新型鹅星状病毒和鸭坦布苏病毒多重荧光定量PCR检测引物探针组、试剂盒及应用的制作方法

技术特征：
1.一种快速检测新型鹅星状病毒和鸭坦布苏病毒的多重引物和探针，其特征在于：包括鸭坦布苏病毒的上、下游引物、鸭坦布苏病毒特异性探针和新型鹅星状病毒的上、下游引物、新型鹅星状病毒特异性探针；所述鸭坦布苏病毒的上、下游引物分、鸭坦布苏病毒特异性探针为：上游引物：5
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ttgttgtccttgctgaaggc-3’(seq id no.1)；下游引物：5
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cattgggaggaccgaagagt-3’(seq id no.2)；鸭坦布苏病毒特异性探针：5
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ctgtcgcggcacgagctcgt-3’(seq id no.3)；所述新型鹅星状病毒的上、下游引物、新型鹅星状病毒特异性探针为：上游引物：5
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ctgcacaagttggttggaca-3’(seq id no.4)；下游引物：5
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catcataacgcgtccagtcc-3’(seq id no.5)；新型鹅星状病毒特异性探针：5
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acctgtcaccaccaccaatgagcc-3’(seq id no.6)。2.根据权利要求1所述的多重引物和探针，其特征在于：所述鸭坦布苏病毒特异性探针在5’端标记6-fam荧光基团，在3’端标记bhq1淬灭基团；所述新型鹅星状病毒特异性探针在5’端标记cy5荧光基团，在3’端标记bhq1淬灭基团。3.权利要求1或2所述的多重引物和探针在制备特异性多重检测鸭坦布苏病毒和新型鹅星状病毒试剂中的应用。4.一种用于检测新型鹅星状病毒和鸭坦布苏病毒的试剂盒，其特征在于，包括试剂2
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aceq qpcr probe master mix、mocl3、50
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rox reference dye 1和权利要求1或2所述的多重引物和探针。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述mocl3的浓度为2.0mmol-3.0mmol。6.一种用于新型鹅星状病毒和鸭坦布苏病毒多重荧光定量pcr的检测方法，其特征在于，配置多重pcr反应体系：检测样品cdna 1.0μl、2
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aceq qpcr probe master mix 10μl、浓度为10μm的新型鹅星状病毒上下游引物和浓度为10μm的鸭坦布苏病毒上下游引物各0.4μl、浓度为10μm的新型鹅星状病毒特异性探针和浓度为10μm的鸭坦布苏病毒探针各0.2μl、50
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rox reference dye 1 0.4μl和ddh2o 6.6μl。7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述多重荧光定量pcr的反应程序为：95℃预变性5min，95℃变性10s，60℃退火和延伸30s，40次循环，72℃终延伸7min，4℃保温。

技术总结
本发明属于病毒检测技术领域，尤其涉及新型鹅星状病毒(GoAstV)和鸭坦布苏病毒(DTMUV)多重荧光定量PCR检测引物探针组、试剂盒及应用。本申请中分别针对DTMUV的E基因与GoAstV的ORF1b基因，设计特异性引物和探针，经优化反应条件，建立了同一体系中同时检测DTMUV、GoAstV的荧光定量PCR方法。该方法具有特异、敏感、高效的优点。效的优点。效的优点。


技术研发人员：李海琴 杨群 张帆帆 谭美芳 康昭风 傅秋玲 曾艳兵 季华员 黄江南 傅光华 韦启鹏 黄瑜 谭佳 吴诚诚 方绍培
受保护的技术使用者：福建省农业科学院畜牧兽医研究所
技术研发日：2022.02.09
技术公布日：2022/3/22