一种24-去甲熊去氧胆酸的合成方法与流程

1.本发明属于有机化学合成领域，具体是指一种24-去甲熊去氧胆酸的合成方法。


背景技术：

2.24-去甲熊去氧胆酸是熊去氧胆酸的同系物，较熊去氧胆酸侧链少一个亚甲基，其化学结构式如下：
[0003][0004]
24-去甲熊去氧胆酸对牛磺酸和甘氨酸亲和力相对较弱，使其易被胆管细胞重吸收回肝血窦与肝细胞，而促进胆管细胞的排泌作用。
[0005]
目前非酒精性脂肪性肝病患者的基础治疗策略主要包括改变生活方式、减重，改善腹型肥胖，改善胰岛素抵抗以及针对代谢综合征组分的药物治疗等；而单纯基础治疗很少能使脂肪性肝炎逆转。在2017年10月19日至23日召开的美国肝病年会中，来自奥地利与德国的团队的一项ⅱa期随机双盲对照研究报道，大剂量的24-去甲熊去氧胆酸可以显著改善非酒精性脂肪性肝病患者的血清转氨酶、甘油三酯和肝脏影像学指标。
[0006]
但迄今为止，关于24-去甲熊去氧胆酸合成方法报道的不多，基本上都是以熊去氧胆酸为原料通过脱羧合成，但这类方法原料昂贵、路线长。相比而言，海豹胆酸作为鹅去氧胆酸提取中的副产物，价廉易得。且海豹胆酸的氧化脱羧反应早在1986年就已经报道(collection czechoslovak chern.commun.1986，51，1722)，最近也有专利报道用于合成24-去甲胆甾酸(cn113135971a，2021)；但是这些合成过程中，脱羧反应和3，7位羟基的氧化反应有竞争关系，尤其是3位的羟基，与最终产物中的羟基构型相同，如果被氧化，就会导致需要额外的步骤再进行立体选择性还原。


技术实现要素：

[0007]
本发明的目的在于：提供一种24-去甲熊去氧胆酸的合成方法，以海豹胆酸(3α,7α,23α-三羟基-5β-胆烷酸)作为原料经一系列氧化还原反应得到24-去甲熊去氧胆酸，其原料来源广泛，价格低廉，并且合成路线各步骤条件温和，收率高，适合大量生产。
[0008]
为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
[0009]
一种24-去甲熊去氧胆酸的合成方法，具体步骤如下：
[0010]
a.将化合物a(海豹胆酸)溶解于第一溶剂中，在微通道反应器内经氧化剂1氧化得到化合物b(24-去甲基醛)；再加入还原剂淬灭反应，静置分层，弃去水相，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤有机相，除去溶剂，干燥得固态化合物b；
[0011]
b.将固态化合物b(24-去甲基醛)溶解于第二溶剂中，经氧化剂2氧化得到化合物c(24-去甲基鹅去氧胆酸)；再加入还原剂淬灭反应，静置分层，弃去水相，用饱和氯化钠溶液洗涤有机相，除去溶剂，得到白色固体，将白色固体溶解于乙酸乙酯中，柱层析分离，蒸馏除去乙酸乙酯，得固态化合物c；
[0012]
c.固态化合物c(24-去甲基鹅去氧胆酸)溶于第三溶剂中，经氧化反应转化为化合物d(24-去甲基-7-酮基石胆酸)，再进行提纯干燥得固态化合物d；
[0013]
所述氧化反应是指：固态化合物c溶解于第三溶剂中，经氧化剂3或酶组分1氧化得到化合物d；
[0014]
d.固态化合物d(24-去甲基-7-酮基石胆酸)溶于第三溶剂中，经还原反应转化为化合物e(24-去甲熊去氧胆酸)；再将得到的化合物e进行提纯干燥即可；
[0015]
所述还原反应是指：固态化合物d溶解于第三溶剂中，经还原剂1或酶组分2还原得到化合物e；
[0016]
其中，所述合成方法的反应过程如路线(i)所示：
[0017][0018]
本发明步骤a中，所述第一溶剂选自本乙腈、酯类溶剂(如乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸异丙酯)、酮类溶剂(如丙酮、丁酮)、醇类溶剂(如叔丁醇)、氯代烷(如二氯甲烷、氯仿)中的一种，所述第一溶剂与化合物a的体积重量比为3～50ml:1g；所述氧化剂1氧化剂1为氯气、次氯酸、次氯酸盐(如次氯酸钠)、次溴酸盐(如次溴酸钠)中的一种，或可通过简单反应获得的等价物(如n-溴代丁二酰亚胺，二氯海因)中任意一种或几种，所述氧化剂1与化合物a的摩尔比为1～2.5:1，所述氧化反应温度为-10～50℃。
[0019]
所述步骤a中，微通道反应器压力为0.1～0.3mpa，反应器使用1/16英寸的不锈钢管。
[0020]
本发明步骤b中，所述第二溶剂选自乙腈、酯类溶剂(如乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸异丙酯)、酮类溶剂(如丙酮、丁酮)、醇类溶剂(如叔丁醇)中的任意一种，所述第二溶剂与化合物b的体积重量比为3～20ml:1g；所述氧化剂2为活泼非金属(如氯气、溴素)、高价金属氧
化物及其酸或盐(如三氧化铁、活性二氧化锰、铬酸、重铬酸钾、高锰酸钾)、过氧化物(如过氧化氢、过氧乙酸、过碳酸钠)、非金属氧化物的酸或盐(如硝酸、浓硫酸、次氯酸钠、亚氯酸钠、氯酸钠)中的任意一种或几种，所述氧化剂2与化合物b的摩尔比为1～3:1，所述氧化反应温度为5～40℃。
[0021]
本发明步骤c中，所述第三溶剂选酯类溶剂(如乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸异丙酯)、酮类溶剂(如丙酮、丁酮)、醇类溶剂(如丁醇、戊醇)中的任意一种，所述第三溶剂与化合物c的体积重量比为5～20ml:1g。
[0022]
本发明步骤c中，所述固态化合物c经氧化剂3氧化得到化合物d并提纯得到固态化合物d的具体步骤如下：
[0023]
将固态化合物c溶解于第三溶剂中，加入氧化剂3将化合物c氧化为化合物d；再加入还原剂淬灭反应，静置分层，弃去水相，用水洗涤有机相，真空蒸馏除去有机相中的水分，降温结晶，过滤干燥，得固态化合物d。
[0024]
所述氧化剂3为活泼非金属(如氯气、溴素)、高价金属氧化物及其酸和盐(如氧化铬、铬酸、重铬酸钾、高锰酸钾)，过氧化物(如过氧化氢、过氧乙酸、过碳酸钠)、非金属氧化物的酸及盐(次氯酸、次氯酸钠、亚氯酸钠)中的任意一种；所述氧化剂3与化合物c的摩尔比为1～3:1；所述氧化反应温度为-15～20℃。
[0025]
作为本发明的另一种实施方式，步骤c中，固态化合物c也可经酶组分1氧化后提纯得到固态化合物d，其具体操作步骤如下：
[0026]
将固态化合物c溶解于第三溶剂中，加入酶组分1，在温度为20～40℃，溶液ph为6.0～8.0下，反应1～12h，氧化为化合物d；将反应液升温至70～75℃，搅拌2h，降温至30℃，盐酸调节溶液ph为4～4.5，过滤除酶，滤液静置分层，水相弃去，有机相中加入10％氢氧化钠溶液，调节溶液ph在8.0～8.5之间，真空蒸馏除去溶剂，盐酸调节溶液ph为3～4，过滤干燥得固态化合物d。
[0027]
所述酶组分1由烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸、丙酮酸钠、乳酸脱氢酶和7-α羟基类固醇脱氢酶组成，其中各组分的含量如下：
[0028]
所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸化合物c的重量比为2～5:1000；
[0029]
所述丙酮酸钠与化合物c的重量比为0.3～0.8:1；
[0030]
所述乳酸脱氢酶与化合物c的活力重量比为200～2000u:1g；
[0031]
所述α羟基类固醇脱氢酶与化合物c的活力重量比为300～1000u:1g。
[0032]
本发明步骤d中，固态化合物d经还原剂1还原后提纯得到固态化合物e的具体操作步骤如下：
[0033]
将固态化合物d溶解于第三溶剂中，加入还原剂1将化合物d还原为化合物e粗品；加入盐酸调节溶液ph至4～4.5，分层，水洗有机相，真空蒸馏至有晶体析出，降温过滤，干燥即可。
[0034]
所述还原剂1为为活泼金属(如锂、钠、钾)、活泼金属氢化物(如硼氢化钠、氢化铝锂)、非金属单质(如氢气)中的一种，所述还原剂4与化合物d的摩尔比为1～10:1，所述还原反应温度为10～105℃。
[0035]
作为本发明的另一种实施方式，步骤d中，固态化合物d也可经酶组分2还原后提纯得到固态化合物e，其具体操作步骤如下：
[0036]
将固态化合物d溶解于第三溶剂中，加入酶组分2，在温度为10～40℃，溶液ph为6.0～8.0的条件下，反应1～10h，将化合物d还原为化合物e；将反应液升温至70～75℃，搅拌2h，降温至30℃，盐酸调节溶液ph为4～4.5，过滤除酶，滤液静置分层，水相弃去，有机相中加入10％氢氧化钠溶液，调节溶液ph至8.0～8.5，真空蒸馏除去溶剂，盐酸调节溶液ph为3～4，过滤，干燥即可。
[0037]
所述酶组分2由烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸、l-苹果酸钠、苹果酸脱氢酶、7-β羟基类固醇脱氢酶组成，其中各组分的含量如下：
[0038]
所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸化合物d的重量比为2～5:1000；
[0039]
所述l-苹果酸钠与化合物d的重量比为0.5～1.0:1；
[0040]
所述苹果酸脱氢酶与化合物d的活力重量比为150～1800u:1g；
[0041]
所述7-β羟基类固醇脱氢酶与化合物d的活力重量比为200～3000u:1g。
[0042]
本发明中，所述盐酸为浓度为6m的的盐酸。
[0043]
如上所述的24-去甲熊去氧胆酸的合成方法，所述步骤a～c中淬灭用的还原剂包括但不限于亚硫酸钠，亚硫酸氢钠，连二亚硫酸钠(保险粉)，所述步骤a～c中使用的还原剂可选择同一种化合物也可分别选择不同的化合物。
[0044]
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
[0045]
本发明以海豹胆酸为起始原料，其原料价廉易得，减少了生产成本；
[0046]
本发明利用了脱羧反应中的产生的二氧化碳做为缓冲物质，通过微通道反应器加压防止二氧化碳溢出，解决了氧化脱羧反应选择性差的问题；
[0047]
本发明选用次氯酸，次溴酸作为氧化试剂，具有价廉易得，使用安全，绿色环保的优点；
[0048]
发明的方法反应条件温和，工艺简单，易于放大，反应选择性好，对环境友好，得到24-去甲熊去氧胆酸收率高、质量好，适合大量生产。
具体实施方式
[0049]
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。
[0050]
实施例1
[0051]
a.制备24-去甲基醛
[0052]
在500ml反应瓶中加入300ml乙酸丁酯，20g充分粉碎的海豹胆酸，得到的微浊液体与30ml的浓度1.5n的次氯酸钠在微混合器中混合后进入微通道反应器，微通道反应器温度为10℃，压力为0.2mpa，反应器使用1/16英寸的不锈钢管，反应器体积为1ml，反应时间为2～5min，以反应后取样测海豹胆酸残留小于0.5％为宜。反应液加入适量保险粉淬灭过量的次氯酸钠，静置分层，弃去水相；在乙酸丁酯相中加入400ml饱和碳酸氢钠溶液，搅拌30min，静置分层，弃去水相；乙酸丁酯相中再用400ml饱和碳酸氢钠溶液重复洗涤一次，弃去水相；将乙酸丁酯相真空蒸馏至馏出液断流，得到白色固体(24-去甲基醛)约18g。
[0053]
b.制备24-去甲基鹅去氧胆酸
[0054]
将24-去甲基醛18g全部溶解于360ml乙酸乙酯中，缓慢流加90ml浓度为10％的次氯酸钠溶液，次氯酸钠加完后继续搅拌反应1h，取样测底物残留为0.331％。静置分层，弃去水相；乙酸乙酯相中加入400ml饱和氯化钠溶液，搅拌30min，静置分层，弃去水相；乙酸乙酯
相中再加入400ml饱和氯化钠溶液重复洗涤一次，弃去水相。乙酸乙酯相真空蒸馏至馏出液断流，得到白色固体。白色固体重新溶解于乙酸乙酯中，柱层析分离，收集成分为24-去甲基鹅去氧胆酸的溶剂段，真空蒸馏至断流，得到24-去甲基鹅去氧胆酸约10g。
[0055]
c.制备24-去甲基-7-酮基石胆酸
[0056]
将上述24-去甲基鹅去氧胆酸溶解于200ml乙酸丁酯中，加入烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nadp)50mg、丙酮酸钠8g、乳酸脱氢酶(ldh)20000u、7-α羟基类固醇脱氢酶(7-αhsdh)10000u，反应6h，取样测24-去甲基鹅去氧胆酸残留为0.562％。反应液升温至70～75℃，搅拌2h，使反应液中的酶变性，降温至30℃,加入6m的盐酸5ml，调节溶液ph＝4.38，过滤除酶；滤液静置分层，水相弃去，有机相中加入10％氢氧化钠溶液12ml，调节溶液ph＝8.13，真空蒸馏除去溶剂，加入6m盐酸6.5ml调节溶液ph＝3.76，过滤，得到24-去甲基-7-酮基石胆酸约14.3g。
[0057]
d.制备24-去甲熊去氧胆酸
[0058]
将24-去甲基-7-酮基石胆酸全部溶解于200ml乙酸丁酯中，加入烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nadp)50mg，l-苹果酸钠10g、苹果酸脱氢酶(mdh)18000u、7-β羟基类固醇脱氢酶(7-βhsdh)30000u，反应3h，取样测24-去甲基-7-酮基石胆酸残留为0.047％。反应液升温至70～75℃，搅拌2h，使反应液中的酶变性，降温至30℃，加入6m盐酸5ml，调节溶液ph＝4.26，过滤除酶。滤液静置分层，水相弃去，有机相中加入10％氢氧化钠溶液12ml，调节溶液ph＝8.27，真空蒸馏除去溶剂，加入6m盐酸6.5ml调节溶液ph＝3.46，过滤，大量水洗涤滤饼至洗水ph为中性，干燥，得到24-去甲熊去氧胆酸约8.5g。
[0059]
实施例2
[0060]
a.制备24-去甲基醛
[0061]
在500ml反应瓶中加入200ml二氯甲烷，20g充分粉碎的海豹胆酸，得到的微浊液体与1.0n的次溴酸钠(由溴素和氢氧化钠制备)45ml，在微混合器中混合后进入微通道反应器，微通道反应器温度为10℃，压力为0.2mpa，反应器使用1/16英寸的不锈钢管，反应器体积为1ml，反应时间为2～5min，以反应后取样测海豹胆酸残留小于0.5％为宜。反应液加入适量保险粉淬灭过量的次溴酸钠，静置分层，弃去水相；二氯甲烷相中加入200ml饱和碳酸氢钠溶液，搅拌30min，静置分层，弃去水相；二氯甲烷相中再加入200ml饱和碳酸氢钠溶液按上述步骤重复洗涤一次，弃去水相。二氯甲烷相真空蒸馏至馏出液断流，得到白色固体(24-去甲基醛)约18.4g。
[0062]
b.制备24-去甲基鹅去氧胆酸
[0063]
将24-去甲基醛全部溶解于184ml甲苯中，缓慢流加15％的亚氯酸钠溶液40ml，亚氯酸钠加完后继续搅拌反应1h，取样测无底物残留。静置分层，弃去水相；甲苯相中加入200ml饱和氯化钠溶液，搅拌30min，静置分层，弃去水相；甲苯相中再加入200ml饱和氯化钠溶液按上述步骤重复洗涤一次，弃去水相；甲苯相真空蒸馏至馏出液断流，得到白色固体，将白色固体溶解于乙酸乙酯中，柱层析分离，收集成分为24-去甲基鹅去氧胆酸的溶剂段，真空蒸馏至断流，得到24-去甲基鹅去氧胆酸约10.3g。
[0064]
c.制备24-去甲基-7-酮基石胆酸
[0065]
将上述24-去甲基鹅去氧胆酸溶解于100ml正丁醇中，加入烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nadp)30mg、丙酮酸钠5g、乳酸脱氢酶(ldh)10000u、7-α羟基类固醇脱氢酶(7-αhsdh)
5000u，反应6h取样测24-去甲基鹅去氧胆酸残留为0.743％。反应液升温至70～75℃，搅拌2h，使反应液中的酶变性，降温至30℃,加入6m的盐酸5ml，调节溶液ph＝4.42，过滤除酶，滤液静置分层，水相弃去，有机相中加入10％氢氧化钠溶液12ml，调节溶液ph＝8.37之间，真空蒸馏除去溶剂，加入6m盐酸6.5ml调节溶液ph＝3.58，过滤，得到24-去甲基-7-酮基石胆酸约14.6g。
[0066]
d.制备24-去甲熊去氧胆酸
[0067]
将24-去甲基-7-酮基石胆酸溶解于100ml正丁醇中，加入烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nadp)30mg，l-苹果酸钠7g、苹果酸脱氢酶(mdh)9000u、7-β羟基类固醇脱氢酶(7-βhsdh)10000u，反应3h取样测24-去甲基-7-酮基石胆酸残留为0.321％。反应液升温至70～75℃，搅拌2h，使反应液中的酶变性，降温至30℃，加入6m盐酸5ml，调节溶液ph＝4.33，过滤除酶。滤液静置分层，水相弃去，有机相中加入10％氢氧化钠溶液12ml，调节溶液ph＝8.06，真空蒸馏除去溶剂，加入6m盐酸6.5ml调节溶液ph＝3.74，过滤，大量水洗涤滤饼至洗水ph中性，干燥，得到24-去甲熊去氧胆酸约8.7g。
[0068]
实施例3
[0069]
a.制备24-去甲基醛
[0070]
在500ml反应瓶中加入200ml丙酮，20g充分粉碎的海豹胆酸，得到的微浊液体与30ml浓度1.5n的次氯酸钠在微混合器中混合后进入微通道反应器，微通道反应器温度为10℃，压力为0.2mpa，反应器使用1/16英寸的不锈钢管，反应器体积为1ml，反应时间为2～5min，以反应后取样测海豹胆酸残留小于0.5％为宜。反应液加入适量保险粉淬灭过量的次氯酸钠，静置分层，弃去水相；丙酮相中加入200ml饱和碳酸氢钠溶液，搅拌30min，静置分层，弃去水相；丙酮相中再加入200ml饱和碳酸氢钠溶液按上述步骤重复洗涤一次，弃去水相。丙酮相真空蒸馏至馏出液断流，干燥得到白色固体(24-去甲基醛)约17.8g。
[0071]
b.制备24-去甲基鹅去氧胆酸
[0072]
将24-去甲基醛全部溶解于100ml甲基异丁基甲酮中，缓慢流加15％的高氯酸钠溶液35ml，高氯酸钠加完后继续搅拌反应1h，取样测无底物残留。静置分层，弃去水相；甲基异丁基甲酮相中加入100ml饱和氯化钠溶液，搅拌30min，静置分层，弃去水相；甲基异丁基甲酮相中再加入100ml饱和氯化钠溶液重复洗涤一次，弃去水相。甲基异丁基甲酮相真空蒸馏至馏出液断流，得到白色固体。将白色固体溶解于乙酸乙酯中，柱层析分离，收集成分为24-去甲基鹅去氧胆酸的溶剂段，真空蒸馏至断流，得到24-去甲基鹅去氧胆酸约9.6g。
[0073]
c.制备24-去甲基-7-酮基石胆酸
[0074]
24-去甲基鹅去氧胆酸溶解于50ml异戊醇中，加入烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nadp)20mg、丙酮酸钠3g、乳酸脱氢酶(ldh)5000u、7-α羟基类固醇脱氢酶(7-αhsdh)2000u，反应6h，取样测24-去甲基鹅去氧胆酸残留为0.876％。反应液升温至70～75℃，搅拌2h，使反应液中的酶变性，降温至30℃，加入6m的盐酸5ml，调节溶液ph＝4.47，过滤除酶。滤液静置分层，水相弃去，有机相中加入10％氢氧化钠溶液12ml，调节溶液ph＝8.26之间，真空蒸馏除去溶剂，加入6m盐酸6.5ml调节溶液ph＝3.74，过滤，得到24-去甲基-7-酮基石胆酸约13.8g。
[0075]
d.制备24-去甲熊去氧胆酸
[0076]
24-去甲基-7-酮基石胆酸溶解于50ml异戊醇中，加入烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸
(nadp)20mg，l-苹果酸钠5g、苹果酸脱氢酶(mdh)1500u、7-β羟基类固醇脱氢酶(7-βhsdh)2000u，反应3h，取样测24-去甲基-7-酮基石胆酸残留为0.685％。反应液升温至70～75℃，搅拌2h，使反应液中的酶变性，降温至30℃，加入6m盐酸5ml，调节溶液ph＝4.21，过滤除酶。滤液静置分层，水相弃去，有机相中加入10％氢氧化钠溶液12ml，调节溶液ph＝8.46，真空蒸馏除去溶剂，加入6m盐酸6.5ml调节溶液ph＝3.72，过滤，大量水洗涤滤饼至洗水ph中性，干燥，得到24-去甲熊去氧胆酸约8.2g。
[0077]
实施例4
[0078]
a.制备24-去甲基醛
[0079]
在500ml反应瓶中加入250ml叔戊醇，20g充分粉碎的海豹胆酸，得到的微浊液体与1.5n的次氯酸钠35ml在微混合器中混合后进入微通道反应器，微通道反应器温度为0℃压力为0.2mpa，反应器使用1/16英寸的不锈钢管，反应器体积为1ml，反应时间为2～5min，以反应后取样测海豹胆酸残留小于0.5％为宜。反应液加入适量保险粉淬灭过量的次氯酸钠，静置分层，弃去水相；叔戊醇相中加入300ml饱和碳酸氢钠溶液，搅拌30min，静置分层，弃去水相；叔戊醇相中再加入300ml饱和碳酸氢钠溶液按上述步骤重复洗涤一次，弃去水相。叔戊醇相真空蒸馏至馏出液断流，干燥得到白色固体(24-去甲基醛)约18.0g。
[0080]
b.制备24-去甲基鹅去氧胆酸
[0081]
将24-去甲基醛溶解于150ml叔戊醇中，缓慢流加15％的亚氯酸钠溶液35ml，亚氯酸钠加完后继续搅拌反应1h，取样测无底物残留。静置分层，弃去水相；叔戊醇相中加入100ml饱和氯化钠溶液，搅拌30min，静置分层，弃去水相；叔戊醇相中再加入100ml饱和氯化钠溶液重复洗涤一次，弃去水相。叔戊醇相真空蒸馏至馏出液断流，得到白色固体。将白色固体溶解于乙酸乙酯中，柱层析分离，收集成分为24-去甲基鹅去氧胆酸的溶剂段，真空蒸馏至断流，得到24-去甲基鹅去氧胆酸约9.8g。
[0082]
c.制备24-去甲基-7-酮基石胆酸
[0083]
24-去甲基鹅去氧胆酸溶解于100ml叔戊醇中，降温至-10℃，缓慢加入5g溴素，继续反应2h，取样测24-去甲基鹅去氧胆酸残留为1.586％，加入少量亚硫酸氢钠淬灭过量的溴素，静置分层，水相弃去，用200ml水洗涤有机相二次，水相弃去，有机相真空蒸馏除去有机相中的水分，降温至5℃，过滤，真空干燥得到24-去甲基-7-酮基石胆酸约8.5g。
[0084]
d.制备24-去甲熊去氧胆酸
[0085]
24-去甲基-7-酮基石胆酸溶解于100ml仲丁醇中，升温至100℃溶解，加入5g金属钠，维持回流反应2h，取样测24-去甲基-7-酮基石胆酸残留为0.132％；降温至35℃以下，加入6m盐酸45ml，测得溶液ph＝4.36，静置分层，弃去水相；仲丁醇相中加水200ml洗涤二次，水相弃去，有机相真空蒸馏，收集馏出液约65ml，溶液中有少量晶体析出，降温至0℃，过滤，干燥得到24-去甲熊去氧胆酸约6.7g。