一种四环素调控蛋白突变体基因及其在调控基因表达和环境检测中的应用的制作方法

技术特征：
1.一种四环素调控蛋白突变体基因，为四环素类抗生素诱导型操纵子基因，具有如seq id no：1所示的核苷酸序列。2.一种含有如权利要求1所述四环素调控蛋白突变体基因的重组载体，其特征在于，所述重组载体含有与所述的四环素类抗生素诱导型操纵子基因可操作性连接的标记基因，所述标记基因位于所述四环素类抗生素诱导型操纵子基因的下游。3.如权利要求2所述的重组载体，其特征在于，所述标记基因为绿色荧光蛋白表达基因。4.如权利要求2所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体的出发载体为psb1k3载体。5.如权利要求2～4任一所述重组载体作为四环素类抗生素诱导型生物传感器在检测四环素类抗生素含量中的应用。6.含有如权利要求2～4任一所述重组载体的工程菌作为四环素类抗生素诱导型生物传感器在检测四环素类抗生素含量中的应用。7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述四环素类抗生素为四环素、dox、地美环素、米诺环素、美他环素、土霉素、金霉素、替加环素。8.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述工程菌为含有所述重组载体的top10。9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，工程菌作为四环素类抗生素诱导型生物传感器检测四环素类抗生素含量的步骤如下：1)将工程菌先进行活化，然后接种于3ml含有卡那霉素抗性的lb液体培养基中，在37℃，200rpm下过夜培养，获得过夜菌液；2)将步骤1)的检测菌液以1：20接种于含有卡那霉素抗性的新鲜lb液体培养基中，37℃，200rpm扩大培养至对数生长期(od
600
＝0.4-0.6)，将四环素类抗生素标准液加入扩大菌液中，于37℃，200rpm下孵育1h，获得诱导菌液；3)将步骤2)的诱导菌液置于12000rpm下离心，上清收集，再用1
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pbs缓冲液漂洗上清，检测荧光表达情况，获得标准曲线；或将诱导菌液以200μl每孔加入96孔板中用酶标仪检测，获得荧光表达情况，得到标准曲线；4)将待测样的荧光值与标准曲线比较，计算获得待测样的四环素类抗生素含量。10.一种含有如权利要求1所述四环素类抗生素诱导型操纵子基因的基因表达调控系统，其特征在于，该调控系统含有由四环素类抗生素响应调控蛋白基因调控的启动子，可沉默下游目的基因表达，该目的基因位于四环素类抗生素诱导型启动子下游。

技术总结
一种四环素调控蛋白突变体基因及其在调控基因表达和环境检测中的应用，涉及基因工程全菌生物传感器及基因表达调控领域，四环素类抗生素诱导型操纵子基因具有如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。该四环素类抗生素诱导型操纵子是野生型四环素调控蛋白TetR的突变子，可直接用于四环素类抗生素诱导型生物传感器的优化构建，用于检测四环素类抗生素含量，检测限高，具有良好的专一性，并且可检测包含四环素在内的八种四环素类抗生素。该四环素类抗生素诱导型操纵子基因还可用于基因表达调控，其对Dox的响应性能提高，低浓度的Dox就可使下游基因表达沉默，尽可能降低药物处理对实验结果的影响，确保实验结果的准确性。确保实验结果的准确性。确保实验结果的准确性。


技术研发人员：吴李君 李顺兰 陈少鹏 陈东东 陶诗频 徐升敏 肖翔
受保护的技术使用者：皖南医学院
技术研发日：2021.12.04
技术公布日：2022/3/4