一种用于抵御幽门螺杆菌在胃内定植的唾液酸酶的制作方法

技术特征：
1.一种用于抵御幽门螺杆菌在胃内定植的唾液酸酶，其特征在于，所述唾液酸酶的氨基酸序列如seq id no.1所示。2.编码权利要求1所述的唾液酸酶的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如seq id no.2所示。3.一种包含权利要求2所述基因的重组表达载体。4.根据权利要求3所述重组载体，其特征在于，所述重组载体还包括his标签序列、编码促溶蛋白的基因；所述编码促溶蛋白的基因包括gst和mbp。5.一种权利要求3所述重组表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1)采用f234/r234引物对扩增幽门螺杆菌基因组dna，得到编码唾液酸酶的基因片段；所述f234的核苷酸序列如seq id no.3所示；所述r234的核苷酸序列如seq id no.4所示；2)将所述编码唾液酸酶的基因片段插入骨架载体中得到重组表达载体；所述骨架载体的多克隆位点为bamh i/ecor i。6.根据权利要求5所述构建方法，其特征在于，所述骨架载体为含his标签序列和编码促溶蛋白的基因的骨架载体；所述含his标签序列和编码促溶蛋白的基因的骨架载体的构建方法，包括以下步骤：a.f29b-1/r502引物对对pmal-c2x模板进行pcr扩增，得到mbp基因片段；用f502/r29b-07引物对对pgex-6p-1模板进行pcr扩增，得到gst基因片段；所述f29b-1的核苷酸序列如seq id no.5所示；所述r502的核苷酸序列如seq id no.6所示；所述f502的核苷酸序列如seq id no.7所示；所述r29b-07的核苷酸序列如seq id no.8所示；b.以所述mbp基因片段和gst基因片段为模板，用f29b-2/r29b-07引物对进行pcr扩增，得到his(tag)-mbp-gst片段；所述f29b-2的核苷酸序列如seq id no.9所示；c.将所述his(tag)-mbp-gst片段插入pet29b质粒中，得到含his标签序列和两种编码促溶蛋白的基因的重组表达载体。7.根据权利要求6所述构建方法，其特征在于，pet29b质粒的插入多克隆位点为ned i/bamh i。8.一种包含权利要求2所述基因或权利要求3所述重组载体的重组菌株。9.一种由权利要求5所述重组菌株重组表达得到的唾液酸酶或权利要求1所述的唾液酸酶在制备检测、预防和/或治疗幽门螺杆菌感染的药物或生物制品中的应用。10.根据权利要求9所述应用，其特征在于，所述生物制品包括疫苗。

技术总结
本发明公开了一种用于抵御幽门螺杆菌在胃内定植的唾液酸酶。属于基因工程疫苗技术领域。唾液酸酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，并提供了构建方法与应用。本发明采用基因工程技术克隆表达幽门螺杆菌唾液酸酶重组蛋白，上清表达量高，分离纯化步骤简便，免疫效价高且有保护性。唾液酸酶重组蛋白可以直接与黏膜佐剂LT(B)5配合使用，适用于口服免疫接种。适用于口服免疫接种。适用于口服免疫接种。


技术研发人员：杜方川 童文德 朱白梅 童武学 蒲凯
受保护的技术使用者：成都欧林生物科技股份有限公司
技术研发日：2021.04.22
技术公布日：2022/4/25