述第一嵌合多肽和所述第二嵌合多肽通过所述一对亲和结构域中的所述第一结构域和所述第二结构域的所述结合而缔合。47.根据权利要求46所述的方法，其中所述第一靶标结合结构域和所述可溶性组织因子结构域在所述第一嵌合多肽中彼此直接邻接。48.根据权利要求46所述的方法，其中所述第一嵌合多肽另外包含介于所述第一嵌合多肽中的所述第一靶标结合结构域与所述可溶性组织因子结构域之间的接头序列。49.根据权利要求46至48中任一项所述的方法，其中所述可溶性组织因子结构域和所述一对亲和结构域中的所述第一结构域在所述第一嵌合多肽中彼此直接邻接。50.根据权利要求46至48中任一项所述的方法，其中所述第一嵌合多肽另外包含介于所述第一嵌合多肽中的所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。51.根据权利要求46至50中任一项所述的方法，其中所述一对亲和结构域中的所述第二结构域和所述第二靶标结合结构域在所述第二嵌合多肽中彼此直接邻接。52.根据权利要求46至50中任一项所述的方法，其中第二嵌合多肽另外包含介于所述
第二嵌合多肽中的所述一对亲和结构域中的所述第二结构域与所述第二靶标结合结构域之间的接头序列。53.根据权利要求46至52中任一项所述的方法，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域特异性结合到相同的抗原。54.根据权利要求46至52中任一项所述的方法，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。55.根据权利要求46至54中任一项所述的方法，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域中的一个或两个为抗原结合结构域。56.根据权利要求46至55中任一项所述的方法，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域中的一个或两个特异性结合到选自由以下组成的组的靶标：cd16a、cd28、cd3、cd33、cd20、cd19、cd22、cd123、il-1r、il-1、vegf、il-6r、il-4、il-10、pdl-1、tigit、pd-1、tim3、ctla4、mica、micb、il-6、il-8、tnfα、cd26、cd36、ulbp2、cd30、cd200、igf-1r、muc4ac、muc5ac、trop-2、cmet、egfr、her1、her2、her3、psma、cea、b7h3、epcam、bcma、p-钙粘素、ceacam5、ul16结合蛋白、hla-dr、dll4、tyro3、axl、mer、cd122、cd155、pdgf-dd、tgf-β受体ii(tgf-βrii)的配体、tgf-βriii的配体、dnam-1的配体、nkp46的配体、nkp44的配体、nkg2d的配体、nkp30的配体、scmhci的配体、scmhcii的配体、sctcr的配体、il-1的受体、il-2的受体、il-3的受体、il-7的受体、il-8的受体、il-10的受体、il-12的受体、il-15的受体、il-17的受体、il-18的受体、il-21的受体、pdgf-dd的受体、干细胞因子(scf)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(flt3l)的受体、mica的受体、micb的受体、ulp16结合蛋白的受体、cd155的受体、cd122的受体和cd28的受体。57.根据权利要求46至55中任一项所述的方法，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域中的一个或两个为可溶性白介素或细胞因子蛋白。58.根据权利要求57所述的方法，其中所述可溶性白介素、细胞因子或配体蛋白选自由以下组成的组：il-1、il-2、il-3、il-7、il-8、il-10、il-12、il-15、il-17、il-18、il-21、pdgf-dd、scf和flt3l。59.根据权利要求46至55中任一项所述的方法，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域中的一个或两个为可溶性白介素或细胞因子受体。60.根据权利要求59所述的方法，其中所述可溶性受体为可溶性tgf-β受体ii(tgf-βrii)、可溶性tgf-βriii、可溶性nkg2d、可溶性nkp30、可溶性nkp44、可溶性nkp46、可溶性dnam-1、scmhci、scmhcii、sctcr、可溶性cd155或可溶性cd28。61.根据权利要求46至60中任一项所述的方法，其中所述第一嵌合多肽另外包含一个或多个另外的靶标结合结构域。62.根据权利要求46至61中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽另外包含一个或多个另外的靶标结合结构域。63.根据权利要求46至62中任一项所述的方法，其中所述可溶性组织因子结构域为可溶性人组织因子结构域。64.根据权利要求63所述的方法，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与seq id no:10至少80％相同的序列。65.根据权利要求46至62中任一项所述的方法，其中所述可溶性组织因子结构域不包
含以下中的任一个：在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。66.根据权利要求46至62中任一项所述的方法，其中所述可溶性组织因子结构域包含以下中的一个或多个：在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。67.根据权利要求46至66中任一项所述的方法，其中所述一对亲和结构域为来自人il-15受体的α链(il15rα)的寿司结构域和可溶性il-15。68.根据权利要求46至66中任一项所述的方法，其中所述一对亲和结构域选自由以下组成的组：芽胞杆菌核糖核酸酶和芽胞杆菌核糖核酸酶抑制子、pka和akap、基于突变核糖核酸酶i片段的衔接子/对接标签模块以及基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和snap25的相互作用的snare模块。69.一种含有组织因子的蛋白质，其通过根据权利要求14至68中任一项所述的方法制造。70.一种药物组合物，其包含根据权利要求69所述的制造的含有组织因子的蛋白质。

技术总结
亲和色谱树脂包含附接到基础树脂的抗组织因子抗体或其抗原结合片段以及其使用方法。织因子抗体或其抗原结合片段以及其使用方法。织因子抗体或其抗原结合片段以及其使用方法。


技术研发人员：H
受保护的技术使用者：HCW生物科技公司
技术研发日：2021.02.11
技术公布日：2022/11/18