一种单细胞转录组测序的方法

技术特征：
1.一种单细胞转录组测序方法，其特征在于，所述方法主要包括以下步骤：(a)提供单细胞样品并置于一反应容器中；(b)使用含有蛋白酶k的缓冲液对样品进行裂解(即解交联)，从而裂解产物；(c)以所述裂解产物为模板，进行逆转录反应，从而得到含cdna的逆转录产物；(d)对所述的逆转录产物进行pcr扩增，从而获得扩增产物；(e)对所述的扩增产物进行纯化，从而获得经纯化的扩增产物；和(f)对所述经纯化的扩增产物进行建库和测序，从而获得单细胞转录组测序数据；其中，在步骤(b)、(c)和(d)各步骤以及其间均不包括核酸纯化操作；并且，在步骤(b)、(c)和(d)均在同一反应容器中进行。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的单细胞是新鲜的单细胞或固定后的单细胞。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(b)中，所述蛋白酶k的用量为0.2-1.5mg/ml(μg/μl),即(0.4-4.5μg)蛋白酶k/(2-3μl)裂解反应体积。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(c)中所述的逆转录反应的反应体系中含有大分子聚乙二醇，所述大分子聚乙二醇选自下组：peg6000、peg7000、peg8000、peg9000或其组合，优选地为peg8000。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述peg8000在反应体系中的终浓度为6-10％(v/v)，优选地为7.5％。6.一种用于单细胞转录组测序的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括细胞裂解试剂、逆转录试剂、pcr扩增试剂和一反应容器。7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述细胞裂解试剂包括蛋白酶k和te缓冲液。8.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述逆转录试剂包括peg8000、tso引物、oligo-dt引物、逆转录酶、反应缓冲液、还原剂(例如dtt)、和rna酶抑制剂。9.一种单细胞转录组测序装置，其特征在于，所述装置包括：(m1)加样模块，所述加样模块被配置为：将单细胞样品置于一反应容器中，所述反应容器为第一容器；(m2)裂解模块，所述裂解模块被配置为：将含有蛋白酶k的缓冲液加入到所述反应容器中对样品进行裂解，得到裂解产物；(m3)逆转录模块，所述逆转录模块被配置为：将逆转录反应试剂加入到所述反应容器中对裂解产物进行逆转录反应，得到含cdna的逆转录产物；(m4)pcr模块，所述pcr模块被配置为：将pcr反应试剂加入到所述反应容器中对逆转录产物进行pcr扩增，得到扩增产物；(m5)纯化模块，所述纯化模块被配置为：对所述反应容器中的扩增产物进行纯化，并将纯化的扩增产物转移至第二容器，所述的第二容器不同于第一容器；(m6)测序模块，所述测序模块被配置为：对第二容器中的纯化的扩增产物进行测序；其中，所述反应容器为同一个反应容器。10.如权利要求9所述的测序装置，其特征在于，所述的测序装置还包括：(m7)控制模块，用于控制模块(m1)加样模块、(m2)裂解模块、(m3)逆转录模块、(m4)pcr模块、(m5)纯化
模块和(m6)测序模块的运作。

技术总结
本发明提供了一种单细胞转录组测序的方法。具体地，本发明的方法采用“一管法”，将样品裂解、逆转录、PCR扩增以及产物纯化步骤在同一个反应容器内完成，提高了对细胞转录组中低丰度RNA以及特殊结构中的RNA扩增的灵敏度，减少了转录组信息的丢失，提高了单细胞转录组扩增和测序效率。并且，本发明的方法同时适用于固定的单细胞样本和活的新鲜单细胞样本的转录组测序。本发明还提供了一种用于单细胞转录组测序的试剂盒以及一种单细胞转录组测序装置，实现了对单细胞转录组更加简便快捷、灵敏完整的测序。的测序。


技术研发人员：何杰 金梦梦 汤霞 刘志勇
受保护的技术使用者：中国科学院脑科学与智能技术卓越创新中心
技术研发日：2020.12.07
技术公布日：2022/6/10