结合在神经自身免疫疾病中靶向中枢神经系统的自身抗体的嵌合自身抗体受体(CAAR)的制作方法

技术特征：
1.一种编码嵌合自身抗体受体(caar)的核酸分子，所述核酸分子包含：i.编码自身抗原或其片段的序列，所述自身抗原或其片段结合与主要靶向中枢神经系统的神经自身免疫疾病相关的自身抗体，ii.编码跨膜结构域的序列，和iii.编码细胞内信号传导结构域的序列。2.根据权利要求1所述的核酸分子，其中，由核酸序列编码的所述自身抗原在自身免疫性脑病或脑脊髓病中与自身抗体结合。3.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中，由核酸序列编码的所述自身抗原在抗n-甲基-d-天冬氨酸受体脑炎(抗nmdar脑炎)中与自身抗体结合。4.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中，由核酸序列编码的所述自身抗原包含以下或由以下组成：n-甲基-d-天冬氨酸受体(nmdar)或一个或多个nmdar片段。5.根据前一项权利要求所述的核酸分子，其中，由核酸序列编码的所述自身抗原包含以下或由以下组成：nmda受体的nr1亚基或其一个或多个片段。6.根据前一项权利要求所述的核酸分子，其中，由核酸序列编码的所述自身抗原包含以下或由以下组成：nmda受体的氨基末端结构域(atd)和/或s1结构域和/或s2结构域或其一个或多个片段，以及任选的定位于所述结构域或其片段之间的接头或间隔子。7.根据权利要求1或2中任一项所述的核酸分子，其中，由核酸序列编码的所述自身抗原包含以下或由以下组成：选自由富亮氨酸胶质瘤失活1(lgi1)、α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异噁唑丙酸受体(ampar)、含ig样结构域蛋白5(iglon5)、代谢型谷氨酸受体5(mglur5)、谷氨酸脱羧酶(gad)、接触蛋白相关蛋白样2(caspr2)、γ-氨基丁酸(gaba)受体诸如gaba-a和/或gaba-b、髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(mog)和水通道蛋白4(aqp4)或其一个或多个片段组成的组的蛋白质。8.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子：-其中所述跨膜结构域是cd28、icos或cd8α跨膜结构域；-其中所述细胞内结构域包含cd28、icos或cd137(4-1bb)共刺激结构域；-其中所述细胞内结构域包含cd3ζ链信号传导结构域；和/或-其中所述核酸分子额外地包含编码定位于所述自身抗原和跨膜结构域之间、和/或定位于所述自身抗原的n-末端和/或所述自身抗原的片段之间、和/或定位于所述跨膜结构域和细胞内共刺激结构域之间的一个或多个前导多肽、接头多肽和/或间隔多肽的一个或多个序列。9.根据前述权利要求中任一项所述的编码嵌合自身抗体受体(caar)的核酸分子，包含：i.编码前导多肽的序列，其中所述前导多肽是cd8前导多肽或nr1前导多肽，所述序列优选地分别包含根据seq id no 1或seq id no 2的序列；ii.编码自身抗原的序列，其中所述自身抗原是n-甲基-d-天冬氨酸受体(nmdar)或一个或多个nmdar片段，所述序列优选地包含根据seq id no 3(atd)和/或seq id no 4(s1)和/或seq id no 5(s2)和/或seq id no 6(nr1)的序列或编码nmdarnr1蛋白的自身抗原片段的seq id no 6的任何亚序列；iii.任选的编码定位于一个或多个nmdar片段之间的接头多肽的序列，所述序列优选
地包含根据ggcacc(接头-1)的序列；iv.任选的编码定位于所述自身抗原和跨膜结构域之间的接头多肽的序列，所述序列优选地包含根据seq id no 7(接头-2)或seq id no 32(接头-2b)的序列；v.编码cd8α跨膜结构域或icos跨膜结构域的序列，所述序列优选地包含根据seq id no 8(cd8α)或seq id no 9(icos)的序列；vi.任选的编码定位于跨膜结构域和细胞内信号传导结构域之间的接头多肽的序列，所述序列优选地包含根据ggcagc(接头-3)的序列；和/或vii.编码细胞内信号传导结构域的序列，所述细胞内信号传导结构域包含cd137(4-1bb)共刺激结构域和cd3ζ链信号传导结构域，所述序列优选地分别包含根据seq id no 10(cd137)和seq id no 11(cd3z)的序列，其中任选地接头序列定位在所述共刺激结构域和信号传导结构域之间。10.一种包含根据前述权利要求中任一项所述的编码嵌合自身抗体受体(caar)的核酸分子的载体，其中所述载体优选地是病毒载体，诸如慢病毒载体、逆转录病毒载体、作为转染载体的纳米颗粒、转座子或rna载体。11.一种由根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子编码的嵌合自身抗体受体(caar)多肽，包含：-自身抗原，所述自身抗原结合与主要靶向中枢神经系统的神经自身免疫疾病相关的自身抗体，所述自身抗原优选地为根据权利要求4至7中的一项或多项所述的自身抗原，-跨膜结构域，和-细胞内信号传导结构域。12.根据前一项权利要求所述的嵌合自身抗体受体(caar)多肽，包含根据seq id no 28(atd-s1-s2)或seq id no 29(atd-s1)或seq id no 30(atd)或seq id no 31(atd-icos)的序列。13.一种基因修饰的免疫细胞，所述基因修饰的免疫细胞包含根据权利要求1至9中任一项所述的核酸分子或根据权利要求10所述的载体，和/或表达根据权利要求11-12所述的caar。14.根据前一项权利要求所述的基因修饰的免疫细胞，其中，所述免疫细胞选自由t细胞、nk细胞、巨噬细胞或树突细胞组成的组，其中t淋巴细胞优选地是cd8 和/或cd4 细胞毒性t淋巴细胞或其混合物。15.根据权利要求13-14中任一项所述的免疫细胞，用于治疗或预防主要靶向中枢神经系统的神经自身免疫疾病诸如自身免疫性脑病或脑脊髓病的用途。16.根据前一项权利要求所述的用作药物的免疫细胞，其中，所述自身免疫疾病是与针对n-甲基-d-天冬氨酸受体(nmdar)的自身抗体相关的医学病症，优选地所述医学病症是抗nmdar脑炎。

技术总结
本发明涉及能够将免疫细胞靶向至产生自身抗体的B细胞的嵌合自身抗体受体(CAAR)。该CAAR包含自身抗原或其片段，所述自身抗原或其片段结合与主要靶向中枢神经系统的神经自身免疫疾病相关的自身抗体。本发明涉及编码嵌合自身抗体受体(CAAR)的核酸分子，该核酸分子包含：编码自身抗原或其片段的序列，所述自身抗原或其片段结合与主要靶向中枢神经系统的神经自身免疫疾病相关的自身抗体；编码跨膜结构域的序列；以及编码细胞内信号传导结构域的序列。在一种实施方式中，由该核酸序列编码的自身抗原包含以下或由以下组成：N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)或一个或多个NMDAR片段。本发明进一步涉及本发明的嵌合自身抗体受体(CAAR)蛋白质、包含编码本发明的嵌合自身抗体受体(CAAR)的核酸分子的载体、包含编码CAAR的核酸分子的基因修饰的免疫细胞以及该免疫细胞在治疗或预防主要靶向中枢神经系统的神经自身免疫疾病中的用途，所述神经自身免疫疾病诸如自身免疫性脑病或脑脊髓病，优选地为抗NMDAR脑炎。NMDAR脑炎。


技术研发人员：哈拉尔德
受保护的技术使用者：马克思-德布鲁克-分子医学中心亥姆霍兹联合会
技术研发日：2020.06.05
技术公布日：2022/2/7