一种猪胆盐的生产方法与流程

1.本发明涉及胆盐生产技术领域，具体涉及一种猪胆盐的生产方法。


背景技术：

2.猪胆盐是猪的肝细胞分泌的胆汁酸类形成的钠盐，其主要用途为，添加在培养基中，作为革兰氏阳性菌的抑菌剂使用，同时能促进肠道菌群生长。
3.利用已提取胆红素钙盐后的粗胆酸生产猪胆盐，现有的，普遍的生产工艺为纯化学法。其化学工艺为：取已提取胆红素钙盐的粗胆酸适量研碎，加9倍量的水及1.5倍量工业氢氧化钠，煮沸皂化8小时以上，使粗胆酸中的胆汁酸、脂肪、蛋白及磷脂等水解完全，冷却后，过滤，弃去少量不溶物残渣。再脱色、酸化、形成钠盐、浓缩干燥，研碎，得呈淡黄色粉末的猪胆盐产品。纯化学工艺关键在于水解程度是否彻底，水解工艺具有反应条件剧烈、耗时长，能耗高的特点，后续生产工艺中有油脂不易去除、色深色泽差、工艺复杂等特点。


技术实现要素：

4.为解决上述背景技术中提到的问题，本发明提供一种猪胆盐的生产工艺方法。通过自制水解酶，运用此种酶水解粗胆酸生产猪胆盐，能解决现有工艺中反应条件剧烈、耗时长，能耗高的缺点，通过后段工艺改进，能解决油脂不易去除、色深色泽差、工艺复杂等弊端。
5.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
6.(一)制备专用水解酶，具体步骤如下：
7.(1)菌株选取及制备菌种液：选取我公司在做胆汁下料生物转化时发现的，对猪胆汁有水解作用的细菌atcc17666，它是杆菌，革兰氏阴性菌，已甘油管保存。转接传代制作菌种液；
8.(2)制备发酵培养基：取牛肉膏0.5％、蛋白胨1％、氯化钠0.5％、乳糖0.5％、磷酸氢二钾0.1％、水，制成培养基；氨水调节ph＝7.0-7.5,于121℃，30分钟灭菌，冷却至60℃加入1.25％无菌卡那霉素标记溶液；
9.(3)发酵：待发酵罐内培养基降温至37℃，校准do电极，ph调整至7.0-7.5，无菌接入菌种液，通过发酵罐控制系统，平稳发酵至菌浓9-11％、发酵罐中的菌体代谢缓慢，酶活不再增加时，结束发酵；
10.(4)水解酶的提取：将发酵液细胞破碎仪破碎，离心，后收集上清，硫酸铵盐析，搅拌，再离心收集酶泥，放冷库-20℃以下保存备用；
11.(5)水解酶的检测：在特定温度35-37℃，ph5.7-5.9范围，以粗胆酸为底物，1min水解粗胆酸生产1umolcdca所需的酶量，定义为1个酶活单位(u)；通过液相示差定量测含量，计算水解酶的酶活量；
12.(二)酶水解：称取一定量的粗胆酸，加入10倍粗胆酸的水，用氢氧化钠水调节ph至5.7-5.9，控制温度35-37℃，加入物料0.5％的水解酶水解1小时，液相检测水解达95％以上
停止水解；
13.(三)调节ph值、脱油：将上述步骤(二)中的水解液调节ph至10以上，过滤后取清液，加入粗胆酸300％的石油醚，45-50℃搅拌萃取脱油，静置后分液得水相；
14.(四)脱色：将上述步骤(三)中脱油后的水相液，加入粗胆酸10％的活性碳，控制温度70-75℃搅拌30分钟以上脱色；
15.(五)浓缩干燥粉碎：将上述步骤(四)中的脱色液过滤后取清液，浓缩至流态膏状后，放于100-130℃烘箱中，干燥至干燥失重5％以下，粉碎成末，包装即可。
16.与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
17.通过选用已用菌株自行发酵生产水解酶，能将猪胆提取胆红素以后的下料粗胆酸水解彻底完全，并进一步生产猪胆盐。此工艺生产猪胆盐，生产工艺简单、耗时短、条件温和、能耗低，对环境友好，容易实现。此工艺生产的猪胆盐在bglb培养基和肠道菌筛选培养基上，微生物效果特征明显，比现有技术生产的猪胆盐制作培养基的微生物效果明显。
具体实施方式
18.下面结合具体实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
19.实施例1：
20.(一)制备专用水解酶，具体步骤如下：
21.(1)菌株选取及制备菌种液：选取我公司在做胆汁下料生物转化菌株筛菌时发现的，对猪胆汁有水解作用的细菌atcc17666，它是杆菌，革兰氏阴性菌，保存于甘油管；制备菌种用培养基200ml,配比为牛肉膏0.5％、蛋白胨1％、氯化钠0.5％、乳糖0.5％、磷酸氢二钾0.1％，无菌水；接菌后35℃培养18-22小时，取样检测合格后，放于4℃冰箱备用；
22.(2)制备发酵培养基：取牛肉膏0.5％、蛋白胨1％、氯化钠0.5％、乳糖0.5％、磷酸氢二钾0.1％、水，制成液体培养基12l；盐酸或氨水调节ph＝7.0-7.5,于121℃，30分钟灭菌，冷却至60℃无菌操作加入1.25％无菌卡那霉素标记溶液，使体系浓度达到50ug/ml(100ml培养基加入0.4ml1.25％无菌卡那霉素)，冷却至40℃后待用；
23.(3)发酵：发酵罐内培养基降温至37℃，ph调整至7.0，无菌接菌，通过发酵罐控制系统，控制发酵参数为：空气流量：1vvm；搅拌：开始搅拌速度较小，当do低于30％，适度逐步提高搅拌，保证溶氧在30％以上；压力：0.01-0.05mpa；温度：35-37℃；ph：不需调整；取样：接种后取样，检测ph和菌浓；在培养过程中每小时记录时间、周期、温度、ph、流量、转速、罐压、体积、溶氧及镜检情况，接种后4小时开始取样，检测ph、菌浓、镜检；平稳发酵至菌浓9-11％、发酵罐中的菌体代谢缓慢，酶活不再增加时，结束发酵；
24.(4)水解酶的提取：将发酵料超声波破碎，离心，收集上清，30％硫酸铵盐析，搅拌，再离心收集酶泥，放冷库-20℃以下保存备用；
25.(5)水解酶的检测：在特定温度35-37℃，ph5.7-5.9范围，以粗胆酸为底物，1min水解粗胆酸生产1umolcdca所需的酶量，定义为1个酶活单位(u)；通过液相示差定量测含量，计算水解酶的酶活量；
26.(二)酶水解：称取一定量的粗胆酸，加入10倍粗胆酸的水，用氢氧化钠水调节ph至5.7-5.9，控制温度35-37℃，加入物料0.5％的水解酶水解1小时，液相检测水解达95％以上
停止水解；
27.(三)调节ph值、脱油：将上述步骤(二)中的水解液调节ph至10以上，过滤后取清液，加入粗胆酸300％的石油醚，45-50℃搅拌萃取脱油，静置后分液得水相；
28.(四)脱色：将上述步骤(三)中脱油后的水相液，加入粗胆酸10％的活性碳，控制温度70-75℃搅拌30分钟以上脱色；
29.(五)浓缩干燥粉碎：将上述步骤(四)中的脱色液过滤后取清液，浓缩至流态膏状后，放于100-130℃烘箱中干燥至干燥失重5％以下，粉碎成末，包装即可。
30.对于本领域技术人员而言，本发明不限于上述示例性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或范围的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，本发明的实施例是示例性的，而且是非限制性的。本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附件视为限制所涉及的权利要求。