嘧啶并吡咯类化合物的制作方法

i54)。
6.除了btk和jak3抑制剂各自单独的临床作用，同时抑制btk/jak3信号通路则会表现出协同的疗效。数个研究表明，在胶原蛋白诱导的大鼠关节炎模型(cia)中同时抑制btk和jak，观察到关节肿胀有明显缓解，破骨细胞数量减少，病理评分也显著改善，疗效优于单药作用(2016 acr/arhp annual meeting.abstract 484；2013 acr/arhp annual meeting.abstract 2353)。abbvie公司于2018年9月和2019年6月分别启动了abbv599(btk抑制剂和jak抑制剂联用)针对ra和sle的临床二期实验。另一针对btk/jak3双靶点抑制剂dwp212525也在小鼠cia模型中展现出了对疾病的缓解和对关节的保护作用(2019 acr/arhp annual meeting.abstract 965)。
7.鉴于庞大的自身免疫病市场以及未被满足的市场需求，基于btk和jak3在自身免疫病上的功能以及已有的临床效果，有必要开发针对btk和jak3具有良好活性，且选择性好、毒副作用低的双靶点小分子抑制剂。


技术实现要素：

8.本发明提供一种式(i)所示化合物或其药学上可接受的盐：
[0009][0010]
其中：
[0011]
环q为5-10元杂芳基或c
6-c
10
芳基；
[0012]
r选自h或任选被r
a1
取代的以下基团：c
1-c
10
烷基、c
3-c
14
环烷基、3-14元杂环基、c
6-c
10
芳基或5-10元杂芳基；
[0013]
r1、r2独立选自h、f、cl、br、i、cn、oh、no2、或任选被r
a2
取代的以下基团：nh2、sh、c
1-c
10
烷基、c
3-c
10
环烷基、3-10元杂环基、c
1-c
10
烷氧基、c
3-c
10
环烷基氧基、3-10元杂环基氧基、c
2-c
10
烯基、c
2-c
10
炔基、c
6-c
10
芳基、5-10元杂芳基、c
6-c
10
芳基氧基或5-10元杂芳基氧基；
[0014]
r3选自h、f、cl、br、i或任选被选自f、cl、br、i、oh的基团取代的c
1-c
10
烷基；
[0015]
r4选自h、f、cl、br、i、oh、cn或任选被r
a3
取代的以下基团：c
1-c
10
烷基、c
1-c
10
烷氧基；
[0016]
r5、r6、r7独立选自h、f、cl、br、i、cn或任选被r
a4
取代的以下基团：c
1-c
10
烷基、c
3-c
10
环烷基或3-10元杂环基；
[0017]
r8、r9、r
11
独立地选自任选被r
a5
取代的以下基团：oh、nh2、c
1-c
10
烷基、c
3-c
10
环烷基、3-10元杂环基、c
6-c
10
芳基或5-10元杂芳基；
[0018]r10
选自h或任选被r
a6
取代的以下基团：c
1-c
10
烷基、c
3-c
10
环烷基、3-10元杂环基、c6-c
10
芳基或5-10元杂芳基；
[0019]
每一个r
a1
、r
a2
独立选自f、cl、br、i、oh、cn、＝o、no2、、硼酸基、硼酸酯基或任选被r
b1
取代的下列基团：nh2、sh、c
1-c
10
烷基、c
3-c
10
环烷基、3-10元杂环基、c
1-c
10
烷氧基、c
3-c
10
环烷基氧基、3-10元杂环基氧基、c
2-c
10
烯基、c
2-c
10
炔基、c
6-c
10
芳基、5-10元杂芳基、c
6-c
10
芳基氧基或5-10元杂芳基氧基；
[0020]
每一个r
a3
、r
a4
、r
a5
或r
a6
独立选自f、cl、br、i、oh、cn、＝o、no2或任选被r
b2
取代的下列基团：c
1-c
10
烷基、c
3-c
10
环烷基、3-10元杂环基、c
1-c
10
烷氧基、c
3-c
10
环烷基氧基、3-10元杂环基氧基、c
2-c
10
烯基、c
2-c
10
炔基、c
6-c
10
芳基、5-10元杂芳基、c
6-c
10
芳基氧基或5-10元杂芳基氧基；
[0021]
每一个rb、r
b1
、r
b2
独立选自f、cl、br、i、oh、cn、＝o、no2或任选被rc取代的下列基团：nh2、sh、c
1-c
10
烷基、c
3-c
10
环烷基、3-10元杂环基、c
1-c
10
烷氧基、c
3-c
10
环烷基氧基、3-10元杂环基氧基、c
2-c
10
烯基、c
2-c
10
炔基、c
6-c
10
芳基、5-10元杂芳基、c
6-c
10
芳基氧基或5-10元杂芳基氧基；
[0022]
每一个rc独立选自f、cl、br、i、oh、cn、＝o、no2、nh2、sh、c
1-c
10
烷基、c
3-c
10
环烷基、3-10元杂环基、c
6-c
10
芳基或5-10元杂芳基；
[0023]
m选自1、2、3或4；
[0024]
n选自0、1或2；
[0025]
p选自1、2或3。
[0026]
在一些实施方案中，环q选自5-10元杂芳基或苯基。
[0027]
在一些实施方案中，环q选自苯基或5元杂芳基，所述杂芳基含有至少一个n原子作为环原子。
[0028]
在一些实施方案中，环q选自苯环、噻唑环、异噻唑环、吡唑环、咪唑环、噁唑环或异噁唑环。
[0029]
在一些实施方案中，环q选自噻唑环、异噻唑环、吡唑环、咪唑环、噁唑环或异噁唑环。
[0030]
在一些实施方案中，环q选自吡唑环或异噻唑环。
[0031]
在一些实施方案中，r选自h或任选被r
a1
取代的以下基团：c
1-c
10
烷基或3-14元杂环基。
[0032]
在一些实施方案中，r选自h或任选被r
a1
取代的以下基团：c
1-c
10
烷基或3-10元杂环基。
[0033]
在一些实施方案中，r选自h或任选被r
a1
取代的以下基团：c
1-c6烷基或4-6元杂环基。
[0034]
在一些实施方案中，r选自h或任选被r
a1
取代的以下基团：c
1-c6烷基或4-6元杂环基，所述4-6元杂环基含有o原子和/或n原子作为环原子。
[0035]
在一些实施方案中，r选自h或任选被r
a1
取代的以下基团：c
1-c6烷基或4-6元杂环基，所述4-6元杂环基含有一个o原子或一个n原子作为环原子。
[0036]
在一些实施方案中，r选自h或任选被r
a1
取代的以下基团：c
1-c6烷基。
[0037]
在一些实施方案中，r选自h或c
1-c6烷基。
[0038]
在一些实施方案中，r选自c
1-c6烷基。
[0039]
在一些实施方案中，r选自甲基或乙基。
[0040]
在一些实施方案中，r选自甲基。
[0041]
在一些实施方案中，r选自乙基。
[0042]
在一些实施方案中，m选自1、2或3。
[0043]
在一些实施方案中，m选自1或2。
[0044]
在一些实施方案中，m选自1。
[0045]
在一些实施方案中，选自其中*代表环q与nh的连接位点。
[0046]
在一些实施方案中，r1选自h、f、cl、br、i、cn、oh、no2或任选被r
a2
取代的以下基团：nh2、sh、c
1-c
10
烷基、c
3-c
10
环烷基、3-10元杂环基、c
1-c
10
烷氧基、c
3-c
10
环烷基氧基、3-10元杂环基氧基、c
2-c
10
烯基、c
2-c
10
炔基、c
6-c
10
芳基、5-10元杂芳基、c
6-c
10
芳基氧基或5-10元杂芳基氧基。
[0047]
在一些实施方案中，r1选自h、f、cl、br、i、cn、oh、no2或任选被r
a2
取代的以下基团：nh2、sh、c
1-c
10
烷基、c
1-c
10
烷氧基、c
2-c
10
烯基或c
2-c
10
炔基。
[0048]
在一些实施方案中，r1选自h、f、cl、br、i、cn、oh、no2或任选被r
a2
取代的以下基团：nh2、sh、c
1-c
10
烷基。
[0049]
在一些实施方案中，r1选自h、f、cl、br、i或任选被r
a2
取代的c
1-c6烷基。
[0050]
在一些实施方案中，r1选自h或c
1-c6烷基。
[0051]
在一些实施方案中，r1选自h或甲基。
[0052]
在一些实施方案中，r1选自h。
[0053]
在一些实施方案中，r2选自h、f、cl、br、i、cn、oh、no2或任选被r
a2
取代的以下基团：nh2、sh、c
1-c
10
烷基、c
3-c
10
环烷基、3-10元杂环基、c
1-c
10
烷氧基、c
3-c
10
环烷基氧基、3-10元杂环基氧基、c
2-c
10
烯基、c
2-c
10
炔基、c
6-c
10
芳基、5-10元杂芳基、c
6-c
10
芳基氧基或5-10元杂芳基氧基。
[0054]
在一些实施方案中，r2选自h、f、cl、br、i、cn、oh、no2或任选被r
a2
取代的以下基团：c
1-c
10
烷基、c
3-c
10
环烷基、c
6-c
10
芳基。
[0055]
在一些实施方案中，r2选自h、f、cl、br、i、cn或任选被r
a2
取代的以下基团：c
1-c6烷基、c
3-c6环烷基。
[0056]
在一些实施方案中，r2选自h、f、cl、br、i、cn、c
1-c6烷基或c
3-c6环烷基。
[0057]
在一些实施方案中，r2选自h、f、cl、br、i、cn或c
3-c6环烷基。
[0058]
在一些实施方案中，r2选自h、f、cl、br、i或环丙基。
[0059]
在一些实施方案中，r2选自h、cl或环丙基。
[0060]
在一些实施方案中，r2选自cl或环丙基。
[0061]
在一些实施方案中，每一个r
a1
、r
a2
独立选自f、cl、br、i、oh、cn、＝o、no2或任选被rb1
取代的下列基团：nh2、sh、c
1-c
10
烷基、c
1-c
10
烷氧基、c
2-c
10
烯基、c
2-c
10
炔基。
[0062]
在一些实施方案中，每一个r
a1
、r
a2
独立选自f、cl、br、i、oh、cn、＝o、no2、nh2、sh、c
1-c
10
烷基、c
1-c
10
烷氧基、c
2-c
10
烯基或c
2-c
10
炔基。
[0063]
在一些实施方案中，每一个r
a1
、r
a2
独立选自f、cl、br、i、oh、cn、＝o、no2、nh2或sh。
[0064]
在一些实施方案中，每一个r
a1
、r
a2
独立选自f、cl、br、i、oh或cn。
[0065]
在一些实施方案中，r3选自h、f、cl、br、i或任选被选自f、cl、br、i的基团取代的c
1-c6烷基。
[0066]
在一些实施方案中，r3选自h、f、cl、br、i或c
1-c6烷基。
[0067]
在一些实施方案中，r3选自h、f、cl、br、i、甲基或乙基。
[0068]
在一些实施方案中，r3选自h或f。
[0069]
在一些实施方案中，r3选自h。
[0070]
在一些实施方案中，r4选自h、f、cl、br、i、oh、cn或任选被r
a3
取代的以下基团：c
1-c6烷基。
[0071]
在一些实施方案中，r4选自h、f、cl、br、i、oh、cn或c
1-c6烷基。
[0072]
在一些实施方案中，r4选自h、f、cl、br、i、甲基或乙基。
[0073]
在一些实施方案中，r4选自h、f或甲基。
[0074]
在一些实施方案中，r4选自h或甲基。
[0075]
在一些实施方案中，r4选自h。
[0076]
在一些实施方案中，r5、r6、r7独立选自h、f、cl、br、i、cn或任选被r
a4
取代的c
1-c
10
烷基。
[0077]
在一些实施方案中，r5、r6、r7独立选自h、f、cl、br、i、cn或c
1-c6烷基。
[0078]
在一些实施方案中，r5、r6、r7独立选自h、cn或c
1-c6烷基。
[0079]
在一些实施方案中，r5、r6、r7独立选自h。
[0080]
在一些实施方案中，r8、r9、r
11
独立地选自任选被r
a5
取代的以下基团：oh、nh2、c
1-c
10
烷基、c
3-c
10
环烷基、苯基或5-6元杂芳基。
[0081]
在一些实施方案中，r
10
选自h或任选被r
a6
取代的以下基团：c
1-c
10
烷基、c
3-c
10
环烷基、苯基或5-6元杂芳基。
[0082]
在一些实施方案中，每一个r
a3
、r
a4
、r
a5
或r
a6
独立选自f、cl、br、i、oh、cn、＝o、no2或任选被r
b2
取代的下列基团：c
1-c
10
烷基、c
3-c
10
环烷基、c
1-c
10
烷氧基、苯基或5-6元杂芳基。
[0083]
在一些实施方案中，每一个r
a3
、r
a4
、r
a5
或r
a6
独立选自f、cl、br、i、oh、cn、＝o、no2或任选被r
b2
取代的下列基团：c
1-c6烷基、c
3-c6环烷基或苯基。
[0084]
在一些实施方案中，每一个rb、r
b1
、r
b2
独立选自f、cl、br、i、oh、cn、＝o、no2或任选被rc取代的下列基团：nh2、sh、c
1-c
10
烷基、c
3-c
10
环烷基、c
1-c
10
烷氧基、苯基或5-6元杂芳基。
[0085]
在一些实施方案中，每一个rb、r
b1
、r
b2
独立选自f、cl、br、i、oh、cn、＝o、no2或任选被rc取代的下列基团：nh2、c
1-c6烷基、c
3-c6环烷基或苯基。
[0086]
在一些实施方案中，每一个rc独立选自f、cl、br、i、oh、cn、＝o、no2、nh2、sh或c
1-c
10
烷基。
[0087]
在一些实施方案中，每一个rc独立选自f、cl、br、i、oh、cn、＝o、nh2或c
1-c6烷基。
[0088]
在一些实施方案中，n选自0。
[0089]
在一些实施方案中，n选自1。
[0090]
在一些实施方案中，选自
[0091]
在一些实施方案中，选自
[0092]
在一些实施方案中，选自
[0093][0094]
在一些实施方案中，选自选自
[0095]
在一些实施方案中，选自
[0096]
在一些实施方案中，p选自1。
[0097]
在一些实施方案中，所述式(i)化合物或其药学上可接受的盐选自式(ia)化合物或其药学上可接受的盐：
[0098][0099]
其中：q、r、r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、m、n、p如式(i)中所定义。
[0100]
在一些实施方案中，所述式(i)化合物或其药学上可接受的盐选自式(ib)化合物或其药学上可接受的盐：
[0101][0102]
其中：q、r、r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、m、n、p如式(i)中所定义。
[0103]
在一些实施方案中，所述式(i)所示的化合物或其药学上可接受的盐，选自以下化合物或其药学可接受的盐：
[0104][0105][0106]
在一些实施方案中，所述式(i)所示的化合物或其药学上可接受的盐，选自以下化合物或其药学上可接受的盐：
[0107]
[0108][0109]
在一些实施方案中，所述式(i)所示的化合物或其药学上可接受的盐，选自以下化合物或其药学上可接受的盐：
[0110]
[0111][0112]
本发明还提供药物组合物，其包含式(i)所示化合物或其药学可接受的盐和药学上可接受的辅料。
[0113]
进一步，本发明涉及式(i)所示的化合物或其药学上可接受的盐，或其药物组合物在制备预防或者治疗janus激酶(jak，特别是jak3)和/或布鲁顿酪氨酸激酶(btk)相关性疾病的药物中的用途。
[0114]
进一步，本发明涉及式(i)所示的化合物或其药学上可接受的盐，或其药物组合物在预防或者治疗janus激酶(jak，特别是jak3)和/或布鲁顿酪氨酸激酶(btk)相关性疾病中的用途。
[0115]
进一步，本发明涉及预防或者治疗janus激酶(jak，特别是jak3)和/或布鲁顿酪氨酸激酶(btk)相关性疾病的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，或其药物组合物。
[0116]
本发明还涉及治疗janus激酶(jak，特别是jak3)和/或布鲁顿酪氨酸激酶(btk)相关性疾病的方法，该方法包括给以患者治疗上有效剂量的包含本发明所述的式(i)化合物或其药学上可接受的盐的药物制剂。
[0117]
本发明的优选方案，其中所述的janus激酶(jak，特别是jak3)和/或布鲁顿酪氨酸激酶(btk)相关性疾病包括但不限于肿瘤(如b细胞淋巴瘤)和自身免疫病(如风湿性关节炎、炎症性肠炎和系统性红斑狼疮)等。
[0118]
术语定义和说明
[0119]
除非另有说明，本发明说明书和权利要求书中记载的基团和术语定义，包括其作为实例的定义、示例性的定义、优选的定义、表格中记载的定义、实施例中具体化合物的定义等，可以彼此之间任意组合和结合。这样的组合和结合后的基团定义及化合物结构，应当属于本发明说明书记载的范围内。
[0120]
本发明中处表示连接位点。
[0121]
术语“药学上可接受的盐”是指药学上可接受的无毒酸或碱的盐，包括无机酸和碱、有机酸和碱的盐。
[0122]
术语“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括顺反异构体、对映异构体、非对应异构体和构象异构体。
[0123]
本发明的化合物可以具有不对称碳原子(光学中心)或双键。外消旋体、对映异构
体、非对映异构体、几何异构体和单个的异构体都包括在本发明的范围之内。
[0124]
本文中消旋体或者对映体纯的化合物的图示法来自maehr，j.chem.ed.1985，62:114-120。除非另有说明，用楔形键和虚楔键表示一个立体中心的绝对构型，用黑实键和虚键表示脂环化合物的顺反构型。当本文所述化合物含有烯属双键或其它几何不对称中心，除非另有规定，它们包括e、z几何异构体。同样地，所有的互变异构形式均包括在本发明的范围之内。
[0125]
本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和( )-对对映体、(r)-和(s)-对映体、非对映异构体、(d)-异构体、(l)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。本技术的含有不对称原子的化合物可以以光学活性纯的形式或外消旋形式被分离出来。光学活性纯的形式可以从外消旋混合物拆分，或通过使用手性原料或手性试剂合成。
[0126]
术语“互变异构体”是指因分子中某一原子在两个位置迅速移动而产生的官能团异构体。本发明化合物可表现出互变异构现象。互变异构的化合物可以存在两种或多种可相互转化的种类。质子移变互变异构体来自两个原子之间共价键合的氢原子的迁移。互变异构体一般以平衡形式存在，尝试分离单一互变异构体时通常产生一种混合物，其理化性质与化合物的混合物是一致的。平衡的位置取决于分子内的化学特性。例如，在很多脂族醛和酮如乙醛中，酮型占优势；而在酚中，烯醇型占优势。本发明包含化合物的所有互变异构形式。
[0127]
术语“药物组合物”表示一种或多种文本所述化合物或其生理学/药学上可接受的盐或前体药物与其它化学组分的混合物，其它组分例如生理学/药学上可接受的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进化合物对生物体的给药。
[0128]
术语“被取代”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧代(即＝o)时，意味着两个氢原子被取代，氧代不会发生在芳香基上。
[0129]
术语“任选”或“任选地”是指随后描述的事件或情况可以发生或不发生，该描述包括发生所述事件或情况和不发生所述事件或情况。例如，乙基“任选”被卤素取代，指乙基可以是未被取代的(ch2ch3)、单取代的(如ch2ch2f)、多取代的(如chfch2f、ch2chf2等)或完全被取代的(cf2cf3)。本领域技术人员可理解，对于包含一个或多个取代基的任何基团，不会引入任何在空间上不可能存在和/或不能合成的取代或取代模式。
[0130]
当任何变量(例如r)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。
[0131]
术语“卤”或“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
[0132]
术语“c
1-c
10
烷基”应理解为表示具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子的直链或支链饱和一价烃基。所述烷基是例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1，2-二甲基丙基、新戊基、1，1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁
基、3，3-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，1-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基或1，2-二甲基丁基等；“c
1-c6烷基”应理解为表示具有1、2、3、4、5、6个碳原子的直链或支链饱和一价烃基。
[0133]
术语“烷氧基”可理解为“烷基氧基”或“烷基-o”，优选地，“c
1-c
10
烷氧基”可以包含“c
1-c6烷氧基”。
[0134]
术语“c
2-c
10
烯基”应理解为优选表示直链或支链的一价烃基，其包含一个或多个双键并且具有2、3、4、5、6、7、8、9、10个碳原子，优选“c
2-c6烯基”，进一步优选“c
2-c4烯基”，更进一步优选c2或c3烯基。应理解，在所述烯基包含多于一个双键的情况下，所述双键可相互分离或共轭。所述烯基例如乙烯基、烯丙基、(e)-2-甲基乙烯基、(z)-2-甲基乙烯基、(e)-丁-2-烯基、(z)-丁-2-烯基、(e)-丁-1-烯基、(z)-丁-1-烯基、异丙烯基、2-甲基丙-2-烯基、1-甲基丙-2-烯基、2-甲基丙-1-烯基、(e)-1-甲基丙-1-烯基、(z)-1-甲基丙-1-烯基。
[0135]
术语“c
2-c
10
炔基”应理解为表示直链或支链的一价烃基，其包含一个或多个三键并且具有2、3、4、5、6、7、8、9、10个碳原子，优选“c
2-c6炔基”，进一步优选“c
2-c4炔基”，更进一步优选c2或c3炔基。所述炔基是例如乙炔基、丙-1-炔基、丙-2-炔基、丁-1-炔基、丁-2-炔基、丁-3-炔基、1-甲基丙-2-炔基。
[0136]
术语“c
3-c
14
环烷基”应理解为表示饱和的一价单环或双环烃环，其具有3～14个碳原子。术语“c
3-c
10
环烷基”应理解为表示饱和的一价单环或双环烃环，其具有3～10个碳原子。术语“c
3-c6环烷基”应理解为表示饱和的一价单环或双环烃环，其具有3、4、5、6个碳原子。环烷基的例子如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基或环癸基，或者是双环烃基如十氢化萘环。根据本发明，所述双环烃环包括桥环、螺环或并环结构。
[0137]
术语“环烷基氧基”可理解为“环烷基-o”，优选地，“c
3-c
10
环烷基氧基”可以包含“c
3-c6环烷基氧基”。
[0138]
术语“3-14元杂环基”应理解为具有3-14个环原子的饱和的或部分饱和的一价单环或双环烃环，其包含1-5个，优选1-3个选自n、o和s的杂原子。术语“3-10元杂环基”意指饱和的或部分饱和的一价单环或双环烃环，其包含1-5个，优选1-3个选自n、o和s的杂原子。术语“4-6元杂环基”应理解为具有4、5、6个环原子的饱和的或部分饱和的一价单环或双环烃环，其包含1-5个，优选1-3个选自n、o和s的杂原子。特别地，所述杂环基可以包括但不限于：4元环，如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基；5元环，如四氢呋喃基、二氧杂环戊烯基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基；或6元环，如四氢吡喃基、哌啶基、吗啉基、二噻烷基、硫代吗啉基、哌嗪基或三噻烷基；或部分饱和的6元环如四氢吡啶基；或7元环，如二氮杂环庚烷基。任选地，所述杂环基可以是苯并稠合的。所述杂环基可以是双环的，例如但不限于5,5元环，如六氢环戊并[c]吡咯-2(1h)-基环，或者5,6元双环，如六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1h)-基环。含氮原子的环可以是部分不饱和的，即它可以包含一个或多个双键，例如但不限于2,5-二氢-1h-吡咯基、4h-[1,3,4]噻二嗪基、4,5-二氢噁唑基或4h-[1,4]噻嗪基，或者，它可以是苯并稠合的，例如但不限于二氢异喹啉基。根据本发明，所述杂环基是无芳香性的。所述双环烃环包括桥环、螺环或并环结构。
[0139]
术语“3-10元杂环基氧基”可理解为“3-10元杂环基-o”，优选地，“3-10元杂环基氧基”可以包含“4-6元杂环基氧基”。
[0140]
术语“c
6-c
10
芳基”应理解为优选表示具有6、7、8、9、10个碳原子的一价芳香性或部
分芳香性的单环或双环烃环。特别是具有6个碳原子的环(“c6芳基”)，例如苯基；或者具有9个碳原子的环(“c9芳基”)，例如茚满基或茚基，或者具有10个碳原子的环(“c
10
芳基”)，例如四氢化萘基、二氢萘基或萘基。
[0141]
术语“c
6-c
10
芳基氧基”可理解为“c
6-c
10
芳基-o”。
[0142]“5-10元杂芳基”应理解为包括这样的一价单环、双环或三环芳族环系：其具有5、6、7、8、9、10个环原子，特别是5或6或9或10个环原子，且其包含1-5个，优选1-3个独立选自n、o和s的杂原子并且，另外在每一种情况下可为苯并稠和的。特别地，杂芳基选自噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基等以及它们的苯并衍生物，例如苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并咪唑基、苯并三唑基、吲唑基、吲哚基、异吲哚基等；或吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基等，以及它们的苯并衍生物，例如喹啉基、喹唑啉基、异喹啉基等；或吖辛因基、吲嗪基、嘌呤基等以及它们的苯并衍生物；或噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基、蝶啶基等。
[0143]“5-10元杂芳基”应理解为包括这样的一价单环、双环或三环芳族环系：其具有5、6、7、8、9、10个环原子，特别是5或6或9或10个环原子，且其包含1-5个，优选1-3个独立选自n、o和s的杂原子并且，另外在每一种情况下可为苯并稠和的。特别地，杂芳基选自噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基等以及它们的苯并衍生物，例如苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并咪唑基、苯并三唑基、吲唑基、吲哚基、异吲哚基等；或吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基等，以及它们的苯并衍生物，例如喹啉基、喹唑啉基、异喹啉基等；或吖辛因基、吲嗪基、嘌呤基等以及它们的苯并衍生物；或噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基、蝶啶基等。“5元杂芳基”是指环原子数为5的一价单环芳族环系，其包含1-5个，优选1-3个独立选自n、o和s的杂原子。特别地，5元杂芳基选自噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基等。
[0144]
术语“5-10元杂芳基氧基”可理解为“5-10元杂芳基-o”。
[0145]
本技术还包括与本文中记载的那些相同的，但一个或多个原子被原子量或质量数不同于自然中通常发现的原子量或质量数的原子置换的同位素标记的本技术化合物。可结合到本技术化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，诸如分别为2h、3h、
11
c、
13
c、
14
c、
13
n、
15
n、
15
o、
17
o、
18
o、
31
p、
32
p、
35
s、
18
f、
123
i、
125
i和
36
cl等。
[0146]
某些同位素标记的本技术化合物(例如用3h及
14
c标记的那些)可用于化合物和/或底物组织分布分析中。氚化(即3h)和碳-14(即
14
c)同位素对于由于它们易于制备和可检测性是尤其优选的。正电子发射同位素，诸如
15
o、
13
n、
11
c和
18
f可用于正电子发射断层扫描(pet)研究以测定底物占有率。通常可以通过与公开于下文的方案和/或实施例中的那些类似的下列程序，通过同位素标记试剂取代未经同位素标记的试剂来制备同位素标记的本技术化合物。
[0147]
此外，用较重同位素(诸如氘(即2h))取代可以提供某些由更高的代谢稳定性产生的治疗优点(例如增加的体内半衰期或降低的剂量需求)，并且因此在某些情形下可能是优选的，其中氘取代可以是部分或完全的，部分氘取代是指至少一个氢被至少一个氘取代。
[0148]
本发明的化合物的所有的同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明
的范围之内。
[0149]
术语“治疗”意为将本技术所述化合物或制剂进行给药以预防、改善或消除疾病或与所述疾病相关的一个或多个症状，且包括：
[0150]
(i)预防疾病或疾病状态在哺乳动物中出现，特别是当这类哺乳动物易患有该疾病状态，但尚未被诊断为已患有该疾病状态时；
[0151]
(ii)抑制疾病或疾病状态，即遏制其发展；
[0152]
(iii)缓解疾病或疾病状态，即使该疾病或疾病状态消退。
[0153]
术语“治疗有效量”意指(i)治疗或预防特定疾病、病况或障碍，(ii)减轻、改善或消除特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本文中所述的特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状发作的本发明化合物的用量。构成“治疗有效量”的本发明化合物的量取决于该化合物、疾病状态及其严重性、给药方式以及待被治疗的哺乳动物的年龄而改变，但可例行性地由本领域技术人员根据其自身的知识及本公开内容而确定。
[0154]
术语“辅料”是指可药用惰性成分。术语“赋形剂”的种类实例非限制性地包括粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、稳定剂、填充剂和稀释剂等。赋形剂能增强药物制剂的操作特性，即通过增加流动性和/或粘着性使制剂更适于直接压缩。适用于上述制剂的典型的“药学上可接受的载体”的实例为：糖类，淀粉类，纤维素及其衍生物等在药物制剂中常用到的辅料。
[0155]
术语“药学上可接受的辅料”是指对有机体无明显刺激作用，而且不会损害该活性化合物的生物活性及性能的那些辅料。合适的辅料是本领域技术人员熟知的，例如碳水化合物、蜡、水溶性和/或水可膨胀的聚合物、亲水性或疏水性材料、明胶、油、溶剂、水等。
[0156]
词语“包括(comprise)”、“含有(comprise)”或“包含(comprise)”及其英文变体例如comprises或comprising应理解为开放的、非排他性的意义，即“包括但不限于”。
[0157]
本技术的药物组合物可通过将本技术的化合物与适宜的药学上可接受的辅料组合而制备，例如可配制成固态、半固态、液态或气态制剂，如片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、膏剂、乳剂、悬浮剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球及气溶胶等。
[0158]
给予本技术化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物的典型途径包括但不限于口服、直肠、局部、吸入、肠胃外、舌下、阴道内、鼻内、眼内、腹膜内、肌内、皮下、静脉内给药。
[0159]
本技术的药物组合物可以采用本领域众所周知的方法制造，如常规的混合法、溶解法、制粒法、制糖衣药丸法、磨细法、乳化法、冷冻干燥法等。
[0160]
在一些实施方案中，药物组合物是口服形式。对于口服给药，可以通过将活性化合物与本领域熟知的药学上可接受的辅料混合，来配制该药物组合物。这些辅料能使本技术的化合物被配制成片剂、丸剂、锭剂、糖衣剂、胶囊剂、液体、凝胶剂、浆剂、悬浮剂等，用于对患者的口服给药。
[0161]
可以通过常规的混合、填充或压片方法来制备固体口服组合物。例如，可通过下述方法获得：将所述的活性化合物与固体辅料混合，任选地碾磨所得的混合物，如果需要则加入其它合适的辅料，然后将该混合物加工成颗粒，得到了片剂或糖衣剂的核心。适合的辅料包括但不限于：粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、甜味剂或矫味剂等。
[0162]
药物组合物还可适用于肠胃外给药，如合适的单位剂型的无菌溶液剂、混悬剂或
冻干产品。
[0163]
本文所述的通式(ⅰ)化合物的所有施用方法中，每天给药的剂量为0.01到100mg/kg体重，优选为0.05到50mg/kg体重，更优选0.1到30mg/kg体重，以单独或分开剂量的形式。本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
[0164]
本发明具体实施方式的化学反应是在合适的溶剂中完成的，所述的溶剂须适合于本发明的化学变化及其所需的试剂和物料。为了获得本发明的化合物，有时需要本领域技术人员在已有实施方式的基础上对合成步骤或者反应流程进行修改或选择。
具体实施方式
[0165]
以下实施例详细说明发明的技术方案，但本发明的保护范围包括但不限于此。
[0166]
本发明所使用的溶剂可经市售获得。市售化合物采用供应商目录名称。
[0167]
化合物的结构是通过核磁共振(nmr)和/或质谱(ms)来确定的。nmr位移的单位为10-6
(ppm)。nmr测定的溶剂为氘代二甲基亚砜、氘代氯仿、氘代甲醇等，内标为四甲基硅烷(tms)；“ic
50”指半数抑制浓度，指达到最大抑制效果一半时的浓度。
[0168]
本发明采用以下缩略词：
[0169][0170]
实施例1化合物001-1和001-2的制备
[0171][0172]
合成路线具体合成步骤：
[0173][0174]
第一步：1-叔丁氧羰基-3-亚甲基吡咯烷1b的合成
[0175]
将1-叔丁氧碳基-3-吡咯烷酮(25.0g,135mmol)溶于无水四氢呋喃(200.0ml)中，加入甲基三苯基溴化膦(50.6g,141mmol)，在0℃下分批加入叔丁醇钾(15.9g,141mmol)并搅拌10分钟，25℃继续搅拌12小时。加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(50.0ml
×
3)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，干燥过滤浓缩，残留物经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)纯化，得到油状物1-叔丁氧羰基-3-亚甲基吡咯烷1b(3.8g)。
[0176]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ4.93-4.86(m,2h),3.87-3.82(m,2h),3.43-3.35(m,2h),2.51-2.44(m,2h),1.40(s,9h).
[0177]
第二步：3-((2,5-二氯-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯1d的合成
[0178]
将1b(2.0g,10.9mmol)溶于无水四氢呋喃(7.0ml)中，加入9-硼双环[3.3.1]壬烷(0.5m,43.6ml)，25℃搅拌2小时后，向反应液中加入的水(5.0ml)、(2,4,5-三氯-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7h吡咯并[2,3-d]嘧啶1c(2.00g,5.67mmol)、四(三苯基膦)钯(655mg,567μmol)、碳酸钾(2.35g,17.0mmol)，在氮气氛围下85℃搅拌16小时。使用乙酸乙酯(30.0ml
×
3)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，干燥过滤浓缩，残留物经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)纯化，得油状物3-((2,5-二氯-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯1d(1.4g)。
[0179]
lcms:rt:0.674min；ms m/z(esi):501.3[m h].
[0180]
第三步：(s)-3-((5-氯-2-((3-甲基异噻唑-5-基)氨基)-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯和(r)-3-((5-氯-2-((3-甲基异噻唑-5-基)氨基)-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的合成
[0181]
将1d(1.00g,1.99mmol)溶于无水1,4-二氧六环(20.0ml)中，加入3-甲基-5-氨基异噻唑盐酸盐1e(450mg,2.99mmol)、碳酸铯(2.60g,7.98mmol)和甲烷磺酸(2-二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2’,4’,6
’‑
三异丙基-1,1
’‑
联苯)(2
’‑
氨基-1,1
’‑
联苯-2-基)钯(180mg,199μmol)，氮气氛围下100℃搅拌16小时。反应液过滤浓缩，残留物经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)纯化，得到3-((5-氯-2-((3-甲基异噻唑-5-基)氨基)-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(660mg,54.1％)，经手性拆分[色谱柱：daicel chiralpak ad(250mm
×
50mm,10μm)；流动相：a:co2；
b:(含0.1％nh3h2o的ipa溶液),35％直到收完样品]得到其中一种对映异构体1f(320mg,26.3％,rt:3.419min)和另一种对映异构体1g(340mg,rt:3.930min)。
[0182]
lcms:rt:0.597min；ms m/z(esi):579.4[m h].
[0183]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.48(s,1h),7.15(d,j＝6.5hz,1h),6.62(d,j＝5.3hz,1h),6.20(s,1h),5.64(s,2h),4.57(s,1h),3.70-3.52(m,4h),3.40-3.14(m,4h),3.01-2.77(m,1h),2.16-1.92(m,3h),1.52(s,9h),1.05-0.89(m,2h),0.01(s,9h).
[0184]
第四步：中间体1h的合成
[0185]
将1f(100mg,172μmol)溶于无水二氯甲烷(3.0ml)中，加入三氟乙酸(1.0ml)，25℃搅拌16小时。将反应液浓缩后，溶于乙醇(2.0ml)和水(1.0ml)中，加入一水合氢氧化锂(36.2mg,863μmol)，50℃搅拌2小时。降温至0℃下滴加1m hcl调至ph＝7，浓缩得到绿色固体中间体1h(81mg)，直接用于下一步。
[0186]
lcms:rt:0.377min；ms m/z(esi):349.0[m h].
[0187]
第五步：化合物001-1的合成
[0188]
将1h(81.0mg,232μmol)溶于四氢呋喃(4.0ml)和水(2.0ml)中，加入磷酸钾(98.5mg,464μmol)，0℃滴加丙烯酰氯(101mg,1.12mmol)，25℃搅拌2小时。加入水稀释，使用乙酸乙酯(15.0ml
×
3)进行萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥过滤浓缩，粗产物经制备高效液相色谱(色谱柱：phenomenex gemini-nx c18 75
×
30mm
×
3μm；流动相：a％:[水(0.05％nh3h2o 10mm nh4hco3)]；b％:acn 14％-54％,11min)分离纯化，得到产物001-1(8.4mg)。
[0189]
lcms:rt:1.718min；ms m/z(esi):403.1[m h].
[0190]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝12.43-11.89(m,1h),11.34(br s,1h),7.57(s,1h),6.76(s,1h),6.73-6.58(m,1h),6.23(td,j＝2.4,16.8hz,1h),5.81-5.68(m,1h),3.95-3.79(m,1h),3.75-3.61(m,2h),3.36(br d,j＝6.4hz,2h),3.27(dd,j＝7.8,12.1hz,1h),3.09-2.84(m,1h),2.40(s,3h),2.26-2.06(m,1h),1.99-1.76(m,1h).
[0191]
第六步：化合物001-2的合成
[0192]
以1g为原料采用上述第四步制备1h同样的方法制得1i后，再以1i为原料采用上述第五步制备001-1相同的方法制得化合物001-2(1.1mg)。
[0193]
lcms:rt:1.722min；ms m/z(esi):403.2[m h].
[0194]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝12.31-11.66(m,1h),11.49-11.08(m,1h),7.61-7.39(m,1h),6.64(s,1h),6.62-6.47(m,1h),6.11(td,j＝2.4,16.8hz,1h),5.71-5.56(m,1h),3.84-3.68(m,1h),3.63-3.50(m,2h),3.25(br d,j＝6.3hz,2h),3.16(dd,j＝7.9,12.1hz,1h),3.00-2.71(m,1h),2.28(s,3h),2.14-1.95(m,1h),1.86-1.67(m,1h).
[0195]
实施例2化合物002-1和002-2的制备
[0196]
[0197]
合成路线和具体合成步骤：
[0198][0199]
第一步：3-((5-氯-2-((1-甲基-1h-吡唑-4-基)氨基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯2a的制备
[0200]
将3-((2,5-二氯-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯1d(1.0g,1.99mmol)溶于无水二氧六环(20.0ml)中，加入2,2'-二(二苯基膦基)-1,1'-联萘(248mg,0.4mmol)、1-甲基-1h-吡唑-4-胺(290mg,2.99mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(183mg,0.2mmol)和碳酸铯(1.95g,5.98mmol)，100℃搅拌16小时。将反应液过滤浓缩，残留物经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)分离纯化，得到3-((5-氯-2-((1-甲基-1h-吡唑-4-基)氨基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯2a(1.08g)。
[0201]
第二步:(s)-3-((5-氯-2-((1-甲基-1h-吡唑-4-基)氨基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯和(r)-3-((5-氯-2-((1-甲基-1h-吡唑-4-基)氨基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的合成
[0202]
将第一步得到的2a进行手性分离[色谱柱：daicel chiralcel od(250mm
×
30mm,10μm)；流动相：a:co2；b:(含0.1％nh3·
h2o的ipa溶液),30％，直到收完样品]得到其中一种对映异构体2b(430mg,rt:1.829min)和另一种对映异构体2c(420mg,rt:1.997min)。
[0203]
lcms:rt:0.609min；ms m/z(esi):562.4[m h].
[0204]
第三步：中间体2d的合成
[0205]
将2b(370mg,0.66mmol)溶于无水二氯甲烷(3.0ml)中，加入三氟乙酸(1.0ml)，25℃搅拌16小时。将反应液浓缩，残留物溶于四氢呋喃(6.0ml)和水(3.0ml)中，加入一水合氢氧化锂(142mg,3.37mmol)，25℃搅拌16小时。加入水稀释，用乙酸乙酯、四氢呋喃(1:1,20.0ml
×
3)的混合溶液进行萃取，有机相干燥过滤浓缩，得棕色油状物中间体2d(367mg)，直接用于下一步。
[0206]
lcms:rt:0.764min；ms m/z(esi):332.0[m h].
[0207]
第四步：化合物002-1的合成
[0208]
将2d(367mg,1.11mmol)溶于四氢呋喃(6.0ml)和水(3.0ml)中，0℃加入磷酸钾(470mg,2.21mmol)和丙烯酰氯(127mg,1.40mmol)，25℃搅拌2小时。加水稀释，用乙酸乙酯(20.0ml
×
3)萃取，有机相干燥过滤浓缩，残留物经hplc(色谱柱：xtimate c18 100
×
30mm
×
10μm；流动相：[水(0.225％fa)]；b％:acn 20％-40％,15min)纯化得黄色固体化合物
002-1(32.4mg)。
[0209]
lcms:rt:2.325min；ms m/z(esi):386.0[m h].
[0210]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.61(s,1h),9.17(s,1h),8.18(s,1h),7.89(d,j＝3.9hz,1h),7.53(d,j＝1.8hz,1h),7.22(s,1h),6.66-6.40(m,1h),6.11(td,j＝2.8,16.7hz,1h),5.72-5.64(m,1h),3.79(s,4h),3.73-3.66(m,1h),3.63-3.49(m,2h),3.18-3.05(m,3h),2.84-2.68(m,1h),2.11-1.94(m,1h),1.84-1.61(m,1h).
[0211]
第五步：化合物002-2的合成
[0212]
以2c为原料采用上述第三步制备2d相同的方法制得2e后，再以2e为原料采用上述第四步制备002-1相同的方法制得化合物002-2(17.1mg)。
[0213]
lcms:rt:2.335min；ms m/z(esi):386.0[m h].
[0214]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.66(brs,1h),9.17(s,1h),8.26(s,1h),7.89(d,j＝3.9hz,1h),7.52(s,1h),7.21(s,1h),6.63-6.44(m,1h),6.17-6.04(m,1h),5.70-5.58(m,1h),3.82-3.66(m,3h),3.60-3.48(m,2h),3.18-3.08(m,3h),2.84-2.67(m,1h),2.13-1.92(m,1h),1.82-1.60(m,1h).
[0215]
实施例3化合物003-1和003-2的制备
[0216][0217]
合成路线和具体合成步骤：
[0218][0219]
第一步：3-((5-氯-2-((1-乙基-1h-吡唑-4-基)氨基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯3a的合成
[0220]
将1-乙基-1h-吡唑-4-胺(296mg,2.66mmol)溶于无水二氧六环(10.0ml)中，加入3-((2,5-二氯-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯1d(0.89g,1.77mmol)、碳酸铯(1.73g,5.32mmol)、2,2
′‑
双(二苯基膦)-1,1
′‑
联萘(221mg,0.35mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(163mg,0.18mmol)，在氮气氛围下100℃搅拌16小时。将反应液过滤浓缩，残留物经柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝1/1)纯化得到3-((5-氯-2-((1-乙基-1h-吡唑-4-基)氨基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲
基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯3a(850mg)。
[0221]
第二步:(s)-3-((5-氯-2-((1-乙基-1h-吡唑-4-基)氨基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯和(r)-3-((5-氯-2-((1-乙基-1h-吡唑-4-基)氨基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的合成
[0222]
将第一步得到的3a进行手性分离[色谱柱：daicel chiralcel od(250mm
×
30mm,10μm)；流动相：a:co2；b:(含0.1％nh3·
h2o的ipa溶液),30％,15min]得到其中一种对映异构体3b(280mg,rt:1.811min)和另一种对映异构体3c(280mg,rt:2.071min)。
[0223]
lcms:rt:0.628min；ms m/z(esi):576.4[m h].
[0224]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.85(s,1h),7.60(s,1h),6.95(d,j＝3.6hz,1h),6.85(s,1h),5.47(s,2h),4.23-4.13(m,2h),3.57-3.52(m,2h),3.35-3.24(m,1h),3.22-3.05(m,3h),2.85-2.69(m,1h),2.05-1.94(m,1h),1.81-1.63(m,2h),1.51(t,j＝7.3hz,3h),1.45(s,9h),1.21(d,j＝6.1hz,1h),0.94-0.88(m,2h),0.07(s,9h).
[0225]
lcms:rt:0.620min；ms m/z(esi):576.4[m h].
[0226]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.85(s,1h),7.61(s,1h),6.96(d,j＝2.8hz,1h),5.47(s,2h),4.21-4.14(m,2h),3.57-3.52(m,2h),3.49(d,j＝5.4hz,2h),3.35-3.24(m,1h),3.22-3.05(m,3h),2.86-2.70(m,1h),1.99(d,j＝5.6hz,1h),1.77-1.67(m,1h),1.51(t,j＝7.3hz,3h),1.45(s,9h),1.21(d,j＝6.1hz,1h),0.94-0.89(m,2h),0.07(s,9h).
[0227]
第三步：中间体3d的合成
[0228]
将3b(250mg,0.43mmol)溶于无水二氯甲烷(3.0ml)中，加入三氟乙酸(1.0ml)，25℃搅拌3小时。将反应液浓缩，残留物溶于四氢呋喃(3.0ml)和水(1.5ml)中，加入一水合氢氧化锂(15,1mg,3.59mmol)，25℃搅拌16小时。将反应液在室温真空浓缩，得到粗品中间体3d(614mg)，直接用于下一步。
[0229]
lcms:rt:0.388min；ms m/z(esi):346.1[m h].
[0230]
第四步：化合物003-1的合成
[0231]
将3d(615mg,1.78mmol)溶于3ml四氢呋喃和1.5ml的水中，0℃加入磷酸钾(1.13g,5.33mmol)和丙烯酰氯(241mg,2.66mmol)，25℃搅拌2小时。用乙酸乙酯(30.0ml
×
3)萃取，有机相干燥过滤浓缩，残留物经制备高效液相色谱(色谱柱：phenomenex luna c18 100
×
30mm
×
3μm；流动相：a％:[水(0.225％fa)]；b％:acn 13％-43％,15min)分离纯化，得到化合物003-1(20.5mg)。
[0232]
lcms:rt:2.417min；ms m/z(esi):400.4[m h].
[0233]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.60(s,1h),9.17(s,1h),7.93(d,j＝3.6hz,1h),7.54(d,j＝2.6hz,1h),7.23(d,j＝1.9hz,1h),6.63-6.46(m,1h),6.16-6.06(m,1h),5.69-5.57(m,1h),4.12-4.04(m,2h),3.82-3.67(m,1h),3.62-3.46(m,2h),3.19-3.07(m,3h),2.84-2.66(m,1h),2.10-1.95(m,1h),1.82-1.65(m,1h),1.36(t,j＝7.3hz,3h).
[0234]
第五步：化合物003-2的合成
[0235]
以3c为原料采用上述第三步制备3d相同的方法制得3e后，再以3e为原料采用上述第四步制备003-1相同的方法制得化合物003-2(25.0mg)。
[0236]
lcms:rt:2.429min；ms m/z(esi):400.4[m h].
[0237]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.60(s,1h),9.17(s,1h),7.93(d,j＝3.6hz,1h),7.54(d,j＝2.6hz,1h),7.23(d,j＝2.1hz,1h),6.63-6.42(m,1h),6.18-6.05(m,1h),5.68-5.56(m,1h),4.12-4.03(m,2h),3.82-3.66(m,1h),3.63-3.45(m,2h),3.20-3.06(m,3h),2.85-2.66(m,1h),2.13-1.95(m,1h),1.83-1.62(m,1h),1.36(t,j＝7.3hz,3h).
[0238]
实施例4化合物004-1和004-2的制备
[0239][0240]
合成路线和具体合成步骤：
[0241][0242]
第一步：3-((2-氯-5-环丙基-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯4b的合成
[0243]
将1b(3.5g,19.1mmol)溶于四氢呋喃(24.0ml)中，加入9-硼双环[3.3.1]壬烷(0.5m,76.0ml)，25℃搅拌1小时。反应液中加入水(10.0ml)，然后依次加入2,4-二氯-5-环丙基-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶4a(4.3g,12.0mmol)、四(三苯基膦)钯(1.39g,1.20mmol)、碳酸钾(4.98g,36.0mmol)，在氮气氛围下85℃搅拌16小时。反应液用水稀释(20.0ml)，用乙酸乙酯(30.0ml
×
3)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，干燥过滤浓缩，残留物经柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)纯化，得到3-((2-氯-5-环丙基-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯4b(3.5g)。
[0244]
lcms:rt:2.077min；ms m/z(esi):507.3[m h].
[0245]
第二步：(s)-3-((5-环丙基-2-((3-甲基异噻唑-5-基)氨基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯和(r)-3-((5-环丙基-2-((3-甲基异噻唑-5-基)氨基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的合成
[0246]
将4b(1.00g,1.97mmol)溶于1,4-二氧六环(20.0ml)中，加入3-甲基异噻唑-5-胺
(339mg,2.25mmol)、碳酸铯(2.57g,7.89mmol)和甲烷磺酸(2-二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2,4,6-三异丙基-1,1-联苯)(2-氨基-1,1-联苯-2-基)钯(ii)(179mg,0.20mmol)，氮气氛围下100℃反应16小时。反应液过滤浓缩，残留物经柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝1/3)纯化，得到3-((5-环丙基-2-((3-甲基异噻唑-5-基)氨基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯4c(900mg)。将得到的4c进行手性分离[色谱柱：daicel chiralpak ig(250mm
×
30mm,10μm)；流动相：a:co2；b:(0.1％nh3·
h2o etoh),30％,15min]得到其中一种对映异构体4d(440mg,rt:1.844min)和另一种对映异构体4e(380mg,rt:1.997min)。
[0247]
lcms:rt:2.163min；ms m/z(esi):585.2[m h].
[0248]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.24-7.99(m,1h),6.80(d,j＝2.8hz,1h),6.52(s,1h),5.54(s,2h),3.66-3.44(m,4h),3.42-3.21(m,3h),3.19-3.04(m,1h),3.03-2.84(m,1h),2.42(s,3h),2.12-1.99(m,1h),1.96-1.85(m,1h),1.84-1.66(m,1h),1.46(d,j＝4.3hz,9h),0.99-0.84(m,4h),0.71-0.57(m,2h),-0.07(s,9h).
[0249]
第三步：中间体4f的合成
[0250]
将4d(400mg,0.68mmol)溶于无水二氯甲烷(3.0ml)中，加入三氟乙酸(1.0ml)，25℃搅拌16小时。将反应液浓缩，残留物溶于四氢呋喃(5.0ml)和水(2.5ml)中，加入一水合氢氧化锂(229mg,5.46mmol)，25℃搅拌2小时。将反应液在室温浓缩，得到中间体4f(400mg)。
[0251]
lcms:rt:0.765min；ms m/z(esi):355.2[m h].
[0252]
第四步：化合物004-1的合成
[0253]
将4f(400mg,1.13mmol)和丙烯酸(106mg,1.47mmol)溶于四氢呋喃(5.0ml)中，加入n,n-二异丙基乙胺(437mg,3.39mmol)和三正丙基环磷酸酐50％乙酸乙酯溶液(718mg,2.26mmol)，25℃搅拌2小时。反应液浓缩，残留物经制备高效液相色谱(色谱柱：phenomenex gemini-nx c18 75
×
30mm
×
3μm；流动相：a％:[水(0.05％nh3h2o 10mm nh4hco3)]；b％:acn 21％-61％,11min)分离纯化，得到化合物004-1(17.2mg)。
[0254]
lcms:rt:1.466min；ms m/z(esi):409.3[m h].
[0255]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.41(s,1h),11.00(s,1h),6.98-6.87(m,1h),6.63-6.46(m,2h),6.10(d,j＝16.8hz,1h),5.70-5.55(m,1h),3.82-3.71(m,2h),3.60-3.54(m,2h),3.28-3.21(m,2h),3.19-3.12(m,1h),2.26(s,3h),2.15-1.89(m,2h),1.88-1.70(m,1h),0.83(dd,j＝3.1,7.6hz,2h),0.60(d,j＝4.6hz,2h).
[0256]
第五步：化合物004-2的合成
[0257]
以4e为原料采用上述第三步制备4f相同的方法制得4g后，再以4g为原料采用上述第四步制备004-1相同的方法制得化合物004-2(15.0mg,5.38％)。
[0258]
lcms:rt:1.507min；ms m/z(esi):409.3[m h].
[0259]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.42(s,1h),11.00(s,1h),6.93(s,1h),6.64-6.44(m,2h),6.10(d,j＝16.8hz,1h),5.70-5.56(m,1h),3.81-3.69(m,2h),3.62-3.53(m,3h),3.28-3.22(m,1h),3.16(dd,j＝7.4,11.9hz,1h),2.26(s,3h),2.18-1.89(m,2h),1.88-1.69(m,1h),0.83(dd,j＝3.3,7.8hz,2h),0.67-0.50(m,2h).
[0260]
实施例5化合物005-1和005-2的制备
[0261][0262]
合成路线和具体合成步骤：
[0263][0264]
第一步：3-((5-环丙基-2-((1-甲基-1h-吡唑-4-基)氨基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯5a的合成
[0265]
将4b(1.0g,2.0mmol)和1-甲基-1h-吡唑-4-胺(287mg,3.0mmol)溶于无水二氧六环(20.0ml)中，加入碳酸铯(2.6g,7.9mmol)、甲烷磺酸(2-二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2’,4’,6
’‑
三异丙基-1，1
’‑
联苯)(2
’‑
氨基-1，1
’‑
联苯-2-基)钯(ⅱ)(179mg,0.2mmol)，100℃搅拌16小时。将反应液过滤浓缩，残留物经柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝1/1)纯化，得到3-((5-环丙基-2-((1-甲基-1h-吡唑-4-基)氨基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯5a(1.0g)。
[0266]
第二步：(s)-3-((5-环丙基-2-((1-甲基-1h-吡唑-4-基)氨基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯和(r)-3-((5-环丙基-2-((1-甲基-1h-吡唑-4-基)氨基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的制备
[0267]
将第一步所得5a进行手性分离[色谱柱：daicel chiralpak ad(250mm
×
30mm,10μm)；流动相：a:co2；b:(含0.1％nh3·
h2o的ipa溶液),30％,15min]得到其中一种对映异构体5b(300mg,rt:1.690min)和另一种对映异构体5c(300mg,rt:1.912min)。
[0268]
lcms:rt:0.552min；ms m/z(esi):568.4[m h].
[0269]
第三步：中间体5d的合成
[0270]
将5b(300mg,0.53mmol)溶于二氯甲烷(3.0ml)中，加入三氟乙酸(1.0ml)，25℃搅拌16小时。将反应液浓缩，残留物溶于四氢呋喃(4.0ml)和水(2.0ml)中，加入一水合氢氧化锂(60mg,1.4mmol)，25℃搅拌16小时。将反应液过滤浓缩，得到中间体5d(160mg)，直接用于下步反应。
[0271]
lcms:rt:0.723min；ms m/z(esi):338.1[m h].
[0272]
第四步：化合物005-1的合成
[0273]
将5d(160mg,0.47mmol)溶于四氢呋喃(6.0ml)和水(3.0ml)中，0℃加入磷酸钾(201mg,0.95mmol)和丙烯酰氯(43mg,0.47mmol)，25℃搅拌2小时。反应完毕后使用10.0ml乙酸乙酯：四氢呋喃(1：1)混合溶剂进行萃取，有机相干燥过滤浓缩，粗产物经制备高效液相色谱(色谱柱：phenomenex luna c18 75
×
30mm
×
3μm；流动相：a％:[水(0.05％nh3h2o)]；b％:acn 13％-58％,15min)纯化，得到化合物005-1(7.3mg)。
[0274]
lcms:rt:1.412min；ms m/z(esi):392.1[m h].
[0275]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.44-10.59(brs,1h),8.98(s,1h),7.98(d,j＝5.0hz,1h),7.60(d,j＝2.9hz,1h),6.82(s,1h),6.71-6.56(m,1h),6.20(td,j＝2.9,16.8hz,1h),5.72(ddd,j＝2.4,10.5,13.4hz,1h),3.88(d,j＝1.8hz,3h),3.80(ddd,j＝4.6,8.0,10.1hz,1h),3.71-3.58(m,1h),3.26(br t,j＝7.9hz,2h),3.04-2.78(m,1h),2.24-2.05(m,1h),2.02-1.74(m,2h),1.13(d,j＝6.1hz,2h),0.97-0.82(m,2h),0.72-0.57(m,2h).
[0276]
第五步：化合物005-2的合成
[0277]
以5c为原料，采用上述第三步相同的方法制得5e后，再以5e为原料采用上述第四步制备005-1相同的方法制得化合物005-2(21.8mg)。
[0278]
lcms:rt:2.112min；ms m/z(esi):392.4[m h].
[0279]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.64-10.19(brs,1h),8.98(s,1h),7.98(d,j＝5.0hz,1h),7.60(d,j＝2.8hz,1h),6.82(s,1h),6.71-6.51(m,1h),6.20(td,j＝2.7,16.8hz,1h),5.72(ddd,j＝2.4,10.5,13.1hz,1h),3.88(d,j＝1.6hz,3h),3.83-3.75(m,1h),3.71-3.57(m,1h),3.26(t,j＝7.9hz,2h),3.04-2.80(m,1h),2.24-2.05(m,1h),2.02-1.70(m,2h),1.13(d,j＝6.1hz,2h),0.98-0.81(m,2h),0.72-0.55(m,2h).
[0280]
实施例6化合物006-1和006-2的制备
[0281][0282]
合成路线和具体合成步骤：
[0283]
[0284]
第一步：3-亚甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯6b的合成
[0285]
将3-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯6a(25.0g,125mmol)溶于无水四氢呋喃(250.0ml)中，加入甲基三苯基溴化膦(47.1g,132mmol)，0℃下分批加入叔丁醇钾(14.8g,132mmol)，0℃搅拌30分钟后恢复到室温，继续反应12小时。加入水淬灭反应(50.0ml)，用乙酸乙酯(30.0ml
×
3)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，干燥过滤浓缩，残留物经柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)纯化，得到3-亚甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯6b(5.5g)。
[0286]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ4.74(d,j＝0.8hz,1h),4.67(d,j＝0.8hz,1h),3.80(s,2h),3.41-3.32(m,2h),2.18(t,j＝6.3hz,2h),1.60-1.50(m,2h),1.38(s,9h).
[0287]
第二步：3-((2-氯-5-环丙基-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯6c的合成
[0288]
将6b(3.0g,15.2mmol)溶于无水四氢呋喃(10.0ml)中，加入9-硼双环[3.3.1]壬烷(0.5m,60.8ml)，25℃搅拌1小时。反应液中加入水(7.0ml)，然后依次加入2,4-二氯-5-环丙基-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶4a(3.5g,9.77mmol)、四(三苯基膦)钯(1.13g,0.98mmol)、碳酸钾(4.05g,29.3mmol)，在氮气氛围下85℃搅拌16小时。反应用水稀释，用乙酸乙酯(30.0ml
×
3)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，干燥过滤浓缩，残留物经柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)纯化，得3-((2-氯-5-环丙基-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯6c(4.5g)。
[0289]
lcms:rt:0.684min；ms m/z(esi):521.1[m h].
[0290]
第三步：(s)-3-((5-环丙基-2-((1-甲基-1h-吡唑-4-基)氨基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯和(r)-3-((5-环丙基-2-((1-甲基-1h-吡唑-4-基)氨基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成
[0291]
将6c(2.1g,4.03mmol)溶于1,4-二氧六环(50.0ml)中，加入1-甲基-1h-吡唑-4-胺(783mg,8.06mmol)、碳酸铯(5.25g,16.1mmol)和甲磺酸(2-二环己基膦-3,6-二甲氧基-2,4,6-三异丙基-1,1-联苯)(2-氨基-1,1-联苯基-2-基)钯(ii)(365mg,0.4mmol)，氮气氛围下100℃搅拌16小时。反应液过滤浓缩，残留物经柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)纯化，得到3-((5-环丙基-2-((1-甲基-1h-吡唑-4-基)氨基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯6d(1.1g)。将得到的6d进行手性分离[色谱柱：daicel chiralcel od(250mm
×
30mm,10μm)；流动相：a:co2；b:(0.1％nh3·
h2o etoh),25％,15min]得到其中一种对映异构体6e(450mg,rt:2.861min)和另一种对映异构体6f(550mg,rt:3.113min)。
[0292]
lcms:rt:0.563min；ms m/z(esi):582.5[m h].
[0293]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.95(s,1h),7.62(s,1h),6.87(brs,1h),6.73(s,1h),5.51(s,2h),4.10-4.02(m,1h),3.98(s,3h),3.86-3.79(m,3h),3.65-3.57(m,2h),3.21-3.11(m,1h),3.10-3.01(m,1h),2.92-2.81(m,1h),2.80-2.64(m,1h),2.27(ddd,j＝3.6,6.9,10.3hz,1h),2.08-1.88(m,5h),1.74(br d,j＝13.3hz,1h),1.47(br s,9h),1.39-1.32(m,1h),0.70(brd,j＝4.9hz,2h),0.00(s,9h).第四步：中间体6g的合成
[0294]
将6e(200mg,0.34mmol)溶于二氯甲烷(3.0ml)中，加入三氟乙酸(1.0ml)，25℃搅
拌16小时。将反应液浓缩后，残留物溶于乙醇(3.0ml)和水(1.0ml)中，加入一水合氢氧化锂(58mg,1.37mmol)和亚硫酸钠(130mg,1.03mmol)，50℃搅拌2小时。将反应液在室温浓缩得到中间体6g(200mg)。
[0295]
lcms:rt:0.745min；ms m/z(esi):352.0[m h].
[0296]
第五步：化合物006-1的合成
[0297]
将6g(100mg,0.28mmol)溶于四氢呋喃(4.0ml)和水(1.0ml)中，加入磷酸钾(181mg,0.85mmol)，0℃滴加丙烯酰氯(52mg,0.57mmol)，25℃搅拌2小时。加入水(3.0ml)稀释，使用乙酸乙酯(10.0ml
×
3)进行萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥过滤浓缩，粗产物经制备高效液相色谱(色谱柱：phenomenex gemini-nx c18 75
×
30mm
×
3μm；流动相：a％:[水(10mm nh4hco3)]；b％:acn 16％-56％,11min)分离纯化，得到化合物006-1(18.1mg)。
[0298]
lcms:rt:1.645min；ms m/z(esi):406.2[m h].
[0299]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.98(s,1h),8.89(d,j＝13.5hz,1h),7.89(s,1h),7.51(s,1h),6.79(dd,j＝10.5,16.6hz,1h),6.73(d,j＝0.6hz,1h),6.63(dd,j＝10.6,16.7hz,1h),6.03(d,j＝16.6hz,1h),5.68-5.49(m,1h),4.37(d,j＝11.1hz,1h),4.16(d,j＝12.8hz,1h),4.06-3.88(m,1h),3.79(s,3h),3.16-2.91(m,3h),2.86(t,j＝10.8hz,1h),2.63-2.57(m,1h),2.26-2.08(m,1h),1.96-1.75(m,2h),1.69(s,1h),1.44-1.23(m,2h),0.83(dd,j＝4.4,7.8hz,2h),0.66-0.46(m,2h).
[0300]
第六步：化合物006-2的合成
[0301]
以6f为原料，采用上述第四步相同的方法制得6g后，再以6g为原料采用上述第五步制备006-1相同的方法制得化合物006-2(25.1mg)。
[0302]
lcms:rt:0.994min；ms m/z(esi):406.0[m h].
[0303]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.98(s,1h),8.89(d,j＝13.4hz,1h),7.89(s,1h),7.51(s,1h),6.80-6.57(m,2h),6.03(d,j＝16.5hz,1h),5.69-5.46(m,1h),4.44-4.11(m,1h),4.05-3.90(m,1h),3.79(s,3h),3.14-2.92(m,3h),2.75-2.57(m,1h),2.25-2.08(m,1h),1.97-1.62(m,3h),1.35(d,j＝8.0hz,2h),0.82(dd,j＝4.4,7.8hz,2h),0.67-0.44(m,2h).
[0304]
生物学活性及相关性质测试例
[0305]
测试实施例1：btk激酶活性抑制实验
[0306]
实验原理：btk激酶与化合物共同孵育后，在atp的作用下与底物反应。使用promega公司的adp-glo检测试剂盒对反应产生的adp进行定量，从而反映酶活性。
[0307]
实验仪器：labcyte公司echo650移液系统；perkin elmer公司envision酶标仪；eppendorf公司5810离心机。
[0308]
实验材料：
[0309][0310][0311]
实验方法：用echo移液系统将待测化合物在二甲基亚砜(dmso)中稀释到不同浓度，转移至384孔板中，并且加入2μl/孔的btk，孵育30分钟。然后加入3μl/孔的底物poly(4:1glu,tyr)和atp的混合溶液，启动酶反应。化合物终浓度分别从3μm或300nm或100nm起始，3倍稀释。反应中酶的终浓度为1.7ng/孔，atp终浓度为36μm，底物的终浓度为0.1mg/ml。反应1小时后，加入5μl/孔adp-glo试剂，孵育40分钟。然后加入10μl/孔激酶反应检测试剂，孵育30分钟。用envision酶标仪读取荧光信号，并计算抑制率、半数抑制浓度(ic
50
)。
[0312]
本发明化合物的生物活性通过以上的试验进行测定，测得的ic
50
值见下表1。
[0313]
表1实施例化合物对btk激酶活性抑制的ic
50
[0314]
实施例化合物编号ic
50
(nm)001-116.73001-238.09002-122.78002-254.47003-110.37003-235.39004-14.25004-221.22005-111.79005-265.40006-132.07006-242.87
[0315]
测试实施例2：jak3激酶活性抑制实验
[0316]
实验原理：jak3激酶与化合物共同孵育后，在atp的作用下与底物反应。使用promega公司的adp-glo检测试剂盒对反应产生的adp进行定量，从而反映酶活性。
[0317]
实验仪器：
[0318]
labcyte公司echo650移液系统
[0319]
perkin elmer公司envision酶标仪
[0320]
eppendorf公司5810离心机。
[0321]
实验材料：
[0322][0323][0324]
实验方法：
[0325]
用echo移液系统将待测化合物在二甲基亚砜(dmso)中稀释到不同浓度，转移至384孔板中，并且加入2μl/孔的jak3，孵育30分钟。然后加入3μl/孔的底物poly(4:1glu,tyr)和atp的混合溶液，启动酶反应。化合物终浓度分别从3μm或300nm或100nm起始，3倍稀释。反应中酶的终浓度为1.9ng/孔，atp终浓度为36μm，底物的终浓度为0.1mg/ml。反应1小时后，加入5μl/孔adp-glo试剂，孵育40分钟。然后加入10μl/孔激酶反应检测试剂，孵育30分钟。用envision酶标仪读取荧光信号，并计算抑制率、半数抑制浓度(ic
50
)。
[0326]
本发明化合物的生物活性通过以上的试验进行测定，测得的ic
50
值见下表2。
[0327]
表2本发明化合物对jak3激酶活性抑制的ic
50
[0328]
实施例化合物编号ic
50
(nm)001-10.46001-21.06002-10.50002-21.26003-10.48003-20.89004-10.53004-22.26005-10.89005-22.26006-13.26006-23.30
[0329]
测试实施例3：对ramos细胞中btk磷酸化的抑制作用
[0330]
实验原理：将ramos细胞与化合物和刺激剂孵育后，使用cisbio公司的btk磷酸化检测试剂盒，通过均相时间分辨荧光(htrf)的方法检测荧光能量的转移，从而反映对磷酸
化的抑制作用。
[0331]
实验仪器：
[0332][0333][0334]
实验材料：
[0335][0336]
实验方法：
[0337]
用echo移液系统将待测化合物在二甲基亚砜(dmso)中稀释到不同浓度，转移至384孔板中,将ramos细胞密度调整为1x107细胞/ml，加入10μl/孔细胞悬液，在37℃，5％co2的培养箱中孵育1小时。然后加入5μl/孔的刺激剂anti-human igm抗体，刺激剂终浓度为10μg/ml，孵育10分钟。化合物终浓度为1μm起始，4倍稀释。加入5μl/孔的细胞裂解液，室温孵育30分钟。使用cisbio公司的btk phospho-y223试剂盒对btk的磷酸化程度进行检测，最终在envision酶标仪上读取发射光665nm和615nm下的荧光信号，计算抑制率和半数抑制浓度(ic
50
)。
[0338]
本发明化合物的生物活性通过以上的试验进行测定，测得的ic
50
值见下表3。
[0339]
表3本发明化合物对ramos细胞中btk磷酸化抑制活性
[0340]
实施例化合物编号ic
50
(nm)001-131.25001-259.00
002-182.03002-299.71003-136.08003-264.06004-117.14004-2103.18005-1221.99005-2234.51006-1222.28006-2429.37
[0341]
测试实施例4：对ctll-2细胞中stat5磷酸化的抑制作用
[0342]
实验原理：此实验是评价化合物对jak3下游底物stat5磷酸化的影响。将ctll-2细胞与化合物和刺激剂孵育后，使用perkin elmer公司的p-stat5(tyr694/699)检测试剂盒，通过时间分辨荧光的方法检测供体微珠和受体微珠之间的荧光能量转移，从而反映对磷酸化的抑制作用。
[0343]
实验仪器：
[0344]
仪器品牌型号echolabcyte650生物安全柜escoclassⅱbsc离心机eppendorf5810co2培养箱escoccl-170b-8细胞计数仪countstaric1000envisionperkin elmer/
[0345]
实验材料：
[0346][0347]
实验方法：
[0348]
将ctll-2细胞种在384孔板中，2x106细胞/ml，6μl/孔，用echo将化合物在二甲基
亚砜(dmso)中稀释到不同浓度，转移至384孔板中，在37℃，5％co2的培养箱中孵育60分钟。然后加入2μl/孔的刺激剂il-2，终浓度为0.5ng/ml，孵育15分钟。化合物终浓度从3μm起始，3倍稀释。加入2μl/孔细胞裂解液，室温孵育10分钟。用perkin elmer公司的alphalisa p-stat5(tyr694/699)检测试剂盒对stat5的磷酸化程度进行检测，最终在envision酶标仪上读取alphalisa信号，计算抑制率和半数抑制浓度(ic
50
)。
[0349]
本发明化合物的生物活性通过以上的试验进行测定，测得的ic
50
值见下表4。
[0350]
表4本发明化合物对ctll-2细胞中stat5磷酸化的抑制活性
[0351][0352][0353]
注：n/a代表未测定。
[0354]
以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。