一种包埋有益生菌的颗粒及其制备方法与流程

1.本发明涉及食品技术领域，尤其涉及一种包埋有益生菌的颗粒及其制备方法。


背景技术：

2.益生菌(probiotics)为有益的活性微生物，能够在人体胃肠道产生多种天然抑菌物质，维持人体胃肠道菌群平衡并改善身体状态。消费者对益生菌的认可表现在益生菌产品市场增长迅速，2010年至2016年我国益生菌产品平均增长率保持在17％左右，预计2020年国内益生菌市场容量将达到879亿元。
3.将包埋的益生菌加入常温产品中，不仅可以提高消费者使用方便和便携性，同时还可以提升口味和外观，拓宽产品结构、更好地满足消费者多样性需求。但在实际应用过程中，益生菌常常因为胃酸和胆汁的作用，在进入人体肠道后活性降低甚至消失而无法发挥其作用，且在常温液态状态也很难长期存活，因此活性益生菌还未有在饮料、常温酸奶、植物蛋白饮料、调制乳等常温液态产品中有成功的应用。
4.因此，必须通过一些方法提高益生菌在液态产品中的存活率。对益生菌进行包埋可以提高益生菌的稳定性，适宜的包材可以在不良环境中维持益生菌的稳定、调控益生菌释放的位置和释放的速度。目前益生菌多层包埋技术在固体粉末产品和低温发酵乳已经有成功的商业化应用案例，但是仍无法实现在常温液态状态下维持益生菌的活性。


技术实现要素：

5.有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种包埋有益生菌的颗粒及其制备方法，该颗粒可以在常温液态状态下稳定存在。
6.本发明提供的包埋有益生菌的颗粒，由内至外依次包括：益生菌和包裹层1、包裹层2、包裹层3、包裹层4、包裹层5，其中：
7.所述包裹层1的包材为蛋白；
8.所述包裹层2的包材为环糊精；
9.所述包裹层3的包材为醇溶性疏水材料；
10.所述包裹层4的包材选自可可酱或花生酱中至少一种；
11.所述包裹层5的包材选自魔芋胶、卡拉胶、海藻酸钠、结冷胶、羧甲基纤维素钠、琼脂、果胶或明胶中至少一种。
12.在本发明中，所述蛋白选自鸡蛋蛋清蛋白、酪蛋白或乳清蛋白中至少一种；所述环糊精为β-环糊精；所述醇溶性疏水材料选自姜黄素、变性淀粉或醇溶玉米蛋白中至少一种。本发明中，所述可可酱或花生酱的水活度≤0.4。
13.在本发明中，所述益生菌选自：嗜酸乳杆菌、乳双歧杆菌或凝结芽孢杆菌中至少一种。一些实施例中，所述嗜酸乳杆菌为嗜酸乳杆菌ncfm；所述乳双歧杆菌为乳双歧杆菌bi-07或乳双歧杆菌hn019；所述凝结芽孢杆菌为凝结芽孢杆菌bc30。所述益生菌采用5.5
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cfu/g的益生菌粉。
14.在本发明一些实施例中，每包裹880g凝结芽孢杆菌，所需的包材包括：
15.包裹层1：鸡蛋蛋清蛋白80g；
16.包裹层2：β-环糊精100g；
17.包裹层3：醇溶玉米蛋白100g；
18.包裹层4：可可粉200g干酪素100g可可脂700g；
19.包裹层5：明胶220g、魔芋胶60g、卡拉胶20g。
20.在本发明另一些实施例中，每包裹600g凝结芽孢杆菌，所需的包材包括：
21.包裹层1：乳清蛋白80g；
22.包裹层2：β-环糊精50g；
23.包裹层3：醇溶玉米蛋白70g；
24.包裹层4：花生酱700g；
25.包裹层5：明胶180g、魔芋胶35g、海藻酸钠15g。
26.本发明所述颗粒的制备方法包括：
27.步骤1：将蛋白溶于水，经喷雾或搅拌，对益生菌进行包埋，获得产物a；
28.步骤2：将环糊精溶于水，经喷雾对产物a进行包埋，获得产物b；
29.步骤3：将醇溶性疏水材料溶解，经喷雾对产物b进行包埋，获得产物c；
30.步骤4：将可可酱或花生酱与产物c混合，滴入胶凝剂溶液后依次经干燥、氢氧化钙溶液浸泡、煮沸、冲淋冷却、ph＝3.5～3.8浸泡，冲洗至ph＝4.1～4.3，获得所述的颗粒；
31.所述胶凝剂溶液由魔芋胶、卡拉胶、海藻酸钠、结冷胶、羧甲基纤维素钠、琼脂、果胶或明胶中至少一种以及水和甘油制得。
32.一些实施例中，为了减少益生菌的热损失，采用流化床喷雾包裹工艺对益生菌进行包裹，蛋白在喷雾干燥过程中发生热变性。步骤1包括：将蛋白溶于水后对益生菌进行喷雾包埋至增重2％～8％，获得产物a；
33.所述蛋白与益生菌的质量比为1：(8～12)。一些实施例中，所述蛋白为鸡蛋清蛋白，所述蛋白溶于水至蛋白的质量分数16％。所述益生菌为5.5
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cfu/g的益生菌粉。具体的，包括将益生菌粉加入流化床，以蛋白质溶液进行喷雾包埋。所述喷雾包埋的参数包括：喷雾速度400～450ml/hr、进风温度30℃～50℃；喷雾完成后再55℃～60℃喷雾干燥1～10min。一些实施例中，所述喷雾包埋的参数包括：喷雾速度420ml/hr，进风温度45℃；喷雾完成后再58℃喷雾干燥5min。
34.另一些实施例中，采用变性后的蛋白对益生菌粉进行包被然后进行交联，从而更有效的抵抗胃酸对益生菌活性的侵蚀。步骤1包括：将蛋白溶于水后经热变性，然后与益生菌和谷氨酰胺转胺酶混合，经搅拌、冻干获得产物a；
35.所述蛋白与益生菌的质量比为1：(8～12)；一些实施例中，所述蛋白为乳清蛋白，所述蛋白溶于水至蛋白的质量分数为8.1％。所述益生菌为5.5
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cfu/g的益生菌粉。所述热变性的温度为75～90℃，时间为15～30min；所述搅拌的温度为30～50℃，时间为150～200min。所述谷氨酰胺转胺酶添加量为5～30u/g，乳清蛋白的质量0.2～10g/100ml。该步骤具体为：将蛋白溶于水至蛋白质量分数为8.1％，经75～90℃热变性15～30min，然后与益生菌和谷氨酰胺转胺酶混合，经40℃搅拌交联180min、冻干获得产物a。
36.另一些实施例中，采用0.5％～30％(wt)酪蛋白水溶液流化床中喷雾干燥，然后ph
≤4.3柠檬酸酸化喷雾处理包埋益生菌；
37.步骤2中所述环糊精溶解于水至环糊精质量分数为2wt％～15wt％；所述喷雾至增重2％～8％；所述喷雾的参数包括：进风温度30℃～60℃，出风温度25℃～45℃，喷雾速度400～450ml/hr。一些实施例中，所述环糊精溶解于水至环糊精质量分数为9.1％。所述步骤2具体为：步骤1中干燥的产物a加入流化床，以环糊精溶液对其进行喷雾包埋，所述喷雾的参数包括：进风温度45℃，出风温度25℃～45℃，喷雾速度420ml/hr。
38.步骤3中所述醇溶性疏水材料溶解至质量分数为2％～20％；所述喷雾至增重2％～8％；所述喷雾的参数包括：进风温度30℃～60℃，出风温度25℃～45℃，喷雾速度400～450ml/hr。
39.一些实施例中，所述醇溶性疏水材料为醇溶玉米蛋白，以88％乙醇会溶液溶解至醇溶玉米蛋白质量分数为10％。将步骤2中制备的产物b在流化床中，以醇溶玉米蛋白的溶液进行喷雾包被，所述喷雾的参数包括：进风温度45℃，出风温度25℃～45℃，喷雾速度420ml/hr。
40.另一些实施例中，所述醇溶性疏水材料为姜黄素，所述姜黄素以ph＝8～9弱碱性溶液溶解，溶解至姜黄素的质量分数为10％。将步骤2中制备的产物b在流化床中，以姜黄素的溶液进行喷雾包被，然后采用0.5wt％～5wt％的柠檬酸溶液喷雾、干燥至颗粒ph为中性。所述喷雾的参数包括：进风温度45℃，出风温度25℃～45℃，喷雾速度420ml/hr。
41.步骤4中，所述可可酱或花生酱与产物c混合前经杀菌处理；
42.一些实施例中，所述可可酱或花生酱与产物c的质量比为1：(0.9～1.1)；
43.一些实施例中，所述产物c与胶凝剂溶液的质量比为1：(0.9～1.1)。
44.所述胶凝剂溶液包括水和3wt％～20wt％甘油、5wt％～45wt％明胶、5wt％～6wt％魔芋胶、0～2wt％卡拉胶和0～2.5wt％海藻酸钠。
45.一些实施例中，所述杀菌采用巴氏杀菌，条件为75℃～80℃、15s～30s。杀菌后还包括研磨的步骤，研磨的条件包括：50～60℃研磨2～12hr。保持温度为40℃。
46.一些实施例中，所述胶凝剂溶液的制备包括：剪切罐中加入85℃热水，然后加入卡拉胶或海藻酸钠溶解后，冷却到60℃加入明胶和魔芋胶溶解后再加入甘油溶解，所述胶体溶液采用巴氏杀菌，条件为75℃～80℃、15s～30s。保持温度为50℃～60℃。
47.本发明中，步骤4中采用滴丸剂制备颗粒，将40℃的可可酱或花生酱与产物c混合，滴入盛有50℃～60℃胶凝剂溶液的滴丸机冷却获得粒径3～4mm的颗粒，然后利用滚筒干燥机干燥。干燥完成的颗粒放入质量分数为0.5％～5％的氢氧化钙溶液中浸泡10～30min，然后加热煮沸，煮沸后迅速取出喷淋冷却到室温(18～30℃)，然后用0.5％～2％柠檬酸溶液漂洗至中性即可。
48.本发明提供了一种食品，其含有本发明所述的颗粒或本发明所述制备方法制得的颗粒。
49.所述食品为液态乳制品，其包括动物基乳制品和植物基乳制品，所述动物基乳制品包括：纯奶、发酵乳、乳酸菌饮料等，所述植物基乳制品包括：豆奶、花生奶、杏仁奶等。
50.所述食品的制备方法包括：将本发明所述的颗粒添加到未杀菌的产品中，对二者按照78～85℃，15～30s共同杀菌。
51.或者所述食品的制备方法包括：将本发明所述的颗粒单独经78～85℃15～30s杀
菌，再与杀菌后的半成品料液在无菌罐中低速搅拌均匀混合。所述颗粒以溶液重悬，所述溶液为糖浆或水。
52.本发明提供了一种包埋有益生菌的颗粒，由内至外依次包括：益生菌和包裹层1、包裹层2、包裹层3、包裹层4、包裹层5，并提供了该颗粒的制备方法，以及含有该颗粒的食品。其有益效果至少包括：
53.(1)本发明提供的一种添加在液态产品中确保长货架期活的益生菌包埋技术，包埋前对包埋材料溶液进行杀菌处理在在无菌流化床中包埋，最终滴丸机也在无菌环境下滴丸制备的包埋益生菌，可以耐78～80℃15～30s杀菌从而能够确保颗粒符合国标gb/t 4789.26《食品卫生微生物学检验食品商业无菌的检验》的规定，具有在产品货架期内商业无菌的性能。
54.(2)本发明采用5层包裹，包括抵御胃液、胆汁侵蚀的定向肠道释放，极大提高了益生菌使用效果，同时多重疏水层处理确保了颗粒在液态饮品、乳品产品中益生菌长货架期内活的。
55.(3)本发明提供的第5层为可可脂可可粉或花生酱，极大的增加了所制备的颗粒的层次感，并且能够在长货架期内保持；并且经过验证，本发明所述颗粒中5层包被的顺序不可调整，其中任一者的调整都会导致在灭菌过程中内容物发生倾泻。
56.(4)本发明提供的技术方案解决了常温长保产品中，特别液态产品中的应用是一大技术难题，同时也容易实现连续大规模生产商业化。
附图说明
57.图1示实施例1包埋的益生菌颗粒。
具体实施方式
58.本发明提供了一种包埋有益生菌的颗粒及其制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
59.本发明提供了一种添加在液态产品中确保长货架期活的包埋有益生菌的颗粒，其在益生菌外，进行了5层包裹，由内至外依次包括：
60.第1层采用鸡蛋蛋清蛋白、酪蛋白、乳清蛋白经过变性或交联处理后在ph＝0.9～1.8酸液都稳定的抵御胃酸侵蚀层；
61.第2层采用环糊精包埋，一方面包裹粘合第1层蛋白，另一方面可以防止ph＝7.4左右含乳化剂的卵磷脂等胆汁破坏；
62.第3层采用变性淀粉、醇溶玉米蛋白或姜黄素隔水涂层；
63.第4层采用水活度≤0.4的可可酱或花生酱既增加口感又进一步隔水的包裹层；
64.第5层为采用魔芋胶、卡拉胶、海藻酸钠、结冷胶、羧甲基纤维素钠、琼脂、果胶和明胶复配油包裹层，并最后经过疏水处理。
65.本发明中，所述包埋的益生菌选择耐热性较好菌株，例如，一些实施例中，采用嗜
酸乳杆菌ncfm、乳双歧杆菌bi-07、乳双歧杆菌hn019或凝结芽孢杆菌bc30。
66.根据本发明要实现定向释放和液体产品中长货架期稳定的活的益生菌，采用不同材料和工艺进行5层包埋包裹，具体实施方案如下：
67.第1层为抵御胃酸侵蚀包裹层：
68.选用0.5％～30％(wt)鸡蛋蛋清蛋白水溶液利用流化床先30℃～50℃喷雾干燥包埋益生菌，再55～60℃进风蛋白变性处理；
69.或0.5％～30％(wt)酪蛋白水溶液流化床中喷雾干燥并ph≤4.3柠檬酸酸化喷雾处理包埋益生菌；
70.或0.2％～10％乳清蛋白溶液经过75℃～90℃，15～30min热变性后，一定浓度益生菌菌液加入变性后的乳清蛋白溶液中，同时快速加入5～30u/g谷氨酰胺转胺酶(tgase)，在40℃搅拌反应180min后离心的凝胶颗粒，冷冻干燥除水后得微胶囊颗粒；整个包裹层以益生菌增重2％～8％为准。
71.第2层为抵御胆汁侵蚀包裹层：
72.配质量浓度2％～15％wt环糊精水溶液，采用流化床喷雾干燥包埋，进风温度均为30℃～60℃，出风温度均为25℃～45℃，在第1层包裹层上继续包裹，包裹层以包好的第1层包裹颗粒继续增重2％～8％为准。
73.第3层为疏水层：
74.可以在液态产品中确保益生菌低水活度保持活性，质量比2％～20％醇溶性变性淀粉、醇溶玉米蛋白或姜黄素的85％～93％醇溶液，或利用ph＝8～9弱碱性相同浓度姜黄溶液，利用流化床喷雾干燥包埋，进风温度均为30～60℃，出风温度均为25～45℃，在完成第2层包裹颗粒继续增重2％～8％为准，利用弱碱溶解的姜黄包埋颗粒采用0.5～5％柠檬酸溶液酸洗到中性处理确保疏水性。
75.在前三个步骤中，共增重6％～24％的包埋好的3层益生菌颗粒最后采用滴丸机制备3～4mm益生菌颗粒，设备采用滴丸机，具体步骤为：
76.第4层和第5层：采用滴丸机制备3～4mm颗粒，增加疏水性和口感，提高耐热性，具体步骤如下：
77.步骤一，可可酱和/或花生酱先75～80℃，15～30s巴氏杀菌处理后研磨机50℃～60℃研磨2～12hr降低颗粒度提高爽滑感；所述可可酱的制备方法包括将：2份可可粉、1份干酪素、7份可可脂，75℃熔解混匀30min后，加入研磨机保持55℃研磨8hr后冷却到40℃保持流动性；
78.步骤二，5％～45％明胶、3％～20％甘油、2％～15％的胶类(魔芋胶、卡拉胶、海藻酸钠、结冷胶、羧甲基纤维素钠、琼脂、果胶中至少一种)，余量为水，配制成明胶为主的胶体溶液，经75～80℃15～30s巴氏杀菌处理后保持50～60℃待用；其中，甘油可以改善包裹时延展性。
79.步骤三，完成好3层包埋的益生菌可以在制备颗粒前加入步骤一巴氏杀菌后酱中混匀，利用滴丸机制备粒径3～4mm颗粒。
80.步骤四，滴丸机制备好的颗粒利用滚筒干燥机干燥。
81.步骤五，干燥完成的颗粒放入质量比浓度0.5％～5％的氢氧化钙溶液中浸泡10～30min，然后加热煮沸，煮沸后迅速取出喷淋冷却到室温，然后用0.5％～2％柠檬酸溶液漂
洗至中性即可。
82.利用上述方法制得的颗粒可添加入高酸产品中，具体可以按照以下方式进行：将上述方法制得的颗粒添加到未杀菌的产品中，对二者按照78～85℃15～30s共同杀菌；或者以颗粒糖浆溶液或颗粒水溶液形式单独78～85℃15～30s杀菌，再与杀菌后的半成品料液在小无菌罐中低速搅拌均匀混合。
83.本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。其中，嗜酸乳杆菌ncfm来自丹尼斯克公司、乳双歧杆菌bi-07来自丹尼斯克公司、乳双歧杆菌hn019来自丹尼斯克公司、凝结芽孢杆菌bc30来自kerry公司。下面结合实施例，进一步阐述本发明：
84.实施例1
85.本实施例提供了一种添加在液态产品中确保长货架期活的益生菌包埋技术，具体步骤为：
86.1.称取80g鸡蛋蛋清蛋白粉，加入500g无菌水中溶解，称取800g 5.5
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cfu/g bc30凝结芽孢杆菌益生菌冻干粉放入流化床，420ml/hr喷雾速度包埋，进风温度45℃喷雾完成后再58℃进风干燥5min完成第1层包埋，得到增重10％的880g益生菌包埋颗粒。
87.2.称取100gβ-环糊精，加1000g无菌水溶解，继续对流化床中包埋好第1层益生菌颗粒喷雾包埋，喷雾速度420ml/hr，进风温度45℃喷雾干燥，得到继续增重8％的950g益生菌2层包埋颗粒。
88.3.称取100g醇溶玉米蛋白，加入900g 88％无水乙醇溶解完成，继续对流化床中包埋好2层益生菌颗粒喷雾包埋，喷雾速度420ml/hr，进风温度45℃喷雾干燥，得到继续增重8％的1026g益生菌3层包埋颗粒。
89.4.称量好200g可可粉、100g干酪素、700g可可脂，75℃熔解混匀30min后，加入研磨机保持55℃研磨8hr后冷却到40℃保持流动性待用。
90.5.称量好220g明胶、60g魔芋胶、20g卡拉胶；剪切罐中准备好550g85℃热水，加入卡拉胶溶解充分后，冷却到60℃继续加入明胶和魔芋胶充分溶解后再加入150g甘油溶解充分待用。
91.6.在步骤4中制备的可可酱中加入3中1026g包埋好的3层益生菌颗搅匀，利用滴丸机5中准备好的胶体包裹益生菌可可酱，冷却得到2800g约10000粒3～4mm颗粒；转入干燥筛干燥颗粒。
92.7.干燥好的颗粒通过输送带加入5kg的1％氢氧化钙溶液中浸泡20min；然后加热煮沸，立即取出用常温无菌水喷淋冲洗冷却。
93.8.冷却好的包埋益生菌颗粒转入柠檬酸调节ph＝3.5～3.8的无菌水溶液中浸泡30min，然后无菌水冲洗到水ph＝4.1～4.3即制得包埋有益生菌的颗粒(图1)。
94.实施例2
95.本实施例提供了一种添加在液态产品中确保长货架期活的益生菌包埋技术，具体步骤为：
96.1.称量60g乳清蛋白，加入740g无菌水中配成溶液，乳清蛋白溶液经过75～90℃，15～30min热变性后，称取600g 5.5
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cfu/g bc30凝结芽孢杆菌益生菌冻干粉加入变性后的乳清蛋白溶液中，同时快速加入10u/g谷氨酰胺转胺酶(tgase)，在40℃搅拌反应180min后离心的凝胶颗粒，冷冻干燥除水后得660g微胶囊颗粒。
97.2.称取50gβ-环糊精，加500g无菌水溶解，冷冻后包埋益生菌微胶囊颗粒加入流化床中，环糊精溶液对包埋好第1层益生菌颗粒喷雾进行第2层包埋，喷雾速度420ml/hr，进风温度45℃喷雾干燥，得到继续增重7.5％左右的710g益生菌2层包埋颗粒。
98.3.称取70g醇溶玉米蛋白，加入630g 88％无水乙醇溶解完成，继续对流化床中包埋好2层益生菌颗粒喷雾包埋，喷雾速度420ml/hr，进风温度45℃喷雾干燥，得到继续增重10％左右的780g益生菌3层包埋颗粒。
99.4.称量好700g花生酱，采用85℃300s杀菌后，加入研磨机保持55℃研磨8hr后冷却到40℃保持流动性待用。
100.5.称量好180g明胶、35g魔芋胶、15g海藻酸钠；剪切罐中准备好390g85℃热水，加入海藻酸钠溶解充分后，冷却到60℃继续加入明胶和魔芋胶充分溶解后再加入80g甘油溶解充分待用。
101.6.在准备好的4花生酱中加入3中780g包埋好的3层益生菌颗搅匀，利用滴丸机5中准备好的胶体包裹益生菌可可酱，冷却得到1730g约6100粒3～4mm颗粒；转入干燥筛干燥颗粒。
102.7.干燥好的颗粒通过输送带加入3kg的1％氢氧化钙溶液中浸泡30min；然后加热煮沸，立即取出用常温无菌水喷淋冲洗冷却。
103.8.冷却好的包埋益生菌颗粒转入柠檬酸调节ph＝3.5～3.8的无菌水溶液中浸泡30min，然后无菌水冲洗到水ph＝4.1～4.3即可。
104.对比例1
105.采用三层包埋益生菌后加入产品中，具体步骤为：
106.1.称取80g鸡蛋蛋清蛋白粉，加入500g无菌水中溶解，称取800g 5.5
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cfu/g bc30凝结芽孢杆菌益生菌冻干粉放入流化床，420ml/hr喷雾速度包埋，进风温度45℃喷雾完成后再58℃进风干燥5min完成第1层包埋，得到增重8％的880g益生菌包埋颗粒。
107.2.称取100gβ-环糊精，加1000g无菌水溶解，继续对流化床中包埋好第1层益生菌颗粒喷雾包埋，喷雾速度420ml/hr，进风温度45℃喷雾干燥，得到继续增重8％的950g益生菌2层包埋颗粒。
108.3.称取120g醇溶玉米蛋白，加入880g 88％无水乙醇溶解完成，继续对流化床中包埋好2层益生菌颗粒喷雾包埋，喷雾速度420ml/hr，进风温度45℃喷雾干燥，得到继续增重10％的1045g益生菌3层包埋颗粒。
109.实施例3
110.将实施例1制备好的颗粒通过计量(按照0.7％～1.5％质量比添加，控制产品1
×
109cfu/g到2
×
109cfu/g益生菌含量)加入常温酸奶巴氏杀菌系统前混合罐中，配好的酸奶(如安慕希)进入混合罐和包埋好的颗粒混匀再通过巴杀菌系统78℃25s杀菌，然后到无菌混合罐中暂存，最终灌装成品。
111.实施例4
112.将实施例2制备好的颗粒通过计量(按照0.7％～1.5％质量比添加，控制产品1
×
109cfu/g到2
×
109cfu/g益生菌含量)加入常温酸奶巴氏杀菌系统前混合罐中，配好的酸奶(如安慕希)进入混合罐和包埋好的颗粒混匀再通过巴杀杀菌系统78℃25s杀菌，然后到无菌混合罐中暂存，最终灌装成品。
113.对比例2
114.将对比例1制备好的颗粒通过计量(按照0.25％～0.5％质量比添加，控制产品1
×
109cfu/g到2
×
109cfu/g益生菌含量)加入常温酸奶巴氏杀菌系统前混合罐中，配好的酸奶(如安慕希)进入混合罐和包埋好的颗粒混匀再通过巴杀杀菌系统78℃25s杀菌，然后到无菌混合罐中暂存，最终灌装成品。
115.货架期稳定性鉴定
116.对实施例3～4和对比例2在货架期内(室温)益生菌的稳定性进行检测，活菌数检测数据分析结果如表1：
117.表1产品货架期稳定性
118.序号货架期时间(月)实施例3实施例4对比例2101.2
×
108cfu/g1.5
×
108cfu/g6.3
×
106cfu/g211.1
×
108cfu/g1.3
×
108cfu/g2.2
×
106cfu/g321.0
×
108cfu/g1.2
×
108cfu/g1.2
×
105cfu/g439.8
×
107cfu/g1.1
×
108cfu/g3.2
×
104cfu/g549.1
×
107cfu/g1.0
×
108cfu/g5.2
×
103cfu/g658.3
×
107cfu/g9.9
×
107cfu/g4.3
×
102cfu/g767.7
×
107cfu/g9.0
×
108cfu/g7.2
×
101cfu/g
119.由实施例3、实施例4、对比例2可知，采用本发明提供的5层包埋益生菌加入液体产品中，能够有效保护益生菌受热影响和在长货架期内能够有效保持益生菌活的数量和有效性。而对比例2中的三层包裹仍无法实现对益生菌活性的良好维持。说明本发明提供的方法简单易行，有利于连续大规模生产商业化。
120.产品感官评价
121.取产品样为实施例3、实施例4和对比例2的产品，然后取相同空白常温酸奶产品样品，依次编号为常温酸奶产品a1、a2、b、c。选择30位专业口感敏感者进行喜好度排序，并计分1分，2分，3分，4分。结果如下：
122.表2评分结果
123.[0124][0125]
利用表2和表3数据及以下公式进行f值(friedman)检验：
[0126]
表3
[0127][0128]
注1：f可能是不连续值，此不连续性是由于j、p值较小而造成，故在a＝0.05和a＝0.01的情况下.不能得到临界值。
[0129]
注2：使用χ2分布的一个近似值得到用斜体表示的值即临界值。
[0130]
根据公式计算：
[0131][0132]
(其中p值为样品数，本实验为4；j值为评价员人数，本实验为30；r1、r2…rp
为每种样品的秩和)
[0133]
代入计算得到：f
test
＝15。
[0134]
按照0.05的显著水平，对照附表3，f值为7.81。f
test
＞7.81，表明三个样品之间存在显著差异。
[0135]
利用下列公式计算最小显著差lsd值：
[0136]
(j为30，p为4)
[0137]
计算得到lsd值为19.6。
[0138]
表4评价结果
[0139][0140]
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。