一种原代奶牛乳腺上皮细胞生物反应器合成的奶牛抗菌多肽及其应用

技术特征：
1.一种原代奶牛乳腺上皮细胞生物反应器合成的奶牛抗菌多肽，其特征在于，所述奶牛抗菌多肽的氨基酸序列如seq id no:1所示。2.根据权利要求1所述的原代奶牛乳腺上皮细胞生物反应器合成的奶牛抗菌多肽制备方法，其特征在于，在序列为seq id no:3的奶牛气管抗菌肽基因的5’端插入牛乳蛋白启动子元件，在牛乳蛋白启动子元件3’端插入β-乳球蛋白肽基因，插入β-乳球蛋白肽基因后的牛乳蛋白表达启动子元件序列如seq id no:2所示。3.根据权利要求2所述的原代奶牛乳腺上皮细胞生物反应器合成的奶牛抗菌多肽制备方法，其特征在于，采用携带增强型绿色荧光蛋白标签的哺乳细胞质粒为载体，将奶牛气管抗菌肽基因转染至原代乳腺上皮细胞中。4.根据权利要求2所述的原代奶牛乳腺上皮细胞生物反应器合成的奶牛抗菌多肽制备方法，其特征在于，所述奶牛乳腺上皮细胞生物反应器的制备方法为：采集泌乳奶牛新鲜乳腺组织，冲洗后剥离脂肪组织和结缔组织，分离腺泡组织并传代培养，加入胰酶消化液得到单细胞悬液，分离原代奶牛乳腺上皮细胞，作为原代奶牛乳腺上皮细胞生物反应器。5.根据权利要求2所述的原代奶牛乳腺上皮细胞生物反应器合成的奶牛抗菌多肽制备方法，其特征在于，分离腺泡组织将其接种至培养皿中，置于37℃、5％co2、饱和湿度的培养箱中20-30分钟左右，使组织块微干涸，然后向培养皿中轻轻加入约1ml培养液，置co2培养箱中培养1-2小时后再补1ml培养基，在培养箱内静置培养两天，第三天更换培养液，以后每两到三天更换一次培养液。6.根据权利要求2所述的原代奶牛乳腺上皮细胞生物反应器合成的奶牛抗菌多肽制备方法，其特征在于，加入胰酶消化液后，至于培养箱内37℃消化3-5分钟，倒置显微镜下观察，待大部分细胞回缩变圆后立即将消化液吸出，继续在培养箱内孵育3-5min，让残留的消化液将细胞消化并脱离瓶底或皿底，立即加2ml含10％fbs的培养液终止消化，用移液器吸取瓶内培养液，反复吹打瓶底细胞，使其成为单细胞悬液。7.根据权利要求1所述的原代奶牛乳腺上皮细胞生物反应器合成的奶牛抗菌多肽在制备奶牛乳腺炎药物中的应用。8.根据权利要求1所述的原代奶牛乳腺上皮细胞生物反应器合成的奶牛抗菌多肽在制备减轻牛乳蛋白过敏症药物中的应用。9.根据权利要求1所述的原代奶牛乳腺上皮细胞生物反应器合成的奶牛抗菌多肽在食品保鲜中的应用。10.根据权利9所述的应用，其特征在于，在低温奶制品中添加权利要求1所述的多功能奶牛溶菌酶，所述奶牛抗菌多肽的添加量为低温奶制品的质量百分含量的1％-3％。

技术总结
本发明属于生物工程领域，公开了一种奶牛乳腺上皮细胞生物反应器合成的奶牛抗菌多肽：包括奶牛气管抗菌肽、奶牛β-乳球蛋白肽和EGFP绿色荧光标签融合蛋白，以原代奶牛乳腺上皮细胞作为生物反应器制备抗菌肽，可以显著提高所制备的抗菌肽活性；所述的奶牛气管抗菌肽可极显著降低金黄色葡萄球菌对细胞的损伤，细胞凋亡率下降81.9％，可有效治疗细菌诱导的小鼠乳腺炎；以所述抗菌多肽主要活性成分的保鲜剂，用于食品的保鲜，可以延长低温食品的保质期一倍以上；所述抗菌多肽含有特定的β-乳球蛋白肽，其可诱导对乳蛋白的口服免疫耐受，能够减轻尤其是消除牛乳蛋白过敏症的急性症状。够减轻尤其是消除牛乳蛋白过敏症的急性症状。够减轻尤其是消除牛乳蛋白过敏症的急性症状。


技术研发人员：杨章平 张志鹏 杨奕 陈代杰 陈志 徐天乐
受保护的技术使用者：扬州大学
技术研发日：2022.06.08
技术公布日：2022/8/12