1.本发明涉及一种利用组织工程皮肤进行药物敏感性测试的方法，属于生物医药技术领域。
背景技术：
2.皮肤癣菌对抗真菌的药物在研发过程中，需要进行敏感性测试，现有的测试方法一般有体外法和在体法两种；体外法是指如试管法等方式，通过试管以及相关仪器设备来测试药物的有效性，这种方式的缺点在于，不能全面的测试和掌握药物的特性；在体法是指如动物法等方式，以动物作为实验载体来测试药物的有效性，这种方式的缺点在于，动物与人体对药物的反应有差异，不能够精确反应药物的效果。
技术实现要素：
3.针对上述存在的技术问题，本发明的目的是：提出了一种利用组织工程皮肤进行药物敏感性测试的方法。
4.本发明的技术解决方案是这样实现的：一种利用组织工程皮肤进行药物敏感性测试的方法，包含以下步骤：
①
构建组织工程皮肤；
②
将受试药和对照药分别加入组织工程皮肤；
③
在组织工程皮肤表面进行皮肤癣菌接种；
④
在显微镜下观察皮肤癣菌侵染皮肤模型的情况；
⑤
统计数据。
5.优选的，所述的步骤
①
中，构建组织工程皮肤的过程如下：先配制组织工程皮肤培养液，然后制备纤维细胞培养层，再制备生物凝胶材料，将纤维细胞培养层与生物凝胶材料混合，得到生物细胞复合材料，在生物细胞复合材料中添加表皮细胞液进行培养，然后将组织工程皮肤培养液加入生物细胞复合材料中，培养得到成熟的组织工程皮肤。
6.优选的，所述的步骤
②
中，受试药分为a1、b1、c1三组加入组织工程皮肤，a1组受试药的浓度为x1，b1组受试药的浓度为y1，c1组受试药的浓度为z1，x1=（0.8~0.99）*y1，y1=（0.8~0.99）*z1。
7.优选的，所述的步骤
②
中，对照药分为a、b2、c2三组加入组织工程皮肤，a2组对照药的浓度为x2，b2组对照药的浓度为y2，c2组对照药的浓度为z2，x2=（0.8~0.99）*y2，y2=（0.8~0.99）*z2。
8.优选的，所述的步骤
③
中，皮肤癣菌为红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌或絮状表皮癣菌。
9.优选的，所述的步骤
④
中，分别在皮肤癣菌接种24h、48h和72h时，观察皮肤癣菌侵染皮肤模型的情况。
10.由于上述技术方案的运用，本发明与现有技术相比具有下列优点：本发明采用在组织工程皮肤上进行测试的方式，将受试药和对照药分别进行对比，可以直观的观察皮肤癣菌侵染皮肤模型的情况，弥补了抗皮肤癣菌药物药效学评价中试管法和动物法两种方法的缺点，获得更接近临床的药敏数据。
附图说明
11.附图1为本发明的红色毛癣菌感染的组织工程皮肤模型图；附图2为本发明的须癣毛癣菌感染的组织工程皮肤模型图。
具体实施方式
12.下面结合实施例和附图来说明本发明。
13.本发明所述的一种利用组织工程皮肤进行药物敏感性测试的方法，包含以下步骤：
①
构建组织工程皮肤；先配制组织工程皮肤培养液，然后制备纤维细胞培养层，再制备生物凝胶材料，将纤维细胞培养层与生物凝胶材料混合，得到生物细胞复合材料，在生物细胞复合材料中添加表皮细胞液进行培养，然后将组织工程皮肤培养液加入生物细胞复合材料中，培养得到成熟的组织工程皮肤。
14.②
不同药物（包括受试药和对照药）按不同浓度加入组织工程皮肤；受试药分为a1、b1、c1三组加入组织工程皮肤，a1组受试药的浓度为x1，b1组受试药的浓度为y1，c1组受试药的浓度为z1，x1=（0.8~0.99）*y1，y1=（0.8~0.99）*z1；对照药分为a、b2、c2三组加入组织工程皮肤，a2组对照药的浓度为x2，b2组对照药的浓度为y2，c2组对照药的浓度为z2，x2=（0.8~0.99）*y2，y2=（0.8~0.99）*z2。
15.③
在组织工程皮肤表面进行皮肤癣菌接种；皮肤癣菌为红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌或絮状表皮癣菌等。
16.④
分别在皮肤癣菌接种24h、48h和72h时，观察皮肤癣菌侵染皮肤模型的情况；
⑤
统计有关数据并得出结论。
17.其中，在一般情况下，在同一组测试药物中，受试药与对照药的浓度相同，即x1=x2，y1=y2，z1=z2。
18.作为一种实施方式，x1=0.85*y1，y1=0.9*z1，x2=0.85*y2，y2=0.9*z2。
19.作为第二种实施方式，x1=0.9*y1，y1=0.95*z1，x2=0.9*y2，y2=0.95*z2。
20.作为第二种实施方式，x1=0.95*y1，y1=0.85*z1，x2=0.95*y2，y2=0.85*z2。
21.上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。
技术特征：
1.一种利用组织工程皮肤进行药物敏感性测试的方法，其特征在于，包含以下步骤：
①
构建组织工程皮肤；
②
将受试药和对照药分别加入组织工程皮肤；
③
在组织工程皮肤表面进行皮肤癣菌接种；
④
在显微镜下观察皮肤癣菌侵染皮肤模型的情况；
⑤
统计数据。2.根据权利要求1所述的利用组织工程皮肤进行药物敏感性测试的方法，其特征在于：所述的步骤
①
中，构建组织工程皮肤的过程如下：先配制组织工程皮肤培养液，然后制备纤维细胞培养层，再制备生物凝胶材料，将纤维细胞培养层与生物凝胶材料混合，得到生物细胞复合材料，在生物细胞复合材料中添加表皮细胞液进行培养，然后将组织工程皮肤培养液加入生物细胞复合材料中，培养得到成熟的组织工程皮肤。3.根据权利要求1所述的利用组织工程皮肤进行药物敏感性测试的方法，其特征在于：所述的步骤
②
中，受试药分为a1、b1、c1三组加入组织工程皮肤，a1组受试药的浓度为x1，b1组受试药的浓度为y1，c1组受试药的浓度为z1，x1=（0.8~0.99）*y1，y1=（0.8~0.99）*z1。4.根据权利要求1所述的利用组织工程皮肤进行药物敏感性测试的方法，其特征在于：所述的步骤
②
中，对照药分为a、b2、c2三组加入组织工程皮肤，a2组对照药的浓度为x2，b2组对照药的浓度为y2，c2组对照药的浓度为z2，x2=（0.8~0.99）*y2，y2=（0.8~0.99）*z2。5.根据权利要求1所述的利用组织工程皮肤进行药物敏感性测试的方法，其特征在于：所述的步骤
③
中，皮肤癣菌为红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌或絮状表皮癣菌。6.根据权利要求1所述的利用组织工程皮肤进行药物敏感性测试的方法，其特征在于：所述的步骤
④
中，分别在皮肤癣菌接种24h、48h和72h时，观察皮肤癣菌侵染皮肤模型的情况。
技术总结
本发明公开了一种利用组织工程皮肤进行抗皮肤癣菌药物敏感性测试的方法，包含构建组织工程皮肤；将受试药和对照药分别加入组织工程皮肤；在组织工程皮肤表面进行皮肤癣菌接种；在显微镜下不同时间点观察皮肤癣菌侵染皮肤模型的情况；最后分析结果并确定最小保护浓度，相当于体外试验的最小抑菌浓度即MIC；本发明采用在组织工程皮肤上进行测试的方式，将受试药和对照药分别进行对比，可以直观地观察皮肤癣菌侵染皮肤模型的情况及药物保护、抗菌情况，弥补了抗皮肤癣菌药物药效学评价中试管法和动物法两种方法的缺点，获得更接近临床的药敏数据。敏数据。敏数据。
技术研发人员：刘维达 王琼 彭静雯
受保护的技术使用者：中国医学科学院皮肤病医院（中国医学科学院皮肤病研究所）
技术研发日：2021.09.15
技术公布日：2021/12/7
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