一种具有免疫力改善作用的调制乳制品组合物和应用的制作方法

1.本发明属于食品技术领域，具体涉及一种具有免疫力改善作用的调制乳制品组合物和应用。


背景技术：

2.季节交替、气候善变、早晚温差、环境污染、工作压力等多种因素造成人体免疫力低下，每年有数千万以上人群受到感冒、流感等细菌、病毒性疾病的侵扰，和免疫力低下相关的亚健康困扰，免疫力泛功能产品的消费场景和需求潜力巨大；根据市场研究消费者洞察，免疫力低下问题是青少年人群和中老年人群的首要困扰问题，是重要的市场机会；国内外专家和权威机构建议居民通过摄入营养素或功能性食品提高免疫力，增强对抗病毒或细菌的自身能力，从而减少患病几率，降低疾病反应和伤害程度，缩短病程。
3.免疫系统包含多种免疫细胞，巨噬细胞是一种位于组织内的白血球，在脊椎动物体内参与非特异性免疫和特异性免疫。其主要功能是以固定细胞或游离细胞的形式对细胞残片及病原体进行吞噬以及消化，继而激活淋巴细胞和其他免疫细胞，令其对病原体作出免疫防御。巨噬细胞是免疫系统发挥免疫作用尤其是初始阶段的重要免疫细胞，在机体免疫力低下的情况下，巨噬细胞整体数量、细胞活性以及吞噬功能都可能发生降低的表现。


技术实现要素：

4.有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种具有免疫力改善作用的调制乳，本发明提供的调制乳可以有效保护巨噬细胞，改善低免疫力个体巨噬细胞数量减少的情况。
5.本发明提供了一种具有免疫力改善作用的调制乳，每1000重量份的调制乳中包括：
6.796～998.5份的液体乳制品，所述液体乳制品中包括含量≥80wt％的生牛乳、生羊乳或复原乳；
7.0.0364～0.2273份的酵母β葡聚糖；
8.1.4545～9.0909份的乳清蛋白粉。
9.优选的，每1000重量份的调制乳中包括：
10.796～998.5份的液体乳制品，所述液体乳制品中包括含量≥80wt％的生牛乳、生羊乳或复原乳；
11.0.0364～0.15份的酵母β葡聚糖；
12.1.4545～6.0597份的乳清蛋白粉；
13.或者，每1000重量份的调制乳中包括：
14.796～998.5份的液体乳制品，所述液体乳制品中包括含量≥80wt％的生牛乳、生羊乳或复原乳；
15.0.0364份的酵母β葡聚糖；
16.1.4545份的乳清蛋白粉；
17.优选的，所述调制乳以每人每日推荐食用量计为220ml。
18.优选的，所述乳清蛋白粉为wpc70或以上规格的浓缩乳清蛋白粉或分离乳清蛋白粉。
19.优选的，所述酵母β葡聚糖中的纯度≥80％。
20.优选的，所述乳制品选自生牛乳、生羊乳、复原乳或调制乳。
21.优选的，还包括添加剂。
22.优选的，所述添加剂选自稳定剂、乳化剂和抗氧化剂中的一种或多种。
23.本发明还提供了一种上述具有免疫力改善作用的调制乳的制备方法，包括以下步骤：
24.将液体乳制品加热后与酵母β葡聚糖和乳清蛋白粉混合，得到混合乳；
25.将所述混合乳依次经过均质、定容和灭菌，得到具有免疫力改善作用的调制乳。
26.优选的，所述液体乳制品加热的温度为50～55℃；
27.所述灭菌为超高温灭菌，温度为137～142℃，时间为4s。
28.与现有技术相比，本发明提供了一种具有免疫力改善作用的调制乳，每1000重量份的调制乳中包括：796～998.5份的液体乳制品，所述液体乳制品中包括含量≥80wt％的生牛乳、生羊乳或复原乳；0.0364～0.2273份的酵母β葡聚糖；1.4545～9.0909份的乳清蛋白粉。本发明在一定添加比例和剂量的情况下向调制乳中强化酵母β葡聚糖和乳清蛋白，可以获得有效保护巨噬细胞，改善低免疫力个体巨噬细胞数量减少的情况的组合物，从而发挥增强低免疫力机体免疫系统功能的作用。
附图说明
29.图1为各组斑马鱼泄殖孔至尾部静脉中巨噬细胞荧光强度差异图；
30.图2为对应荧光强度转化为数值后经统计学分析的结果图(与模型对照组比较：*p《0.05，***p《0.001)。
具体实施方式
31.本发明提供了一种具有免疫力改善作用的调制乳，其特征在于，每1000重量份的调制乳中包括：
32.796～998.5份的液体乳制品，所述液体乳制品中包括含量≥80wt％的生牛乳、生羊乳或复原乳；
33.0.0364～0.2273份的酵母β葡聚糖；
34.1.4545～9.0909份的乳清蛋白粉。
35.本发明提供的具有免疫力改善作用的调制乳中，添加了0.0364～0.2273份酵母β葡聚糖，优选为0.0364、0.0400、0.0500、0.1000、0.1500、0.2000、0.2273，或0.0364～0.2273份之间的任意值。
36.其中，所述酵母β葡聚糖为β1-3键连接为主的葡糖苷聚合物，具有免疫活化作用和有丝分裂促进功能，可以通过主动吞噬和胞饮作用被摄入机体，可以与巨噬细胞的dectin-1受体结合，激活免疫系统。在本发明中，所述酵母β葡聚糖中的纯度≥80％。
37.本发明提供的具有免疫力改善作用的调制乳中，还添加了1.4545～9.0909份的乳清蛋白粉0.32g，优选为1.5000、2.0000、3.0000、4.0000、5.0000、6.0000、6.0597、7.0000、8.0000、9.0909，或1.4545～9.0909份之间的任意值。
38.其中，乳清蛋白粉是乳源分离获得的蛋白质，包含生乳的基础营养物质之外，还富含诸如乳铁蛋白、免疫球蛋白、乳白蛋白等一些直接参与机体免疫反应的活性物质，直接和间接的支持免疫系统功能强化。在本发明中，所述乳清蛋白粉可以为wpc70或以上规格的浓缩乳清蛋白粉或者分离乳清蛋白粉。
39.本发明提供的具有免疫力改善作用的调制乳中还包括796～998.5份的液体乳制品。其中，所述液体乳制品作为调制乳的乳源营养基底，为含量≥80wt％的生牛乳、生羊乳或复原乳。所述乳制品具备乳中的原生营养物质，包含氨基酸、蛋白质、维生素和矿物质等，保证乳含量、乳蛋白含量、乳源活性复合营养物质，当酵母β葡聚糖和乳清蛋白粉以极低的量添加至液体乳制品中，液体乳制品的复合营养物质为本发明的协同作用提供必要的营养基础。在本发明中，所述乳制品选自生牛乳、生羊乳、复原乳或调制乳，可以为但不限于伊利舒化奶无乳糖全脂型牛奶、伊利舒化奶无乳糖低脂型牛奶、伊利纯牛奶、复原乳。
40.在本发明的一些具体实施方式中，每1000重量份的调制乳中包括：
41.796～998.5份的液体乳制品，所述液体乳制品中包括含量≥80wt％的生牛乳、生羊乳或复原乳；
42.0.0364～0.15份的酵母β葡聚糖；
43.1.4545～6.0597份的乳清蛋白粉。
44.在本发明的一些具体实施方式中，每1000重量份的调制乳中包括：
45.796～998.5份的液体乳制品，所述液体乳制品中包括含量≥80wt％的生牛乳、生羊乳或复原乳；
46.0.0364份的酵母β葡聚糖；
47.1.4545份的乳清蛋白粉。
48.在本发明中，所述调制乳以每人每日推荐食用量计为220
±
30ml。
49.当向220ml的液体乳制品中添加0.033～0.050g的酵母β葡聚糖和1.333～2.000g的乳清蛋白粉时，在低于现有技术的添加水平条件下，可以实现获得有效保护巨噬细胞，改善低免疫力个体巨噬细胞数量减少的情况的组合物，从而发挥增强低免疫力机体免疫系统功能的作用。
50.当向220ml的液体乳制品中添加0.008g的酵母β葡聚糖和0.32g的乳清蛋白粉时，极低的酵母β葡聚糖和乳清蛋白粉的添加量与液体乳中的营养成分配合，可以实现获得有效保护巨噬细胞，改善低免疫力个体巨噬细胞数量减少的情况的组合物，从而发挥增强低免疫力机体免疫系统功能的作用。
51.在本发明的一些具体实施方式中，酵母β葡聚糖、乳清蛋白和作为营养基底的乳制品三者发挥协同增效的作用，酵母葡聚糖的活化和促增殖作用启动一系列生理反应和免疫反应，届时需要的营养物质由乳清蛋白和调制乳基底加以支持，在特定营养蛋白强化的基础上，乳制品中复合的多种营养素又发挥了法国悖论中的协同增效作用，从而实现本发明的结果。
52.在本发明的一些具体实施方式中，所述具有免疫力改善作用的调制乳还包括添加
剂。
53.在本发明中，所述添加剂选自稳定剂、乳化剂和抗氧化剂中的一种或多种，本发明对所述添加剂的种类并没有特殊限制，本领域技术人员公知的可用于液体乳制品的添加剂种类即可。每1000重量份的调制乳中，所述添加剂的添加量为0～2重量份。
54.在本发明的一些具体实施方式中，所述具有免疫力改善作用的调制乳，每1000重量份的调制乳中包括：
55.796～899份的液体乳制品，所述液体乳制品为生牛乳或复原乳；
56.0.0364份的酵母β葡聚糖；
57.1.4545份的乳清蛋白粉；
58.0～2份的稳定剂；
59.100～200份的水。
60.本发明还提供了一种上述具有免疫力改善作用的调制乳的制备方法，包括以下步骤：
61.将液体乳制品加热后与酵母β葡聚糖和乳清蛋白粉混合，得到混合乳；
62.将所述混合乳依次经过均质、定容和灭菌，得到具有免疫力改善作用的调制乳。
63.优选的，所述液体乳制品加热的温度为50～55℃；
64.所述灭菌为超高温灭菌，温度为137～142℃，时间为4s。
65.本发明在特定比例和剂量的情况下向液体乳制品中强化酵母β葡聚糖和乳清蛋白营养物质，可以获得有效保护巨噬细胞，改善低免疫力个体巨噬细胞数量减少的情况的组合物，从而发挥增强低免疫力机体免疫系统功能的作用。
66.本发明提供的具有免疫力改善作用的调制乳对巨噬细胞的保护作用，提示对免疫初期的反应有改善或者预防免疫能力降低发生相关疾病的风险，间接提示对感冒、病毒或致病菌引起的流感、肺炎、上呼吸道感染等疾病存在潜在的预防和改善的作用。同时可能对压力、污染、熬夜、劳累引起的相关免疫力低下亚健康状态的调整恢复作用。
67.为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明提供的具有免疫力改善作用的调制乳进行说明，本发明的保护范围不受以下实施例的限制。
68.以下实施例中所用的原料，如无特别说明，均为一般市售产品。
69.对比例1
70.保健食品“增强免疫力”功能低温酸奶，批准文号国食健字g20090243，每日200g推荐剂量。
71.对比例2
72.(无乳糖)调制乳(参考产品为全脂舒化调制乳)220ml,为每人每日食用量。
73.实施例1
74.每份成品调制乳：含酵母β葡聚糖0.008g，浓缩乳清蛋白粉(wpc70)0.32g，对比例2的(无乳糖)调制乳220ml，为每人每日食用量。
75.对比例3
76.每份含酵母β葡聚糖0.008g，浓缩乳清蛋白粉(wpc70)0.32g，为每人每日食用量。
77.实施例2
78.每份含酵母β葡聚糖0.033g，浓缩乳清蛋白粉(wpc70)1.333g，为每人每日食用量。
79.实施例3
80.每份含酵母β葡聚糖0.050g，浓缩乳清蛋白粉(wpc70)2.000g，为每人每日食用量。
81.对比例4
82.每份含酵母β葡聚糖0.100g，浓缩乳清蛋白粉(wpc70)4.000g，为每人每日食用量。
83.实施例4
84.1.实验样品
85.对比例1～3和实施例1得到的产品
86.2.实验动物
87.巨噬细胞荧光斑马鱼(tg(coro1a:egfp)hkz04ttg/ )，以自然成对交配繁殖方式进行。年龄为3dpf，每实验组为30尾。用于供试品对斑马鱼巨噬细胞减少改善功效评价。
88.斑马鱼均饲养于28℃的养鱼用水中(水质：每1l反渗透水中加入200mg速溶海盐，电导率为450～550μs/cm；ph为6.5～8.5；硬度为50～100mg/l caco3)，由杭州环特生物科技有限公司养鱼中心繁殖提供。饲养管理符合国际aaalac认证的要求。
89.3.仪器和试剂
90.解剖显微镜(szx7，olympus，japan)；荧光显微镜(az100，nikon，japan)；显微注射仪(im-300，narishige)；拉针仪(pc-10，narishige，japan)；精密电子天平(cp214，ohaus，china)；6孔板(nest biotech，china)；甲基纤维素(sigma，usa)；酒石酸长春瑞滨注射液(民生药业，中国)；过碳酸钠(上海阿拉丁生化科技股份有限公司，中国)。
91.4.实验方法
92.随机选取3dpf转基因巨噬细胞荧光斑马鱼，静脉注射长春瑞滨建立斑马鱼巨噬细胞免疫功能损伤模型。注射完后，随机选取模型斑马鱼每实验组30尾，按照对比例和实施例的给药剂量浓度列表中进行给药处理，同时设置正常对照组(养鱼用水处理未注射斑马鱼)和模型对照组，每个实验组容量为20ml。每个实验组均加入0.01％过碳酸钠增氧。每天换取新鲜的样液，各浓度组处理4天，至7dpf时，每组随机选取10尾斑马鱼在荧光显微镜下拍照，用nis-elements d 3.2高级图像处理软件进行图像分析并采集数据，统计斑马鱼泄殖孔至尾部静脉中巨噬细胞荧光强度总和(s)，以巨噬细胞荧光强度总和的统计学分析结果分别评价供试品的巨噬细胞减少改善作用。统计学处理结果用mean
±
se表示。巨噬细胞减少改善作用计算公式如下：
[0093][0094]
两组间用ttest，多组间用方差分析和dunnett’s t-检验进行统计学分析，p《0.05表明具有显著性差异。
[0095]
5.实验结果
[0096]
表格中对应描述人体的日服用剂量和对应的斑马鱼实验组给药方式及浓度，由图1可见各组斑马鱼泄殖孔至尾部静脉中巨噬细胞荧光强度差异，图2为对应荧光强度转化为数值后经统计学分析的结果(与模型对照组比较：*p《0.05，***p《0.001)。
[0097]
由图表可见对比例1，即保健食品“增强免疫力”功能低温酸奶(批准文号国食健字g20090243)依照每日200g推荐剂量，可以对巨噬细胞有47％的极显著保护和修复作用；依照每人每日220ml的摄入量，对比例2无乳糖调制乳对巨噬细胞的保护7％作用未见显著性；
对比例3中，按照每人每日食用一份含酵母β葡聚糖0.008g，浓缩乳清蛋白粉(wpc70)0.32g的混合物，其对巨噬细胞的保护作用19％亦未见显著性；而实施例1中，将混合物添加于220ml调制乳中，其对该实验组斑马鱼巨噬细胞具有显著保护作用50％(p＜0.05)，是对比例2和对比例3总和的1.92倍，甚至超过保健食品对比例1的1.06倍，表现出明显的协同作用，可以通过复合添加的方式提高巨噬细胞的保护作用，从而改善低免疫力机体的免疫力调节功能。
[0098]
表1供试品剂量及巨噬细胞减少改善作用结果(n＝10)
[0099][0100]
与模型对照组比较，*p《0.05，***p《0.001
[0101]
实施例5
[0102]
1、实验样品
[0103]
实施例2～3和对比例4得到的产品
[0104]
2、实验动物
[0105]
巨噬细胞荧光斑马鱼(tg(coro1a:egfp)hkz04ttg/ )，以自然成对交配繁殖方式进行。年龄为受精后3天(3dpf)，共450尾，每实验组为30尾。用于供试品对斑马鱼巨噬细胞减少改善功效评价。
[0106]
斑马鱼均饲养于28℃的养鱼用水中(水质：每1l反渗透水中加入200mg速溶海盐，电导率为450～550μs/cm；ph为6.5～8.5；硬度为50～100mg/l caco3)，由本公司养鱼中心繁殖提供。饲养管理符合国际aaalac认证的要求。
[0107]
3、仪器和试剂
[0108]
解剖显微镜(szx7，olympus，japan)；荧光显微镜(az100，nikon，japan)；显微注射仪(im-300，narishige)；拉针仪(pc-10，narishige，japan)；精密电子天平(cp214，ohaus，china)；6孔板(nest biotech，china)；甲基纤维素(货号mo512，sigma，usa)；酒石酸长春瑞滨注射液(民生药业，中国)。
[0109]
4、实验方法
[0110]
随机选取3dpf转基因巨噬细胞荧光斑马鱼，静脉注射长春瑞滨建立斑马鱼巨噬细胞免疫功能损伤模型。注射完后，随机选取模型斑马鱼于六孔板中，每孔(即每实验组)30尾，水溶给予相应供试品，具体浓度见表1，同时设置正常对照组(养鱼用水处理未注射斑马鱼)和模型对照组，每孔(实验组)容量为3ml。每天换取新鲜的样液，各浓度组处理4天，至7dpf时，每组随机选取10尾斑马鱼在荧光显微镜下拍照，用nis-elements d 3.2高级图像
处理软件进行图像分析并采集数据，统计斑马鱼泄殖孔至尾部静脉中巨噬细胞荧光强度总和(s)，以巨噬细胞荧光强度总和的统计学分析结果分别评价供试品的巨噬细胞减少改善作用。统计学处理结果用mean
±
se表示。巨噬细胞减少改善作用计算公式如下：
[0111][0112]
两组间用ttest，多组间用方差分析和dunnett’s t-检验进行统计学分析，p《0.05表明具有显著性差异。
[0113]
5、实验结果
[0114]
在实施例2和3的剂量下，可以改善低免疫力模型实验动物的巨噬细胞减少，从而改善免疫力功能，因此，本发明可以在相比现有技术添加量低的剂量条件下，将酵母β葡聚糖和浓缩乳清蛋白粉加入至乳制品中，得到具有免疫力改善作用的调制乳。
[0115]
表2.供试品处理后巨噬细胞减少改善作用实验结果(n＝10)
[0116][0117][0118]
以下实施例中，每1000重量份的调制乳中，包括2份稳定剂，所述稳定剂的具体用量为：
[0119][0120]
实施例6(舒化全脂1000g配方)每天220ml
[0121]
(1)配方：
[0122]
每1000重量份组成：
[0123]
[0124]
(2)制备方法：
[0125]
1、化料：将占配料量20％的巴氏牛奶加热至50-55℃，加入称量好的酵母β葡聚糖、浓缩乳清蛋白粉(wpc70)及稳定剂，采用具有剪切、分散作用的搅拌搅拌15-20分钟；
[0126]
2、均质：先调一级压力30-50bar,再调二级压力200左右bar；均质温度50-55℃；
[0127]
3、定容；
[0128]
4、超高温灭菌：137-142℃/4s
[0129]
5、无菌添加乳糖酶；
[0130]
6、无菌灌装，为无菌纸包装；
[0131]
7、检测合格出厂。
[0132]
实施例7：(舒化低脂1000g配方)每天220ml
[0133]
(1)配方：每1000重量份组成：
[0134][0135]
(2)制备方法：
[0136]
1、乳脂分离：对原奶中的脂肪进行部分分离；
[0137]
2、巴氏杀菌：70-80℃/15s或者80-90℃/15s；
[0138]
3、冷却贮存：将巴氏杀菌后的牛乳冷却至1-8℃贮存；
[0139]
4、化料：将占配料量20％的巴氏牛奶加热至50-55℃，加入称量好的酵母β葡聚糖、浓缩乳清蛋白粉(wpc70)及稳定剂，采用具有剪切、分散作用的搅拌搅拌15-20分钟；
[0140]
5、均质：先调一级压力30-50bar,再调二级压力200左右bar；均质温度50-55℃；
[0141]
6、定容；
[0142]
7、超高温灭菌：137-142℃/4s
[0143]
8、无菌添加乳糖酶；
[0144]
9、无菌灌装，为无菌纸包装；
[0145]
10、检测合格出厂。
[0146]
实施例8：(纯牛奶1000g配方)每天220ml
[0147]
(1)配方：每1000重量份组成：
[0148][0149]
(2)制备方法：
[0150]
1、化料：将占配料量20％的巴氏牛奶加热至50-55℃，加入称量好的酵母β葡聚糖、
浓缩乳清蛋白粉(wpc70)及稳定剂，采用具有剪切、分散作用的搅拌搅拌15-20分钟；
[0151]
2、均质：先调一级压力30-50bar,再调二级压力200左右bar；均质温度50-55℃；
[0152]
3、定容；
[0153]
4、超高温灭菌：137-142℃/4s
[0154]
5、无菌灌装，为无菌纸包装；
[0155]
6、检测合格出厂。
[0156]
实施例9：(调制乳1000g配方)每天220ml
[0157]
(1)配方：每1000重量份组成：
[0158][0159]
(2)制备方法：
[0160]
1、化料：将占配料量20％的巴氏牛奶加热至50-55℃，加入称量好的酵母β葡聚糖、浓缩乳清蛋白粉(wpc70)及稳定剂，采用具有剪切、分散作用的搅拌搅拌15-20分钟；
[0161]
2、均质：先调一级压力30-50bar,再调二级压力200左右bar；均质温度50-55℃；
[0162]
3、定容；
[0163]
4、超高温灭菌：137-142℃/4s
[0164]
5、无菌灌装，为无菌纸包装；
[0165]
6、检测合格出厂。
[0166]
实施例10：(复原乳1000g配方)每天220ml
[0167]
(1)配方：每1000重量份组成：
[0168][0169][0170]
(2)制备方法：
[0171]
1、复原乳制备：将适量配料水升温至45-55℃，按照配方添加量将全脂乳粉加入化料罐中，搅拌分散；水合25-30分钟(化粉结束后开始计时)，水合温度为45-55℃，此工序不得开启搅拌器或加热；
[0172]
2、过滤：将水合完成的复原乳溶液通过60-80目过滤器进行过滤；
[0173]
3、冷却贮存：将复原乳溶液冷却到1-8℃贮存；
[0174]
4、化料：将占配料量20％的复原乳加热至50-55℃，加入称量好的酵母β葡聚糖、浓缩乳清蛋白粉(wpc70)及稳定剂，采用具有剪切、分散作用的搅拌搅拌15-20分钟；
[0175]
5、均质：先调一级压力30-50bar,再调二级压力200左右bar；均质温度50-55℃；
[0176]
6、定容；
[0177]
7、超高温灭菌：137-142℃/4s
[0178]
8、无菌灌装，为无菌纸包装；
[0179]
9、检测合格出厂。
[0180]
实施例11：(复原乳1000g配方)每天220ml
[0181]
(1)配方：每1000重量份组成：
[0182][0183]
(2)制备方法：
[0184]
1、复原乳制备：将适量配料水升温至45-55℃，按照配方添加量将脱脂乳粉加入化料罐中，搅拌分散；水合25-30分钟(化粉结束后开始计时)，水合温度为45-55℃，此工序不得开启搅拌器或加热；
[0185]
2、过滤：将水合完成的复原乳溶液通过60-80目过滤器进行过滤；
[0186]
3、冷却贮存：将复原乳溶液冷却到1-8℃贮存；
[0187]
4、化料：将占配料量20％的复原乳加热至50-55℃，加入称量好的酵母β葡聚糖、浓缩乳清蛋白粉(wpc70)及稳定剂，采用具有剪切、分散作用的搅拌搅拌15-20分钟；
[0188]
5、均质：先调一级压力30-50bar,再调二级压力200左右bar；均质温度50-55℃；
[0189]
6、定容；
[0190]
7、超高温灭菌：137-142℃/4s
[0191]
8、无菌灌装，为无菌纸包装；
[0192]
9、检测合格出厂。
[0193]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。