一种获得两性霉素B新晶型的纯化方法与流程

一种获得两性霉素b新晶型的纯化方法
技术领域
1.本发明涉及有机合成领域，具体地，涉及一种获得两性霉素b新晶型的纯化方法。


背景技术：

2.两性霉素b是一种多烯类抗真菌抗生素，深部感染的首选药。产品呈黄色或橙黄色粉末，有引湿性。在二甲基亚砜中溶解，在二甲基甲酰胺中微溶，在甲醇中极微溶解，在水、无水乙醇、氯仿或乙醚中不溶。
3.在日光下易被破坏失效，易被热和酸破坏。在中性或酸性介质中可形成盐，其水溶性增高但抗菌活性会下降。在170℃以上逐渐分解，在37℃时不稳定。
4.目前两性霉素b的纯化方法主要有溶媒结晶法、树脂吸附、膜过滤等。溶媒结晶法，需要多次精制才能得到合格产品。树脂吸附及膜过滤需将70％纯度的两性霉素粗品，先精制到95％以上的纯度后，再进行树脂吸附或膜过滤处理来提高产品质量。


技术实现要素：

5.本发明旨在克服上述缺陷，通过新的工艺方法和条件，获得一种全新的两性霉素b晶型，该晶型的两性霉素b，其产品杂质低，稳定性好，纯度高，平均纯度能达到98％以上。且本发明产品经过一次结晶就达标，即、产品质量符合药典标准。
6.本发明提供了一种获得两性霉素b新晶型的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：
7.步骤1.于两性霉素b粗品中加入二甲基甲酰胺或二甲亚砜，和酸；
8.该粗品是通过传统工艺获得，如：通过对两性霉素发酵液提取得到。无需精制，直接使用即可。
9.步骤2.将步骤1中的混合液，10-40℃的温度下搅拌溶解，经过滤去除不溶物后待用；
10.步骤3.将步骤2中获得的待用样品，采用色谱分离，将目标馏分收集到弱碱性缓冲液中；
11.步骤4.静置7-20小时后，经过滤、洗涤和干燥，获得目标产物。
12.进一步地，本发明提供的一种获得两性霉素b新晶型的纯化方法，其特征还在于：上述酸选自有机酸或无机酸中的一种或几种；
13.上述有机酸选自多元酸、卤代烷基酸；
14.上述无机酸选自卤化氢。
15.进一步地，本发明提供的一种获得两性霉素b新晶型的纯化方法，其特征还在于：上述二甲基甲酰胺或二甲亚砜的用量为10-50ml/每g两性霉素b粗品。
16.进一步地，本发明提供的一种获得两性霉素b新晶型的纯化方法，其特征还在于：上述柠檬酸与两性霉素b粗品的质量比例为1：0.8-1.2。
17.进一步地，本发明提供的一种获得两性霉素b新晶型的纯化方法，其特征还在于：
上述色谱分离为预先装有c18填料的50mm*500mm的工业制备色谱系统。
18.进一步地，本发明提供的一种获得两性霉素b新晶型的纯化方法，其特征还在于：上述色谱分离过程，在检测波长为383nm，温度＞20℃的条件下，进行分离。
19.进一步地，本发明提供的一种获得两性霉素b新晶型的纯化方法，其特征还在于：上述色谱分离过程的色谱条件为：以乙腈/水溶液为流动相，流速为30-100ml/min。
20.进一步地，本发明提供的一种获得两性霉素b新晶型的纯化方法，其特征还在于：上述弱碱性缓冲溶液为1-10％质量浓度的碱土金属盐的缓冲溶液。
21.进一步地，本发明提供的一种获得两性霉素b新晶型的纯化方法，其特征还在于：上述干燥在不高于80℃的温度下进行。
附图说明
22.附图1、实施例产品的x-射线衍射图；
23.附图2、实施例产品的液相谱图；
24.附图3、传统方法制备的两性霉素b的x-射线衍射图谱；
25.附图4、传统工艺制备的两性霉素b的液相谱图。
具体实施方式
26.关于两性霉素b粗品制备工艺如下：
27.将两性霉素菌丝体按1：1用纯化水浸泡18-24小时后，用泵打入70-75％的乙醇罐中，乙醇量为1：12～18，在35-45℃下搅拌，加入碱液，调ph在10.1-10.8。后过滤，滤液用6mol/l盐酸调ph至5.1-7.0，温度30-42℃，搅拌1小时后，降温至0-15℃，静置16-24小时。抽滤得两性霉素粗品。
28.关于两性霉素b精制工艺工艺如下：
29.将两性霉素粗品2g,用20mldmf溶解，室温下搅拌，滴加6mol/lhcl溶解，ph控制在4.3-5.5。过滤除去不溶物，滤液加入70-75％的乙醇60ml。在加热至35-45℃，搅拌下用三乙胺乙醇溶液调ph5.3-6.7结晶，保温1h,在降温至0-15℃，保温16小时。抽滤得两性霉素精制品。50℃下干燥，得产物0.93g.纯度92.9％，最大单杂2.54％。即、传统结晶。液相图谱如图4所示。
30.实施例1
31.样品的配制：将两性霉素b粗品2g加入100ml反应瓶中，再加入40ml二甲基甲酰胺和2g三氟乙酸。室温下搅拌溶解30分钟后，过滤，除去不溶物，反应液待用。
32.上样：将样品注入预先装有c18填料的50mm*500mm的工业制备色谱系统，装填高度为220mm,检测波长为383nm,温度＞20℃，进行分离。色谱条件为30％的乙腈/水溶液为流动相，流速为60ml/min。
33.馏分的收集：将目标馏分收集到5％的碳酸氢钠缓冲液中，有固体析出。反应液静置过夜后抽滤，滤饼用纯化水洗涤。50℃下干燥，得产物0.79g。其液相谱图如图2所示。
34.经x-射线衍射，显示为一种新晶型(如图1所示，具体的晶格数据如下表1所示)。稳定性好，纯度98.6％，最大单杂0.82％。
35.表1
[0036][0037][0038]
采用传统方法制备的两性霉素b的x-射线衍射图谱如图3所示。其晶格数据如下表2所示。
[0039]
表2
[0040][0041]
从上述表1和表2数据的比对可以发现，此两个两性霉素b系完全不同的晶型结构。
[0042]
稳定性数据：
[0043]
[0044]
实施例2
[0045]
样品的配制：将两性霉素b粗品2g加入100ml反应瓶中，再加入40ml二甲基甲酰胺和2g 6n盐酸。室温下搅拌溶解30分钟后，过滤，除去不溶物，反应液待用。
[0046]
上样：将样品注入预先装有c18填料的50mm*500mm的工业制备色谱系统，装填高度为220mm,检测波长为383nm,温度＞20℃，进行分离。色谱条件为30％的乙腈/水溶液为流动相，流速为60ml/min。
[0047]
馏分的收集：将目标馏分收集到5％的碳酸氢钠缓冲液中，有固体析出。反应液静置过夜后抽滤，滤饼用纯化水洗涤。50℃下干燥，得产物0.74g。经x-射线衍射，显示为一种新晶型(同实施例1)。稳定性好，纯度96.3％，最大单杂0.91％。
[0048]
实施例3
[0049]
样品的配制：将两性霉素b粗品2g加入100ml反应瓶中，再加入40ml二甲基甲酰胺和2g柠檬酸。室温下搅拌溶解30分钟后，过滤，除去不溶物，反应液待用。
[0050]
上样：将样品注入预先装有c18填料的50mm*500mm的工业制备色谱系统，装填高度为220mm,检测波长为383nm,温度＞20℃，进行分离。色谱条件为30％的乙腈/水溶液为流动相，流速为60ml/min。
[0051]
馏分的收集：将目标馏分收集到1％的碳酸氢钠缓冲液中，有固体析出。反应液静置过夜后抽滤，滤饼用纯化水洗涤。50℃下干燥，得产物0.76g。经x-射线衍射，显示为一种新晶型(同实施例1)。稳定性好，纯度97.2％，最大单杂0.87％。
[0052]
实施例4
[0053]
样品的配制：将两性霉素b粗品2g加入100ml反应瓶中，再加入60ml二甲基甲酰胺和2.5g柠檬酸。室温下搅拌溶解20分钟后，过滤，除去不溶物，反应液待用。
[0054]
上样：将样品注入预先装有c18填料的50mm*500mm的工业制备色谱系统，装填高度为220mm,检测波长为383nm,温度＞20℃，进行分离。色谱条件为30％的乙腈/水溶液为流动相，流速为60ml/min。
[0055]
馏分的收集：将目标馏分收集到5％的碳酸氢钠缓冲液中，有固体析出。反应液静置过夜后抽滤，滤饼用纯化水洗涤。50℃下干燥，得产物0.69g。经x-射线衍射，显示为一种新晶型(同实施例1)。稳定性好，纯度97.9％，最大单杂0.84％。
[0056]
实施例5
[0057]
样品的配制：将两性霉素b粗品2g加入100ml反应瓶中，再加入70ml二甲基甲酰胺和1.5g柠檬酸。室温下搅拌溶解60分钟后，过滤，除去不溶物，反应液待用。
[0058]
上样：将样品注入预先装有c18填料的50mm*500mm的工业制备色谱系统，装填高度为220mm,检测波长为383nm,温度＞20℃，进行分离。色谱条件为30％的乙腈/水溶液为流动相，流速为60ml/min。
[0059]
馏分的收集：将目标馏分收集到3％的碳酸氢钠缓冲液中，有固体析出。反应液静置过夜后抽滤，滤饼用纯化水洗涤。50℃下干燥，得产物0.72g。经x-射线衍射，显示为一种新晶型(同实施例1)。稳定性好，纯度98.1％，最大单杂0.83％。