细菌菌株、其组合物以及其用于治疗胃肠紊乱的用途的制作方法

细菌菌株、其组合物以及其用于治疗胃肠紊乱的用途
1.本发明涉及新型细菌菌株，例如：被鉴定为短双歧杆菌bbibs01的属于短双歧杆菌物种的菌株(dsm 33231)、被鉴定为短双歧杆菌bbibs02的属于短双歧杆菌物种的菌株(dsm 33232)、被鉴定为动物双歧杆菌乳酸亚种blibs01的属于动物双歧杆菌物种的菌株(dsm 33233)、和被鉴定为植物乳杆菌lpibs01的属于植物乳杆菌物种的菌株(dsm 33234)。
2.此外，本发明涉及包含一种混合物的组合物，所述混合物包括以下细菌菌株或由以下细菌菌株组成：选自下组的至少一种或多种细菌菌株，所述组包括以下或由以下组成：所述短双歧杆菌bbibs01(dsm 33231)、短双歧杆菌bbibs02(dsm 33232)、动物双歧杆菌乳酸亚种blibs01(dsm 33233)和植物乳杆菌lpibs01(dsm 33234)；以及可选地选自下组的至少一种其他细菌菌株，所述组包括以下或由以下组成：干酪乳杆菌(cncm i-1572)和副干酪乳杆菌lpc-s01
tm
(dsm 26760)。
3.最后，本发明涉及所述细菌菌株或其混合物或其组合物，其用于预防性和/或治愈性治疗胃肠疾病、紊乱或症状的方法中，特别是功能性胃肠紊乱，例如肠易激综合征(ibs)，和/或炎性紊乱，例如慢性炎性肠病(ibd)。
4.肠易激综合征(简称为ibs)属于功能性胃肠紊乱(fgi)的组，这是一种可以仅基于症状表现来定义诊断类别，并且其特征在于不存在明显的病理遗传基底。胃肠功能紊乱(fgds)，也称为肠脑轴紊乱，是基于与以下的任何组合相关的胃肠症状分类的一组紊乱：肠运动紊乱、内脏高敏感性、改变的粘膜和免疫功能、肠微生物群的改变、对中枢神经系统中刺激的感知的改变。ibs是最常见的胃肠紊乱中的一种，影响约15-20％的人群，其中腹部不适或疼痛与肠道环境的变化相关联。尽管在文献中报道了，但是在组织、细胞或分子水平对管腔或胃肠道粘膜的明显改变是可变的事件，并且它们还没有在ibs中无可辩驳地识别。似乎涉及改变的免疫应答，但是它们不能完全解释症状。类似地，肠道微生物群的改变(即，失调)促成病理生理学，但特定病原体或致病有机体尚未可靠地与ibs相关联。
5.肠易激综合征(ibs)是由腹部疼痛表征的肠功能的紊乱，所述腹部疼痛与肠道的变化(便秘或腹泻)相关，并且具有改变的排便和鼓胀的迹象。ibs不应与痉挛性结肠炎混淆，因为痉挛性结肠炎是由引起痉挛和腹部疼痛的炎症引起的器质性疾病。根据rome iv标准，ibs的特征在于，在最近3个月中平均每周至少1天的复发性腹部疼痛，其与以下标准中的两个以上相关联：与排便有关，与粪便频率的变化有关，与粪便形状(外观)的变化有关。在最近3个月中必须满足标准，并且在诊断前症状发作至少6个月。
6.取决于粪便的特点，区分成四组，其中患者可以被分层次：便秘占主要的ibs(小肠便秘)，腹泻占主要的ibs(小肠腹泻)，便秘和腹泻交替的ibs，未分类ibs。
7.目前，可用于治疗ibs的疗法旨在解决ibs潜在的病理事件。在患有小肠腹泻的受试者中，可以通过减少短链碳水化合物的食物摄取来减少排便的频率，所述短链碳水化合物(例如果糖、山梨糖醇和甘露糖醇)在小肠(fodmap：可发酵的低聚糖、二糖、单糖和多元醇)中被较差地吸收。将高岭土型制剂(例如diosmectite)与这些溶液组合可能是有用的。在小肠便秘占主要且存在鼓胀的受试者中可用的是要每天服用的具有低浓度的聚乙二醇/矿物质盐的制剂。此外，使用利那洛肽(linaclotide)(一种鸟苷酸环化酶c受体激动剂)在
这些患有中度至重度便秘的受试者中也是可用的。当患者认可其焦虑时，在短时期内使用抗焦虑药(例如苯二氮卓类(benzodiazepines))，其可用于减少对疼痛的心理参与，并使其减少。类似地，除了在不改变心理功能的情况下直接调节疼痛之外，抗抑郁药如三环(tricyclics)和ssri(选择性的血清素再摄取抑制剂)的使用能够改善睡眠质量并降低发作频率。其他疗法替代地旨在控制疼痛；在这种意义上，一些解痉剂是特别有用的。抗胆碱能抗痉挛药物(抗毒蕈碱药物)如阿托品、东莨菪碱、甲苯凡林用于减少胃分泌和肠蠕动。与憩室病的疗法类似，可以通过使用吸收性较差的抗生素(例如利福昔明)和调节肠道菌群的益生菌来减少鼓膜综合征。
8.然而，上述治疗通常不能使疾病及其症状被完全且持久的解决。
9.因此，特别需要提供有效的解决方案来治疗胃肠紊乱，特别是功能性胃肠紊乱，更特别是肠易激综合征(ibs)、小肠便秘、小肠腹泻、交替的便秘和腹泻、以及未分类ibs。
10.此外，需要提供有效的解决方案来治疗炎性胃肠紊乱，例如慢性炎性肠病(ibd)。
11.在广泛的研究和开发活动之后，如在本说明书和权利要求书中所报告的，申请人通过提供以下内容解决了前述的需求：新型分离细菌菌株，例如(i.i)短双歧杆菌bbibs01(dsm 33231)、(i.ii)短双歧杆菌bbibs02(dsm 33232)、(i.iii)动物双歧杆菌乳酸亚种blibs01(dsm 33233)和(i.iv)植物乳杆菌lpibs01(dsm 33234)(简称为本发明的新型细菌菌株(i.i-i.iv)或(i.i-i.iv))；混合物(m)，其包含所述细菌菌株(i.i-i.iv)中的至少一种或多种，以及可选的选自下组的至少一种其他细菌菌株，所述组包括以下或由以下组成：干酪乳杆菌(cncm i-1572)和副干酪乳杆菌lpc-s01
tm
(dsm 26760)(简称为本发明的混合物(m))；所述细菌菌株、混合物或组合物的用途，其用于预防性和/或治愈性治疗胃肠紊乱，优选功能性胃肠紊乱，更优选肠易激综合征(ibs)(伴随腹泻的ibs、伴随便秘的ibs、伴随交替的便秘和腹泻的ibs和未分类ibs)，和/或炎性胃肠紊乱，更优选慢性炎性肠病(ibd)。
12.植物乳杆菌lpibs01(dsm 33234)从人类胃肠道中分离。所讨论的双歧杆菌如短双歧杆菌bbibs01(dsm 33231)、(i.ii)短双歧杆菌bbibs02(dsm 33232)、(i.iii)动物双歧杆菌乳酸亚种blibs01(dsm 33233)是人类来源的，并且它们天然存在于人类肠中。
13.具体地，本发明的所述新型细菌菌株(i.i-i.iv)或其衍生物、本发明的细菌菌株的混合物(m)和本发明的包含所述混合物(m)的组合物可有效地预防性和/或治愈性治疗胃肠紊乱，特别是功能性胃肠紊乱，例如ibs，条件是它们确定：
[0014]-在肠道微生物群的水平下，积极调节存在的微生物群，例如乳杆菌属和双歧杆菌属的细菌群增加，同时，属于瘤胃球菌属(通常与ibs相关的致病有机体)的细菌群显著减少；
[0015]-短链脂肪酸(特别是丁酸和/或乙酸)的肠浓度增加；
[0016]-积极调节细菌代谢产物的水平(代谢组学)，例如游离氨基酸和生物源性胺；
[0017]-积极调节炎症途径，例如促炎细胞因子(例如il-6和/或il-15等)减少；
[0018]-肠渗透性改善，例如通过连蛋白、瓜氨酸和pv-1的血清水平进行评估；
[0019]-血清素源性途径水平的积极调节。
[0020]
此外，本发明的混合物和组合物中所含的细菌菌株(例如属于乳杆菌属和双歧杆菌属的菌株)产生各种有益效果，条件是各物种通过各种机制(例如分泌细菌素、调节宿主
免疫系统等)对胃肠道发挥不同的作用。这些作用可以是互补的或协同的。
[0021]
另外，本发明的所述新型细菌菌株(i.i-i.iv)、细菌菌株的混合物(m)和包含所述混合物(m)的组合物影响在肠中(特别是在回肠中)的免疫应答中涉及的不同基因表达，使其在肠中的抗炎性/调节活性似乎是可信的。因此，本发明的细菌菌株、混合物和组合物适合且有效用于预防性和/或治愈性治疗炎性胃肠紊乱，例如慢性炎性肠病(ibd)。
[0022]
尽管在现有技术中已使用益生菌细菌菌株来改善ibs症状，但益生菌在ibs中的精确功效仍旧在很大程度上是未知的。由于益生菌细菌菌株属于不同的菌株和物种，文献中不存在关于哪些菌株和物种最有效的明确结论。
[0023]
此外，本发明的新型细菌菌株、混合物和组合物不具有明显的副作用，并且它们可以施用于所有受试者，特别是老年受试者和孕妇。
[0024]
最后，本发明的混合物或组合物是有效的，易于制备，且具有成本效益。
[0025]
由于说明书中呈现的和所附权利要求书中要求保护的技术特征，由后文具体实施方式清楚可见的这些及其他目的通过本发明的细菌菌株、混合物和组合物而得以实现。
附图说明
[0026]
图1：具有准备(run-in)、治疗、交叉、治疗和随访阶段的临时试验的设计。
具体实施方式
[0027]
形成本发明的一个目的是一种属于短双歧杆菌物种的细菌菌株或其衍生物，其被鉴定为(i.i)短双歧杆菌bbibs01，其中所述细菌菌株根据布达佩斯条约在2019年7月31日由索法尔公司(sofar s.p.a.)以dsm 33231的保藏号保藏在德国微生物保藏中心(deutsche sammlung von mikroorganismen und zellkulturen gmbh，dsmz)(简称为bbibs01或短双歧杆菌bbibs01 dsm 33231或(i.i))。
[0028]
形成本发明的一个目的是一种属于短双歧杆菌物种的细菌菌株或其衍生物，其被鉴定为(i.ii)短双歧杆菌bbibs02，其中所述细菌菌株根据布达佩斯条约在2019年7月31日由索法尔公司以dsm 33232的保藏号保藏在德国微生物保藏中心(dsmz)(简称为bbibs02或短双歧杆菌bbibs02 dsm 33232或(i.ii))。
[0029]
形成本发明的一个目的是一种属于动物双歧杆菌物种的细菌菌株或其衍生物，其被鉴定为(i.iii)动物双歧杆菌乳酸亚种blibs01，其中所述细菌菌株根据布达佩斯条约在2019年7月31日由索法尔公司以dsm 33233的保藏号保藏在德国微生物保藏中心(dsmz)(简称为blibs01或动物双歧杆菌乳酸亚种blibs01 dsm 33233或(i.iii))。
[0030]
形成本发明的一个目的是一种属于植物乳杆菌物种的细菌菌株或其衍生物，其被鉴定为(i.iv)植物乳杆菌lpibs01，其中所述细菌菌株根据布达佩斯条约在2019年7月31日由索法尔公司以dsm 33234的保藏号保藏在德国微生物保藏中心(dsmz)(简称为lpibs01或植物乳杆菌lpibs01 dsm 33234或(i.iv))。
[0031]
优选地，本发明的细菌菌株(即(i.i)、(i.ii)、(i.iii)、(i.iv)、(ii.i)、(ii.ii))是活细菌菌株(活体且可存活)，例如益生菌产品或活体生物治疗产品(简称为lbp，例如包含活细菌菌株的药物产品)中存在的活细菌菌株。
[0032]“益生菌”是活体且可存活的微生物(即细菌菌株)，其在以足够的量施用时赋予宿
主健康的益处；术语“益生菌”是指存在于或添加到食品中的微生物(fao和who定义)。
[0033]
在本发明的上下文中，本发明的细菌菌株的术语“衍生物(一种或多种)”(即(i.i)、(i.ii)、(i.iii)、(i.iv)、(ii.i)、(ii.ii))用于表示间歇灭菌的(tyndalized)或灭活的细菌菌株(例如通过γ辐射或超声处理)，或细菌菌株(灭活益生菌)的裂解物或提取物，或细菌菌株的任何衍生物和/或组分，优选表多糖、顶叶部分、代谢物或由细菌菌株产生的代谢生物产物(后生元)，和/或源自于细菌菌株的任何其他产物。优选地，本发明的细菌菌株的术语“衍生物”用于表示间歇灭菌的或灭活的细菌菌株。
[0034]
根据本发明的一个方面，在本发明的混合物(m)或本发明的组合物中，部分细菌菌株可以是活的，并且部分细菌菌株可以为如上定义的衍生物的形式(例如间歇灭菌的)。
[0035]
形成本发明的一个目的是混合物(m)(简称为本发明的混合物(m))，其包括以下或由以下组成：选自组a的至少一种或多种细菌菌株或其衍生物，所述组a包括以下或由以下组成：(i.i)短双歧杆菌bbibs01(dsm 33231)、(i.ii)短双歧杆菌bbibs02(dsm33232)、(i.iii)动物双歧杆菌乳酸亚种blibs01(dsm 33233)、(i.iv)植物乳杆菌lpibs01(dsm 33234)以及它们的混合物。
[0036]
本发明的所述混合物(m)可包含选自组a的单种细菌菌株，所述组a包括以下或由以下组成：(i.i)、(i.ii)、(i.iii)和(i.iv)；简称为混合物m.1。
[0037]
本发明的所述混合物(m)可包含选自组m.2的两种细菌菌株的混合物，所述组m.2由以下组成：(i.i)和(i.ii)、(i.i)和(i.iii)、(i.i)和(i.iv)、(i.ii)和(i.iii)、(i.ii)和(i.iv)、(i.iii)和(i.iv)；简称为混合物m.2。
[0038]
本发明的所述混合物(m)可包含选自组m.3的三种细菌菌株的混合物，所述组m.3由以下组成：(i.i)和(i.ii)和(i.iii)、(i.i)和(i.ii)和(i.iv)、(i.i)和(i.iii)和(i.iv)、(i.ii)和(i.iii)和(i.iv)；简称为混合物m.3。
[0039]
本发明的所述混合物(m)可包含选自组m.4的四种细菌菌株的混合物，所述组m.4由以下组成：(i.i)短双歧杆菌bbibs01(dsm 33231)、(i.ii)短双歧杆菌bbibs02(dsm 33232)、(i.iii)动物双歧杆菌乳酸亚种blibs01(dsm 33233)和(i.iv)植物乳杆菌lpibs01(dsm 33234)；简称为混合物m.4。
[0040]
在本发明的一个实施方式中，并且除了选自组a的至少一种或多种细菌菌株或其衍生物之外，本发明的混合物(m)包含选自组b的至少一种其他细菌菌株，所述组b包括以下或由以下组成：细菌菌株(ii.i)干酪乳杆菌(cncm i-1572)、细菌菌株(ii.ii)副干酪乳杆菌lpc-s01
tm
(dsm 26760)以及它们的混合物。
[0041]
被鉴定为干酪乳杆菌(索法尔公司的注册商标)的细菌菌株在1995年5月05日由索法尔公司以cncm i-1572的保藏号保藏在巴黎巴斯德研究所国家微生物保藏中心(national collection of cultures of microorganisms of the pasteur institute in paris)(简称为或干酪乳杆菌cncm i-1572或(ii.i))；该菌株的最初名称为干酪乳杆菌干酪亚组；其后来被重新分类为副干酪乳杆菌应观察到，无论名称是干酪乳杆菌还是副干酪乳杆菌其都依旧唯一地是相同的细菌菌株。
[0042]
被鉴定为副干酪乳杆菌lpc-s01
tm
(备选名称为副干酪乳杆菌s01)的细菌菌株在2017年5月15日由索法尔公司以dsm 26760的保藏号保藏在德国微生物保藏中心(dsmz)(根
据布达佩斯条约，将保藏的申请日期转换为保藏日期；初始保藏日期：2013年1月11日)(简称为lpc-s01
tm
或副干酪乳杆菌lpc-s01
tm dsm 26760或(ii.ii))。应观察到，无论申请人使用的名称是副干酪乳杆菌s01 dsm 26760还是副干酪乳杆菌lpc-s01
tm dsm 26760，其都依旧唯一地是相同的细菌菌株。
[0043]
在本发明的优选实施方式中，除了选自组a的至少一种或多种细菌菌株之外，本发明的混合物(m)还包含细菌菌株(ii.i)干酪乳杆菌(cncm i-1572)或其衍生物(即混合物(m) (ii.i)，其中m可以是m.1、m.2、m.3或m.4)。
[0044]
在本发明的实施方式中，除了选自组a的至少一种或多种细菌菌株之外，本发明的混合物(m)还包含细菌菌株(ii.ii)副干酪乳杆菌lpc-s01
tm
(dsm 26760)或其衍生物(即混合物(m) (ii.ii)，其中m可以是m.1、m.2、m.3或m.4)。
[0045]
在本发明的实施方式中，除了选自组a的至少一种或多种细菌菌株之外，本发明的混合物(m)还包含细菌菌株(ii.i)干酪乳杆菌(cncm i-1572)和细菌菌株(ii.ii)副干酪乳杆菌lpc-s01
tm
(dsm 26760)或其衍生物(即混合物(m) (ii.i)(ii.ii)，其中m可以是m.1、m.2、m.3或m.4)。
[0046]
根据本发明的一个方面，本发明的所述混合物(m)包含选自如本发明中定义的组a(或混合物m.1的组)的一种细菌菌株，以及细菌菌株(ii.i)干酪乳杆菌(cncm i-1572)或其衍生物(即：(i.i)和(ii.i)、(i.ii)和(ii.i)、(i.iii)和(ii.i)、(i.iv)和(ii.i)；简称为混合物m.1 (ii.i))。
[0047]
根据本发明的一个方面，本发明的所述混合物(m)包含选自如本发明中定义的混合物m.2的两种细菌菌株，以及细菌菌株(ii.i)干酪乳杆菌(cncm i-1572)或其衍生物(即：(i.i)和(i.ii)和(ii.i)、(i.i)和(i.iii)和(ii.i)、(i.i)和(i.iv)和(ii.i)、(i.ii)和(i.iii)和(ii.i)、(i.ii)和(i.iv)和(ii.i)、(i.iii)和(i.iv)和(ii.i)；简称为混合物m.2 (ii.i))。
[0048]
根据本发明的一个方面，本发明的所述混合物(m)包含选自如本发明中定义的混合物m.3的三种细菌菌株，以及细菌菌株(ii.i)干酪乳杆菌(cncm i-1572)或其衍生物(即：(i.i)和(i.ii)和(i.iii)和(ii.i)、(i.i)和(i.ii)和(i.iv)和(ii.i)、(i.i)和(i.iii)和(i.iv)和(ii.i)、(i.ii)和(i.iii)和(i.iv)和(ii.i)；简称为混合物m.3 (ii.i))。
[0049]
在本发明的优选实施方式中，本发明的所述混合物(m)包含四种细菌菌株(i.i)短双歧杆菌bbibs01(dsm 33231)、(i.ii)短双歧杆菌bbibs02(dsm 33232)、(i.iii)动物双歧杆菌乳酸亚种blibs01(dsm 33233)和(i.iv)植物乳杆菌lpibs01(dsm 33234)和细菌菌株(ii.i)干酪乳杆菌(cncm i-1572)或其衍生物(简称为混合物m.4 (ii.i))。
[0050]
在本发明的实施方式中，本发明的所述混合物(m)包含四种细菌菌株(i.i)短双歧杆菌bbibs01(dsm 33231)、(i.ii)短双歧杆菌bbibs02(dsm 33232)、(i.iii)动物双歧杆菌乳酸亚种blibs01(dsm 33233)和(i.iv)植物乳杆菌lpibs01(dsm 33234)和细菌菌株(ii.ii)副干酪乳杆菌lpc-s01
tm
(dsm 26760)或其衍生物(简称为混合物m.4 (ii.ii))。
[0051]
在本发明的实施方式中，本发明的所述混合物(m)包含四种细菌菌株(i.i)短双歧杆菌bbibs01(dsm 33231)、(i.ii)短双歧杆菌bbibs02(dsm 33232)、(i.iii)动物双歧杆菌
乳酸亚种blibs01(dsm 33233)和(i.iv)植物乳杆菌lpibs01(dsm 33234)和细菌菌株(ii.i)干酪乳杆菌(cncm i-1572)和细菌菌株(ii.ii)副干酪乳杆菌lpc-s01
tm
(dsm 26760)或其衍生物(简称为混合物m.4 (ii.i) (ii.ii))。
[0052]
在本发明的上下文中，术语“本发明的混合物(m)”用于表示如本发明的上下文中定义的混合物m.1、m.2、m.3、m.4、m.1 (ii.i)、m.1 (ii.ii)、m.1 (ii.i) (ii.ii)、m.2 (ii.i)、m.2 (ii.ii)、m.2 (ii.i) (ii.ii)、m.3 (ii.i)、m.3 (ii.ii)、m.3 (ii.i) (ii.ii)、m.4 (ii.i)、m.4 (ii.ii)和m.4 (ii.i) (ii.ii)。
[0053]
形成本发明的一个目的是一种组合物(简称为本发明的组合物)，其包含混合物(m)，所述混合物(m)包括以下或由以下组成：选自组a的至少一种或多种细菌菌株(即两种、三种或四种菌株)或其衍生物，所述组a包括以下或由以下组成：(i.i)短双歧杆菌bbibs01(dsm 33231)、(i.ii)短双歧杆菌bbibs02(dsm 33232)、(i.iii)动物双歧杆菌乳酸亚种blibs01(dsm 33233)和(i.iv)植物乳杆菌lpibs01(dsm 33234)，并且，可选地，所述组合物包含至少一种食品或药物级添加剂和/或赋形剂。
[0054]
在本发明的上下文中，术语“本发明的组合物”用于表示包含如本发明的上下文中定义的混合物m.1、m.2、m.3、m.4、m.1 (ii.i)、m.1 (ii.ii)、m.1 (ii.i) (ii.ii)、m.2 (ii.i)、m.2 (ii.ii)、m.2 (ii.i) (ii.ii)、m.3 (ii.i)、m.3 (ii.ii)、m.3 (ii.i) (ii.ii)、m.4 (ii.i)、m.4 (ii.ii)和m.4 (ii.i) (ii.ii)的组合物。
[0055]
在一个实施方式中，本发明的组合物包含混合物(m.1)，所述混合物(m.1)包括以下或由以下组成：选自组a(或混合物m.1的组)的细菌菌株，所述组a包括以下或由以下组成：(i.i)、(i.ii)、(i.iii)和(i.iv)。
[0056]
在一个实施方式中，本发明的组合物包含混合物(m.2)，所述混合物(m.2)包括以下或由以下组成：选自如本发明中定义的混合物m.2的组的两种细菌菌株。
[0057]
在一个实施方式中，本发明的组合物包含混合物(m.3)，所述混合物(m.3)包括以下或由以下组成：选自如本发明中定义的混合物m.3的组的三种细菌菌株。
[0058]
在优选实施方式中，本发明的组合物包含混合物m.4)，所述混合物m.4)包括以下或由以下组成：四种细菌菌株，例如：(i.i)短双歧杆菌bbibs01(dsm 33231)、(i.ii)短双歧杆菌bbibs02(dsm 33232)、(i.iii)动物双歧杆菌乳酸亚种blibs01(dsm 33233)和(i.iv)植物乳杆菌lpibs01(dsm 33234)(简称为(i.i)、(i.ii)、(i.iii)和(i.iv))。
[0059]
在本发明的实施方式中，本发明的组合物包含本发明的混合物(m)，除了选自组a的至少一种或多种细菌菌株之外，本发明的混合物(m)包含选自组b的至少一种其他细菌菌株，所述组b包括以下或由以下组成：细菌菌株(ii.i)干酪乳杆菌(cncm i-1572)和细菌菌株(ii.ii)副干酪乳杆菌lpc-s01
tm
(dsm 26760)，例如混合物m (ii.i)或混合物m (ii.ii)或混合物m (ii.i) (ii.ii)，其中m可以是如本发明的上下文中定义的m.1、m.2、m.3或m.4。
[0060]
在本发明的优选实施方式中，本发明的组合物包含本发明的混合物(m)，除了选自组a的至少一种或多种细菌菌株之外，本发明的混合物(m)还包含细菌菌株(ii.i)干酪乳杆菌(cncm i-1572)或其衍生物(即混合物(m) (ii.i)，其中m可以是m.1、m.2、m.3或m.4)。
[0061]
在本发明的实施方式中，本发明的组合物包含本发明的混合物(m)，除了选自组a的至少一种或多种细菌菌株之外，本发明的混合物(m)还包含细菌菌株(ii.ii)副干酪乳杆菌lpc-s01
tm
(dsm 26760)或其衍生物(即混合物(m) (ii.ii)，其中m可以是m.1、m.2、m.3或m.4)。
[0062]
在本发明的实施方式中，本发明的组合物包含本发明的混合物(m)，除了选自组a的至少一种或多种细菌菌株之外，本发明的混合物(m)还包含细菌菌株(ii.i)干酪乳杆菌(cncm i-1572)和a细菌菌株(ii.ii)副干酪乳杆菌lpc-s01
tm
(dsm 26760)或其衍生物(即混合物(m) (ii.i)(ii.ii)，其中m可以是m.1、m.2、m.3或m.4)。
[0063]
根据本发明的一个方面，本发明的组合物包含本发明的所述混合物(m.1 (ii.i))，所述混合物(m.1 (ii.i))包括选自如本发明中定义的组a(或混合物m.1的组)的细菌菌株，以及细菌菌株(ii.i)干酪乳杆菌(cncm i-1572)。
[0064]
根据本发明的一个方面，本发明的组合物包含本发明的所述混合物(m.2 (ii.i))，所述混合物(m.2 (ii.i))包括选自如本发明中定义的混合物m.2的组的两种细菌菌株，以及细菌菌株(ii.i)干酪乳杆菌(cncm i-1572)。
[0065]
根据本发明的一个方面，本发明的组合物包含本发明的所述混合物(m.3 (ii.i))，所述混合物(m.3 (ii.i))包括选自如本发明中定义的混合物m.3的组的三种细菌菌株，以及细菌菌株(ii.i)干酪乳杆菌(cncm i-1572)。
[0066]
在本发明的优选实施方式中，本发明的组合物包含本发明的所述混合物(m.4 (ii.i))，所述混合物(m.4 (ii.i))包括四种细菌菌株(i.i)短双歧杆菌bbibs01(dsm 33231)、(i.ii)短双歧杆菌bbibs02(dsm 33232)、(i.iii)动物双歧杆菌乳酸亚种blibs01(dsm 33233)和(i.iv)植物乳杆菌lpibs01(dsm 33234)，以及细菌菌株(ii.i)干酪乳杆菌(cncm i-1572)。
[0067]
在本发明的优选实施方式中，本发明的组合物包含本发明的所述混合物(m.4 (ii.i))，所述混合物(m.4 (ii.i))包括四种细菌菌株(i.i)短双歧杆菌bbibs01(dsm 33231)、(i.ii)短双歧杆菌bbibs02(dsm 33232)、(i.iii)动物双歧杆菌乳酸亚种blibs01(dsm 33233)和(i.iv)植物乳杆菌lpibs01(dsm 33234)，以及细菌菌株(ii.ii)副干酪乳杆菌lpc-s01
tm
(dsm 26760)。
[0068]
根据本发明的一个方面，本发明的组合物包含本发明的所述混合物((m.4) (ii.i) (ii.ii))，所述混合物((m.4) (ii.i) (ii.ii))包括四种细菌菌株(i.i)、(i.ii)、(i.iii)和(i.iv)，以及细菌菌株(ii.i)干酪乳杆菌(cncm i-1572)和(ii.ii)副干酪乳杆菌lpc-s01
tm
(dsm 26760)。
[0069]
优选地，所述细菌菌株(即(i.i)、(i.ii)、(i.iii)、(i.iv)、(ii.i)和(ii.ii))彼此独立地包含在本发明的混合物(m)中，相对于每日摄入量，其浓度为1
×
106cfu至1
×
10
12
cfu，优选1
×
107cfu至1
×
10
11
cfu，更优选1
×
108cfu至1
×
10
10
cfu，例如1
×
109cfu(cfu：菌落形成单位)。
[0070]
在优选的实施方式中，本发明的混合物m.4或m.4 (ii.i)或m.4 (ii.ii)m.4 (ii.i) (ii.ii)或相关组合物彼此独立地包含细菌菌株(i.i)、(i.ii)、(i.iii)、(i.iv)中的每一种和可选的(ii.i)和/或(ii.ii)，相对于每日摄入量，其浓度为1
×
106cfu至1
×
10
12
cfu，优选1
×
107cfu至1
×
10
11
cfu，更优选1
×
108cfu至1
×
10
10
cfu，例如1
×
109cfu。
[0071]
优选地，在混合物m.2或m.1 (ii.i)或m.1 (ii.ii)中，细菌菌株的比率为约1:1；在混合物m.3或m.2 (ii.i)或m.2 (ii.ii)中，细菌菌株的比率为约1:1:1；在混合物m.4或m.3 (ii.i)或m.3 (ii.ii)中，细菌菌株的比率为约1:1:1:1；在混合物m.4 (ii.i)或m.4 (ii.ii)中，细菌菌株的比率为约1:1:1:1:1；在混合物m.4 (ii.i) (ii.ii)中，细菌菌株的比率为约1:1:1:1:1:1，其中所述比率是相对于cfu的。
[0072]
在一个实施方式中，除了本发明的一种所述混合物(m)(优选m4或m.4 (ii.i)或m.4 (ii.ii))之外，本发明的组合物可包含选自包括以下或由以下组成的组的至少一种其他活性组分：其他活细菌菌株和/或灭活益生菌(paraprobiotic)和/或后生元(postbiotics)的和/或裂解的和/或间歇灭菌的和/或灭活的细菌菌株，酶，具有直接或间接抗酸作用的物质，益生元物质，属于酵母和细菌家族的益生菌物质，免疫刺激物质，抗腹泻物质，营养物，b、c、d、e类维生素，镁、硒、锌的有机和/或无机盐，褪黑素、缬草(valerian)，西番莲(passion flower)，香蜂叶(lemon balm)，山楂，甘菊，啤酒花植物，抗氧化剂，抗自由基剂
[0073]
本发明的组合物可以为固体形式，例如片剂、可咀嚼片剂、待溶解于口腔或口腔可溶性片剂、胶囊、锭剂、颗粒剂、薄片或粉末剂(待溶解于液体的颗粒或粉末剂，或口腔可溶性颗粒或粉末剂，例如口腔可溶性棒)；半固体形式，例如软凝胶、乳膏；或液体形式，例如溶液、悬浮液、分散体、乳液或糖浆。
[0074]
本发明的组合物可配制用于口服(或胃肠溶)、舌下(或颊)、经粘膜、经皮或局部阴道使用(或给药)，例如直肠、皮肤、阴道；其有利地配制用于口服使用。
[0075]
包括本发明的一种所述混合物(m)(优选m.4或m.4 (ii.i)或m.4 (ii.ii))或由其组成的本发明的组合物还可选地包含所述至少一种药物或食品级添加剂和/或赋形剂，即适于药物或食品用途的没有治疗活性的物质。在本发明的上下文中，对于药物或食品用途可接受的添加剂和/或赋形剂包括本领域技术人员知晓用于制备固体、半固体或液体形式的组合物的所有辅助物质，例如稀释剂、溶剂(包括水、甘油、乙醇)、增溶剂、酸化剂、增稠剂、甜味剂、风味增强剂、着色剂、润滑剂、表面活性剂、防腐剂、ph稳定缓冲剂及其混合物。
[0076]
包括本发明的一种所述混合物(m)(优选m.4或m.4 (ii.i)或m.4 (ii.ii))或由其组成的本发明的组合物可以是药物组合物(或活体生物治疗产品)、医疗装置组合物、膳食补充剂、食品或新型食品或益生菌产品、化妆品组合物、用于特殊医疗目的的食品组合物(fsmp)。
[0077]
在本发明的上下文中，根据日期为1997年2月24日的意大利立法政令n
°
46或根据新的医疗装置规章(eu)2017/745(mdr)的含义使用表述“医疗装置”。
[0078]
形成本发明的另一目的的是本发明的所述混合物(m)(优选m.4或m.4 (ii.i)或m.4 (ii.ii))或包含本发明的一种所述混合物(m)(优选m.4或m.4 (ii.i)或m.4 (ii.ii))的所述组合物，其用作药物。
[0079]
本发明的所述混合物(m)或所述组合物还用作药物，其作为其他治疗方法的佐剂，优选为药理学或膳食类型。
[0080]
在一个实施方式中，本发明的细菌菌株、本发明的混合物(m)(优选m.4或m.4 (ii.i)或m.4 (ii.ii))或本发明的组合物用于预防性和/或治愈性治疗有需要的受试者的
胃肠疾病、紊乱或症状，优选功能性胃肠紊乱，例如肠易激综合征(ibs)、消化不良、胃灼热、食道、胃和十二指肠紊乱、sibo(小肠细菌过度生长)、具有亚炎性病况的紊乱，优选地其中所述亚炎性病况在老年受试者中或在患有憩室病的受试者中。
[0081]
在优选实施方式中，本发明的细菌菌株、本发明的混合物(m)(优选m.4或m.4 (ii.i)或m.4 (ii.ii))或本发明的组合物用于预防性和/或治愈性治疗肠易激综合征(ibs)、便秘、腹泻、交替的便秘和腹泻以及未分类ibs的紊乱或症状的方法中。可通过本发明的细菌菌株、本发明的混合物(m)或本发明的组合物治疗的肠易激综合征(ibs)的紊乱或症状的具体实例是：伴随各种强度和局部化的痉挛形式的间歇腹痛；肠胃胀气；腹部鼓胀；鼓胀感。
[0082]
在本发明的优选实施方式中，混合物m.4 (ii.i)或包含混合物m.4 (ii.i)的组合物用于预防性和/或治愈性治疗肠易激综合征(ibs)、便秘、腹泻、交替的便秘和腹泻以及未分类ibs的紊乱或症状的方法中，其中所述混合物m.4 (ii.i)包括以下细菌菌株或由以下细菌菌株组成：(i.i)短双歧杆菌bbibs01(dsm 33231)、(i.ii)短双歧杆菌bbibs02(dsm 33232)、(i.iii)动物双歧杆菌乳酸亚种blibs01(dsm 33233)和(i.iv)植物乳杆菌lpibs01(dsm 33234)和(ii.i)干酪乳杆菌(cncm i-1572)。
[0083]
在本发明的备选实施方式中，混合物m.4 (ii.ii)或包含混合物m.4 (ii.ii)的组合物用于预防性和/或治愈性治疗肠易激综合征(ibs)、便秘、腹泻、交替的便秘和腹泻以及未分类ibs的紊乱或症状的方法中，其中所述混合物m.4 (ii.ii)包括以下细菌菌株或由以下细菌菌株组成：(i.i)短双歧杆菌bbibs01(dsm 33231)、(i.ii)短双歧杆菌bbibs02(dsm 33232)、(i.iii)动物双歧杆菌乳酸亚种blibs01(dsm 33233)和(i.iv)植物乳杆菌lpibs01(dsm 33234)和(ii.ii)副干酪乳杆菌lpc-s01
tm
(dsm 26760)。
[0084]
在一个实施方式中，本发明的细菌菌株、本发明的所述混合物(m)(优选m.4或m.4 (ii.i)或m.4 (ii.ii))或本发明的所述组合物用于治疗有需要的受试者的炎性胃肠疾病、紊乱或症状，例如幽门螺旋杆菌、消化性溃疡或胃溃疡、十二指肠溃疡、慢性炎性肠病(ibd)，例如克罗恩氏病和溃疡性结肠炎、显微镜下结肠炎、憩室病和憩室炎；优选慢性炎性肠病(ibd)、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、显微镜下结肠炎、憩室病或憩室炎。
[0085]
在一个实施方式中，本发明的细菌菌株、本发明的所述混合物(m)(优选m.4或m.4 (ii.i)或m.4 (ii.ii))或本发明的所述组合物用于作为其将要施用的受试者的免疫调节剂(能够调节免疫系统)和/或免疫刺激剂。因此，本发明的细菌菌株或其衍生物以及组合物可有效应用于与免疫系统改变有关的疾病的预防性或治愈性治疗，特别是自身免疫疾病和过敏、免疫缺陷疾病、影响皮肤的疾病(例如痤疮、特应性皮炎)。
[0086]
有利地，本发明的细菌菌株、本发明的混合物(m)和本发明的组合物能够积极地调节炎性途径，并因此调节炎性细胞因子和抗炎细胞因子之间的比率。特别地，本发明的细菌菌株、本发明的混合物(m)和本发明的组合物能够减少促炎细胞因子(优选il-6、il-15、il-12和tnf-α)的产生和/或增加抗炎细胞因子(优选il-10)的产生。
[0087]
因此，在本发明的实施方式中，本发明的细菌菌株、本发明的混合物(m)(优选m.4或m.4 (ii.i)或m.4 (ii.ii))和本发明的组合物用于预防性和/或治愈性治疗由于促炎细胞因子的增加和/或抗炎细胞因子的减少引起或与之相关/伴随的疾病或症状或紊乱的方法中，优选的是影响以下系统的疾病：运动系统(肌肉和骨骼系统)、消化系统、泌尿生殖系
统(泌尿系统和生殖系统)、呼吸系统、表皮系统、免疫系统和/或循环系统。
[0088]
在一个实施方式中，本发明的细菌菌株、本发明的混合物(m)(优选m.4或m.4 (ii.i)或m.4 (ii.ii))和本发明的组合物用于预防性或治愈性治疗炎性肌肉骨骼、风湿病、炎性关节病和炎性术后疾病的方法中，优选用于治疗骨关节炎、类风湿性关节炎和强直性脊柱炎的方法，特别是膝关节的骨关节炎和一般关节的骨关节炎。
[0089]
形成本发明的一个目的是预防性或治愈性治疗胃肠疾病、紊乱或症状的方法，特别是功能性或炎性胃肠紊乱，优选ibs(便秘、腹泻、交替的便秘和腹泻和未分类ibs)或ibd，所述方法提供用于对有需要的受试者施用治疗上有效量的本发明的一种混合物(m)(优选m.4或m.4 (ii.i)或m.4 (ii.ii))或本发明的组合物。
[0090]
出于清楚起见，为了实现本发明的目的，本发明的混合物(m)的组分(或活性组分)(例如本发明中的细菌菌株)可以单独(优选在30分钟至60分钟的时间间隔内)并以任意顺序施用，但优选地，细菌菌株同时施用给受试者，甚至更优选地在单一组合物中施用以获得更快速的效果并易于施用。当本发明的混合物(m)的组分(或活性组分)(例如细菌菌株)在单一组合物中施用时，所述单一组合物对应于本发明的组合物。
[0091]
在本发明的上下文中，表述“受试者”用于表示人类受试者或动物受试者(例如宠物，例如狗或猫，或其他哺乳动物)。优选地，本发明的组合物用于人类受试者的治疗方法。
[0092]
除非另有说明，否则表述包含“含量为x至y的范围内”的组分的组合物或混合物等用于表示所述组分可以以所述范围内存在的所有的量存在于组合物或混合物或提取物等中，即使未说明，也包含的范围的极值。
[0093]
表述“治疗上有效量”是指在由个体、研究人员、兽医、医师或其他临床医生或健康工作者寻求和定义的组织、系统、哺乳动物或人类中引发生物或药物响应的组合物、混合物和/或细菌菌株的量。
[0094]
在本发明的上下文中，术语“新型食品”以其依照2015年11月25日的eu规章25.11.2015的2015/2283的含义使用。
[0095]
下文中报告了本发明的实施方式(frn)。
[0096]
fr1.一种包含混合物m的组合物，所述混合物m包括选自组a的至少一种细菌菌株或由其组成，所述组a包括以下细菌菌株或由以下细菌菌株组成：
[0097]
被鉴定为短双歧杆菌bbibs01的属于短双歧杆菌物种的细菌菌株，其保藏号为dsm 33231，
[0098]
被鉴定为短双歧杆菌bbibs02的属于短双歧杆菌物种的细菌菌株，其保藏号为dsm 33232，
[0099]
被鉴定为动物双歧杆菌乳酸亚种blibs01的属于动物双歧杆菌物种的细菌菌株，其保藏号为dsm 33233，
[0100]
被鉴定为植物乳杆菌lpibs01的属于植物乳杆菌物种的细菌菌株，其保藏号为dsm 33234，
[0101]
以及它们的混合物，
[0102]
其中所有所述细菌菌株都在2019年7月31日由索法尔公司保藏在德国微生物保藏中心(dsmz)；
[0103]
并且其中，可选地，所述组合物包含至少一种食品或药物级添加剂和/或赋形剂。
[0104]
fr2.如fr1所述的组合物，其中所述混合物m包括以下细菌菌株或由以下细菌菌株组成：
[0105]-短双歧杆菌bbibs01 dsm 33231，
[0106]-短双歧杆菌bbibs02 dsm 33232，
[0107]-动物双歧杆菌乳酸亚种blibs01 dsm 33233，和
[0108]-植物乳杆菌lpibs01 dsm 33234。
[0109]
fr3.如fr1或2所述的组合物，其中所述混合物m还包含选自组b的至少一种其他细菌菌株，所述组b包括以下或由以下组成：
[0110]
被鉴定为干酪乳杆菌的细菌菌株，其在1995年5月05日由索法尔公司以cncm i-1572的保藏号保藏在巴黎巴斯德研究所国家微生物保藏中心，
[0111]
被鉴定为副干酪乳杆菌lpc-s01
tm
的细菌菌株，其在2017年5月15日由索法尔公司以dsm 26760的保藏号保藏在德国微生物保藏中心(dsmz)，
[0112]
以及它们的混合物。
[0113]
fr4.如fr3所述的组合物，其中所述混合物m包括以下细菌菌株或由以下细菌菌株组成：
[0114]-短双歧杆菌bbibs01 dsm 33231，
[0115]-短双歧杆菌bbibs02 dsm 33232，
[0116]-动物双歧杆菌乳酸亚种blibs01 dsm 33233，
[0117]-植物乳杆菌lpibs01 dsm 33234，和
[0118]-干酪乳杆菌cncm i-1572。
[0119]
fr5.如fr3所述的组合物，其中所述混合物m包括以下细菌菌株或由以下细菌菌株组成：
[0120]-短双歧杆菌bbibs01 dsm 33231，
[0121]-短双歧杆菌bbibs02 dsm 33232，
[0122]-动物双歧杆菌乳酸亚种blibs01 dsm 33233，
[0123]-植物乳杆菌lpibs01 dsm 33234，和
[0124]-副干酪乳杆菌lpc-s01
tm dsm 26760。
[0125]
fr6.如fr1至5中任一项所述的组合物，其中所述组合物配制用于口服、舌下或颊、经粘膜、局部、直肠、局部皮肤或局部阴道使用；优选地，所述组合物配制用于口服使用。
[0126]
fr7.如fr1至6中任一项所述的组合物，其用作药物。
[0127]
fr8.如fr1至6中任一项所述的组合物，其用于预防性和/或治愈性治疗功能性胃肠疾病、紊乱和/或症状的方法中。
[0128]
fr9.如fr8所述的组合物，其中所述组合物用于预防性和/或治愈性治疗功能性胃肠疾病、紊乱和/或症状的方法中，所述功能性胃肠疾病、紊乱和/或症状选自包括以下或由以下组成的组：肠易激综合征(ibs)，消化不良，胃灼热，食道紊乱，胃紊乱，十二指肠紊乱，小肠细菌过度生长(sibo)，具有亚炎性病况的胃肠紊乱；优选伴有肠便秘的肠易激综合征(ibs)，或伴有肠腹泻的肠易激综合征(ibs)，或伴有交替的便秘和腹泻的肠易激综合征(ibs)。
[0129]
fr10.如fr1至6中任一项所述的组合物，其用于预防性和/或治愈性治疗炎性胃肠
疾病、紊乱和/或症状的方法中。
[0130]
fr11.如fr10所述的组合物，其中所述组合物用于预防性或治愈性治疗炎性胃肠紊乱的方法中，所述炎性胃肠紊乱选自包括以下或由以下组成的组：慢性炎性肠病(ibd)、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、显微镜下结肠炎、憩室病、憩室炎、幽门螺旋杆菌、消化性溃疡或胃溃疡和十二指肠溃疡；优选选自慢性炎性肠病(ibd)、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、显微镜下结肠炎、憩室病和憩室炎。
[0131]
fr12.一种被鉴定为短双歧杆菌bbibs01的属于短双歧杆菌物种的细菌菌株，其中所述细菌菌株根据布达佩斯条约在2019年7月31日由索法尔公司以dsm 33231的保藏号保藏在德国微生物保藏中心。
[0132]
fr13.一种被鉴定为短双歧杆菌bbibs02的属于短双歧杆菌物种的细菌菌株，其中所述细菌菌株在2019年7月31日由索法尔公司以dsm 33232的保藏号保藏在德国微生物保藏中心。
[0133]
fr14.一种被鉴定为动物双歧杆菌乳酸亚种blibs01的属于动物双歧杆菌物种的细菌菌株，其中所述细菌菌株在2019年7月31日由索法尔公司以dsm 33233的保藏号保藏在德国微生物保藏中心。
[0134]
fr15.一种被鉴定为植物乳杆菌lpibs01的属于植物乳杆菌物种的细菌菌株，其中所述细菌菌株在2019年7月31日由索法尔公司以dsm 33234的保藏号保藏在德国微生物保藏中心。
[0135]
试验部分
[0136]
评估5种活细菌菌株的组合在患有肠易激综合征(ibs)的患者的治疗中的功效；多中心、随机化、双盲、平行组、安慰剂对照试验。
[0137]
1.试验目的
[0138]-主要目的：评估本发明的5种益生菌菌株的组合补充剂(组合物1)对于患有ibs的患者的肠道微生物群的影响。
[0139]-次要目的
[0140]
1.评估组合物1对ibs症状的影响；
[0141]
2.评估组合物1对腹部疼痛/不适的影响；
[0142]
3.评估组合物1对患有ibs的患者的每日肠排便习惯的影响；
[0143]
4.评估组合物1对肠渗透性的影响；
[0144]
5.评估粪便样品中组合物1的菌株的恢复；
[0145]
6.评估治疗的整体满意度；
[0146]
7.评估患者的生活质量的变化；
[0147]
8.评估救援药物的摄入。
[0148]
换言之，试验旨在评估：
[0149]
·
5种活细菌菌株的组合(组合物1，根据本发明)对于患有肠易激综合征(ibs)的非便秘患者中的腹部症状的影响；
[0150]
·
ibs症状的缓解；
[0151]
·
粪便的每日一致性；
[0152]
·
治疗的整体满意度；
[0153]
·
生活质量；
[0154]
·
心理损伤；
[0155]
·
救援药物的摄入；
[0156]
·
肠道微生物群和代谢产物的组合(代谢组学)—以及因此，肠道微生物群生态系统水平的改变；
[0157]
·
肠渗透性；
[0158]
·
粪便中的菌株的恢复；
[0159]
·
炎性路径的改变。
[0160]
出于试验的目的，分析血液中微生物群的可能性将被认为是探索性目标。
[0161]
2.试验设计
[0162]
多中心、随机化、双盲、平行组、安慰剂对照试验。
[0163]
评估的招募期将约为12个月。
[0164]
在任何其他试验程序之前和评估认可/排除标准之后，将在签署知情同意之后招收患者。
[0165]
将对每名受试者计划6次试验访问，每次都根据协议中报告的要求进行(参见图1)。
[0166]
试验访问将如下进行：访问0(筛选)，访问1(第一治疗期的基线/开始)，访问2(第一治疗期结束/开始淘汰)，访问3(结束淘汰/开始第二治疗期)，访问4(第二治疗期结束)，访问5(试验结束)。
[0167]
在筛选访问时招募受试者，他们将进入1周的筛选期。
[0168]
因此，如果符合条件，则他们将在基线访问时进行随机化过程，并且他们被随机分配到治疗组(组合物1/安慰剂或安慰剂/组合物1)。对各受试者提供4周的活性产品(组合物1)或安慰剂；4周淘汰期之后，各受试者将进入另外4周的第二治疗期。在访问4(治疗结束)后，患者将进入4周的随访阶段，直至试验访问结束(访问5)。
[0169]
各受试者将服用1袋活性产品(组合物1)或安慰剂，每天一次，持续4周。
[0170]
因此，可标识两种治疗顺序：
[0171]-顺序1(e-p)：患者在第一治疗期内用组合物1(e)治疗，在第二治疗期内用安慰剂(p)治疗。
[0172]-顺序2(p-e)：患者在第一治疗期内用安慰剂(p)治疗，在第二治疗期内用组合物1(e)治疗。
[0173]
3.患者
[0174]
≥18岁且≤65岁的男性或女性患者，根据rome iv标准诊断为患有无便秘的ibs(见下文)。
[0175]
对于ibs的诊断标准(其满足先于诊断3个月，症状发作至少6个月)是每周至少一天的复发性疼痛，其与下述中的两项以上有关：
[0176]
1)与排便有关；
[0177]
2)与粪便频率的变化有关；
[0178]
3)与粪便形式(外观)的变化有关；
[0179]
患有无便秘的ibs的患者包括：
[0180]
1)腹泻占主要的ibs(ibs-d)：超过四分之一(25％)的排便形式为1或2型粪便(bristol)；
[0181]
2)混合肠排便习惯的ibs(ibs-m)：超过四分之一(25％)的排便形式为1或2型粪便(bristol)，并且超过四分之一(25％)的排便形式为6或7型粪便(bristol)。
[0182]
4.认可标准
[0183]-年龄≥18且≤65岁。
[0184]-根据rome iv标准，无便秘的ibs(ibs-d和ibs-m，男性和女性都有)的阳性诊断。
[0185]-如果患者年龄至少50岁，或者如果患者具有这些警报信号之一，则在筛选访问之前的5年内进行结肠镜检查：
[0186]
1)近6个月内记录到明显的体重减轻；或
[0187]
2)在夜间显示出症状；或
[0188]
3)具有结肠癌的家族史；或
[0189]
4)血液与粪便混合(不包括来自痔疾的血液)。
[0190]-在适当的情况下的进一步相关的筛选或咨询。
[0191]-遵从试验协议的能力。
[0192]
5.排除标准
[0193]-根据rome iv标准患有ibs-c或ibs-u的患者。
[0194]-存在任何相关的器质性、全身性或代谢疾病(特别是心脏、肾、神经、精神、肿瘤、内分泌、代谢或肝疾病的显著历史)，或在准备期间检测出异常的实验室值，其基于预定值(例如，比最高参考值高2倍的肾或肝功能水平)被认为是在临床上显著的。
[0195]-已产生的器质性肠病，包括食物过敏或炎性肠病(克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、憩室病、传染性结肠炎、缺血性结肠炎、显微镜下结肠炎)。
[0196]-先前的重大腹部手术。
[0197]-任何类型的活跃恶性肿瘤或恶性肿瘤的历史(可以接受具有已手术去除的其他肿瘤的临床历史并且在试验招募之前至少5年没有复发的证据的患者)。
[0198]-产生的未经处理的食物不耐受。
[0199]-如通过记忆评估或适当时的乳糖呼吸测试定义的疑似乳糖不耐受。
[0200]-在近一个月内使用益生菌或局部/全身性抗生素疗法。
[0201]-频繁或全身性使用接触式泻药。
[0202]-孕妇或无有效避孕方法情况下的生育年龄女性。
[0203]-没有遵从协议的能力。
[0204]-在先前30天内使用任意实验药物治疗。
[0205]-近期的酒精滥用或药物成瘾史或疑似。
[0206]-根据rome iv标准存在危险或放弃信号。
[0207]-功能性胃肠紊乱的社会心理警报问卷。
[0208]
6.治疗
[0209]
·
本发明的组合物1包括：干酪乳杆菌植物乳杆菌lpibs01、短双歧杆菌bbibs01、短双歧杆菌bbibs02、动物双歧杆菌乳酸亚种blibs01，每天1剂量(胶囊或袋)，持续4周(各细菌菌株约25-30
×
109cfu/剂量，约5
×
109cfu)。
[0210]
·
组合物2(安慰剂)，难以与组合物1区分，每天1片胶囊/袋，持续4周。
[0211]
7.随机化
[0212]
可招募的患者将进入1周的准备期，然后他们将被随机以1:1的比例分配为用组合物1(本发明的组合物)治疗，或用颜色和香味相似的无细菌的等效产品(安慰剂)治疗，每天一次，持续4周。图1报告了临床试验设计，其具有准备、治疗、交叉、治疗和随访阶段。
[0213]
8.端点
[0214]
主要端点
[0215]
评估粪便微生物群在微生物分散指数(α和β多样性)、相对分类丰度和代谢物方面相对于基线的变化。
[0216]
次要端点
[0217]
1.在v1、v2、v3、v4和v5处评估的通过ibs症状严重性程度(ibs-sss)评分评估的ibs症状的缓解；
[0218]
2.通过标准11点数值评级量表(nrs)(从0＝无，至10＝最严重的可能疼痛)评估的每日腹部疼痛/不适的评估；
[0219]
3.如通过bristol粪便形式评级(bsfs)评估的每日粪便的频率和一致性的评估；
[0220]
4.肠渗透性的变化(血液样品)，通过elisa测试评估连蛋白血清、瓜氨酸和pv-1水平；
[0221]
5.使用qpcr特异性引物检测粪便样品中的组合物1中存在的菌株；
[0222]
6.通过vas评级评估治疗的整体满意度。
[0223]
7.通过在0至100的评分上的简式12项(sf-12)验证的健康调查评估生活质量。
[0224]
8.救援药物摄入的变化。
[0225]
安全端点
[0226]
9.收集患有ibs的患者的不良事件和试验期间的严重不良事件；
[0227]
10.试验期间的伴随的药物。
[0228]
探索性端点
[0229]
评估血液微生物群在微生物分散指数(α和β多样性)、相对分类丰度方面相对于基线的变化。
[0230]
9.用于分析和统计考虑的群体
[0231]-完全分析组fas)：由所有随机化患者组成。
[0232]-安全组：由接收至少一个试验治疗剂量并具有至少一个基线后安全评估的所有随机化患者组成。
[0233]-协议组(pp)：由完成试验且没有任何明显违反协议的情况的所有随机化患者组成。
[0234]-治疗意向组(itt)：由接收至少一个试验治疗剂量并具有至少一个基线后功效评估的所有随机化患者组成。
[0235]
试验的主要终点将在两个试验组(arm)(组合物1和安慰剂)之间进行描述性比较。将仅出于探索性目的来进行适当的推断分析。
[0236]
通常，所有变量将描述性地分析为涉及治疗组和访问(均值、中值、标准偏差、在通过kolmogorov-smirnov测试控制分配常态之后的连续变量的最小值和最大值、分类变量的
频率分布)。所有分析将在统计分析计划(sap)中详述，其将在data base lock(dbl)之前在版本1.0中完成。详细地，安全性和耐受性数据将(至少)包括物理检查、生命体征、试验室数据和不良事件。