与NKG2D结合的抗体的制作方法

技术特征：

1.一种与NKG2D结合的抗体，其中所述抗体包含第一抗原结合结构域，所述第一抗原结合结构域包含

(i)重链可变区(VH)，其包含SEQ ID NO:73的重链互补决定区(HCDR)1，选自由SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104和SEQ ID NO:105组成的组的HCDR 2，以及SEQ ID NO:75的HCDR 3；和轻链可变区(VL)，其包含SEQ ID NO:76的轻链互补决定区(LCDR)1、SEQ ID NO:77的LCDR 2和SEQ ID NO:78的LCDR 3；

(ii)VH，其包含SEQ ID NO:65的HCDR 1、SEQ ID NO:66的HCDR 2和SEQ ID NO:67的HCDR 3；和VL，其包含SEQ ID NO:68的LCDR 1、SEQ ID NO:69的LCDR 2和SEQ ID NO:70的LCDR 3；

(iii)VH，其包含SEQ ID NO:1的HCDR 1、SEQ ID NO:2的HCDR2和SEQ ID NO:3的HCDR 3；和VL，其包含SEQ ID NO:4的LCDR 1、SEQ ID NO:5的LCDR 2和SEQ ID NO:6的LCDR 3；

(iv)VH，其包含SEQ ID NO:25的HCDR 1、SEQ ID NO:26的HCDR 2和SEQ ID NO:27的HCDR 3；和VL，其包含SEQ ID NO:28的LCDR 1、SEQ ID NO:29的LCDR 2和SEQ ID NO:30的LCDR 3；

(v)VH，其包含SEQ ID NO:49的HCDR 1、SEQ ID NO:50的HCDR 2和SEQ ID NO:51的HCDR 3；和VL，其包含SEQ ID NO:52的LCDR 1、SEQ ID NO:53的LCDR 2和SEQ ID NO:54的LCDR 3；

(vi)VH，其包含SEQ ID NO:57的HCDR 1、SEQ ID NO:58的HCDR 2和SEQ ID NO:59的HCDR 3；和VL，其包含SEQ ID NO:60的LCDR 1、SEQ ID NO:61的LCDR 2和SEQ ID NO:62的LCDR 3；

(vii)VH，其包含SEQ ID NO:9的HCDR 1、SEQ ID NO:10的HCDR 2和SEQ ID NO:11的HCDR 3；和VL，其包含SEQ ID NO:12的LCDR 1、SEQ ID NO:13的LCDR 2和SEQ ID NO:14的LCDR 3；

(viii)VH，其包含SEQ ID NO:17的HCDR 1、SEQ ID NO:18的HCDR 2和SEQ ID NO:19的HCDR 3；和VL，其包含SEQ ID NO:20的LCDR 1、SEQ ID NO:21的LCDR 2和SEQ ID NO:22的LCDR 3；

(ix)VH，其包含SEQ ID NO:33的HCDR 1、SEQ ID NO:34的HCDR 2和SEQ ID NO:35的HCDR 3；和VL，其包含SEQ ID NO:36的LCDR 1、SEQ ID NO:37的LCDR 2和SEQ ID NO:38的LCDR 3；或

(x)VH，其包含SEQ ID NO:41的HCDR 1、SEQ ID NO:42的HCDR 2和SEQ ID NO:43的HCDR 3；和VL，其包含SEQ I DNO:44的LCDR 1、SEQ ID NO:45的LCDR 2和SEQ ID NO:46的LCDR 3。

2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述第一抗原结合结构域包含

(i)VH，其包含与选自由SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:112和SEQ ID NO:113组成的组的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或VL，其包含与SEQ ID NO:80的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；

(ii)VH，其包含与SEQ ID NO:71的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或VL，其包含与SEQ ID NO:72的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；

(iii)VH，其包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性的氨基酸序列；和/或VL，其包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；

(iv)VH，其包含与SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或VL，其包含与SEQ ID NO:32的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；

(v)VH，其包含与SEQ ID NO:55的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或VL，其包含与SEQ ID NO:56的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；

(vi)VH，其包含与SEQ ID NO:63的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或VL，其包含与SEQ ID NO:64的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；

(vii)VH，其包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或VL，其包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；

(viii)VH，其包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或VL，其包含与SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；

(ix)VH，其包含与SEQ ID NO:39的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或VL，其包含与SEQ ID NO:40的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；或

(x)VH，其包含与SEQ ID NO:47的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或VL，其包含与SEQ ID NO:48的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的抗体，其中所述抗体为IgG抗体，特别是IgG1抗体。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗体，其中所述抗体为全长抗体。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的抗体，其中所述抗体为选自下组的抗体片段：Fv分子、scFv分子、Fab分子和F(ab')2分子。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体，其中所述抗体为多特异性抗体，特别是双特异性抗体。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含与第二抗原结合的第二抗原结合结构域。

8.根据权利要求7所述的抗体，其中所述第二抗原为靶细胞抗原，特别是肿瘤细胞抗原。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含由第一亚基和第二亚基构成的Fc结构域。

10.根据权利要求9所述的抗体，其中所述Fc结构域为IgG Fc结构域，特别是IgG1 Fc结构域。

11.根据权利要求9或10所述的抗体，其中所述Fc结构域为人Fc结构域。

12.根据权利要求9至11中任一项所述的抗体，其中所述Fc结构域包含降低与Fc受体的结合和/或效应子功能的一个或多个氨基酸取代。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的抗体，其中所述抗体不与FcγRIIIa(CD16a)结合。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的抗体，其中所述第一抗原结合结构域和/或所述第二抗原结合结构域为Fab分子。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的抗体，其中所述第一抗原结合结构域为Fab分子，其中Fab轻链和Fab重链的可变结构域VL和VH彼此替换或恒定结构域CL和CH1彼此替换，特别是所述可变结构域VL和VH彼此替换。

16.根据权利要求7至15中任一项所述的抗体，其中所述第二抗原结合结构域为常规Fab分子。

17.根据权利要求7至16中任一项所述的抗体，其中所述第二抗原结合结构域为Fab分子，其中在恒定CL结构域中，第124位的氨基酸被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)独立地取代(根据Kabat编号)，且第123位的氨基酸被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)独立地取代(根据Kabat编号)；并且在恒定结构域CH1中，第147位的氨基酸被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)独立地取代(根据Kabat EU索引编号)，且第213位的氨基酸被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)独立地取代(根据Kabat EU索引编号)。

18.根据权利要求7至14中任一项所述的抗体，其中所述第二抗原结合结构域为Fab分子，其中Fab轻链和Fab重链的可变结构域VL和VH彼此替换或恒定结构域CL和CH1彼此替换，特别是所述可变结构域VL和VH彼此替换。

19.根据权利要求1至14或权利要求18中任一项所述的抗体，其中所述第一抗原结合结构域为常规Fab分子。

20.根据权利要求1至14、权利要求18或19中任一项所述的抗体，其中所述第一抗原结合结构域为Fab分子，其中在恒定结构域CL中，第124位的氨基酸被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)独立地取代(根据Kabat编号)，且第123位的氨基酸被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)独立地取代(根据Kabat编号)；并且在恒定结构域CH1中，第147位的氨基酸被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)独立地取代(根据Kabat EU索引编号)，且第213位的氨基酸被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)独立地取代(根据Kabat EU索引编号)。

21.根据权利要求7至20中任一项所述的抗体，其中所述第一抗原结合结构域和所述第二抗原结合结构域各自为Fab分子，并且所述抗体包含由第一亚基和第二亚基构成的Fc结构域；并且(i)所述第一抗原结合结构域在所述Fab重链的C末端融合至所述Fc结构域的所述第一亚基的N末端，且所述第二抗原结合结构域在所述Fab重链的C末端融合至所述Fc结构域的所述第二亚基的N末端，或者(ii)所述第二抗原结合结构域在所述Fab重链的C末端融合至所述Fc结构域的所述第一亚基的N末端，且所述第一抗原结合结构域在所述Fab重链的C末端融合至所述Fc结构域的所述第二亚基的N末端。

22.根据权利要求9至21中任一项所述的抗体，其中所述Fc结构域包含促进所述Fc结构域的所述第一亚基和所述第二亚基进行缔合的修饰。

23.根据权利要求9至22中任一项所述的抗体，其中所述Fc结构域的所述第一亚基的CH3结构域中的氨基酸残基被具有较大侧链体积的氨基酸残基替换，从而在所述第一亚基的CH3结构域内产生突起，所述突起可定位在所述第二亚基的CH3结构域内的空腔中，并且所述Fc结构域的所述第二亚基的CH3结构域中的氨基酸残基被具有较小侧链体积的氨基酸残基替换，从而在所述第二亚基的CH3结构域内产生空腔，所述第一亚基的CH3结构域内的所述突起可定位在所述空腔内。

24.一种分离的多核苷酸，其编码根据权利要求1至23中任一项所述的抗体。

25.一种宿主细胞，其包含根据权利要求24所述的分离的多核苷酸。

26.一种生产与NKG2D结合的抗体的方法，所述方法包括以下步骤：(a)在适合表达所述抗体的条件下培养根据权利要求25所述的宿主细胞，以及任选地(b)回收所述抗体。

27.一种与NKG2D结合的抗体，其通过根据权利要求26所述的方法产生。

28.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至23中任一项所述的抗体以及药用载体。

29.根据权利要求1至23中任一项所述的抗体或根据权利要求28所述的药物组合物，其作为药物使用。

30.根据权利要求1至23中任一项所述的抗体或根据权利要求28所述的药物组合物，其在疾病的治疗中使用。

31.根据权利要求30所述的抗体或药物组合物，其中所述疾病为癌症。

32.根据权利要求30或31所述的抗体或药物组合物，其中所述使用与以下项组合：T细胞活化剂，例如与CD3结合的抗体，特别是与CD3和靶细胞抗原特别是肿瘤细胞抗原结合的双特异性抗体。

33.根据权利要求1至23中任一项所述的抗体或根据权利要求28所述的药物组合物在制造药物中的用途。

34.根据权利要求1至23中任一项所述的抗体或根据权利要求28所述的药物组合物在制造用于治疗疾病的药物中的用途。

35.根据权利要求34所述的用途，其中所述疾病为癌症。

36.根据权利要求34或35所述的用途，其中所述治疗与以下项组合：T细胞活化剂，例如与CD3结合的抗体，特别是与CD3和靶细胞抗原特别是肿瘤细胞抗原结合的双特异性抗体。

37.一种治疗个体的疾病、特别是癌症的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的根据权利要求1至23中任一项所述的抗体或根据权利要求28所述的药物组合物。

38.根据权利要求37所述的方法，其进一步包括施用T细胞活化剂，例如与CD3结合的抗体，特别是与CD3和靶细胞抗原特别是肿瘤细胞抗原结合的双特异性抗体。

39.如前文所述的本发明。

技术总结
本发明总体上涉及与NKG2D结合的抗体，包括多特异性抗原结合分子，例如用于活化T细胞和/或NK细胞。此外，本发明涉及编码此类抗体的多核苷酸，以及包含此类多核苷酸的载体和宿主细胞。本发明进一步涉及用于生产所述抗体的方法，以及涉及将所述抗体用于治疗疾病的方法。

技术研发人员：S·登格尔;G·乔治斯;R·霍斯;C·克雷恩;P·尤马纳;I·瓦尔德豪泽;
受保护的技术使用者：豪夫迈·罗氏有限公司;
技术研发日：2020.07.14
技术公布日：2022.04.15