一种具有免疫力改善作用的豆制品组合物以及应用的制作方法

1.本发明属于食品技术领域，具体涉及一种具有免疫力改善作用的豆制品组合物以及应用。


背景技术：

2.季节交替、气候善变、早晚温差、环境污染、工作压力等多种因素造成人体免疫力低下，每年有数千万以上人群受到感冒、流感等细菌、病毒性疾病的侵扰，和免疫力低下相关的亚健康困扰，免疫力泛功能产品的消费场景和需求潜力巨大；根据市场研究消费者洞察，免疫力低下问题是青少年人群和中老年人群的首要困扰问题，是重要的市场机会；国内外专家和权威机构建议居民通过摄入营养素或功能性食品提高免疫力，增强对抗病毒或细菌的自身能力，从而减少患病几率，降低疾病反应和伤害程度，缩短病程。
3.免疫系统包含多种免疫细胞，巨噬细胞是一种位于组织内的白血球，在脊椎动物体内参与非特异性免疫和特异性免疫。其主要功能是以固定细胞或游离细胞的形式对细胞残片及病原体进行吞噬以及消化，继而激活淋巴细胞和其他免疫细胞，令其对病原体作出免疫防御。巨噬细胞是免疫系统发挥免疫作用尤其是初始阶段的重要免疫细胞，在机体免疫力低下的情况下，巨噬细胞整体数量、细胞活性以及吞噬功能都可能发生降低的表现。
4.单核-巨噬细胞均起源于骨髓干细胞，在骨髓中经前单核细胞分化发育为单核细胞，进入血液，随血流到全身各种组织，进入组织中随即发生形态变化，如肝脏中的枯否氏细胞(kupffer cell)，肺脏中的尘细胞(dust cells)，结缔组织中的组织细胞(histocytes)，神经组织中的小胶质细胞(microglialcells)，脾和淋巴结中的固定和游走巨噬细胞等。当血液中的单核细胞进入组织转变为巨噬细胞后，一般不再返回血液循环。巨噬细胞在组织中虽有增殖潜能，但很少分裂，主要通过血液中的单核细胞补充。单核巨噬细胞是参与免疫反应的重要免疫细胞之一，参与过敏反应的发生和发展。
5.植物豆乳提供基础免疫力改善的营养功效成分，同时也是免疫原物质的风险带入成分，其富含大豆蛋白、大豆异黄酮、大豆多糖和水溶性膳食纤维等营养物质，是优质的植物基营养食品，但其富含的大豆球蛋白和β伴大豆球蛋白、gly mbd 28k等抗原性物质使相关过敏反应或炎症反应成为潜在风险和美中不足。


技术实现要素：

6.有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种具有免疫力改善作用的豆制品组合物以及应用，本发明提供豆制品组合物可以改善低免疫力个体巨噬细胞数量减少的情况，同时对大豆蛋白引起的相关炎症或过敏反应有显著改善作用。
7.本发明提供了一种具有免疫力改善作用的豆制品组合物，制备原料包括大豆豆乳、茯苓和山药。
8.优选的，所述茯苓和山药的质量比为4:6.7～3:5。
9.优选的，所述大豆豆乳、茯苓和山药的体积质量比为(25～315)ml：(0.75～4.0)g：
(1.25～6.7)g。
10.优选的，所述大豆豆乳、茯苓和山药的体积质量比为(31.5～315)ml：4.0g：6.7g。
11.优选的，以每人每日推荐食用量计，所述豆制品组合物的制备原料包括：
12.大豆豆乳31.5～315ml，茯苓4.0g，山药6.7g。
13.优选的，以每人每日推荐食用量计，所述豆制品组合物的制备原料包括：
14.大豆豆乳25ml，茯苓0.75g，山药1.25g。
15.优选的，所述大豆豆乳为蛋白含量≥6wt％的大豆豆乳。
16.优选的，还包括植物提取物。
17.本发明还提供了一种上述豆制品组合物的制备方法，包括以下步骤：
18.将大豆、茯苓、山药和水混合磨浆后，依次进行加热处理和过滤，得到豆制品组合物；
19.或者，
20.大豆与水磨浆后加热煮沸，得到蛋白含量≥6wt％的大豆豆乳；
21.茯苓与水加热浸提得到茯苓水提物；
22.山药与水加热浸提得到山药水提物；
23.将所述大豆豆乳、茯苓水提物和山药水提物混合，得到豆制品组合物。
24.本发明还提供了一种上述豆制品组合物在制备具有免疫力改善作用的食品和/或制备低致敏性大豆食品中的应用。
25.优选的，所述食品选自豆乳、豆浆粉、豆腐或豆干。
26.与现有技术相比，本发明提供了一种具有免疫力改善作用的豆制品组合物，制备原料包括大豆豆乳、茯苓和山药。本发明将茯苓和山药与大豆豆乳混合制备的豆制品组合物可以获得有效保护巨噬细胞，改善低免疫力个体巨噬细胞数量减少的情况，另外，对大豆蛋白引起的相关炎症或过敏反应有显著改善作用，从而发挥增强低免疫力机体免疫系统双向调节功能的作用。
附图说明
27.图1为实施例2及对比例2免疫力的巨噬细胞荧光分布情况；
28.图2为实施例及对比例免疫力改善作用；与模型对照组比较，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001；与对比例3比较，#p《0.05。
具体实施方式
29.本发明提供了一种具有免疫力改善作用的豆制品组合物，制备原料包括大豆豆乳、茯苓和山药。
30.本发明将茯苓与山药配合添加至大豆豆乳中，在发挥免疫力功能的双向调节作用，在补充活性成分增强免疫细胞保护作用的同时，也使复合植物乳营养结构更加均衡合理，并且对大豆引起的炎症或过敏反应存在缓解作用。
31.在本发明的一些具体实施方式中，所述大豆豆乳、茯苓和山药的体积质量比为(25～315)ml：(0.75～4.0)g：(1.25～6.7)g。
32.在本发明的一些具体实施方式中，所述大豆豆乳、茯苓和山药的体积质量比为
(31.5～315)ml：4.0g：6.7g。
33.在本发明的一些具体实施方式中，以每人每日推荐食用量计，所述豆制品组合物由以下原料制备而成：
34.大豆豆乳31.5～315ml，茯苓4.0g，山药6.7g。
35.在上述剂量条件下，可以实现获得有效保护巨噬细胞，改善低免疫力个体巨噬细胞数量减少的情况，同时对大豆蛋白引起的相关炎症或过敏反应有显著改善作用，从而发挥增强低免疫力机体免疫系统双向调节功能的作用。
36.在本发明的一些具体实施方式中，以每人每日推荐食用量计，所述豆制品组合物由以下原料制备而成：
37.大豆豆乳25ml，茯苓0.75g，山药1.25g。
38.在上述剂量条件下，可以实现在低剂量条件下，实现获得有效保护巨噬细胞，改善低免疫力个体巨噬细胞数量减少的情况。
39.在本发明中，所述茯苓和山药的质量比为4:6.7～3:5。当生药茯苓和山药以4:6.7～3:5的质量比与不同量的大豆豆乳混合制备组合物时，可以不同程度的发挥免疫力功能的双向调节作用。
40.在本发明中，所述茯苓优选为茯苓个，所述山药优选为淮山药或怀山药。
41.在本发明中，本发明对所述大豆豆乳的种类和来源并没有特殊限制，本领域技术人员公知的大豆豆乳即可。在本发明中，所述大豆豆乳为蛋白含量≥6wt％的大豆豆乳。
42.在本发明对所述茯苓和山药在组合物中的添加形式没有特殊限制，可以通过与水混合匀浆后干燥的形式加入，也可以以各自的提取物的形式加入。本发明对所述提取物的提取方法并没有特殊限制，优选为水提法。
43.在本发明的一些具体实施方式中，所述茯苓生药与茯苓提取物的质量比为5:1，所述山药生药与山药提取物的质量比为10:1。
44.大豆豆乳中蛋白的摄入量是免疫功能的营养基础，通过控制茯苓和山药的生药比例以保证本文涉及功能的有效性。
45.在本发明中，所述大豆豆乳按照如下方法进行制备：
46.将大豆与水混合磨浆，加热煮沸，得到大豆豆乳。
47.其中，本发明对所述茯苓提取物的来源并没有特殊限制，一般市售或自行制备。在本发明中，所述茯苓提取物优选为茯苓水提物，所述茯苓水提物按照如下方法进行制备：
48.将茯苓粉碎后与水混合，加热浸提，得到浸提液；
49.将所述浸提液浓缩后干燥，得到茯苓水提物。
50.本发明中，对所述山药提取物的来源并没有特殊限制，一般市售或自行制备。在本发明中，所述山药提取物优选为山药水提物，所述山药水提物按照如下方法进行制备：
51.将山药粉碎后与水混合，加热浸提，得到浸提液；
52.将所述浸提液浓缩后干燥，得到山药水提物；
53.茯苓-山药：《本经》中列为上品，传统中医常用健脾肾化湿配伍，茯苓味淡能利水，山药味甘滋补脾胃，两者合用一开一合，阴阳结合。《和剂局方》《金匮要略》《景岳全书》中多作合用。
54.山药：药材基源为薯蓣科植物山药的块茎。性平，味甘；归脾、肺、肾经。补中益气，
清热解毒，补脾胃亏损，治气虚衰弱。
55.茯苓：药材基源为多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核。性平，味甘、淡；归心、脾、肾经。利水渗湿，健脾宁心，补中健脾，导浊生津。
56.在本发明中，茯苓和山药的加入可以针对大豆高蛋白体系引起的相关炎症和过敏反应起到改善作用。
57.在本发明中，所述组合物中还可以包括植物提取物，所述植物提取物可以选自可以添加至食品中的植物提取物。在本发明中，所述植物提取物优选为人参提取物、当归提取物、甘草提取物、枸杞子提取物、茯苓提取物、金银花提取物、蒲公英提取物、沙棘提取物、鱼腥草提取物、山药提取物、山楂提取物、黄精提取物、枣提取物、接骨木莓提取物、山楂提取物、小麦胚芽肽、针叶樱桃提取物、百合提取物、红参提取物、蘑菇粉、香菇多糖、盐藻提取物、灵芝多糖、灵芝三萜、雨生红球藻类提取物、葡萄糖酸、桑椹提取物、樱桃提取物、苹果提取物和蔓越莓提取物中的一种或多种。
58.本发明还提供了一种上述豆制品组合物的制备方法，包括以下步骤：
59.将大豆、茯苓、山药和水混合磨浆后，依次进行加热处理和过滤，得到豆制品组合物；
60.或者，
61.大豆与水磨浆后加热煮沸，得到大豆豆乳；
62.茯苓与水加热浸提得到茯苓水提物；
63.山药与水加热浸提得到山药水提物；
64.将所述大豆豆乳、茯苓水提物和山药水提物混合，得到豆制品组合物。
65.在本发明中，所述豆制品组合物可以为豆乳，或者由豆乳制备得到的豆粉。
66.在进行含有上述组合物的食品的制备时，可以以上述豆乳或豆粉为原料进行制备。
67.本发明还提供了一种上述豆制品组合物在制备具有免疫力改善作用的食品和/或制备低致敏性大豆食品中的应用。
68.其中，所述食品选自豆乳、豆浆粉、豆腐或豆干。本发明对所述豆乳、豆浆粉、豆腐或豆干的制备方法并没有特殊限制，本领域技术人员公知的制备方法即可。
69.本发明将茯苓和山药与大豆豆乳混合制备的豆制品组合物可以获得有效保护巨噬细胞，改善低免疫力个体巨噬细胞数量减少的情况，同时对大豆蛋白引起的相关炎症或过敏反应有显著改善作用，从而发挥增强低免疫力机体免疫系统双向调节功能的作用。
70.本发明提供的豆制品组合物在对巨噬细胞的保护作用，提示对免疫初期的反应有改善或者预防免疫能力降低发生相关疾病的风险，间接提示对感冒、病毒或致病菌引起的流感、肺炎、上呼吸道感染等疾病存在潜在的预防和改善的作用。同时可能对压力、污染、熬夜、劳累引起的相关免疫力低下亚健康状态的调整恢复作用。
71.为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明提供的具有免疫力改善作用的豆制品组合物以及应用进行说明，本发明的保护范围不受以下实施例的限制。
72.以下实施例中，茯苓水提物(5：1)为茯苓生药与茯苓水提物的质量比为5:1，茯苓为茯苓个。
73.山药水提物(10：1)为山药生药与山药水提物的质量比为10:1，山药为淮山药。
74.对比例1.
75.6％蛋白含量大豆豆乳315ml,为每人每日食用量。
76.对比例2.
77.6％蛋白含量大豆豆乳31.5ml,为每人每日食用量。
78.对比例3.
79.6％蛋白含量大豆豆乳25ml,为每人每日食用量。
80.对比例4.
81.保健食品“增强免疫力”功能低温酸奶，批准文号国食健字g20090243，每日200g推荐剂量。
82.实施例1.
83.每份含大豆豆乳315ml，茯苓水提物(5：1)0.8g，山药水提物(10：1)0.67g，为每人每日食用量。
84.实施例2.
85.每份含大豆豆乳31.5ml，茯苓水提物(5：1)0.8g，山药水提物(10：1)0.67g，为每人每日食用量。
86.实施例3.
87.每份含大豆豆乳25ml，茯苓水提物(5：1)0.15g，山药水提物(10：1)0.125g，为每人每日食用量。
88.实施例4
89.1、实验样品
90.实施例1～3和对比例1～4
91.2、实验动物
92.巨噬细胞数量减少改善实验：巨噬细胞荧光斑马鱼(tg(coro1a:egfp)hkz04ttg/ )，以自然成对交配繁殖方式进行。年龄为3dpf，每实验组为30尾。用于供试品对斑马鱼巨噬细胞减少改善功效评价。
93.巨噬细胞吞噬功能改善实验：野生型ab品系，以自然成对交配繁殖方式进行。年龄为3dpf，每实验组为30尾。用于供试品对斑马鱼巨噬细胞吞噬促进功效评价。
94.t淋巴细胞荧光斑马鱼(tg(rag2:dsred)zf411tg)，以自然成对交配繁殖方式进行。年龄为4dpf，每实验组为30尾。用于供试品对斑马鱼t细胞减少改善功效评价。
95.斑马鱼均饲养于28℃的养鱼用水中(水质：每1l反渗透水中加入200mg速溶海盐，电导率为450～550μs/cm；ph为6.5～8.5；硬度为50～100mg/l caco3)，由杭州环特生物科技有限公司养鱼中心繁殖提供。饲养管理符合国际aaalac认证的要求。
96.3、仪器和试剂
97.解剖显微镜(szx7，olympus，japan)；荧光显微镜(az100，nikon，japan)；显微注射仪(im-300，narishige)；拉针仪(pc-10，narishige，japan)；精密电子天平(cp214，ohaus，china)；6孔板(nestbiotech，china)；甲基纤维素(sigma，usa)；酒石酸长春瑞滨注射液(民生药业，中国)；过碳酸钠(上海阿拉丁生化科技股份有限公司，中国)。
98.4、实验方法
99.巨噬细胞数量减少改善实验：随机选取3dpf转基因巨噬细胞荧光斑马鱼，静脉注
射长春瑞滨建立斑马鱼巨噬细胞免疫功能损伤模型。注射完后，随机选取模型斑马鱼每实验组30尾，按照对比例和实施例的给药剂量浓度列表中进行给药处理，同时设置正常对照组(养鱼用水处理未注射斑马鱼)和模型对照组，每个实验组容量为20ml。每个实验组均加入0.01％过碳酸钠增氧。每天换取新鲜的样液，各浓度组处理4天，至7dpf时，每组随机选取10尾斑马鱼在荧光显微镜下拍照，用nis-elements d 3.2高级图像处理软件进行图像分析并采集数据，统计斑马鱼泄殖孔至尾部静脉中巨噬细胞荧光强度总和(s)，以巨噬细胞荧光强度总和的统计学分析结果分别评价供试品的巨噬细胞减少改善作用。统计学处理结果用mean
±
se表示。巨噬细胞减少改善作用计算公式如下：
[0100][0101]
巨噬细胞吞噬功能改善实验：随机选取3dpf野生型ab品系斑马鱼，同时静脉注射长春瑞滨和荧光颗粒建立斑马鱼免疫功能损伤模型。注射完后，随机选取模型斑马鱼于烧杯中，每个烧杯(即每实验组)30尾，按照对比例和实施例的给药剂量浓度列表中进行给药处理，同时设置正常对照组(养鱼用水处理未注射斑马鱼)和模型对照组，每个烧杯(实验组)容量为20ml。每个实验组均加入0.01％过碳酸钠增氧。每天换取新鲜的样液，各浓度组处理4天，至7dpf时，每组随机选取10尾斑马鱼在荧光显微镜下拍照，用image j高级图像处理软件进行图像分析并采集数据，统计斑马鱼体内剩余荧光颗粒的数量(n)，以荧光颗粒的数量的统计学分析结果分别评价供试品的巨噬细胞吞噬促进作用。统计学处理结果用mean
±
se表示。巨噬细胞吞噬促进作用计算公式如下：
[0102][0103]
随机选取4dpf转基因t淋巴细胞荧光斑马鱼，静脉注射长春瑞滨建立斑马鱼免疫功能损伤模型。注射完后，随机选取模型斑马鱼于烧杯中，每个烧杯(即每实验组)30尾，按照对比例和实施例的给药剂量浓度列表中进行给药处理，同时设置正常对照组(养鱼用水处理未注射斑马鱼)和模型对照组，每个烧杯(实验组)容量为20ml。每个实验组均加入0.01％过碳酸钠增氧。各浓度组处理1天，至5dpf时，每组随机选取10尾斑马鱼在荧光显微镜下拍照，用nis-elements d 3.2高级图像处理软件进行图像分析并采集数据，统计斑马鱼t细胞荧光强度(s)，以t细胞荧光强度的统计学分析结果分别评价供试品的t细胞减少改善作用。统计学处理结果用mean
±
se表示。t细胞减少改善作用计算公式如下：
[0104][0105]
两组间用ttest，多组间用方差分析和dunnett’s t-检验进行统计学分析，p《0.05表明具有显著性差异。
[0106]
5.实验结果
[0107]
表格中可见，对比例1豆乳单方的实验组中，实验动物出现了不耐受或过敏相关的40％死亡率的现象，而实施例1在同等剂量的豆乳单方的基础上添加了茯苓山药复合成分的实验组中，实验动物异常死亡的情况没有发生，同时表现出对巨噬细胞减少的23％的显著改善作用；
[0108]
对比例2豆乳单方的较低剂量实验组中，实验动物没有出现异常死亡，但从图1中可见，实验组斑马鱼发生全身巨噬细胞弥漫分布的现象，提示可能发生相关炎症或过敏反应，而实施例2中，在同等剂量的豆乳基础上添加了茯苓山药复合成分的实验组中，巨噬细胞全身弥漫的现象得到改善，同时表现出与高剂量复合豆乳相似的对巨噬细胞减少的25％的显著改善作用；
[0109]
对比例3豆乳单方的低剂量实验组中，实验动物没有出现异常死亡，或者巨噬细胞弥漫的炎症现象，显示出对巨噬细胞数量减少的34％的显著改善作用，同时对巨噬细胞的吞噬功能有78％的改善/保护作用；而实施例3中，在同等剂量的豆乳基础上添加了茯苓山药复合成分的实验组中，对巨噬细胞和t淋巴细胞的数量减少有显著改善/保护作用，从而发挥对低免疫力机体的免疫力改善和保护作用；同时，鉴于巨噬细胞的吞噬作用，在炎症反应的发生，过敏(变态反应)的过程中发挥着不可或缺的作用，因而，在图2中可见复合豆乳的实验组在巨噬细胞吞噬作用有表现出相对抑制的作用，从而提示对炎症或过敏反应存在缓解作用。
[0110]
表1.实验各组给样对应浓度及实验现象
[0111][0112][0113]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。