整合应激反应路径的调节剂
1.本发明涉及式(i)化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、互变异构体或立体异构体，其中r1至r3、a1和a2具有如说明书和权利要求中所示的含义。本发明进一步涉及包含所述化合物的药物组合物、它们作为药物的用途以及在用于治疗和预防与整合应激反应相关的一种或多种疾病或病症的方法中的用途。
2.整合应激反应(isr)是所有真核生物共有的细胞应激反应(1)。isr信号传导的调节异常具有重要的病理后果，尤其与炎症、病毒感染、糖尿病、癌症和神经退行性疾病有关。
3.isr是不同类型的细胞应激的共同特征，导致丝氨酸51上真核翻译起始因子2 (eif2α)的α亚基的磷酸化，导致正常蛋白合成的抑制和应激反应基因的表达(2)。在哺乳动物细胞中，磷酸化由四种eif2α激酶的家族进行，即：pkr-样er激酶(perk)、双链rna-依赖性蛋白激酶(pkr)、血红素-调节的eif2α激酶(hri)和总控不可抑制激酶2(general control non-derepressible 2 ) (gcn2)，其各自响应于不同的环境和生理应激(3)。
4.eif2α与eif2β和eif2γ一起形成eif2复合物，正常mrna翻译起始的关键参与者(4)。eif2复合物结合gtp和met-trnai，形成三元复合物(eif2-gtp-met-trnai)，其由核糖体募集用于翻译起始(5, 6)。
5.eif2b是一种异十聚体复合物，其由5个亚基(α、β、γ、δ、ε)组成，所述亚基一式两份形成gef-活性十聚体(7)。
6.响应于isr活化，磷酸化的eif2α抑制eif2b-介导的gdp交换为gtp，导致三元复合物形成减少，且因此导致抑制特征在于与5' aug起始密码子结合的核糖体的正常mrna的翻译(8)。在降低的三元复合物丰度的这些条件下，包括编码转录因子atf4的mrna在内的几种特定mrna的翻译经由涉及上游orf (uorf)的改变的翻译的机制被活化(7, 9, 10)。这些mrna通常含有一个或多个uorf，所述uorf通常在未受应激的细胞中发挥功能，以限制核糖体向主要编码orf的流动。例如，在正常条件期间，atf的5' utr中的uorf占据核糖体并阻止atf4的编码序列的翻译。然而，在应激条件期间，即在三元复合物形成减少的条件下，核糖体扫描通过这些上游orf并在编码orf的atf4处引发翻译的可能性增加。atf4和以这种方式表达的其它应激反应因子随后控制一系列进一步应激反应基因的表达。急性期在于旨在恢复体内平衡的蛋白的表达，而慢性期导致促凋亡因子的表达(1, 11, 12, 13)。
7.isr信号传导的标志物的上调已在各种病况(包括癌症和神经退行性疾病)中得到证实。在癌症中，er应激-调节的翻译增加对缺氧条件的耐受性并促进肿瘤生长(14, 15, 16)，并且已经显示通过基因靶向缺失perk减缓源自转化的perk-/-小鼠胚胎成纤维细胞的
肿瘤的生长(14, 17)。此外，最近的报告已提供了如下的概念证据：使用在小鼠中的源自患者的异种移植模型，eif2b活化剂有效治疗一种形式的侵袭性转移性前列腺癌(28)。总之，细胞保护性isr信号传导的预防可能代表一种有效的抗增殖策略，用于治疗至少一些形式的癌症。
8.此外，isr信号传导的调节可以证明在保持突触功能和减少神经元衰退中是有效的，在特征在于错误折叠蛋白和未折叠蛋白反应(upr)活化的神经退行性疾病(如肌萎缩侧索硬化症(als)、额颞叶痴呆(ftd)、阿尔茨海默氏病(ad)、帕金森氏病(pd)和jakob creutzfeld(朊病毒)病)中也是如此(18, 19, 20)。以朊病毒病作为存在的神经退行性疾病的实例，其中已显示isr信号传导的药理学以及遗传抑制可以使蛋白翻译水平正常化、挽救突触功能并防止神经元丢失(21)。具体地，通过控制磷酸化eif2α水平的磷酸酶的过表达来降低磷酸化eif2α的水平，增加了感染朊病毒的小鼠的存活率，而持续的eif2α磷酸化降低了存活率(22)。
9.此外，控制蛋白表达水平对于正常脑功能的重要性的直接证据以影响eif2和eif2b的功能的罕见遗传疾病的形式存在。破坏eif2的复杂完整性且因此导致降低的正常蛋白表达水平的eif2γ中的突变与智力障碍综合征(id)相关(23)。eif2b的亚基中的部分功能丧失突变已被显示是罕见的脑白质营养不良白质消融性疾病(vwmd)的原因(24, 25)。具体地，通过与isrib相关的小分子在vwmd小鼠模型中稳定eif2b部分功能丧失已被显示减少isr标记物并改善功能以及病理学终点(26, 27)。
10.eif2α路径的调节剂描述于wo 2014/144952 a2中。wo 2017/193030 a1、wo 2017/193034 a1、wo 2017/193041 a1和wo 2017/193063 a1描述了整合应激路径的调节剂。wo 2017/212423 a1、wo 2017/212425 a1、wo 2018/225093 a1、wo 2019/008506 a1和wo 2019/008507 a1描述了atf4路径的抑制剂。wo 2019/032743 a1和wo 2019/046779 a1涉及真核起始因子2b调节剂。
11.描述整合应激路径的调节剂的另外的文献是wo 2019/090069 a1、 wo 2019/090074 a1、 wo 2019/090076 a1、 wo 2019/090078 a1、 wo 2019/090081 a1、wo 2019/090082 a1、wo 2019/090085 a1、 wo 2019/090088 a1、 wo 2019/090090 a1。真核起始因子的调节剂描述于wo 2019/183589 a1中。wo 2019/118785 a2描述了整合应激反应路径的抑制剂。作为atf4抑制剂的杂芳基衍生物描述于wo 2019/193540 a1中。作为atf4抑制剂的双环芳族环衍生物描述于wo 2019/193541 a1中。
12.然而，仍然需要可用作整合应激反应路径调节剂的具有良好药代动力学特性的新化合物。
13.因此，本发明的目的是提供一类新的作为整合应激反应路径的调节剂的化合物，其可有效治疗整合应激反应路径相关的疾病并且可显示改善的药学相关特性，包括活性、选择性、admet特性和/或减少的副作用。
14.因此，本发明提供了式(i)的化合物
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、互变异构体或立体异构体，其中a1是c5亚环烷基、c5亚环烯基或含氮环原子的5-元亚杂环基（heterocyclene），其中a1任选地被一个或多个相同或不同的r4取代；每个r4独立地是卤素；cn；or5；氧代(=o)，其中环至少部分饱和；或c
1-6
烷基，其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；r5是h或c
1-6
烷基，其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；a2是苯基或5-至6-元芳族杂环基，优选地是苯基或6-元芳族杂环基，其中a2任选地被一个或多个相同或不同的r6取代；每个r6独立地是oh、o(c
1-6
烷基)、卤素、cn、环丙基、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基或c
2-6
炔基，其中环丙基、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；或者两个r6与它们所连接的原子连接在一起以形成环a
2a
；a
2a
是苯基；c
3-7
环烷基；或3至7元杂环基，其中a
2a
任选地被一个或多个相同或不同的r7取代；每个r7独立地是c
1-6
烷基、c
2-6
烯基或c
2-6
炔基，其中c
1-6
烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；r1是h或c
1-4
烷基，优选地是h，其中c
1-4
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；r2是h或c
1-4
烷基，其中c
1-4
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；且r3是a3；或者r2和r3连接以形成3,4-二氢-2h-1-苯并吡喃环，其任选地被一个或多个相同或不同的r8取代；a3是苯基或5-至6-元芳族杂环基，优选地是苯基或6-元芳族杂环基，其中a3任选地被一个或多个相同或不同的r8取代；每个r8独立地是卤素、cn、c(o)or9、or9、c(o)r9、c(o)n(r9r
9a
)、s(o)2n(r9r
9a
)、s(o)n(r9r
9a
)、s(o)2r9、s(o)r9、n(r9)s(o)2n(r
9ar9b
)、sr9、n(r9r
9a
)、no2、oc(o)r9、n(r9)c(o)r
9a
、n(r9)s(o)2r
9a
、n(r9)s(o)r
9a
、n(r9)c(o)or
9a
、n(r9)c(o)n(r
9ar9b
)、oc(o)n(r9r
9a
)、氧代(=o)(其中环至少部分饱和)、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基或c
2-6
炔基，其中c
1-6
烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基任选地被一个或多个相同或不同的r
10
取代；r9、r
9a
、r
9b
独立地选自h、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基，其中c
1-6
烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；每个r
10
独立地是卤素、cn、c(o)or
11
、or
11
、c(o)r
11
、c(o)n(r
11r11a
)、s(o)2n(r
11r11a
)、s(o)n(r
11r11a
)、s(o)2r
11
、s(o)r
11
、n(r
11
)s(o)2n(r
11ar11b
)、sr
11
、n(r
11r11a
)、no2、oc
(o)r
11
、n(r
11
)c(o)r
11a
、n(r
11
)so2r
11a
、n(r
11
)s(o)r
11a
、n(r
11
)c(o)n(r
11ar11b
)、n(r
11
)c(o)or
11a
或oc(o)n(r
11r11a
)；r
11
、r
11a
、r
11b
独立地选自h、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基，其中c
1-6
烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代。
15.在变量或取代基可以选自一组不同的变体的情况下，并且此类变量或取代基出现多于一次，则各个变体可以相同或不同。
16.在本发明的含义内，使用如下术语：术语“任选取代的”意指未取代的或取代的。通常-但不限于-，“一个或多个取代基”意指一个、两个或三个取代基，优选一个或两个取代基，且更优选一个取代基。通常，这些取代基可以相同或不同。
[0017]“烷基”意指直链或支链烃链。烷基碳的每个氢可以被进一步指定的取代基替代。
[0018]“烯基”意指含有至少一个碳-碳双键的直链或支链烃链。烯基碳的每个氢可以被进一步指定的取代基替代。
[0019]“炔基”意指含有至少一个碳-碳三键的直链或支链烃链。炔基碳的每个氢可以被进一步指定的取代基替代。
[0020]“c
1-4
烷基”意指具有1-4个碳原子的烷基链，如果在分子的末端出现，例如是：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基，或者，当分子的两个部分通过该烷基连接时，例如是，-ch
2-、-ch
2-ch
2-、-ch(ch3)-、-ch
2-ch
2-ch
2-、-ch(c2h5)-、-c(ch3)
2-。c
1-4
烷基碳的每个氢可以被进一步指定的取代基替代。
[0021]“c
1-6
烷基”意指具有1-6个碳原子的烷基链，如果在分子的末端出现，例如是：c
1-4
烷基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基，或者，当分子的两个部分通过该烷基连接时，例如是，-ch
2-、-ch
2-ch
2-、-ch(ch3)-、-ch
2-ch
2-ch
2-、-ch(c2h5)-、-c(ch3)
2-。c
1-6
烷基碳的每个氢可以被进一步指定的取代基替代。
[0022]“c
2-6
烯基”意指具有2至6个碳原子的烯基链，如果在分子的末端出现，例如是：-ch=ch2、-ch=ch-ch3、-ch
2-ch=ch2、-ch=ch-ch
2-ch3、-ch=ch-ch=ch2，或者，当分子的两个部分通过该烯基连接时，例如是，-ch=ch-。c
2-6
烯基碳的每个氢可以被进一步指定的取代基替代。
[0023]“c
2-6
炔基”意指具有2至6个碳原子的炔基链，如果在分子的末端出现，例如是：-c≡ch、-ch
2-c≡ch、-ch
2-ch
2-c≡ch、-ch
2-c≡c-ch3，或者，当分子的两个部分通过该炔基连接时，例如是，-c≡c-。c
2-6
炔基碳的每个氢可以被进一步指定的取代基替代。
[0024]“c
3-7
环烷基”或“c
3-7
环烷基环”意指具有3-7碳原子的环状烷基链，例如，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己烯基、环庚基。优选，环烷基是指环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基。环烷基碳的每个氢可以被本文进一步指定的取代基替代。术语“c
3-5
环烷基”或“c
3-5
环烷基环”相应地定义。
[0025]“c5亚环烷基”是指具有五个碳原子的二价环烷基，即二价环戊基环。
[0026]“c5亚环烯基”是指二价亚环烯基，即二价环戊烯或环戊二烯。
[0027]“卤素”意指氟、氯、溴或碘。通常优选卤素是氟或氯。
[0028]“3至7元杂环基”或“3至7元杂环”意指具有3、4、5、6或7个环原子的环，其可以含有高达最大数量的双键(完全、部分或不饱和的芳族或非芳族环)，其中，至少一个环原子直至
4个环原子被选自硫(包括-s(o)-、-s(o)
2-)、氧和氮(包括=n(o)-)的杂原子替代，且其中所述环经由碳或氮原子与分子的其余部分连接。3至7元杂环的实例是：氮杂环丙烷、氮杂环丁烷、氧杂环丁烷、硫杂环丁烷、呋喃、噻吩、吡咯、吡咯啉、咪唑、咪唑啉、吡唑、吡唑啉、噁唑、噁唑啉、异噁唑、异噁唑啉、噻唑、噻唑啉、异噻唑、异噻唑啉、噻二唑、噻二唑啉、四氢呋喃、四氢噻吩、吡咯烷、咪唑烷、吡唑烷、噁唑烷、异噁唑烷、噻唑烷、异噻唑烷、噻二唑烷、环丁砜、吡喃、二氢吡喃、四氢吡喃、咪唑烷、吡啶、哒嗪、吡嗪、嘧啶、哌嗪、哌啶、吗啉、四唑、三唑、三唑烷、四唑烷、二氮杂环庚烷、氮杂
䓬
或高哌嗪。术语“5至6元杂环基”或“5至6元杂环”相应地定义。术语“5元杂环基”或“5元杂环”相应地定义并且包括5元芳族杂环基或杂环。
[0029]
术语“含氮环原子的5-元亚杂环基”是指二价5-元杂环，其中五个环原子中的至少一个是氮原子并且其中该环经由碳或氮原子与分子的其余部分连接。
[0030]“饱和的4至7元杂环基”或“饱和的4至7元杂环”意指完全饱和的“4至7元杂环基”或“4至7元杂环”。
[0031]“4至7元至少部分饱和的杂环基”或“4至7元至少部分饱和的杂环”意指至少部分饱和的“4至7元杂环基”或“4至7元杂环”。
[0032]“5至6元芳族杂环基”或“5至6元芳族杂环”意指衍生自环戊二烯基或苯的杂环，其中至少一个碳原子被选自硫(包括-s(o)-、-s(o)
2-)、氧和氮(包括=n(o)-)的杂原子替代。此类杂环的实例是呋喃、噻吩、吡咯、咪唑、吡唑、噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、噻二唑、三唑、四唑、吡啶、嘧啶、哒嗪、吡嗪、三嗪。
[0033]“5元芳族杂环基”或“5元芳族杂环”意指衍生自环戊二烯基的杂环，其中至少一个碳原子被选自硫(包括-s(o)-、-s(o)
2-)、氧和氮(包括=n(o)-)的杂原子替代。此类杂环的实例是呋喃、噻吩、吡咯、咪唑、吡唑、噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、噻二唑、三唑、四唑。
[0034]“7至12元杂双环基”或“7至12元杂双环”意指具有7至12个环原子的两个环的杂环体系，其中，两个环共享至少一个环原子，并且可以含有高达最大数量的双键(完全、部分或不饱和的芳族或非芳族环)，其中至少一个环原子至6个环原子被选自硫(包括-s(o)-、-s(o)
2-)、氧和氮(包括=n(o)-)的杂原子替代，且其中所述环经由碳或氮原子与分子的其余部分连接。7至12元杂双环的实例是吲哚、二氢吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并噁唑、苯并异噁唑、苯并噻唑、苯并异噻唑、苯并咪唑、苯并咪唑啉、喹啉、喹唑啉、二氢喹唑啉、喹啉、二氢喹啉、四氢喹啉、十氢喹啉、异喹啉、十氢异喹啉、四氢异喹啉、二氢异喹啉、苯并氮杂
䓬
、嘌呤或蝶啶。术语7至12元杂双环还包括两个环的螺结构，如6-氧杂-2-氮杂螺[3,4]辛烷、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚-6-基或2,6-二氮杂螺[3.3]庚-6-基，或桥接杂环，如8-氮杂-双环[3.2.1]辛烷或2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛-2-基或3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷。
[0035]“饱和的7至12元杂双环基”或“饱和的7至12元杂双环”意指完全饱和的7至12元杂双环基或7至12元杂双环。
[0036]“7至12元至少部分饱和的杂双环基”或“7至12元至少部分饱和的杂双环”意指至少部分饱和的“7至12元杂双环基”或“7至12元杂双环”。
[0037]“9至11元芳族杂双环基”或“9至11元芳族杂双环”意指两个环的杂环体系，其中至少一个环是芳族的，并且其中所述杂环体系具有9至11个环原子，其中两个环共享两个环原子，并且可以含有高达最大数量的双键(完全或部分芳族的)，其中至少一个环原子至6个环原子被选自硫(包括-s(o)-、-s(o)
2-)、氧和氮(包括=n(o)-)的杂原子替代，且其中所述环
经由碳或氮原子与分子的其余部分连接。9至11元芳族杂双环的实例是吲哚、二氢吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并噁唑、苯并异噁唑、苯并噻唑、苯并异噻唑、苯并咪唑、苯并咪唑啉、喹啉、喹唑啉、二氢喹唑啉、二氢喹啉、四氢喹啉、异喹啉、四氢异喹啉、二氢异喹啉、苯并氮杂
䓬
、嘌呤或蝶啶。术语“9至10元芳族杂双环基”或“9至10元芳族杂双环”相应地定义。
[0038]
优选的式(i)化合物是其中含有的一个或多个残基具有下面给出的含义的那些化合物，其中优选的取代基定义的所有组合都是本发明的主题。关于所有优选的式(i)的化合物，本发明还包括它们的所有互变异构和立体异构形式和其所有比率的混合物，以及它们的药学上可接受的盐。
[0039]
在本发明的优选实施方案中，下面提到的取代基独立地具有下列含义。由此，这些取代基中的一个或多个取代基可以具有下面给出优选的或更优选的含义。
[0040]
优选地，a1是含有氮环原子的5-元亚杂环基，其中a1任选地被一个或多个相同或不同的r4取代。
[0041]
优选地，a1是含有氮环原子的5-元亚杂环基，其选自以下二价杂环：噁二唑、咪唑、咪唑烷、吡唑和三唑，优选噁二唑，且其中a1任选地被一个或多个相同或不同的r4取代。
[0042]
优选地，a1未被取代或被一个或两个相同或不同的r4取代，优选地，a1未被取代。
[0043]
优选地，r4是氧代，其中环是至少部分饱和的。
[0044]
优选地，a1是更优选地，a1是。
[0045]
优选地，a2是苯基、吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、吡唑基或1,2,4-噁二唑基，其中a2任选地被一个或多个相同或不同的r6取代。
[0046]
优选地，a2是苯基、吡啶基、吡嗪基或哒嗪基，其中a2任选地被一个或多个相同或不同的r6取代。
[0047]
优选地，a2被一个或两个相同或不同的r6取代。
氟-6-甲基吡啶-3-基)氧基]乙酰胺,2-[(6-氯-5-氟吡啶-3-基)氧基]-n-[(3r,6s)-6-[5-(6-氯吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-基]氧杂环己烷-3-基]乙酰胺,n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]氧杂环己烷-3-基]-2-[(6-甲基吡啶-3-基)氧基]乙酰胺,n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]氧杂环己烷-3-基]-2-[(5-氯吡嗪-2-基)氧基]乙酰胺,n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]氧杂环己烷-3-基]-2-[(2-氯嘧啶-5-基)氧基]乙酰胺,2-[(5-氯-6-甲基吡啶-3-基)氧基]-n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]氧杂环己烷-3-基]乙酰胺,2-(4-氯-3-氟苯氧基)-n-[(3r,6s)-6-{5-[5-(三氟甲基)吡啶-3-基]-1,3,4-噁二唑-2-基}氧杂环己烷-3-基]乙酰胺,2-(4-氯-3-氟苯氧基)-n-[(3r,6s)-6-{5-[2-(三氟甲基)吡啶-4-基]-1,3,4-噁二唑-2-基}氧杂环己烷-3-基]乙酰胺,n-[3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]-2-[[6-(三氟甲基)-3-吡啶基]氧基]乙酰胺，或n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]氧杂环己烷-3-基]-2-{[5-(三氟甲基)吡啶-3-基]氧基}乙酰胺。
[0058]
在可以存在式(i)化合物的互变异构(例如，酮-烯醇互变异构)的情况下，单一形式，例如酮和烯醇形式，被独立地包括在内以及以任何比率的混合物形式被包括在内。同样适用于立体异构体，例如，对映异构体、顺式/反式异构体、构象异构体等。
[0059]
尤其是，当得到根据式(i)的化合物的对映异构或非对映异构形式时，式(i)包括每种单独的纯的形式和至少两种纯的形式的任何比率的任何混合物，并且是本发明的主题。
[0060]
优选的式(i)是式(ib)。
[0061]
同位素标记的式(i)化合物也在本发明范围内。同位素标记的方法是本领域已知的。优选的同位素是元素h、c、n、o和s的同位素。式(i)化合物的溶剂化物和水合物也在本发明的范围内。
[0062]
如果需要的话，可以通过本领域众所周知的方法分离异构体，例如，通过液相色谱。通过使用例如手性固定相，同样适用于对映异构体。另外，可以如下分离对映异构体：将它们转化为非对映异构体，即，与对映异构纯的助剂化合物结合，随后分离所得的非对映异构体，并使助剂残基裂解。或者，可以由立体选择性合成，使用光学纯的起始材料、试剂和/
或催化剂，获得式(i)化合物的任何对映异构体。
[0063]
如果根据式(i)的化合物含有一个或多个酸性或碱性基团，则本发明也包括它们相应的药学上或毒理学可接受的盐，尤其是它们的药学上可利用的盐。因此，根据本发明，可以使用含有酸性基团的式(i)的化合物，例如，作为碱金属盐、碱土金属盐或作为铵盐。此类盐的更确切的实例包括：钠盐、钾盐、钙盐、镁盐或与氨或有机胺形成的盐，所述有机胺例如乙胺、乙醇胺、三乙醇胺或氨基酸。可以存在含有一个或多个碱性基团(即，可以被质子化的基团)的式(i)的化合物，并且根据本发明，可以以它们与无机或有机酸形成的加成盐形式使用。合适的酸的实例包括：盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、萘二磺酸、草酸、乙酸、酒石酸、乳酸、水杨酸、苯甲酸、甲酸、丙酸、特戊酸、二乙基乙酸、丙二酸、琥珀酸、庚二酸、富马酸、马来酸、苹果酸、氨基磺酸、苯基丙酸、葡糖酸、抗坏血酸、异烟酸、柠檬酸、己二酸，以及本领域技术人员已知的其它酸。如果式(i)的化合物在分子中同时含有酸性和碱性基团，则除了提到的盐形式之外，本发明还包括内盐或甜菜碱(两性离子)。通过本领域技术人员已知的常规方法，可以获得根据式(i)的各种盐，例如，在溶剂或分散剂中，使这些与有机或无机酸或碱接触，或通过与其它盐的阴离子交换或阳离子交换。本发明还包括式(i)的化合物的所有盐，所述盐由于它们低的生理相容性，不适合在药物中直接使用，但可以例如用作化学反应的中间体，或用于制备药学上可接受的盐。
[0064]
如下所示，本发明的化合物被认为适用于调节整合应激反应路径。
[0065]
整合应激反应(isr)是所有真核生物共有的细胞应激反应(1)。isr信号传导的调节异常具有重要的病理后果，尤其与炎症、病毒感染、糖尿病、癌症和神经退行性疾病有关。
[0066]
isr是不同类型的细胞应激的共同特征，导致丝氨酸51上真核翻译起始因子2 (eif2α)的α亚基的磷酸化，导致正常蛋白合成的抑制和应激反应基因的表达(2)。在哺乳动物细胞中，磷酸化由四种eif2α激酶的家族进行，即：pkr-样er激酶(perk)、双链rna-依赖性蛋白激酶(pkr)、血红素-调节的eif2α激酶(hri)和总控不可抑制激酶2(gcn2)，其各自响应于不同的环境和生理应激(3)。
[0067]
eif2α与eif2β和eif2γ一起形成eif2复合物，这是正常mrna翻译起始的关键参与者(4)。eif2复合物结合gtp和met-trnai，形成三元复合物(eif2-gtp-met-trnai)，其由核糖体募集用于翻译起始(5, 6)。
[0068]
eif2b是一种异十聚体复合物，其由5个亚基(α、β、γ、δ、ε)组成，所述亚基一式两份形成gef-活性十聚体(7)。
[0069]
响应于isr活化，磷酸化的eif2α抑制eif2b-介导的gdp交换为gtp，导致三元复合物形成减少，且因此导致抑制特征在于与5' aug起始密码子结合的核糖体的正常mrna的翻译(8)。在降低的三元复合物丰度的这些条件下，包括编码转录因子atf4的mrna在内的几种特定mrna的翻译经由涉及上游orf (uorf)的改变的翻译的机制被活化(7, 9, 10)。这些mrna通常含有一个或多个uorf，所述uorf通常在未受应激的细胞中发挥功能，以限制核糖体向主要编码orf的流动。例如，在正常条件期间，atf的5' utr中的uorf占据核糖体并阻止atf4的编码序列的翻译。然而，在应激条件期间，即在三元复合物形成减少的条件下，核糖体扫描通过这些上游orf并在编码orf的atf4处引发翻译的可能性增加。atf4和以这种方式表达的其它应激反应因子随后控制一系列进一步应激反应基因的表达。急性期在于旨在恢复体内平衡的蛋白的表达，而慢性期导致促凋亡因子的表达(1, 11, 12, 13)。
[0070]
isr信号传导的标志物的上调已在各种疾病(包括癌症和神经退行性疾病)中得到证实。在癌症中，er应激-调节的翻译增加对缺氧条件的耐受性并促进肿瘤生长(14, 15, 16)，并且已经显示通过基因靶向缺失perk减缓源自转化的perk-/-小鼠胚胎成纤维细胞的肿瘤的生长(14, 17)。此外，最近的报告已提供了如下的概念证据：使用在小鼠中的源自患者的异种移植模型，eif2b活化剂可有效治疗一种形式的侵袭性转移性前列腺癌(28)。总之，细胞保护性isr信号传导的预防可能代表一种有效的抗增殖策略，用于治疗至少一些形式的癌症。
[0071]
此外，isr信号传导的调节可以证明可有效保持突触功能和减少神经元衰退，并且在特征在于错误折叠蛋白和未折叠蛋白反应(upr)活化的神经退行性疾病(如肌萎缩侧索硬化症(als)、额颞叶痴呆(ftd)、阿尔茨海默氏病(ad)、帕金森氏病(pd)和jakob creutzfeld(朊病毒)病)中也是如此(18, 19, 20)。以朊病毒病作为存在的神经退行性疾病的实例，其中已显示isr信号传导的药理学以及遗传抑制可以使蛋白翻译水平正常化，挽救突触功能并防止神经元丢失(21)。具体地，通过控制磷酸化eif2α水平的磷酸酶的过表达来降低磷酸化eif2α的水平，增加了感染朊病毒的小鼠的存活率，而持续的eif2α磷酸化降低了存活率(22)。
[0072]
此外，控制蛋白表达水平对于正常脑功能的重要性的直接证据以影响eif2和eif2b的功能的罕见遗传疾病的形式存在。破坏eif2的复杂完整性且因此导致正常蛋白表达水平降低的eif2γ中的突变与智力障碍综合征(id)相关(23)。eif2b的亚基中的部分功能丧失突变已被显示是罕见的脑白质营养不良白质消融性疾病(vwmd)的原因(24, 25)。具体地，通过与isrib相关的小分子在vwmd小鼠模型中稳定eif2b部分功能丧失已被显示减少isr标记物并改善功能以及病理学终点(26, 27)。
[0073]
本发明提供了游离或药学上可接受的盐形式的本发明的化合物，其将用于治疗本文提及的疾病或病症。
[0074]
因此，本发明的进一步方面是本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其用作药物。
[0075]
所描述的治疗方法可应用于哺乳动物，如狗、猫、牛、马、兔、猴和人。优选地，哺乳动物患者是人类患者。
[0076]
因此，本发明提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其将用于治疗或预防一种或多种与整合应激反应相关的疾病或病症。
[0077]
本发明的进一步方面是本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗或预防一种或多种与整合应激反应相关的病症或疾病的方法中。
[0078]
本发明的进一步方面是本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于制备药物的用途，所述药物用于治疗或预防一种或多种与整合应激反应相关的病症或疾病。
[0079]
本发明的又另一个方面是用于治疗、控制、延迟或预防需要治疗的哺乳动物患者中的一种或多种与整合应激反应相关的疾病或病症的方法，其中所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。
[0080]
本发明提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其将用于治疗或预防一种或多种下面提及的疾病或病症。
[0081]
本发明的进一步方面是本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗或预
classification of diseases and related health problems 10th revision(icd-10)类别c00-d48分类的任何肿瘤。
[0090]
示例性地，根据本发明的肿瘤病可以存在一种或多种恶性瘤(肿瘤)(icd-10类别c00-c97)，可以存在一种或多种原位瘤(icd-10类别d00-d09)，可以存在一种或多种良性瘤(icd-10类别d10-d36)，或可以存在一种或多种不确定的或未知特性的瘤(icd-10类别d37-d48)。优选地，根据本发明的肿瘤病是指存在一种或多种恶性瘤，即，恶性肿瘤(icd-10类别c00-c97)。
[0091]
在更优选实施方案中，肿瘤病是癌症。
[0092]
可以将癌症最广义地理解为任何恶性肿瘤病，即，患者中存在一种或多种恶性瘤。癌症可以是实体或血液学的恶性肿瘤。本文考虑但不限于白血病、淋巴瘤、癌和肉瘤。
[0093]
具体而言，在本文中包括特征在于上调的isr标志物的肿瘤病，如癌症。
[0094]
示例性癌症包括但不限于甲状腺癌、内分泌系统癌、胰腺癌、脑癌(例如多形性成胶质细胞瘤、神经胶质瘤)、乳腺癌(例如er阳性、er阴性、化学疗法抗性、赫赛汀(herceptin)抗性、her2阳性、多柔比星(doxorubicin)抗性、他莫昔芬(tamoxifen)抗性、导管癌、小叶癌、原发性的、转移性的)、宫颈癌、卵巢癌、子宫癌、结肠癌、头颈癌、肝癌(例如肝细胞癌瘤)、肾癌、肺癌(例如非小细胞肺癌、鳞状细胞肺癌、腺癌、大细胞肺癌、小细胞肺癌、类癌、肉瘤)、结肠癌、食道癌、胃癌、膀胱癌、骨癌、胃癌、前列腺癌和皮肤癌(例如黑素瘤)。
[0095]
进一步的实例包括但不限于骨髓瘤、白血病、间皮瘤和肉瘤。
[0096]
另外的实例包括但不限于髓母细胞瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、神经母细胞瘤、神经胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤、横纹肌肉瘤、原发性血小板增多症、原发性巨球蛋白血症、原发性脑肿瘤、恶性胰腺胰岛素瘤、恶性类癌、膀胱癌、癌前皮肤病变、睾丸癌、淋巴瘤、泌尿生殖道癌症、恶性高钙血症、子宫内膜癌、肾上腺皮质癌、胰腺内分泌或外分泌肿瘤(neoplasms of the endocrine or exocrine pancreas)、髓样甲状腺癌、髓样甲状腺癌瘤、黑素瘤、结肠直肠癌、乳头状甲状腺癌、肝细胞癌瘤、佩吉特氏乳头病(paget's disease of the nipple)、叶状肿瘤、小叶癌瘤、导管癌瘤、胰腺星状细胞癌和肝星状细胞癌。
[0097]
示例性白血病包括但不限于急性非淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、急性粒细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、急性早幼粒细胞性白血病、成人t细胞白血病、非白血病性白血病、白血病性白血病(leukocythemic leukemia)、嗜碱性白血病、母细胞白血病、牛白血病、慢性髓细胞白血病、皮肤白血病、干细胞性白血病、嗜酸性粒细胞白血病、格罗斯氏白血病(gross'leukemia)、毛细胞白血病、成血细胞性白血病、血胚细胞性白血病（hemocytoblastic leukemia）、组织细胞性白血病、干细胞白血病、急性单核细胞性白血病、白细胞减少性白血病、淋巴性白血病、淋巴母细胞性白血病、淋巴细胞性白血病、淋巴细胞白血病(lymphogenous leukemia)、淋巴样白血病、淋巴肉瘤细胞性白血病、肥大细胞白血病、巨核细胞白血病、微型髓母细胞性白血病(micromyeloblastic leukemia)、单核细胞性白血病、髓母细胞性白血病、髓细胞性白血病、骨髓性粒细胞性白血病、骨髓单核细胞性白血病、内格利氏白血病(naegeli leukemia)、浆细胞白血病(plasma cell leukemia)、多发性骨髓瘤、浆细胞性白血病(plasmacytic leukemia)、早幼粒细胞性白血病、李德尔氏细胞白血病(rieder cell leukemia)、希林氏白血病(schilling's leukemia)、干细胞白血
病、亚白血病性白血病和未分化性细胞白血病。
[0098]
示例性肉瘤包括但不限于软骨肉瘤、纤维肉瘤、淋巴肉瘤、黑素肉瘤、粘液肉瘤、骨肉瘤、艾伯内西氏肉瘤(abemethy's sarcoma)、脂肪组织肉瘤、脂肪肉瘤、腺泡状软组织肉瘤、成釉细胞肉瘤、葡萄状肉瘤、绿色肉瘤、绒毛膜癌、胚胎肉瘤、威尔姆氏肿瘤肉瘤(wilms' tumor sarcoma)、子宫内膜肉瘤、间质肉瘤、尤文氏肉瘤(ewing's sarcoma)、筋膜肉瘤、纤维母细胞性肉瘤、巨细胞肉瘤、粒细胞性肉瘤、霍奇金肉瘤、特发性多发性色素性出血性肉瘤、b细胞免疫母细胞性肉瘤、淋巴瘤、t细胞免疫母细胞性肉瘤、詹森氏肉瘤(jensen's sarcoma)、卡波西氏肉瘤(kaposi's sarcoma)、库普弗氏细胞肉瘤(kupffer cell sarcoma)、血管肉瘤、白色肉瘤、恶性间叶瘤、骨旁肉瘤、网状细胞肉瘤、劳斯氏肉瘤(rous sarcoma)、浆液囊性肉瘤(serocystic sarcoma)、滑膜肉瘤和毛细管扩张性肉瘤。
[0099]
示例性黑素瘤包括但不限于肢端着色斑性黑素瘤(acral-lentiginous melanoma)、无黑色素性黑素瘤、良性青少年性黑素瘤、克劳德曼氏黑素瘤(cloudman's melanoma)、s91黑素瘤、哈-帕二氏黑素瘤(harding-passey melanoma)、青少年性黑素瘤、恶性雀斑样痣性黑素瘤、恶性黑素瘤、结节性黑素瘤、甲下黑素瘤和浅表扩散性黑素瘤。
[0100]
示例性癌瘤包括但不限于髓样甲状腺癌瘤、家族性髓样甲状腺癌瘤、腺泡癌、腺泡状瘤、腺囊性癌、腺样囊性癌、腺癌、肾上腺皮质癌、滤泡癌、滤泡细胞癌、基底细胞癌、基底细胞癌瘤、基底细胞样癌、基底鳞状细胞癌、细支气管肺泡癌、细支气管癌、支气管癌、髓状癌、胆管细胞癌、绒毛膜癌、胶样癌、粉刺状癌、子宫体癌、筛状癌、铠甲状癌、皮肤癌、柱状癌(cylindrical carcinoma)、柱状细胞癌(cylindrical cell carcinoma)、导管癌(duct carcinoma)、导管癌(ductal carcinoma)、硬癌、胚胎癌、脑样癌、表皮样癌、腺样上皮癌、外生性癌瘤、溃疡性胃癌(carcinoma ex ulcere)、纤维癌、胶样癌(gelatiniforni carcinoma)、胶质癌(gelatinous carcinoma)、巨细胞癌瘤(giant cell carcinoma)、巨细胞癌(carcinoma gigantocellulare)、腺癌、粒层细胞癌、发母质癌(hair-matrix carcinoma)、血样癌、肝细胞癌瘤、许特耳氏细胞癌瘤(hurthle cell carcinoma)、胶样癌、肾上腺样癌、幼稚型胚胎性癌、原位癌、表皮内癌、上皮内癌、克鲁肯伯格氏癌(krompecher's carcinoma)、库尔契茨基氏细胞癌(kulchitzky-cell carcinoma)、大细胞癌、豆状癌(lenticular carcinoma)、豆状癌(carcinoma lenticulare)、脂瘤样癌、小叶癌、淋巴上皮癌、髓样癌(carcinoma medullare)、髓样癌(medullary carcinoma)、黑色素癌、髓样癌(carcinoma molle)、黏液癌(mucinous carcinoma)、粘液状癌(carcinoma muciparum)、粘液细胞癌、粘液表皮样癌、粘液癌(carcinoma mucosum)、黏液癌(mucous carcinoma)、粘液瘤样癌、鼻咽癌、燕麦细胞癌、骨化性癌、骨样癌、乳头状癌、门脉周癌、侵袭性癌、棘细胞癌、脑样癌、肾脏的肾细胞癌、贮备细胞癌、肉瘤样癌、施奈德氏癌(schneiderian carcinoma)、硬癌(scirrhous carcinoma)、阴囊癌、印戒细胞癌、单纯癌、小细胞癌、马铃薯状癌、球状细胞癌、梭形细胞癌、海绵样癌、鳞癌、鳞状细胞癌、绳捆癌(string carcinoma)、血管扩张性癌(carcinoma telangiectaticum)、血管扩张性癌(carcinoma telangiectodes)、移行细胞癌、小管癌(carcinoma tuberosum)、小管癌(tubular carcinoma)、结节性癌、疣赘性癌(verrucous carcinoma)和绒毛状癌。
[0101]
感染性疾病实例包括但不限于由病毒引起的感染(如hiv-1：人类免疫缺陷病毒1型；iav：甲型
流感病毒；hcv：丙型肝炎病毒；denv：登革热病毒；asfv：非洲猪瘟病毒；ebv：爱泼斯坦-巴尔病毒；hsv1：单纯疱疹病毒1；chikv：基孔肯雅病毒；hcmv：人类巨细胞病毒；sars-cov：严重急性呼吸系统综合征冠状病毒)；sars-cov-2：严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2的感染)以及细菌引起的感染(如军团菌、布鲁氏菌、西姆卡氏菌、衣原体、螺杆菌和弯曲杆菌的感染)。
[0102]
炎性疾病炎性疾病的实例包括但不限于术后认知功能异常(手术后认知功能降低)、创伤性脑损伤、关节炎、类风湿性关节炎、牛皮癣性关节炎、幼年型特发性关节炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮(sle)、重症肌无力、青少年发作型糖尿病、1型糖尿病、格-巴二氏综合征、桥本氏脑炎、桥本氏甲状腺炎、强直性脊柱炎、牛皮癣、斯耶格伦氏综合征、血管炎、肾小球肾炎、自身免疫性甲状腺炎、白塞病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、大疱性类天疱疮、肉样瘤病、鱼鳞癣、格雷夫斯眼病、炎性肠病、爱迪生氏病、白斑病、哮喘、过敏性哮喘、寻常痤疮、乳糜泻、慢性前列腺炎、炎性肠病、盆腔炎性疾病、再灌注损伤、肉样瘤病、移植排斥、间质性膀胱炎、动脉粥样硬化和特应性皮炎。
[0103]
肌肉骨骼疾病肌肉骨骼疾病的实例包括但不限于肌肉萎缩症、多发性硬化症、弗里德里希共济失调、肌肉萎缩性病症(例如，肌肉萎缩、肌肉减少症、恶病质)、包涵体肌病、进行性肌肉萎缩、运动神经元疾病、腕管综合征、上髁炎、肌腱炎、背痛、肌肉疼痛、肌肉酸痛、重复性劳损病症(repetitive strain disorder)和瘫痪。
[0104]
代谢疾病代谢疾病的实例包括但不限于糖尿病(特别是ii型糖尿病)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、非酒精性脂肪肝病(nafld)、尼曼匹克病、肝纤维化、肥胖症、心脏病、动脉粥样硬化、关节炎、胱氨酸病、苯酮尿酸症、增生性视网膜病变和克-萨二氏病。
[0105]
眼病眼病的实例包括但不限于任何闭塞性或炎性视网膜血管疾病的水肿或新血管形成，如虹膜发红、新生血管性青光眼、翼状胬肉、血管化青光眼滤过泡、结膜乳头状瘤；脉络膜新血管形成，如新生血管性年龄相关的黄斑变性(amd)、近视、前葡萄膜炎、创伤或特发性眼病；黄斑水肿，如手术后黄斑水肿、继发于葡萄膜炎的黄斑水肿，包括视网膜和/或脉络膜炎症、继发于糖尿病的黄斑水肿、和继发于视网膜血管闭塞性疾病(即分支和中央视网膜静脉闭塞)的黄斑水肿；糖尿病引起的视网膜新生血管形成，如视网膜静脉闭塞、葡萄膜炎、源自颈动脉疾病的眼部缺血综合征、眼部或视网膜动脉闭塞、镰状细胞视网膜病、其它缺血性或闭塞性新生血管性视网膜病、早产儿视网膜病或伊尔斯病(eale disease)；和遗传病，如希佩尔-林道综合征(vonhippel-lindau syndrome)。
[0106]
另外的疾病另外的疾病包括但不限于器官纤维化(如肝纤维化、肺纤维化或肾纤维化)、慢性和急性肝病(如脂肪肝病或肝脂肪变性)、慢性和急性肺病、慢性和急性肾病、心肌梗塞、心血管疾病、心律失常、动脉粥样硬化、脊髓损伤、缺血性中风和神经性疼痛。
[0107]
本发明的又另一个方面是药物组合物，其包含至少一种本发明的化合物或其药学上可接受的盐连同药学上可接受的载体，任选地与一种或多种其它生物活性化合物或药物
组合物组合。
[0108]
优选地，所述一种或多种生物活性化合物是除了式(i)的化合物之外的整合应激反应路径的调节剂。
[0109]“药物组合物”意指一种或多种活性成分和组成载体的一种或多种惰性成分以及由下列直接或间接获得的任何产物：任何两种或多种成分组合、复合、聚集；或者一种或多种组分解离；或者一种或多种成分的其它类型的反应或相互作用。因此，本发明药物组合物包括通过本发明化合物和药学上可接受的载体混合而制得的任何组合物。
[0110]
本发明的药物组合物可以包含一种或多种另外的化合物作为活性成分，如组合物中的式(i)的化合物的混合物或整合应激反应路径的其它调节剂。
[0111]
活性成分可以包含在一种或多种不同的药物组合物(药物组合物的组合)中。
[0112]
术语“药学上可接受的盐”是指由药学上可接受的无毒碱或酸(包括无机碱或酸和有机碱或酸)制得的盐。
[0113]
所述组合物包括适合经口、直肠、局部、肠胃外(包括皮下、肌肉内和静脉内)、眼(眼的)、肺(鼻或颊吸入)或鼻施用的组合物，尽管在任何给定的情况下最合适的途径取决于治疗的病况的性质和严重性以及活性成分的性质。它们可方便地以单位剂量形式呈现并采用药物领域众所周知的任何方法制备。
[0114]
在实际应用中，根据常规药物配制技术，式(i)的化合物作为活性成分可以与药用载体结合为紧密混合物。所述载体可根据施用(例如，经口或胃肠外(包括静脉内的))所需的制剂形式而采用多种形式。在制备口服剂型组合物时，在口服液体制剂如，例如，混悬剂、酏剂和溶液剂的情况下，可使用任何常用的药用介质，如，水、二醇类、油类、醇类、矫味剂、防腐剂、着色剂等；或者，在口服固体制剂如粉剂、硬和软胶囊以及片剂情况下，可使用任何常用的药用载体，如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等，相对液体剂型来说，优选固体口服剂型。
[0115]
因为其容易施用，所以片剂和胶囊代表最有益的口服单位剂型，在此情况下，明显采用固体药物载体。如果需要，片剂可通过标准含水或非含水技术包衣。此类组合物和制剂应包含至少0.1％的活性化合物。当然，活性化合物在这些组合物中的百分比可变化，并且可以方便地为单位重量的约2％至约60％。在此类治疗有用的组合物中的活性化合物的量使得将获得有效剂量。活性化合物也可以鼻内施用，例如，作为液体滴剂或喷雾剂。
[0116]
片剂、丸剂、胶囊等也可以含有：粘合剂，如黄蓍胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂，如磷酸氢钙；崩解剂，如玉米淀粉、土豆淀粉、海藻酸；润滑剂，如硬脂酸镁；和甜味剂，如蔗糖、乳糖或糖精。当单位剂型为胶囊时，除了上述类型的材料之外，其可以含有液体载体，如脂肪油。
[0117]
各种其它材料可以作为包衣存在，或用于改变单位剂量的物理形式。例如，片剂可用虫胶、糖或两者一起包衣。除了活性成分外，糖浆剂或酏剂可以含有：作为甜味剂的蔗糖、作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、着色剂和矫味剂(如樱桃或橙子口味)。
[0118]
式(i)的化合物也可以肠胃外施用。这些活性化合物的溶液剂或混悬剂可在水中与表面活性剂(如羟丙基纤维素)合适地混合来制备。分散体也可以在甘油、液体聚乙二醇以及其在油中的混合物中制备。在储存和使用的通常条件下，这些制剂包含防腐剂以防止
微生物的生长。
[0119]
适合于注射使用的药物形式包括用于即时制备无菌注射溶液或分散体的无菌水溶液或分散体和无菌粉末。在所有情况下，该形式应当为无菌的并且应当为流体的，达到的程度为具有易于注射性。在制备和储存的条件下，所述形式应当稳定并且应当使其免受微生物(如细菌和真菌)的污染作用。载体可以是溶剂或分散介质，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)、其合适的混合物和植物油。
[0120]
任何合适的施用途径可以用于为哺乳动物(尤其是人类)提供有效剂量的本发明化合物。例如，可以采用经口、直肠、局部、肠胃外、眼、肺、鼻等。剂型包括片剂、口含片剂、分散体、混悬剂、溶液剂、胶囊剂、霜剂、软膏剂、气雾剂等。优选地，经口施用式(i)的化合物。
[0121]
所采用的活性成分的有效剂量可取决于采用的具体化合物、施用模式、正在治疗的病况以及正在治疗的病况的严重性而变化。此类剂量可由本领域技术人员容易地确定。
[0122]
用于合成本发明的优选实施方案的起始材料可以购自市售来源，如array、sigma aldrich、acros、fisher、fluka、abcr，或者可以使用本领域技术人员已知的方法合成。
[0123]
通常，几种方法可供用于制备本发明的化合物。在一些情况下，可以组合各种策略。可以使用依序的或汇聚的路线。下面描述示例性合成路线。
实施例
[0124]
i 化学合成实验程序：使用以下缩写词和首字母缩略词：aq
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
含水的盐水(brine)
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
nacl在水中的饱和溶液cv
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
柱体积δ
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
以百万分之几计的化学位移d
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
双重峰dcm
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二氯甲烷dd
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
双重双重峰ddd
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
双重的双重双重峰dmso
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二甲亚砜dmso-d6
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
氘代二甲亚砜dipea
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二异丙基乙胺dmf
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二甲基甲酰胺esi
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
正电离模式esi
‑ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
负电离模式etoac
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
乙酸乙酯et2o
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
乙醚hcl
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
盐酸hplc
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
高效液相色谱h
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
小时
acquity光电二极管阵列检测器，在215 nm处记录uv光谱。使用waters quatro premier xe以每秒5次扫描的取样率经m/z 150至850的范围获得质谱。使用waters masslynx和openlynx软件，将数据整合并报告。
[0127]
体系3 (s3)：酸性最终方法(shimadzu)：5%溶剂b持续1 min，且然后线性梯度5.5 min内5-100%溶剂b 2.5 min 100%溶剂b，流速为1.0 ml/min。柱atlantis dc18 (50 x 3.0 mm)。溶剂a=0.1%的在水中的甲酸，溶剂b=0.1%的在乙腈中的甲酸。
[0128]
体系4 (s4)：碱性最终方法(ms16)在具有waters 2996 pda检测器和waters 2420 els检测器的agilent g1312a系统上使用phenomenex gemini
ꢀ–
nx c18柱(2.0 x 100mm, 3mm柱；温度：40℃)以及如下的梯度：经5.5 min 5-100% (a= 2 mm 碳酸氢铵，缓冲至 ph 10；b = 乙腈)，然后 100% b 持续0.4 min，进行分析型metcr1603 hplc-ms，其中进样量为 3
ꢀµ
l，和流速为0.6 ml/min。使用waters acquity光电二极管阵列检测器，在215 nm处记录uv光谱。使用waters zq质量检测器以每秒5次扫描的取样率经m/z 150至850的范围获得质谱。使用waters masslynx和openlynx软件，将数据整合并报告。
[0129]
制备型hplc条件如下：方法1：使用酸性ph的反相色谱，标准洗脱方法在biotage isolera系统上使用适当的snap c18短柱(catridge)和如下的梯度：经1.7cv 的10% b (a=0.1%的在水中的甲酸；b=0.1%的在乙腈中的甲酸)、然后经19.5 cv的10-100% b以及持续2 cv的100% b，通过反向硅胶上的fcc进行纯化(酸性ph，标准洗脱方法)。
[0130]
路线1的方案：中间体1：[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]氯化铵在室温向n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]氨基甲酸叔丁酯(90%, 227 mg, 0.539 mmol)于dcm (1.35 ml)中的溶液中添加4 m hcl于二
氧杂环己烷中的溶液(1.4 ml, 5.40 mmol)，并将反应在该温度搅拌 1 小时。在减压下除去溶剂，以得到作为灰白色粉末的[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]氯化铵(199 mg, 0.522 mmol, 97%产率)。1h nmr (500 mhz, dmso-d6) δ 8.17 (s, 3h), 8.08
ꢀ–ꢀ
7.96 (m, 2h), 7.75
ꢀ–ꢀ
7.64 (m, 2h), 4.90 (dd, j = 10.2, 2.5 hz, 1h), 4.09 (dd, j = 10.8, 3.5 hz, 1h), 3.59
ꢀ–ꢀ
3.54 (m, 1h), 3.29
ꢀ–ꢀ
3.26 (m, 1h), 2.27
ꢀ–ꢀ
2.17 (m, 2h), 2.09
ꢀ–ꢀ
1.97 (m, 1h), 1.83
ꢀ–ꢀ
1.70 (m, 1h)。m/z: 280, 282 [m h], esi , rt = 2.46 min (s4)。
[0131]
步骤1.1：n-[(3r,6s)-6-[[(4-氯苯甲酰基)氨基]氨基甲酰基]四氢吡喃-3-基]氨基甲酸叔丁酯在室温将hatu (651 mg, 1.71 mmol)添加至4-氯苯甲酰肼(243 mg, 1.43 mmol)和dipea (0.75 ml, 4.28 mmol)于无水dmf (4 ml)中的溶液中，并搅拌10 分钟。然后添加(2s,5r)-5-(叔丁氧基羰基氨基)四氢吡喃-2-甲酸(350 mg, 1.43 mmol)，并将反应混合物在室温搅拌2小时。反应混合物用水 (30 ml)和et2o (30 ml)稀释，引起棕褐色固体沉淀。将固体过滤，用et2o洗涤，并在真空中除去残余溶剂，以得到作为棕褐色固体的n-[(3r,6s)-6-[[(4-氯苯甲酰基)氨基]氨基甲酰基]四氢吡喃-3-基]氨基甲酸叔丁酯(522 mg, 1.25 mmol, 87%产率)。1h nmr (400 mhz, dmso-d6) δ 10.38 (s, 1h), 9.76 (s, 1h), 7.88 (d, j = 8.6 hz, 2h), 7.57 (d, j = 8.6 hz, 2h), 6.84 (d, j = 7.9 hz, 1h), 3.91 (d, j = 7.3 hz, 1h), 3.87
ꢀ–ꢀ
3.74 (m, 1h), 3.38 (d, j = 7.0 hz, 1h), 3.06 (t, j = 10.6 hz, 1h), 1.94 (t, j = 13.2 hz, 2h), 1.62
ꢀ–ꢀ
1.43 (m, 2h), 1.39 (s, 9h)。m/z: 342, 344 [m-tbu h], esi , rt = 1.21 min (s1)。
[0132]
步骤1.2：n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]氨基甲酸叔丁酯将n-[(3r,6s)-6-[[(4-氯苯甲酰基)氨基]氨基甲酰基]四氢吡喃-3-基]氨基甲酸叔丁酯(372 mg, 0.673 mmol)和甲氧基羰基-(三乙基胺基)磺酰基-氮烷化物(azanide)(642 mg, 2.69 mmol)于无水thf (4 ml)中的悬浮液在微波辐射(正常吸收)下在120℃搅拌10分钟。所得溶液在水(25 ml)和etoac (25 ml)之间分配，其中有机层用盐水(brine) (25 ml)洗涤、干燥(mgso4)、过滤并在真空中浓缩。残余物质使用硅胶上的快速色谱纯化，用庚烷-etoac，1:0至0:1洗脱，以得到作为灰白色粉末的n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]氨基甲酸叔丁酯(227 mg, 0.539 mmol, 80%产率)。1h nmr (500 mhz, 氯仿-d) δ 8.04
ꢀ–ꢀ
7.97 (m, 2h), 7.52
ꢀ–ꢀ
7.45 (m, 2h), 4.72 (dd, j
= 9.6, 3.0 hz, 1h), 4.48 (s, 1h), 4.23
ꢀ–ꢀ
4.14 (m, 1h), 3.82
ꢀ–ꢀ
3.72 (m, 1h), 3.30 (t, j= 10.2 hz, 1h), 2.32
ꢀ–ꢀ
2.10 (m, 2h), 1.58 (d, j= 18.1 hz, 2h), 1.46 (s, 9h)。m/z: 324, 326 [m-tbu h], esi , rt = 1.21 min (s1)。
[0133]
路线2的方案中间体2：2-[(6-氯-5-氟-3-吡啶基)氧基]乙酸在室温将2 m naoh的水溶液(12 ml, 24.7 mmol)添加至2-[(6-氯-5-氟-3-吡啶基)氧基]乙酸乙酯(96%, 6.01 g, 24.7 mmol)于甲醇(15 ml)中的溶液中并搅拌2 小时。将反应混合物浓缩，且然后用1n hcl溶液酸化至ph 4。过滤沉淀的固体，以得到作为米色固体的2-[(6-氯-5-氟-3-吡啶基)氧基]乙酸(1.00 g, 4.67 mmol, 19%产率)。1h nmr (500 mhz, dmso-d6) δ 8.06 (d, j = 2.6 hz, 1h), 7.73 (dd, j = 10.4, 2.6 hz, 1h), 4.82 (s, 2h)。m/z: 206, 208, esi , rt = 0.85 min (s1)。
[0134]
步骤2.1：2-[(6-氯-5-氟-3-吡啶基)氧基]乙酸乙酯将2-溴乙酸乙酯(3.4 ml, 30.2 mmol)添加至6-氯-5-氟吡啶-3-醇(4.25 g, 28.8 mmol)和碳酸钾(11.94 g, 86.4 mmol)于dmf (12 ml)中的悬浮液中并在65℃搅拌1 小时，并使之冷却至室温并在室温放置过夜。将反应混合物悬浮于etoac (20 ml)中并过滤。将滤液用水(50 ml)、盐水(brine)(50 ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并蒸发，以得到作为绿色固体的2-[(6-氯-5-氟-3-吡啶基)氧基]乙酸乙酯(6.01 g, 24.7 mmol, 86%产率)。1h nmr (500 mhz, 氯仿-d) δ 7.92 (d, j = 2.6 hz, 1h), 7.08 (dd, j = 9.1, 2.6 hz, 1h), 4.65 (s, 2h), 4.26 (q, j = 7.1 hz, 2h), 1.29 (t, j = 7.1 hz, 3h)。m/z: 234, 236 [m 1], esi , rt = 1.09 min (s1)。
[0135]
路线3的方案
中间体3：n-[3r,6s)-6-(肼羰基)四氢吡喃-3-基]氨基甲酸叔丁酯在室温向n-[(3r,6s)-6-(苄基氧基羰基氨基氨基甲酰基)四氢吡喃-3-基]氨基甲酸叔丁酯(950 mg, 2.41 mmol)于乙醇(25 ml)和etoac (15 ml)中的脱气溶液中添加炭载钯(10%, 95 mg, 0.089 mmol)，并将反应混合物在氢气气氛下搅拌3 小时。通过将气氛切换为n2来停止反应。将反应混合物温热至接近回流并通过celite
®
垫热过滤，用乙醇充分洗涤。将滤液浓缩至干，以得到作为灰白色粉末的n-[(3r,6s)-6-(肼羰基)四氢吡喃-3-基]氨基甲酸叔丁酯(678 mg, 2.46 mmol, 100%产率)。1h nmr (500 mhz, dmso-d6) δ 8.86 (s, 1h), 6.80 (d, j = 7.7 hz, 1h), 4.20 (s, 2h), 3.91
ꢀ–ꢀ
3.80 (m, 1h), 3.68
ꢀ–ꢀ
3.62 (m, 1h), 3.02
ꢀ–ꢀ
2.94 (m, 1h), 1.93
ꢀ–ꢀ
1.82 (m, 2h), 1.46
ꢀ–ꢀ
1.31 (m, 12h)。
[0136]
步骤3.1：n-[(3r,6s)-6-(苄基氧基羰基氨基氨基甲酰基)四氢吡喃-3-基]氨基甲酸叔丁酯向(2s,5r)-5-(叔丁氧基羰基氨基)四氢吡喃-2-甲酸(710 mg, 2.89 mmol) 和dipea (1.0 ml, 5.79 mmol)于无水dmf (7 ml)中的溶液中添加hatu (1.21 g, 3.18 mmol)。将溶液搅拌10分钟。然后分批添加n-氨基氨基甲酸苄酯(529 mg, 3.18 mmol)并将反应混合物在室温搅拌1 小时。将反应用水(20 ml)淬灭并剧烈搅拌10 分钟。过滤混合物以收集灰白色沉淀物，将其在高真空烘箱中进一步干燥以提供作为灰白色粉末的n-[(3r,6s)-6-(苄基氧基羰基氨基氨基甲酰基)四氢吡喃-3-基]氨基甲酸叔丁酯 (950 mg, 2.20 mmol, 76%产率)。1nmr (400mhz, dmso-d6) δ 9.60 (s, 1h), 9.12 (s, 1h), 7.35 (d, j = 15.1 hz, 5h), 6.82 (d, j = 7.1 hz, 1h), 5.07 (s, 2h), 3.88 (d, j = 6.1 hz, 1h), 3.74 (d, j = 9.7 hz, 1h), 3.08
ꢀ–ꢀ
2.95 (m, 1h), 1.99
ꢀ–ꢀ
1.78 (m, 2h), 1.57
ꢀ–ꢀ
1.29 (m, 12h)。m/z: 416 [m na], esi , rt = 1.09 min (s1)。
[0137]
路线4的方案：中间体4：2-(5-氯吡嗪-2-基)氧基乙酸
在室温将在1,4-二氧杂环己烷中的4m氯化氢(10ml,40.0mmol)添加至2-(5-氯吡嗪-2-基)氧基乙酸叔丁酯(269mg,1.09mmol)中，并搅拌72小时。将混合物蒸发至干。使用c18-12gkp-ultrasnap短柱通过快速色谱纯化残余物，用在水( 0.1%甲酸)中的mecn( 0.1%甲酸)(10至100%)的溶液洗脱，以提供作为白色固体的2-(5-氯吡嗪-2-基)氧基乙酸(120mg,0.630mmol,58%产率)。1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ8.36(d,j=1.3hz,1h),8.29(d,j=1.3hz,1h),4.89(s,2h)。m/z:187,189[m-h],esi-,rt=0.76min(s1)。
[0138]
步骤4.1：2-(5-氯吡嗪-2-基)氧基乙酸叔丁酯在室温经5分钟向2-羟基乙酸叔丁酯(0.049ml,3.69mmol)于无水dmf(5ml)中的溶液中分批添加氢化钠(89mg,3.69mmol)。向悬浮液中加入另外的dmf(5ml)并搅拌30分钟。然后逐滴添加2,5-二氯吡嗪(500mg,3.36mmol)，并将反应混合物在室温搅拌3小时。反应混合物用水(50ml)缓慢稀释并用etoac(2x30ml)萃取。合并的有机层用盐水(brine)(30ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并蒸发至干。使用方法1纯化残余物以提供作为白色固体的2-(5-氯吡嗪-2-基)氧基乙酸叔丁酯(269mg,1.09mmol,32%产率)。1hnmr(500mhz,氯仿-d)δ8.12(d,j=1.0hz,1h),8.05(d,j=1.0hz,1h),4.78(s,2h),1.47(s,9h)。m/z:245,247[m h],esi ,rt=1.18min(s1)。
[0139]
路线5的方案：中间体5：2-氯-n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]乙酰胺将[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]氯化铵(250mg,0.791mmol)和dipea(0.28ml,1.58mmol)于dmf(3ml)中的溶液搅拌5分钟。将
反应混合物冷却至0℃，然后添加在dmf (3 ml)中的2-氯乙酰氯(89 mg, 0.791 mmol)。将反应混合物温热至室温并搅拌1.5小时。添加水(10 ml)，在真空下过滤反应混合物并用水进一步冲洗以提供作为棕色固体的2-氯-n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]乙酰胺(146 mg, 0.344 mmol, 44%产率)。1h nmr (500 mhz, dmso-d6) δ 8.27 (d, j = 7.6 hz, 1h), 8.06
ꢀ–ꢀ
8.01 (m, 2h), 7.71
ꢀ–ꢀ
7.67 (m, 2h), 4.84 (dd, j = 10.6, 2.6 hz, 1h), 4.06 (d, j = 1.3 hz, 2h), 3.98
ꢀ–ꢀ
3.92 (m, 1h), 3.85
ꢀ–ꢀ
3.75 (m, 1h), 3.50-3.25 (m, 1h), 2.16 (dt, j = 10.5, 4.3 hz, 1h), 2.08
ꢀ–ꢀ
1.96 (m, 2h), 1.72
ꢀ–ꢀ
1.62 (m, 1h)。m/z: 356, 358 [m h], esi , rt = 1.03 min (s1)。
[0140]
路线6的方案：中间体6：(2r,5s)-5-(叔丁氧基羰基氨基)四氢吡喃-2-甲酸将n-[(3s,6r)-6-(羟基甲基)四氢吡喃-3-基]氨基甲酸叔丁酯(657 mg, 2.84 mmol)于dcm (5 ml)、乙腈(5 ml)和水(7 ml)中的溶液剧烈搅拌，同时冷却至0℃。添加高碘酸钠(1.22 g, 5.68 mmol)和三氯化钌(3 )(0.027 g, 0.13 mmol)，并将反应在该温度搅拌3小时。添加etoac (10 ml)并过滤混合物。添加甲醇并过滤溶液。添加10%亚硫酸氢钠(10 ml)溶液并将ph用1 m hcl调节至2。分离水层，用etoac萃取。将有机层合并，经mgso4干燥并在减压下浓缩。将残余物吸收在饱和nahco
3 (10 ml)中并用etoac (2
×
10ml)萃取。将水层用1m hcl酸化至ph 2并用etoac (4 x 10 ml)萃取，合并有机层，经mgso4干燥并在减压下浓缩。将残余物与1:2 tbme/庚烷(100 ml)一起研磨，过滤，在真空中干燥，以提供作为黄色粉末的(2r,5s)-5-(叔丁氧基羰基氨基)四氢吡喃-2-甲酸(375 mg, 1.53 mmol, 54%产率)。1h nmr (400 mhz, 氯仿-d) δ 4.57
ꢀ–ꢀ
4.15 (m, 2h), 4.13
ꢀ–ꢀ
3.85 (m, 2h), 3.79
ꢀ–ꢀ
3.39 (m, 1h), 3.15 (t,j= 10.6 hz, 1h), 2.27
ꢀ–ꢀ
2.03 (m, 2h), 1.87
ꢀ–ꢀ
1.62 (m, 1h), 1.44 (s, 10h)。
[0141]
步骤6.1：(2r)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-碘-丙酸甲酯
在室温将咪唑(4.27g,62.8mmol)添加至三苯基膦(16.46g,62.8mmol)于dcm(200ml)中的溶液中，并且在完全溶解后，在n2气氛下冷却至0℃。经20分钟分批添加分子碘(15.93g,62.8mmol)。将溶液温热至室温，搅拌10分钟并冷却回0℃。经1小时逐滴添加(2{s})-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-羟基-丙酸甲酯(10.59g,48.3mmol)于dcm(50ml)中的溶液。将反应在0℃搅拌1小时，使其温热至室温，并再搅拌1.5小时。反应混合物通过硅胶塞(75g)过滤，用1:1乙醚:庚烷洗脱，并蒸发溶剂。残余物通过硅胶上的色谱纯化，用0-30%在庚烷中的tbme洗脱，以得到透明油状物。从庚烷中结晶后，通过过滤收集固体并在真空中干燥，以提供(2r)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-碘-丙酸甲酯(11.46g,33.1mmol,69%产率)。1hnmr(500mhz,氯仿-d)δ5.34(d,j=5.9hz,1h),4.56
–
4.46(m,1h),3.80(s,3h),3.63
–
3.49(m,2h),1.46(s,9h)。
[0142]
步骤6.2：(2s)-2-(叔丁氧基羰基氨基)己-5-烯酸甲酯将锌(1.96g,30.0mmol)和分子碘(76mg,0.299mmol)添加至装有温度计的3-颈烧瓶中。将烧瓶抽真空并用热风枪加热10分钟，然后用n2冲洗并重复该过程两次。冷却至室温后，添加无水dmf(1ml)，并将浆液冷却至0℃。经10分钟逐滴添加(2{r})-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-碘-丙酸甲酯(3.29g,10.0mmol)于dmf(6.5ml)中的溶液，并将反应混合物在室温搅拌1小时。
[0143]
向装有温度计的第二个3-颈烧瓶中装入溴化铜与甲基硫的络合物(bromocoppermethylsulfanymethane)(207mg,1.00mmol)，并在真空下用热风枪轻轻加热，同时颜色从灰白色变为浅绿色。冷却至室温后，添加dmf(6.5ml)和3-氯丙-1-烯(0.81ml,10.0mmol)。将烧瓶冷却至-15℃并逐滴添加锌试剂。使反应混合物温热至室温，并搅拌18小时。添加etoac(75ml)并将混合物搅拌15分钟，再用etoac(75ml)稀释，用5%na2s2o3(2x25ml)、水(2x25ml)、盐水(brine)(25ml)洗涤，经na2so4干燥并在减压下浓缩。残余物通过硅胶上的色谱纯化，用0-50%在庚烷中的tbme洗脱，以得到作为澄清油状物的(2s)-2-(叔丁氧基羰基氨基)己-5-烯酸甲酯(1.96g,7.67mmol,77%产率)。1hnmr(500mhz,氯仿-d)δ5.79(ddt,j=16.9,10.2,6.6hz,1h),5.08
–
4.95(m,3h),4.36
–
4.27(m,1h),3.74(s,3h),2.17
–
2.05(m,2h),1.90(dq,j=13.5,7.4hz,1h),1.71(dq,j=14.4,8.0hz,1h),1.44(s,9h)。
[0144]
步骤6.3：n-[(1s)-1-(羟基甲基)戊-4-烯基]氨基甲酸叔丁酯
(ddd, j = 11.5, 7.1, 4.5 hz, 1h), 3.36 (dtd, j = 10.3, 5.5, 2.7 hz, 1h), 3.02 (t, j = 10.7 hz, 1h), 2.16
ꢀ–ꢀ
1.96 (m, 2h), 1.51
ꢀ–ꢀ
1.36 (m, 10h), 1.29 (qd, j = 12.5, 4.2 hz, 1h)路线7的方案中间体7：2-[(5-氟-6-甲基-3-吡啶基)氧基]乙酸锂在室温向2-[(5-氟-6-甲基-3-吡啶基)氧基]乙酸乙酯(0.50 g, 2.35 mmol)于甲醇(5 ml)中的溶液中添加2m氢氧化锂(2.3 ml, 4.69 mmol)并在室温搅拌过夜，然后蒸发至干。将固体悬浮于乙腈(10 ml)中，并蒸发至干，以得到作为白色固体的2-[(5-氟-6-甲基-3-吡啶基)氧基]乙酸锂(630 mg, 2.34 mmol, 100%产率)。1h nmr (400 mhz, dmso-d6) δ 8.01
ꢀ–ꢀ
7.84 (m, 1h), 7.08
ꢀ–ꢀ
7.00 (m, 1h), 4.20
ꢀ–ꢀ
4.11 (m, 2h), 3.20
ꢀ–ꢀ
3.13 (m, 1h), 2.35
ꢀ–ꢀ
2.29 (m, 3h)。m/z: 186 [m h] , rt = 0.4-0.6 min (s4)。
[0147]
步骤7.1：2-[(5-氟-6-甲基-3-吡啶基)氧基]乙酸乙酯在室温在氮气气氛下向2-[(6-氯-5-氟-3-吡啶基)氧基]乙酸乙酯(97%, 2.60 g, 10.8 mmol)于无水thf (30 ml)中的脱气溶液添加三苯基膦钯(0.80 g, 0.692 mmol)并搅拌。然后添加在thf中的2 m 甲基氯化锌(6.5 ml, 13.0 mmol)并搅拌5分钟。将反应混合物加热至75℃，搅拌过夜并使其冷却至室温。反应混合物用氯化铵溶液(20 ml)淬灭，用水(100 ml)稀释，并用etoac (2 x 50 ml)萃取。有机物经硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干。通过快速色谱(biotage isolera, c18 120 g kp
‑ꢀ
ultra snap短柱)纯化，用mecn ( 0.1 %甲酸)于水 ( 0.1 %甲酸)中的溶液(10至100 %)洗脱，随后蒸发，得到作为灰白色固体的2-[(5-氟-6-甲基-3-吡啶基)氧基]乙酸乙酯(1.69 g, 7.69 mmol, 71%产率)。1h nmr (400 mhz, 氯仿-d) δ 8.05 (d, j = 2.4 hz, 1h), 6.94 (dd, j = 10.4, 2.5 hz, 1h), 4.63 (s, 2h), 4.27 (q, j = 7.1 hz, 2h), 2.45 (d, j = 2.9 hz, 3h), 1.30 (t, j = 7.1 hz, 3h)。m/z: 214 [m h] , rt = 0.98 (s1)。
[0148]
路线8的方案：
实施例1： 2-(4-氯-3-氟-苯氧基)-n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]乙酰胺在室温，向[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]氯化铵 (78 mg, 0.241 mmol)于dcm (1.5 ml)中的溶液中添加dipea (0.17 ml, 0.964 mmol)，随后逐滴添加2-(4-氯-3-氟-苯氧基)乙酰氯 (0.11 g, 0.482 mmol)于dcm (1 ml)中的溶液。搅拌5 分钟后，将反应混合物用1m氯化氢水溶液和dcm稀释。将有机层分离并依次用1 m naoh溶液和盐水(brine)洗涤，干燥(mgso4)，过滤并在真空中浓缩。残余物质通过柱色谱 (硅胶，用庚烷-etoac，1:0至0:1洗脱)纯化，以提供作为灰白色固体的2-(4-氯-3-氟-苯氧基)-n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]乙酰胺(106 mg, 0.22 mmol, 92%产率)。1h nmr (500 mhz, dmso-d6) δ 8.12 (d, j = 7.8 hz, 1h), 8.00
ꢀ–ꢀ
8.06 (m, 2h), 7.67
ꢀ–ꢀ
7.73 (m, 2h), 7.51 (t, j = 8.9 hz, 1h), 7.09 (dd, j = 11.4, 2.8 hz, 1h), 6.83
ꢀ–ꢀ
6.91 (m, 1h), 4.82 (dd, j = 10.7, 2.6 hz, 1h), 4.56 (s, 2h), 3.84
ꢀ–ꢀ
4.00 (m, 2h), 3.38 (t, j = 10.2 hz, 1h), 2.12
ꢀ–ꢀ
2.22 (m, 1h), 1.95
ꢀ–ꢀ
2.08 (m, 2h), 1.68
ꢀ–ꢀ
1.80 (m, 1h)。m/z: 466[m h], esi , rt = 4.20 min (s1)。
[0149]
表1中的化合物使用相应的中间体根据如实施例1所例举的通用路线8合成。
2h), 4.87
ꢀ–ꢀ
4.76 (m, 1h), 4.67 (d, j =1.9, 2h), 3.97
ꢀ–ꢀ
3.91 (m, 1h), 3.92
ꢀ–ꢀ
3.84 (m, 1h), 3.40
ꢀ–ꢀ
3.37 (m, 1h), 2.16 (d, j =13.7, 1h), 2.10
ꢀ–ꢀ
1.95 (m, 2h), 1.77
ꢀ–ꢀ
1.67 (m, 1h)。m/z: 467, 469 [m h], esi , rt = 3.35 min (s2)。
[0151]
表2中的化合物使用相应的中间体根据如实施例7所例举的通用路线9合成。
[0152]
路线10的方案实施例18：n-[3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]-2-[[6-(三氟甲基)-3-吡啶基]氧基]乙酰胺：将2-氯-n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]乙
酰胺(84%, 70 mg, 0.165 mmol)、碳酸二钾(46 mg, 0.330 mmol)、碘化钠(37 mg, 0.248 mmol)和6-(三氟甲基)吡啶-3-醇(27 mg, 0.165 mmol)于无水dmf (1 ml)中的溶液在n2下在40℃搅拌4 小时。添加水并在真空下过滤形成的沉淀物。残余物通过硅胶上的柱色谱纯化，使用etoac/庚烷(40-100%)作为洗脱液，以提供作为白色固体的n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]-2-[[6-(三氟甲基)-3-吡啶基]氧基]乙酰胺(41 mg, 0.082 mmol, 50%产率)。1h nmr (500 mhz, dmso-d6) δ 8.48 (d, j = 2.8 hz, 1h), 8.23 (d, j = 7.8 hz, 1h), 8.06
ꢀ–ꢀ
8.01 (m, 2h), 7.88 (d, j = 8.7 hz, 1h), 7.71
ꢀ–ꢀ
7.66 (m, 2h), 7.58 (dd, j = 8.7, 2.8 hz, 1h), 4.83 (dd, j = 10.7, 2.5 hz, 1h), 4.74 (d, j = 1.8 hz, 2h), 3.98
ꢀ–ꢀ
3.93 (m, 1h), 3.93
ꢀ–ꢀ
3.85 (m, 1h), 3.40 (s, 1h), 2.17 (dt, j = 10.2, 2.5 hz, 1h), 2.08
ꢀ–ꢀ
1.97 (m, 2h), 1.78
ꢀ–ꢀ
1.69 (m, 1h)。m/z: 483, 485 [m h] , rt = 3.37 (s2)。
[0153]
表3中的化合物使用相应的中间体根据如实施例18所例举的通用路线10合成。
[0154]
ii 生物测定hek-atf4高含量成像测定在hek-atf4高含量成像测定中测试实施例化合物，以评估它们防止衣霉素诱导的isr的药理学效力。将野生型hek293细胞以每孔12,000个细胞的密度铺板于384-孔成像测定板中的生长培养基(含有dmem/f12、10% fbs、2mm l-谷氨酰胺、100 u/ml青霉素-100μg/ml链霉素)中并在37℃、5% co2下孵育。24小时后，将培养基改为每孔50
ꢀµ
l测定培养基
(dmem/f12、0.3% fbs、2mm l-谷氨酰胺、100 u/ml青霉素-100 μg/ml链霉素)。将实施例化合物在二甲亚砜(dmso)中连续稀释，点样至中间板中，并用含有3.3
ꢀµ
m衣霉素的测定培养基预稀释，以得到最终测定浓度的11倍过量。除了实施例化合物测试区域之外，所述板还含有多个用于测定归一化目的的对照孔、含有衣霉素但不含实施例化合物的孔(高对照)，以及既不含实施例化合物也不含衣霉素的孔(低对照)。通过将5μl从中间板转移至测定板中开始测定，随后在37℃、5%co2下孵育6小时。随后，将细胞固定(在pbs中的4% pfa，在室温20 分钟)并进行间接atf4免疫荧光染色(一抗兔抗atf4，克隆d4b8，cell signaling technologies；二抗alexa fluor 488山羊抗-兔igg (h l)，thermofisher scientific)。使用hoechst染料(thermofisher scientific)对细胞核进行染色，并在配备405nm和488nm发射的opera phenix高含量成像平台上对板成像。最后，使用基于脚本的算法分析图像。主要读数hek-atf4监测细胞核和细胞质之间的atf4信号比。衣霉素诱导总体atf4比率信号的增加，这被isr调节实施例化合物所阻止。此外，hek-细胞计数(hek-cellcount)读数衍生自将对应于健康细胞的染色细胞核的数量进行计数。该读数充当内部毒性对照。本文的实施例化合物在细胞计数(cellcount)中没有产生显著的减少。
[0155]
测试的实施例化合物的活性提供于如下表t5中： = ic50 1-500nm； = ic50 》500-2000nm； = ic50 》2000-15000nm。
1.本发明涉及式(i)化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、互变异构体或立体异构体，其中r1至r3、a1和a2具有如说明书和权利要求中所示的含义。本发明进一步涉及包含所述化合物的药物组合物、它们作为药物的用途以及在用于治疗和预防与整合应激反应相关的一种或多种疾病或病症的方法中的用途。
2.整合应激反应(isr)是所有真核生物共有的细胞应激反应(1)。isr信号传导的调节异常具有重要的病理后果，尤其与炎症、病毒感染、糖尿病、癌症和神经退行性疾病有关。
3.isr是不同类型的细胞应激的共同特征，导致丝氨酸51上真核翻译起始因子2 (eif2α)的α亚基的磷酸化，导致正常蛋白合成的抑制和应激反应基因的表达(2)。在哺乳动物细胞中，磷酸化由四种eif2α激酶的家族进行，即：pkr-样er激酶(perk)、双链rna-依赖性蛋白激酶(pkr)、血红素-调节的eif2α激酶(hri)和总控不可抑制激酶2(general control non-derepressible 2 ) (gcn2)，其各自响应于不同的环境和生理应激(3)。
4.eif2α与eif2β和eif2γ一起形成eif2复合物，正常mrna翻译起始的关键参与者(4)。eif2复合物结合gtp和met-trnai，形成三元复合物(eif2-gtp-met-trnai)，其由核糖体募集用于翻译起始(5, 6)。
5.eif2b是一种异十聚体复合物，其由5个亚基(α、β、γ、δ、ε)组成，所述亚基一式两份形成gef-活性十聚体(7)。
6.响应于isr活化，磷酸化的eif2α抑制eif2b-介导的gdp交换为gtp，导致三元复合物形成减少，且因此导致抑制特征在于与5' aug起始密码子结合的核糖体的正常mrna的翻译(8)。在降低的三元复合物丰度的这些条件下，包括编码转录因子atf4的mrna在内的几种特定mrna的翻译经由涉及上游orf (uorf)的改变的翻译的机制被活化(7, 9, 10)。这些mrna通常含有一个或多个uorf，所述uorf通常在未受应激的细胞中发挥功能，以限制核糖体向主要编码orf的流动。例如，在正常条件期间，atf的5' utr中的uorf占据核糖体并阻止atf4的编码序列的翻译。然而，在应激条件期间，即在三元复合物形成减少的条件下，核糖体扫描通过这些上游orf并在编码orf的atf4处引发翻译的可能性增加。atf4和以这种方式表达的其它应激反应因子随后控制一系列进一步应激反应基因的表达。急性期在于旨在恢复体内平衡的蛋白的表达，而慢性期导致促凋亡因子的表达(1, 11, 12, 13)。
7.isr信号传导的标志物的上调已在各种病况(包括癌症和神经退行性疾病)中得到证实。在癌症中，er应激-调节的翻译增加对缺氧条件的耐受性并促进肿瘤生长(14, 15, 16)，并且已经显示通过基因靶向缺失perk减缓源自转化的perk-/-小鼠胚胎成纤维细胞的
肿瘤的生长(14, 17)。此外，最近的报告已提供了如下的概念证据：使用在小鼠中的源自患者的异种移植模型，eif2b活化剂有效治疗一种形式的侵袭性转移性前列腺癌(28)。总之，细胞保护性isr信号传导的预防可能代表一种有效的抗增殖策略，用于治疗至少一些形式的癌症。
8.此外，isr信号传导的调节可以证明在保持突触功能和减少神经元衰退中是有效的，在特征在于错误折叠蛋白和未折叠蛋白反应(upr)活化的神经退行性疾病(如肌萎缩侧索硬化症(als)、额颞叶痴呆(ftd)、阿尔茨海默氏病(ad)、帕金森氏病(pd)和jakob creutzfeld(朊病毒)病)中也是如此(18, 19, 20)。以朊病毒病作为存在的神经退行性疾病的实例，其中已显示isr信号传导的药理学以及遗传抑制可以使蛋白翻译水平正常化、挽救突触功能并防止神经元丢失(21)。具体地，通过控制磷酸化eif2α水平的磷酸酶的过表达来降低磷酸化eif2α的水平，增加了感染朊病毒的小鼠的存活率，而持续的eif2α磷酸化降低了存活率(22)。
9.此外，控制蛋白表达水平对于正常脑功能的重要性的直接证据以影响eif2和eif2b的功能的罕见遗传疾病的形式存在。破坏eif2的复杂完整性且因此导致降低的正常蛋白表达水平的eif2γ中的突变与智力障碍综合征(id)相关(23)。eif2b的亚基中的部分功能丧失突变已被显示是罕见的脑白质营养不良白质消融性疾病(vwmd)的原因(24, 25)。具体地，通过与isrib相关的小分子在vwmd小鼠模型中稳定eif2b部分功能丧失已被显示减少isr标记物并改善功能以及病理学终点(26, 27)。
10.eif2α路径的调节剂描述于wo 2014/144952 a2中。wo 2017/193030 a1、wo 2017/193034 a1、wo 2017/193041 a1和wo 2017/193063 a1描述了整合应激路径的调节剂。wo 2017/212423 a1、wo 2017/212425 a1、wo 2018/225093 a1、wo 2019/008506 a1和wo 2019/008507 a1描述了atf4路径的抑制剂。wo 2019/032743 a1和wo 2019/046779 a1涉及真核起始因子2b调节剂。
11.描述整合应激路径的调节剂的另外的文献是wo 2019/090069 a1、 wo 2019/090074 a1、 wo 2019/090076 a1、 wo 2019/090078 a1、 wo 2019/090081 a1、wo 2019/090082 a1、wo 2019/090085 a1、 wo 2019/090088 a1、 wo 2019/090090 a1。真核起始因子的调节剂描述于wo 2019/183589 a1中。wo 2019/118785 a2描述了整合应激反应路径的抑制剂。作为atf4抑制剂的杂芳基衍生物描述于wo 2019/193540 a1中。作为atf4抑制剂的双环芳族环衍生物描述于wo 2019/193541 a1中。
12.然而，仍然需要可用作整合应激反应路径调节剂的具有良好药代动力学特性的新化合物。
13.因此，本发明的目的是提供一类新的作为整合应激反应路径的调节剂的化合物，其可有效治疗整合应激反应路径相关的疾病并且可显示改善的药学相关特性，包括活性、选择性、admet特性和/或减少的副作用。
14.因此，本发明提供了式(i)的化合物
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、互变异构体或立体异构体，其中a1是c5亚环烷基、c5亚环烯基或含氮环原子的5-元亚杂环基（heterocyclene），其中a1任选地被一个或多个相同或不同的r4取代；每个r4独立地是卤素；cn；or5；氧代(=o)，其中环至少部分饱和；或c
1-6
烷基，其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；r5是h或c
1-6
烷基，其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；a2是苯基或5-至6-元芳族杂环基，优选地是苯基或6-元芳族杂环基，其中a2任选地被一个或多个相同或不同的r6取代；每个r6独立地是oh、o(c
1-6
烷基)、卤素、cn、环丙基、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基或c
2-6
炔基，其中环丙基、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；或者两个r6与它们所连接的原子连接在一起以形成环a
2a
；a
2a
是苯基；c
3-7
环烷基；或3至7元杂环基，其中a
2a
任选地被一个或多个相同或不同的r7取代；每个r7独立地是c
1-6
烷基、c
2-6
烯基或c
2-6
炔基，其中c
1-6
烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；r1是h或c
1-4
烷基，优选地是h，其中c
1-4
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；r2是h或c
1-4
烷基，其中c
1-4
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；且r3是a3；或者r2和r3连接以形成3,4-二氢-2h-1-苯并吡喃环，其任选地被一个或多个相同或不同的r8取代；a3是苯基或5-至6-元芳族杂环基，优选地是苯基或6-元芳族杂环基，其中a3任选地被一个或多个相同或不同的r8取代；每个r8独立地是卤素、cn、c(o)or9、or9、c(o)r9、c(o)n(r9r
9a
)、s(o)2n(r9r
9a
)、s(o)n(r9r
9a
)、s(o)2r9、s(o)r9、n(r9)s(o)2n(r
9ar9b
)、sr9、n(r9r
9a
)、no2、oc(o)r9、n(r9)c(o)r
9a
、n(r9)s(o)2r
9a
、n(r9)s(o)r
9a
、n(r9)c(o)or
9a
、n(r9)c(o)n(r
9ar9b
)、oc(o)n(r9r
9a
)、氧代(=o)(其中环至少部分饱和)、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基或c
2-6
炔基，其中c
1-6
烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基任选地被一个或多个相同或不同的r
10
取代；r9、r
9a
、r
9b
独立地选自h、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基，其中c
1-6
烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；每个r
10
独立地是卤素、cn、c(o)or
11
、or
11
、c(o)r
11
、c(o)n(r
11r11a
)、s(o)2n(r
11r11a
)、s(o)n(r
11r11a
)、s(o)2r
11
、s(o)r
11
、n(r
11
)s(o)2n(r
11ar11b
)、sr
11
、n(r
11r11a
)、no2、oc
(o)r
11
、n(r
11
)c(o)r
11a
、n(r
11
)so2r
11a
、n(r
11
)s(o)r
11a
、n(r
11
)c(o)n(r
11ar11b
)、n(r
11
)c(o)or
11a
或oc(o)n(r
11r11a
)；r
11
、r
11a
、r
11b
独立地选自h、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基，其中c
1-6
烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代。
15.在变量或取代基可以选自一组不同的变体的情况下，并且此类变量或取代基出现多于一次，则各个变体可以相同或不同。
16.在本发明的含义内，使用如下术语：术语“任选取代的”意指未取代的或取代的。通常-但不限于-，“一个或多个取代基”意指一个、两个或三个取代基，优选一个或两个取代基，且更优选一个取代基。通常，这些取代基可以相同或不同。
[0017]“烷基”意指直链或支链烃链。烷基碳的每个氢可以被进一步指定的取代基替代。
[0018]“烯基”意指含有至少一个碳-碳双键的直链或支链烃链。烯基碳的每个氢可以被进一步指定的取代基替代。
[0019]“炔基”意指含有至少一个碳-碳三键的直链或支链烃链。炔基碳的每个氢可以被进一步指定的取代基替代。
[0020]“c
1-4
烷基”意指具有1-4个碳原子的烷基链，如果在分子的末端出现，例如是：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基，或者，当分子的两个部分通过该烷基连接时，例如是，-ch
2-、-ch
2-ch
2-、-ch(ch3)-、-ch
2-ch
2-ch
2-、-ch(c2h5)-、-c(ch3)
2-。c
1-4
烷基碳的每个氢可以被进一步指定的取代基替代。
[0021]“c
1-6
烷基”意指具有1-6个碳原子的烷基链，如果在分子的末端出现，例如是：c
1-4
烷基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基，或者，当分子的两个部分通过该烷基连接时，例如是，-ch
2-、-ch
2-ch
2-、-ch(ch3)-、-ch
2-ch
2-ch
2-、-ch(c2h5)-、-c(ch3)
2-。c
1-6
烷基碳的每个氢可以被进一步指定的取代基替代。
[0022]“c
2-6
烯基”意指具有2至6个碳原子的烯基链，如果在分子的末端出现，例如是：-ch=ch2、-ch=ch-ch3、-ch
2-ch=ch2、-ch=ch-ch
2-ch3、-ch=ch-ch=ch2，或者，当分子的两个部分通过该烯基连接时，例如是，-ch=ch-。c
2-6
烯基碳的每个氢可以被进一步指定的取代基替代。
[0023]“c
2-6
炔基”意指具有2至6个碳原子的炔基链，如果在分子的末端出现，例如是：-c≡ch、-ch
2-c≡ch、-ch
2-ch
2-c≡ch、-ch
2-c≡c-ch3，或者，当分子的两个部分通过该炔基连接时，例如是，-c≡c-。c
2-6
炔基碳的每个氢可以被进一步指定的取代基替代。
[0024]“c
3-7
环烷基”或“c
3-7
环烷基环”意指具有3-7碳原子的环状烷基链，例如，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己烯基、环庚基。优选，环烷基是指环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基。环烷基碳的每个氢可以被本文进一步指定的取代基替代。术语“c
3-5
环烷基”或“c
3-5
环烷基环”相应地定义。
[0025]“c5亚环烷基”是指具有五个碳原子的二价环烷基，即二价环戊基环。
[0026]“c5亚环烯基”是指二价亚环烯基，即二价环戊烯或环戊二烯。
[0027]“卤素”意指氟、氯、溴或碘。通常优选卤素是氟或氯。
[0028]“3至7元杂环基”或“3至7元杂环”意指具有3、4、5、6或7个环原子的环，其可以含有高达最大数量的双键(完全、部分或不饱和的芳族或非芳族环)，其中，至少一个环原子直至
4个环原子被选自硫(包括-s(o)-、-s(o)
2-)、氧和氮(包括=n(o)-)的杂原子替代，且其中所述环经由碳或氮原子与分子的其余部分连接。3至7元杂环的实例是：氮杂环丙烷、氮杂环丁烷、氧杂环丁烷、硫杂环丁烷、呋喃、噻吩、吡咯、吡咯啉、咪唑、咪唑啉、吡唑、吡唑啉、噁唑、噁唑啉、异噁唑、异噁唑啉、噻唑、噻唑啉、异噻唑、异噻唑啉、噻二唑、噻二唑啉、四氢呋喃、四氢噻吩、吡咯烷、咪唑烷、吡唑烷、噁唑烷、异噁唑烷、噻唑烷、异噻唑烷、噻二唑烷、环丁砜、吡喃、二氢吡喃、四氢吡喃、咪唑烷、吡啶、哒嗪、吡嗪、嘧啶、哌嗪、哌啶、吗啉、四唑、三唑、三唑烷、四唑烷、二氮杂环庚烷、氮杂
䓬
或高哌嗪。术语“5至6元杂环基”或“5至6元杂环”相应地定义。术语“5元杂环基”或“5元杂环”相应地定义并且包括5元芳族杂环基或杂环。
[0029]
术语“含氮环原子的5-元亚杂环基”是指二价5-元杂环，其中五个环原子中的至少一个是氮原子并且其中该环经由碳或氮原子与分子的其余部分连接。
[0030]“饱和的4至7元杂环基”或“饱和的4至7元杂环”意指完全饱和的“4至7元杂环基”或“4至7元杂环”。
[0031]“4至7元至少部分饱和的杂环基”或“4至7元至少部分饱和的杂环”意指至少部分饱和的“4至7元杂环基”或“4至7元杂环”。
[0032]“5至6元芳族杂环基”或“5至6元芳族杂环”意指衍生自环戊二烯基或苯的杂环，其中至少一个碳原子被选自硫(包括-s(o)-、-s(o)
2-)、氧和氮(包括=n(o)-)的杂原子替代。此类杂环的实例是呋喃、噻吩、吡咯、咪唑、吡唑、噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、噻二唑、三唑、四唑、吡啶、嘧啶、哒嗪、吡嗪、三嗪。
[0033]“5元芳族杂环基”或“5元芳族杂环”意指衍生自环戊二烯基的杂环，其中至少一个碳原子被选自硫(包括-s(o)-、-s(o)
2-)、氧和氮(包括=n(o)-)的杂原子替代。此类杂环的实例是呋喃、噻吩、吡咯、咪唑、吡唑、噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、噻二唑、三唑、四唑。
[0034]“7至12元杂双环基”或“7至12元杂双环”意指具有7至12个环原子的两个环的杂环体系，其中，两个环共享至少一个环原子，并且可以含有高达最大数量的双键(完全、部分或不饱和的芳族或非芳族环)，其中至少一个环原子至6个环原子被选自硫(包括-s(o)-、-s(o)
2-)、氧和氮(包括=n(o)-)的杂原子替代，且其中所述环经由碳或氮原子与分子的其余部分连接。7至12元杂双环的实例是吲哚、二氢吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并噁唑、苯并异噁唑、苯并噻唑、苯并异噻唑、苯并咪唑、苯并咪唑啉、喹啉、喹唑啉、二氢喹唑啉、喹啉、二氢喹啉、四氢喹啉、十氢喹啉、异喹啉、十氢异喹啉、四氢异喹啉、二氢异喹啉、苯并氮杂
䓬
、嘌呤或蝶啶。术语7至12元杂双环还包括两个环的螺结构，如6-氧杂-2-氮杂螺[3,4]辛烷、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚-6-基或2,6-二氮杂螺[3.3]庚-6-基，或桥接杂环，如8-氮杂-双环[3.2.1]辛烷或2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛-2-基或3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷。
[0035]“饱和的7至12元杂双环基”或“饱和的7至12元杂双环”意指完全饱和的7至12元杂双环基或7至12元杂双环。
[0036]“7至12元至少部分饱和的杂双环基”或“7至12元至少部分饱和的杂双环”意指至少部分饱和的“7至12元杂双环基”或“7至12元杂双环”。
[0037]“9至11元芳族杂双环基”或“9至11元芳族杂双环”意指两个环的杂环体系，其中至少一个环是芳族的，并且其中所述杂环体系具有9至11个环原子，其中两个环共享两个环原子，并且可以含有高达最大数量的双键(完全或部分芳族的)，其中至少一个环原子至6个环原子被选自硫(包括-s(o)-、-s(o)
2-)、氧和氮(包括=n(o)-)的杂原子替代，且其中所述环
经由碳或氮原子与分子的其余部分连接。9至11元芳族杂双环的实例是吲哚、二氢吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并噁唑、苯并异噁唑、苯并噻唑、苯并异噻唑、苯并咪唑、苯并咪唑啉、喹啉、喹唑啉、二氢喹唑啉、二氢喹啉、四氢喹啉、异喹啉、四氢异喹啉、二氢异喹啉、苯并氮杂
䓬
、嘌呤或蝶啶。术语“9至10元芳族杂双环基”或“9至10元芳族杂双环”相应地定义。
[0038]
优选的式(i)化合物是其中含有的一个或多个残基具有下面给出的含义的那些化合物，其中优选的取代基定义的所有组合都是本发明的主题。关于所有优选的式(i)的化合物，本发明还包括它们的所有互变异构和立体异构形式和其所有比率的混合物，以及它们的药学上可接受的盐。
[0039]
在本发明的优选实施方案中，下面提到的取代基独立地具有下列含义。由此，这些取代基中的一个或多个取代基可以具有下面给出优选的或更优选的含义。
[0040]
优选地，a1是含有氮环原子的5-元亚杂环基，其中a1任选地被一个或多个相同或不同的r4取代。
[0041]
优选地，a1是含有氮环原子的5-元亚杂环基，其选自以下二价杂环：噁二唑、咪唑、咪唑烷、吡唑和三唑，优选噁二唑，且其中a1任选地被一个或多个相同或不同的r4取代。
[0042]
优选地，a1未被取代或被一个或两个相同或不同的r4取代，优选地，a1未被取代。
[0043]
优选地，r4是氧代，其中环是至少部分饱和的。
[0044]
优选地，a1是更优选地，a1是。
[0045]
优选地，a2是苯基、吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、吡唑基或1,2,4-噁二唑基，其中a2任选地被一个或多个相同或不同的r6取代。
[0046]
优选地，a2是苯基、吡啶基、吡嗪基或哒嗪基，其中a2任选地被一个或多个相同或不同的r6取代。
[0047]
优选地，a2被一个或两个相同或不同的r6取代。
氟-6-甲基吡啶-3-基)氧基]乙酰胺,2-[(6-氯-5-氟吡啶-3-基)氧基]-n-[(3r,6s)-6-[5-(6-氯吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-基]氧杂环己烷-3-基]乙酰胺,n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]氧杂环己烷-3-基]-2-[(6-甲基吡啶-3-基)氧基]乙酰胺,n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]氧杂环己烷-3-基]-2-[(5-氯吡嗪-2-基)氧基]乙酰胺,n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]氧杂环己烷-3-基]-2-[(2-氯嘧啶-5-基)氧基]乙酰胺,2-[(5-氯-6-甲基吡啶-3-基)氧基]-n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]氧杂环己烷-3-基]乙酰胺,2-(4-氯-3-氟苯氧基)-n-[(3r,6s)-6-{5-[5-(三氟甲基)吡啶-3-基]-1,3,4-噁二唑-2-基}氧杂环己烷-3-基]乙酰胺,2-(4-氯-3-氟苯氧基)-n-[(3r,6s)-6-{5-[2-(三氟甲基)吡啶-4-基]-1,3,4-噁二唑-2-基}氧杂环己烷-3-基]乙酰胺,n-[3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]-2-[[6-(三氟甲基)-3-吡啶基]氧基]乙酰胺，或n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]氧杂环己烷-3-基]-2-{[5-(三氟甲基)吡啶-3-基]氧基}乙酰胺。
[0058]
在可以存在式(i)化合物的互变异构(例如，酮-烯醇互变异构)的情况下，单一形式，例如酮和烯醇形式，被独立地包括在内以及以任何比率的混合物形式被包括在内。同样适用于立体异构体，例如，对映异构体、顺式/反式异构体、构象异构体等。
[0059]
尤其是，当得到根据式(i)的化合物的对映异构或非对映异构形式时，式(i)包括每种单独的纯的形式和至少两种纯的形式的任何比率的任何混合物，并且是本发明的主题。
[0060]
优选的式(i)是式(ib)。
[0061]
同位素标记的式(i)化合物也在本发明范围内。同位素标记的方法是本领域已知的。优选的同位素是元素h、c、n、o和s的同位素。式(i)化合物的溶剂化物和水合物也在本发明的范围内。
[0062]
如果需要的话，可以通过本领域众所周知的方法分离异构体，例如，通过液相色谱。通过使用例如手性固定相，同样适用于对映异构体。另外，可以如下分离对映异构体：将它们转化为非对映异构体，即，与对映异构纯的助剂化合物结合，随后分离所得的非对映异构体，并使助剂残基裂解。或者，可以由立体选择性合成，使用光学纯的起始材料、试剂和/
或催化剂，获得式(i)化合物的任何对映异构体。
[0063]
如果根据式(i)的化合物含有一个或多个酸性或碱性基团，则本发明也包括它们相应的药学上或毒理学可接受的盐，尤其是它们的药学上可利用的盐。因此，根据本发明，可以使用含有酸性基团的式(i)的化合物，例如，作为碱金属盐、碱土金属盐或作为铵盐。此类盐的更确切的实例包括：钠盐、钾盐、钙盐、镁盐或与氨或有机胺形成的盐，所述有机胺例如乙胺、乙醇胺、三乙醇胺或氨基酸。可以存在含有一个或多个碱性基团(即，可以被质子化的基团)的式(i)的化合物，并且根据本发明，可以以它们与无机或有机酸形成的加成盐形式使用。合适的酸的实例包括：盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、萘二磺酸、草酸、乙酸、酒石酸、乳酸、水杨酸、苯甲酸、甲酸、丙酸、特戊酸、二乙基乙酸、丙二酸、琥珀酸、庚二酸、富马酸、马来酸、苹果酸、氨基磺酸、苯基丙酸、葡糖酸、抗坏血酸、异烟酸、柠檬酸、己二酸，以及本领域技术人员已知的其它酸。如果式(i)的化合物在分子中同时含有酸性和碱性基团，则除了提到的盐形式之外，本发明还包括内盐或甜菜碱(两性离子)。通过本领域技术人员已知的常规方法，可以获得根据式(i)的各种盐，例如，在溶剂或分散剂中，使这些与有机或无机酸或碱接触，或通过与其它盐的阴离子交换或阳离子交换。本发明还包括式(i)的化合物的所有盐，所述盐由于它们低的生理相容性，不适合在药物中直接使用，但可以例如用作化学反应的中间体，或用于制备药学上可接受的盐。
[0064]
如下所示，本发明的化合物被认为适用于调节整合应激反应路径。
[0065]
整合应激反应(isr)是所有真核生物共有的细胞应激反应(1)。isr信号传导的调节异常具有重要的病理后果，尤其与炎症、病毒感染、糖尿病、癌症和神经退行性疾病有关。
[0066]
isr是不同类型的细胞应激的共同特征，导致丝氨酸51上真核翻译起始因子2 (eif2α)的α亚基的磷酸化，导致正常蛋白合成的抑制和应激反应基因的表达(2)。在哺乳动物细胞中，磷酸化由四种eif2α激酶的家族进行，即：pkr-样er激酶(perk)、双链rna-依赖性蛋白激酶(pkr)、血红素-调节的eif2α激酶(hri)和总控不可抑制激酶2(gcn2)，其各自响应于不同的环境和生理应激(3)。
[0067]
eif2α与eif2β和eif2γ一起形成eif2复合物，这是正常mrna翻译起始的关键参与者(4)。eif2复合物结合gtp和met-trnai，形成三元复合物(eif2-gtp-met-trnai)，其由核糖体募集用于翻译起始(5, 6)。
[0068]
eif2b是一种异十聚体复合物，其由5个亚基(α、β、γ、δ、ε)组成，所述亚基一式两份形成gef-活性十聚体(7)。
[0069]
响应于isr活化，磷酸化的eif2α抑制eif2b-介导的gdp交换为gtp，导致三元复合物形成减少，且因此导致抑制特征在于与5' aug起始密码子结合的核糖体的正常mrna的翻译(8)。在降低的三元复合物丰度的这些条件下，包括编码转录因子atf4的mrna在内的几种特定mrna的翻译经由涉及上游orf (uorf)的改变的翻译的机制被活化(7, 9, 10)。这些mrna通常含有一个或多个uorf，所述uorf通常在未受应激的细胞中发挥功能，以限制核糖体向主要编码orf的流动。例如，在正常条件期间，atf的5' utr中的uorf占据核糖体并阻止atf4的编码序列的翻译。然而，在应激条件期间，即在三元复合物形成减少的条件下，核糖体扫描通过这些上游orf并在编码orf的atf4处引发翻译的可能性增加。atf4和以这种方式表达的其它应激反应因子随后控制一系列进一步应激反应基因的表达。急性期在于旨在恢复体内平衡的蛋白的表达，而慢性期导致促凋亡因子的表达(1, 11, 12, 13)。
[0070]
isr信号传导的标志物的上调已在各种疾病(包括癌症和神经退行性疾病)中得到证实。在癌症中，er应激-调节的翻译增加对缺氧条件的耐受性并促进肿瘤生长(14, 15, 16)，并且已经显示通过基因靶向缺失perk减缓源自转化的perk-/-小鼠胚胎成纤维细胞的肿瘤的生长(14, 17)。此外，最近的报告已提供了如下的概念证据：使用在小鼠中的源自患者的异种移植模型，eif2b活化剂可有效治疗一种形式的侵袭性转移性前列腺癌(28)。总之，细胞保护性isr信号传导的预防可能代表一种有效的抗增殖策略，用于治疗至少一些形式的癌症。
[0071]
此外，isr信号传导的调节可以证明可有效保持突触功能和减少神经元衰退，并且在特征在于错误折叠蛋白和未折叠蛋白反应(upr)活化的神经退行性疾病(如肌萎缩侧索硬化症(als)、额颞叶痴呆(ftd)、阿尔茨海默氏病(ad)、帕金森氏病(pd)和jakob creutzfeld(朊病毒)病)中也是如此(18, 19, 20)。以朊病毒病作为存在的神经退行性疾病的实例，其中已显示isr信号传导的药理学以及遗传抑制可以使蛋白翻译水平正常化，挽救突触功能并防止神经元丢失(21)。具体地，通过控制磷酸化eif2α水平的磷酸酶的过表达来降低磷酸化eif2α的水平，增加了感染朊病毒的小鼠的存活率，而持续的eif2α磷酸化降低了存活率(22)。
[0072]
此外，控制蛋白表达水平对于正常脑功能的重要性的直接证据以影响eif2和eif2b的功能的罕见遗传疾病的形式存在。破坏eif2的复杂完整性且因此导致正常蛋白表达水平降低的eif2γ中的突变与智力障碍综合征(id)相关(23)。eif2b的亚基中的部分功能丧失突变已被显示是罕见的脑白质营养不良白质消融性疾病(vwmd)的原因(24, 25)。具体地，通过与isrib相关的小分子在vwmd小鼠模型中稳定eif2b部分功能丧失已被显示减少isr标记物并改善功能以及病理学终点(26, 27)。
[0073]
本发明提供了游离或药学上可接受的盐形式的本发明的化合物，其将用于治疗本文提及的疾病或病症。
[0074]
因此，本发明的进一步方面是本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其用作药物。
[0075]
所描述的治疗方法可应用于哺乳动物，如狗、猫、牛、马、兔、猴和人。优选地，哺乳动物患者是人类患者。
[0076]
因此，本发明提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其将用于治疗或预防一种或多种与整合应激反应相关的疾病或病症。
[0077]
本发明的进一步方面是本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗或预防一种或多种与整合应激反应相关的病症或疾病的方法中。
[0078]
本发明的进一步方面是本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于制备药物的用途，所述药物用于治疗或预防一种或多种与整合应激反应相关的病症或疾病。
[0079]
本发明的又另一个方面是用于治疗、控制、延迟或预防需要治疗的哺乳动物患者中的一种或多种与整合应激反应相关的疾病或病症的方法，其中所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。
[0080]
本发明提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其将用于治疗或预防一种或多种下面提及的疾病或病症。
[0081]
本发明的进一步方面是本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗或预
classification of diseases and related health problems 10th revision(icd-10)类别c00-d48分类的任何肿瘤。
[0090]
示例性地，根据本发明的肿瘤病可以存在一种或多种恶性瘤(肿瘤)(icd-10类别c00-c97)，可以存在一种或多种原位瘤(icd-10类别d00-d09)，可以存在一种或多种良性瘤(icd-10类别d10-d36)，或可以存在一种或多种不确定的或未知特性的瘤(icd-10类别d37-d48)。优选地，根据本发明的肿瘤病是指存在一种或多种恶性瘤，即，恶性肿瘤(icd-10类别c00-c97)。
[0091]
在更优选实施方案中，肿瘤病是癌症。
[0092]
可以将癌症最广义地理解为任何恶性肿瘤病，即，患者中存在一种或多种恶性瘤。癌症可以是实体或血液学的恶性肿瘤。本文考虑但不限于白血病、淋巴瘤、癌和肉瘤。
[0093]
具体而言，在本文中包括特征在于上调的isr标志物的肿瘤病，如癌症。
[0094]
示例性癌症包括但不限于甲状腺癌、内分泌系统癌、胰腺癌、脑癌(例如多形性成胶质细胞瘤、神经胶质瘤)、乳腺癌(例如er阳性、er阴性、化学疗法抗性、赫赛汀(herceptin)抗性、her2阳性、多柔比星(doxorubicin)抗性、他莫昔芬(tamoxifen)抗性、导管癌、小叶癌、原发性的、转移性的)、宫颈癌、卵巢癌、子宫癌、结肠癌、头颈癌、肝癌(例如肝细胞癌瘤)、肾癌、肺癌(例如非小细胞肺癌、鳞状细胞肺癌、腺癌、大细胞肺癌、小细胞肺癌、类癌、肉瘤)、结肠癌、食道癌、胃癌、膀胱癌、骨癌、胃癌、前列腺癌和皮肤癌(例如黑素瘤)。
[0095]
进一步的实例包括但不限于骨髓瘤、白血病、间皮瘤和肉瘤。
[0096]
另外的实例包括但不限于髓母细胞瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、神经母细胞瘤、神经胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤、横纹肌肉瘤、原发性血小板增多症、原发性巨球蛋白血症、原发性脑肿瘤、恶性胰腺胰岛素瘤、恶性类癌、膀胱癌、癌前皮肤病变、睾丸癌、淋巴瘤、泌尿生殖道癌症、恶性高钙血症、子宫内膜癌、肾上腺皮质癌、胰腺内分泌或外分泌肿瘤(neoplasms of the endocrine or exocrine pancreas)、髓样甲状腺癌、髓样甲状腺癌瘤、黑素瘤、结肠直肠癌、乳头状甲状腺癌、肝细胞癌瘤、佩吉特氏乳头病(paget's disease of the nipple)、叶状肿瘤、小叶癌瘤、导管癌瘤、胰腺星状细胞癌和肝星状细胞癌。
[0097]
示例性白血病包括但不限于急性非淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、急性粒细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、急性早幼粒细胞性白血病、成人t细胞白血病、非白血病性白血病、白血病性白血病(leukocythemic leukemia)、嗜碱性白血病、母细胞白血病、牛白血病、慢性髓细胞白血病、皮肤白血病、干细胞性白血病、嗜酸性粒细胞白血病、格罗斯氏白血病(gross'leukemia)、毛细胞白血病、成血细胞性白血病、血胚细胞性白血病（hemocytoblastic leukemia）、组织细胞性白血病、干细胞白血病、急性单核细胞性白血病、白细胞减少性白血病、淋巴性白血病、淋巴母细胞性白血病、淋巴细胞性白血病、淋巴细胞白血病(lymphogenous leukemia)、淋巴样白血病、淋巴肉瘤细胞性白血病、肥大细胞白血病、巨核细胞白血病、微型髓母细胞性白血病(micromyeloblastic leukemia)、单核细胞性白血病、髓母细胞性白血病、髓细胞性白血病、骨髓性粒细胞性白血病、骨髓单核细胞性白血病、内格利氏白血病(naegeli leukemia)、浆细胞白血病(plasma cell leukemia)、多发性骨髓瘤、浆细胞性白血病(plasmacytic leukemia)、早幼粒细胞性白血病、李德尔氏细胞白血病(rieder cell leukemia)、希林氏白血病(schilling's leukemia)、干细胞白血
病、亚白血病性白血病和未分化性细胞白血病。
[0098]
示例性肉瘤包括但不限于软骨肉瘤、纤维肉瘤、淋巴肉瘤、黑素肉瘤、粘液肉瘤、骨肉瘤、艾伯内西氏肉瘤(abemethy's sarcoma)、脂肪组织肉瘤、脂肪肉瘤、腺泡状软组织肉瘤、成釉细胞肉瘤、葡萄状肉瘤、绿色肉瘤、绒毛膜癌、胚胎肉瘤、威尔姆氏肿瘤肉瘤(wilms' tumor sarcoma)、子宫内膜肉瘤、间质肉瘤、尤文氏肉瘤(ewing's sarcoma)、筋膜肉瘤、纤维母细胞性肉瘤、巨细胞肉瘤、粒细胞性肉瘤、霍奇金肉瘤、特发性多发性色素性出血性肉瘤、b细胞免疫母细胞性肉瘤、淋巴瘤、t细胞免疫母细胞性肉瘤、詹森氏肉瘤(jensen's sarcoma)、卡波西氏肉瘤(kaposi's sarcoma)、库普弗氏细胞肉瘤(kupffer cell sarcoma)、血管肉瘤、白色肉瘤、恶性间叶瘤、骨旁肉瘤、网状细胞肉瘤、劳斯氏肉瘤(rous sarcoma)、浆液囊性肉瘤(serocystic sarcoma)、滑膜肉瘤和毛细管扩张性肉瘤。
[0099]
示例性黑素瘤包括但不限于肢端着色斑性黑素瘤(acral-lentiginous melanoma)、无黑色素性黑素瘤、良性青少年性黑素瘤、克劳德曼氏黑素瘤(cloudman's melanoma)、s91黑素瘤、哈-帕二氏黑素瘤(harding-passey melanoma)、青少年性黑素瘤、恶性雀斑样痣性黑素瘤、恶性黑素瘤、结节性黑素瘤、甲下黑素瘤和浅表扩散性黑素瘤。
[0100]
示例性癌瘤包括但不限于髓样甲状腺癌瘤、家族性髓样甲状腺癌瘤、腺泡癌、腺泡状瘤、腺囊性癌、腺样囊性癌、腺癌、肾上腺皮质癌、滤泡癌、滤泡细胞癌、基底细胞癌、基底细胞癌瘤、基底细胞样癌、基底鳞状细胞癌、细支气管肺泡癌、细支气管癌、支气管癌、髓状癌、胆管细胞癌、绒毛膜癌、胶样癌、粉刺状癌、子宫体癌、筛状癌、铠甲状癌、皮肤癌、柱状癌(cylindrical carcinoma)、柱状细胞癌(cylindrical cell carcinoma)、导管癌(duct carcinoma)、导管癌(ductal carcinoma)、硬癌、胚胎癌、脑样癌、表皮样癌、腺样上皮癌、外生性癌瘤、溃疡性胃癌(carcinoma ex ulcere)、纤维癌、胶样癌(gelatiniforni carcinoma)、胶质癌(gelatinous carcinoma)、巨细胞癌瘤(giant cell carcinoma)、巨细胞癌(carcinoma gigantocellulare)、腺癌、粒层细胞癌、发母质癌(hair-matrix carcinoma)、血样癌、肝细胞癌瘤、许特耳氏细胞癌瘤(hurthle cell carcinoma)、胶样癌、肾上腺样癌、幼稚型胚胎性癌、原位癌、表皮内癌、上皮内癌、克鲁肯伯格氏癌(krompecher's carcinoma)、库尔契茨基氏细胞癌(kulchitzky-cell carcinoma)、大细胞癌、豆状癌(lenticular carcinoma)、豆状癌(carcinoma lenticulare)、脂瘤样癌、小叶癌、淋巴上皮癌、髓样癌(carcinoma medullare)、髓样癌(medullary carcinoma)、黑色素癌、髓样癌(carcinoma molle)、黏液癌(mucinous carcinoma)、粘液状癌(carcinoma muciparum)、粘液细胞癌、粘液表皮样癌、粘液癌(carcinoma mucosum)、黏液癌(mucous carcinoma)、粘液瘤样癌、鼻咽癌、燕麦细胞癌、骨化性癌、骨样癌、乳头状癌、门脉周癌、侵袭性癌、棘细胞癌、脑样癌、肾脏的肾细胞癌、贮备细胞癌、肉瘤样癌、施奈德氏癌(schneiderian carcinoma)、硬癌(scirrhous carcinoma)、阴囊癌、印戒细胞癌、单纯癌、小细胞癌、马铃薯状癌、球状细胞癌、梭形细胞癌、海绵样癌、鳞癌、鳞状细胞癌、绳捆癌(string carcinoma)、血管扩张性癌(carcinoma telangiectaticum)、血管扩张性癌(carcinoma telangiectodes)、移行细胞癌、小管癌(carcinoma tuberosum)、小管癌(tubular carcinoma)、结节性癌、疣赘性癌(verrucous carcinoma)和绒毛状癌。
[0101]
感染性疾病实例包括但不限于由病毒引起的感染(如hiv-1：人类免疫缺陷病毒1型；iav：甲型
流感病毒；hcv：丙型肝炎病毒；denv：登革热病毒；asfv：非洲猪瘟病毒；ebv：爱泼斯坦-巴尔病毒；hsv1：单纯疱疹病毒1；chikv：基孔肯雅病毒；hcmv：人类巨细胞病毒；sars-cov：严重急性呼吸系统综合征冠状病毒)；sars-cov-2：严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2的感染)以及细菌引起的感染(如军团菌、布鲁氏菌、西姆卡氏菌、衣原体、螺杆菌和弯曲杆菌的感染)。
[0102]
炎性疾病炎性疾病的实例包括但不限于术后认知功能异常(手术后认知功能降低)、创伤性脑损伤、关节炎、类风湿性关节炎、牛皮癣性关节炎、幼年型特发性关节炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮(sle)、重症肌无力、青少年发作型糖尿病、1型糖尿病、格-巴二氏综合征、桥本氏脑炎、桥本氏甲状腺炎、强直性脊柱炎、牛皮癣、斯耶格伦氏综合征、血管炎、肾小球肾炎、自身免疫性甲状腺炎、白塞病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、大疱性类天疱疮、肉样瘤病、鱼鳞癣、格雷夫斯眼病、炎性肠病、爱迪生氏病、白斑病、哮喘、过敏性哮喘、寻常痤疮、乳糜泻、慢性前列腺炎、炎性肠病、盆腔炎性疾病、再灌注损伤、肉样瘤病、移植排斥、间质性膀胱炎、动脉粥样硬化和特应性皮炎。
[0103]
肌肉骨骼疾病肌肉骨骼疾病的实例包括但不限于肌肉萎缩症、多发性硬化症、弗里德里希共济失调、肌肉萎缩性病症(例如，肌肉萎缩、肌肉减少症、恶病质)、包涵体肌病、进行性肌肉萎缩、运动神经元疾病、腕管综合征、上髁炎、肌腱炎、背痛、肌肉疼痛、肌肉酸痛、重复性劳损病症(repetitive strain disorder)和瘫痪。
[0104]
代谢疾病代谢疾病的实例包括但不限于糖尿病(特别是ii型糖尿病)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、非酒精性脂肪肝病(nafld)、尼曼匹克病、肝纤维化、肥胖症、心脏病、动脉粥样硬化、关节炎、胱氨酸病、苯酮尿酸症、增生性视网膜病变和克-萨二氏病。
[0105]
眼病眼病的实例包括但不限于任何闭塞性或炎性视网膜血管疾病的水肿或新血管形成，如虹膜发红、新生血管性青光眼、翼状胬肉、血管化青光眼滤过泡、结膜乳头状瘤；脉络膜新血管形成，如新生血管性年龄相关的黄斑变性(amd)、近视、前葡萄膜炎、创伤或特发性眼病；黄斑水肿，如手术后黄斑水肿、继发于葡萄膜炎的黄斑水肿，包括视网膜和/或脉络膜炎症、继发于糖尿病的黄斑水肿、和继发于视网膜血管闭塞性疾病(即分支和中央视网膜静脉闭塞)的黄斑水肿；糖尿病引起的视网膜新生血管形成，如视网膜静脉闭塞、葡萄膜炎、源自颈动脉疾病的眼部缺血综合征、眼部或视网膜动脉闭塞、镰状细胞视网膜病、其它缺血性或闭塞性新生血管性视网膜病、早产儿视网膜病或伊尔斯病(eale disease)；和遗传病，如希佩尔-林道综合征(vonhippel-lindau syndrome)。
[0106]
另外的疾病另外的疾病包括但不限于器官纤维化(如肝纤维化、肺纤维化或肾纤维化)、慢性和急性肝病(如脂肪肝病或肝脂肪变性)、慢性和急性肺病、慢性和急性肾病、心肌梗塞、心血管疾病、心律失常、动脉粥样硬化、脊髓损伤、缺血性中风和神经性疼痛。
[0107]
本发明的又另一个方面是药物组合物，其包含至少一种本发明的化合物或其药学上可接受的盐连同药学上可接受的载体，任选地与一种或多种其它生物活性化合物或药物
组合物组合。
[0108]
优选地，所述一种或多种生物活性化合物是除了式(i)的化合物之外的整合应激反应路径的调节剂。
[0109]“药物组合物”意指一种或多种活性成分和组成载体的一种或多种惰性成分以及由下列直接或间接获得的任何产物：任何两种或多种成分组合、复合、聚集；或者一种或多种组分解离；或者一种或多种成分的其它类型的反应或相互作用。因此，本发明药物组合物包括通过本发明化合物和药学上可接受的载体混合而制得的任何组合物。
[0110]
本发明的药物组合物可以包含一种或多种另外的化合物作为活性成分，如组合物中的式(i)的化合物的混合物或整合应激反应路径的其它调节剂。
[0111]
活性成分可以包含在一种或多种不同的药物组合物(药物组合物的组合)中。
[0112]
术语“药学上可接受的盐”是指由药学上可接受的无毒碱或酸(包括无机碱或酸和有机碱或酸)制得的盐。
[0113]
所述组合物包括适合经口、直肠、局部、肠胃外(包括皮下、肌肉内和静脉内)、眼(眼的)、肺(鼻或颊吸入)或鼻施用的组合物，尽管在任何给定的情况下最合适的途径取决于治疗的病况的性质和严重性以及活性成分的性质。它们可方便地以单位剂量形式呈现并采用药物领域众所周知的任何方法制备。
[0114]
在实际应用中，根据常规药物配制技术，式(i)的化合物作为活性成分可以与药用载体结合为紧密混合物。所述载体可根据施用(例如，经口或胃肠外(包括静脉内的))所需的制剂形式而采用多种形式。在制备口服剂型组合物时，在口服液体制剂如，例如，混悬剂、酏剂和溶液剂的情况下，可使用任何常用的药用介质，如，水、二醇类、油类、醇类、矫味剂、防腐剂、着色剂等；或者，在口服固体制剂如粉剂、硬和软胶囊以及片剂情况下，可使用任何常用的药用载体，如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等，相对液体剂型来说，优选固体口服剂型。
[0115]
因为其容易施用，所以片剂和胶囊代表最有益的口服单位剂型，在此情况下，明显采用固体药物载体。如果需要，片剂可通过标准含水或非含水技术包衣。此类组合物和制剂应包含至少0.1％的活性化合物。当然，活性化合物在这些组合物中的百分比可变化，并且可以方便地为单位重量的约2％至约60％。在此类治疗有用的组合物中的活性化合物的量使得将获得有效剂量。活性化合物也可以鼻内施用，例如，作为液体滴剂或喷雾剂。
[0116]
片剂、丸剂、胶囊等也可以含有：粘合剂，如黄蓍胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂，如磷酸氢钙；崩解剂，如玉米淀粉、土豆淀粉、海藻酸；润滑剂，如硬脂酸镁；和甜味剂，如蔗糖、乳糖或糖精。当单位剂型为胶囊时，除了上述类型的材料之外，其可以含有液体载体，如脂肪油。
[0117]
各种其它材料可以作为包衣存在，或用于改变单位剂量的物理形式。例如，片剂可用虫胶、糖或两者一起包衣。除了活性成分外，糖浆剂或酏剂可以含有：作为甜味剂的蔗糖、作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、着色剂和矫味剂(如樱桃或橙子口味)。
[0118]
式(i)的化合物也可以肠胃外施用。这些活性化合物的溶液剂或混悬剂可在水中与表面活性剂(如羟丙基纤维素)合适地混合来制备。分散体也可以在甘油、液体聚乙二醇以及其在油中的混合物中制备。在储存和使用的通常条件下，这些制剂包含防腐剂以防止
微生物的生长。
[0119]
适合于注射使用的药物形式包括用于即时制备无菌注射溶液或分散体的无菌水溶液或分散体和无菌粉末。在所有情况下，该形式应当为无菌的并且应当为流体的，达到的程度为具有易于注射性。在制备和储存的条件下，所述形式应当稳定并且应当使其免受微生物(如细菌和真菌)的污染作用。载体可以是溶剂或分散介质，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)、其合适的混合物和植物油。
[0120]
任何合适的施用途径可以用于为哺乳动物(尤其是人类)提供有效剂量的本发明化合物。例如，可以采用经口、直肠、局部、肠胃外、眼、肺、鼻等。剂型包括片剂、口含片剂、分散体、混悬剂、溶液剂、胶囊剂、霜剂、软膏剂、气雾剂等。优选地，经口施用式(i)的化合物。
[0121]
所采用的活性成分的有效剂量可取决于采用的具体化合物、施用模式、正在治疗的病况以及正在治疗的病况的严重性而变化。此类剂量可由本领域技术人员容易地确定。
[0122]
用于合成本发明的优选实施方案的起始材料可以购自市售来源，如array、sigma aldrich、acros、fisher、fluka、abcr，或者可以使用本领域技术人员已知的方法合成。
[0123]
通常，几种方法可供用于制备本发明的化合物。在一些情况下，可以组合各种策略。可以使用依序的或汇聚的路线。下面描述示例性合成路线。
实施例
[0124]
i 化学合成实验程序：使用以下缩写词和首字母缩略词：aq
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
含水的盐水(brine)
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
nacl在水中的饱和溶液cv
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
柱体积δ
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
以百万分之几计的化学位移d
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
双重峰dcm
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二氯甲烷dd
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
双重双重峰ddd
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
双重的双重双重峰dmso
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二甲亚砜dmso-d6
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
氘代二甲亚砜dipea
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二异丙基乙胺dmf
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二甲基甲酰胺esi
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
正电离模式esi
‑ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
负电离模式etoac
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
乙酸乙酯et2o
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
乙醚hcl
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
盐酸hplc
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
高效液相色谱h
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
小时
acquity光电二极管阵列检测器，在215 nm处记录uv光谱。使用waters quatro premier xe以每秒5次扫描的取样率经m/z 150至850的范围获得质谱。使用waters masslynx和openlynx软件，将数据整合并报告。
[0127]
体系3 (s3)：酸性最终方法(shimadzu)：5%溶剂b持续1 min，且然后线性梯度5.5 min内5-100%溶剂b 2.5 min 100%溶剂b，流速为1.0 ml/min。柱atlantis dc18 (50 x 3.0 mm)。溶剂a=0.1%的在水中的甲酸，溶剂b=0.1%的在乙腈中的甲酸。
[0128]
体系4 (s4)：碱性最终方法(ms16)在具有waters 2996 pda检测器和waters 2420 els检测器的agilent g1312a系统上使用phenomenex gemini
ꢀ–
nx c18柱(2.0 x 100mm, 3mm柱；温度：40℃)以及如下的梯度：经5.5 min 5-100% (a= 2 mm 碳酸氢铵，缓冲至 ph 10；b = 乙腈)，然后 100% b 持续0.4 min，进行分析型metcr1603 hplc-ms，其中进样量为 3
ꢀµ
l，和流速为0.6 ml/min。使用waters acquity光电二极管阵列检测器，在215 nm处记录uv光谱。使用waters zq质量检测器以每秒5次扫描的取样率经m/z 150至850的范围获得质谱。使用waters masslynx和openlynx软件，将数据整合并报告。
[0129]
制备型hplc条件如下：方法1：使用酸性ph的反相色谱，标准洗脱方法在biotage isolera系统上使用适当的snap c18短柱(catridge)和如下的梯度：经1.7cv 的10% b (a=0.1%的在水中的甲酸；b=0.1%的在乙腈中的甲酸)、然后经19.5 cv的10-100% b以及持续2 cv的100% b，通过反向硅胶上的fcc进行纯化(酸性ph，标准洗脱方法)。
[0130]
路线1的方案：中间体1：[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]氯化铵在室温向n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]氨基甲酸叔丁酯(90%, 227 mg, 0.539 mmol)于dcm (1.35 ml)中的溶液中添加4 m hcl于二
氧杂环己烷中的溶液(1.4 ml, 5.40 mmol)，并将反应在该温度搅拌 1 小时。在减压下除去溶剂，以得到作为灰白色粉末的[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]氯化铵(199 mg, 0.522 mmol, 97%产率)。1h nmr (500 mhz, dmso-d6) δ 8.17 (s, 3h), 8.08
ꢀ–ꢀ
7.96 (m, 2h), 7.75
ꢀ–ꢀ
7.64 (m, 2h), 4.90 (dd, j = 10.2, 2.5 hz, 1h), 4.09 (dd, j = 10.8, 3.5 hz, 1h), 3.59
ꢀ–ꢀ
3.54 (m, 1h), 3.29
ꢀ–ꢀ
3.26 (m, 1h), 2.27
ꢀ–ꢀ
2.17 (m, 2h), 2.09
ꢀ–ꢀ
1.97 (m, 1h), 1.83
ꢀ–ꢀ
1.70 (m, 1h)。m/z: 280, 282 [m h], esi , rt = 2.46 min (s4)。
[0131]
步骤1.1：n-[(3r,6s)-6-[[(4-氯苯甲酰基)氨基]氨基甲酰基]四氢吡喃-3-基]氨基甲酸叔丁酯在室温将hatu (651 mg, 1.71 mmol)添加至4-氯苯甲酰肼(243 mg, 1.43 mmol)和dipea (0.75 ml, 4.28 mmol)于无水dmf (4 ml)中的溶液中，并搅拌10 分钟。然后添加(2s,5r)-5-(叔丁氧基羰基氨基)四氢吡喃-2-甲酸(350 mg, 1.43 mmol)，并将反应混合物在室温搅拌2小时。反应混合物用水 (30 ml)和et2o (30 ml)稀释，引起棕褐色固体沉淀。将固体过滤，用et2o洗涤，并在真空中除去残余溶剂，以得到作为棕褐色固体的n-[(3r,6s)-6-[[(4-氯苯甲酰基)氨基]氨基甲酰基]四氢吡喃-3-基]氨基甲酸叔丁酯(522 mg, 1.25 mmol, 87%产率)。1h nmr (400 mhz, dmso-d6) δ 10.38 (s, 1h), 9.76 (s, 1h), 7.88 (d, j = 8.6 hz, 2h), 7.57 (d, j = 8.6 hz, 2h), 6.84 (d, j = 7.9 hz, 1h), 3.91 (d, j = 7.3 hz, 1h), 3.87
ꢀ–ꢀ
3.74 (m, 1h), 3.38 (d, j = 7.0 hz, 1h), 3.06 (t, j = 10.6 hz, 1h), 1.94 (t, j = 13.2 hz, 2h), 1.62
ꢀ–ꢀ
1.43 (m, 2h), 1.39 (s, 9h)。m/z: 342, 344 [m-tbu h], esi , rt = 1.21 min (s1)。
[0132]
步骤1.2：n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]氨基甲酸叔丁酯将n-[(3r,6s)-6-[[(4-氯苯甲酰基)氨基]氨基甲酰基]四氢吡喃-3-基]氨基甲酸叔丁酯(372 mg, 0.673 mmol)和甲氧基羰基-(三乙基胺基)磺酰基-氮烷化物(azanide)(642 mg, 2.69 mmol)于无水thf (4 ml)中的悬浮液在微波辐射(正常吸收)下在120℃搅拌10分钟。所得溶液在水(25 ml)和etoac (25 ml)之间分配，其中有机层用盐水(brine) (25 ml)洗涤、干燥(mgso4)、过滤并在真空中浓缩。残余物质使用硅胶上的快速色谱纯化，用庚烷-etoac，1:0至0:1洗脱，以得到作为灰白色粉末的n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]氨基甲酸叔丁酯(227 mg, 0.539 mmol, 80%产率)。1h nmr (500 mhz, 氯仿-d) δ 8.04
ꢀ–ꢀ
7.97 (m, 2h), 7.52
ꢀ–ꢀ
7.45 (m, 2h), 4.72 (dd, j
= 9.6, 3.0 hz, 1h), 4.48 (s, 1h), 4.23
ꢀ–ꢀ
4.14 (m, 1h), 3.82
ꢀ–ꢀ
3.72 (m, 1h), 3.30 (t, j= 10.2 hz, 1h), 2.32
ꢀ–ꢀ
2.10 (m, 2h), 1.58 (d, j= 18.1 hz, 2h), 1.46 (s, 9h)。m/z: 324, 326 [m-tbu h], esi , rt = 1.21 min (s1)。
[0133]
路线2的方案中间体2：2-[(6-氯-5-氟-3-吡啶基)氧基]乙酸在室温将2 m naoh的水溶液(12 ml, 24.7 mmol)添加至2-[(6-氯-5-氟-3-吡啶基)氧基]乙酸乙酯(96%, 6.01 g, 24.7 mmol)于甲醇(15 ml)中的溶液中并搅拌2 小时。将反应混合物浓缩，且然后用1n hcl溶液酸化至ph 4。过滤沉淀的固体，以得到作为米色固体的2-[(6-氯-5-氟-3-吡啶基)氧基]乙酸(1.00 g, 4.67 mmol, 19%产率)。1h nmr (500 mhz, dmso-d6) δ 8.06 (d, j = 2.6 hz, 1h), 7.73 (dd, j = 10.4, 2.6 hz, 1h), 4.82 (s, 2h)。m/z: 206, 208, esi , rt = 0.85 min (s1)。
[0134]
步骤2.1：2-[(6-氯-5-氟-3-吡啶基)氧基]乙酸乙酯将2-溴乙酸乙酯(3.4 ml, 30.2 mmol)添加至6-氯-5-氟吡啶-3-醇(4.25 g, 28.8 mmol)和碳酸钾(11.94 g, 86.4 mmol)于dmf (12 ml)中的悬浮液中并在65℃搅拌1 小时，并使之冷却至室温并在室温放置过夜。将反应混合物悬浮于etoac (20 ml)中并过滤。将滤液用水(50 ml)、盐水(brine)(50 ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并蒸发，以得到作为绿色固体的2-[(6-氯-5-氟-3-吡啶基)氧基]乙酸乙酯(6.01 g, 24.7 mmol, 86%产率)。1h nmr (500 mhz, 氯仿-d) δ 7.92 (d, j = 2.6 hz, 1h), 7.08 (dd, j = 9.1, 2.6 hz, 1h), 4.65 (s, 2h), 4.26 (q, j = 7.1 hz, 2h), 1.29 (t, j = 7.1 hz, 3h)。m/z: 234, 236 [m 1], esi , rt = 1.09 min (s1)。
[0135]
路线3的方案
中间体3：n-[3r,6s)-6-(肼羰基)四氢吡喃-3-基]氨基甲酸叔丁酯在室温向n-[(3r,6s)-6-(苄基氧基羰基氨基氨基甲酰基)四氢吡喃-3-基]氨基甲酸叔丁酯(950 mg, 2.41 mmol)于乙醇(25 ml)和etoac (15 ml)中的脱气溶液中添加炭载钯(10%, 95 mg, 0.089 mmol)，并将反应混合物在氢气气氛下搅拌3 小时。通过将气氛切换为n2来停止反应。将反应混合物温热至接近回流并通过celite
®
垫热过滤，用乙醇充分洗涤。将滤液浓缩至干，以得到作为灰白色粉末的n-[(3r,6s)-6-(肼羰基)四氢吡喃-3-基]氨基甲酸叔丁酯(678 mg, 2.46 mmol, 100%产率)。1h nmr (500 mhz, dmso-d6) δ 8.86 (s, 1h), 6.80 (d, j = 7.7 hz, 1h), 4.20 (s, 2h), 3.91
ꢀ–ꢀ
3.80 (m, 1h), 3.68
ꢀ–ꢀ
3.62 (m, 1h), 3.02
ꢀ–ꢀ
2.94 (m, 1h), 1.93
ꢀ–ꢀ
1.82 (m, 2h), 1.46
ꢀ–ꢀ
1.31 (m, 12h)。
[0136]
步骤3.1：n-[(3r,6s)-6-(苄基氧基羰基氨基氨基甲酰基)四氢吡喃-3-基]氨基甲酸叔丁酯向(2s,5r)-5-(叔丁氧基羰基氨基)四氢吡喃-2-甲酸(710 mg, 2.89 mmol) 和dipea (1.0 ml, 5.79 mmol)于无水dmf (7 ml)中的溶液中添加hatu (1.21 g, 3.18 mmol)。将溶液搅拌10分钟。然后分批添加n-氨基氨基甲酸苄酯(529 mg, 3.18 mmol)并将反应混合物在室温搅拌1 小时。将反应用水(20 ml)淬灭并剧烈搅拌10 分钟。过滤混合物以收集灰白色沉淀物，将其在高真空烘箱中进一步干燥以提供作为灰白色粉末的n-[(3r,6s)-6-(苄基氧基羰基氨基氨基甲酰基)四氢吡喃-3-基]氨基甲酸叔丁酯 (950 mg, 2.20 mmol, 76%产率)。1nmr (400mhz, dmso-d6) δ 9.60 (s, 1h), 9.12 (s, 1h), 7.35 (d, j = 15.1 hz, 5h), 6.82 (d, j = 7.1 hz, 1h), 5.07 (s, 2h), 3.88 (d, j = 6.1 hz, 1h), 3.74 (d, j = 9.7 hz, 1h), 3.08
ꢀ–ꢀ
2.95 (m, 1h), 1.99
ꢀ–ꢀ
1.78 (m, 2h), 1.57
ꢀ–ꢀ
1.29 (m, 12h)。m/z: 416 [m na], esi , rt = 1.09 min (s1)。
[0137]
路线4的方案：中间体4：2-(5-氯吡嗪-2-基)氧基乙酸
在室温将在1,4-二氧杂环己烷中的4m氯化氢(10ml,40.0mmol)添加至2-(5-氯吡嗪-2-基)氧基乙酸叔丁酯(269mg,1.09mmol)中，并搅拌72小时。将混合物蒸发至干。使用c18-12gkp-ultrasnap短柱通过快速色谱纯化残余物，用在水( 0.1%甲酸)中的mecn( 0.1%甲酸)(10至100%)的溶液洗脱，以提供作为白色固体的2-(5-氯吡嗪-2-基)氧基乙酸(120mg,0.630mmol,58%产率)。1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ8.36(d,j=1.3hz,1h),8.29(d,j=1.3hz,1h),4.89(s,2h)。m/z:187,189[m-h],esi-,rt=0.76min(s1)。
[0138]
步骤4.1：2-(5-氯吡嗪-2-基)氧基乙酸叔丁酯在室温经5分钟向2-羟基乙酸叔丁酯(0.049ml,3.69mmol)于无水dmf(5ml)中的溶液中分批添加氢化钠(89mg,3.69mmol)。向悬浮液中加入另外的dmf(5ml)并搅拌30分钟。然后逐滴添加2,5-二氯吡嗪(500mg,3.36mmol)，并将反应混合物在室温搅拌3小时。反应混合物用水(50ml)缓慢稀释并用etoac(2x30ml)萃取。合并的有机层用盐水(brine)(30ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并蒸发至干。使用方法1纯化残余物以提供作为白色固体的2-(5-氯吡嗪-2-基)氧基乙酸叔丁酯(269mg,1.09mmol,32%产率)。1hnmr(500mhz,氯仿-d)δ8.12(d,j=1.0hz,1h),8.05(d,j=1.0hz,1h),4.78(s,2h),1.47(s,9h)。m/z:245,247[m h],esi ,rt=1.18min(s1)。
[0139]
路线5的方案：中间体5：2-氯-n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]乙酰胺将[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]氯化铵(250mg,0.791mmol)和dipea(0.28ml,1.58mmol)于dmf(3ml)中的溶液搅拌5分钟。将
反应混合物冷却至0℃，然后添加在dmf (3 ml)中的2-氯乙酰氯(89 mg, 0.791 mmol)。将反应混合物温热至室温并搅拌1.5小时。添加水(10 ml)，在真空下过滤反应混合物并用水进一步冲洗以提供作为棕色固体的2-氯-n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]乙酰胺(146 mg, 0.344 mmol, 44%产率)。1h nmr (500 mhz, dmso-d6) δ 8.27 (d, j = 7.6 hz, 1h), 8.06
ꢀ–ꢀ
8.01 (m, 2h), 7.71
ꢀ–ꢀ
7.67 (m, 2h), 4.84 (dd, j = 10.6, 2.6 hz, 1h), 4.06 (d, j = 1.3 hz, 2h), 3.98
ꢀ–ꢀ
3.92 (m, 1h), 3.85
ꢀ–ꢀ
3.75 (m, 1h), 3.50-3.25 (m, 1h), 2.16 (dt, j = 10.5, 4.3 hz, 1h), 2.08
ꢀ–ꢀ
1.96 (m, 2h), 1.72
ꢀ–ꢀ
1.62 (m, 1h)。m/z: 356, 358 [m h], esi , rt = 1.03 min (s1)。
[0140]
路线6的方案：中间体6：(2r,5s)-5-(叔丁氧基羰基氨基)四氢吡喃-2-甲酸将n-[(3s,6r)-6-(羟基甲基)四氢吡喃-3-基]氨基甲酸叔丁酯(657 mg, 2.84 mmol)于dcm (5 ml)、乙腈(5 ml)和水(7 ml)中的溶液剧烈搅拌，同时冷却至0℃。添加高碘酸钠(1.22 g, 5.68 mmol)和三氯化钌(3 )(0.027 g, 0.13 mmol)，并将反应在该温度搅拌3小时。添加etoac (10 ml)并过滤混合物。添加甲醇并过滤溶液。添加10%亚硫酸氢钠(10 ml)溶液并将ph用1 m hcl调节至2。分离水层，用etoac萃取。将有机层合并，经mgso4干燥并在减压下浓缩。将残余物吸收在饱和nahco
3 (10 ml)中并用etoac (2
×
10ml)萃取。将水层用1m hcl酸化至ph 2并用etoac (4 x 10 ml)萃取，合并有机层，经mgso4干燥并在减压下浓缩。将残余物与1:2 tbme/庚烷(100 ml)一起研磨，过滤，在真空中干燥，以提供作为黄色粉末的(2r,5s)-5-(叔丁氧基羰基氨基)四氢吡喃-2-甲酸(375 mg, 1.53 mmol, 54%产率)。1h nmr (400 mhz, 氯仿-d) δ 4.57
ꢀ–ꢀ
4.15 (m, 2h), 4.13
ꢀ–ꢀ
3.85 (m, 2h), 3.79
ꢀ–ꢀ
3.39 (m, 1h), 3.15 (t,j= 10.6 hz, 1h), 2.27
ꢀ–ꢀ
2.03 (m, 2h), 1.87
ꢀ–ꢀ
1.62 (m, 1h), 1.44 (s, 10h)。
[0141]
步骤6.1：(2r)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-碘-丙酸甲酯
在室温将咪唑(4.27g,62.8mmol)添加至三苯基膦(16.46g,62.8mmol)于dcm(200ml)中的溶液中，并且在完全溶解后，在n2气氛下冷却至0℃。经20分钟分批添加分子碘(15.93g,62.8mmol)。将溶液温热至室温，搅拌10分钟并冷却回0℃。经1小时逐滴添加(2{s})-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-羟基-丙酸甲酯(10.59g,48.3mmol)于dcm(50ml)中的溶液。将反应在0℃搅拌1小时，使其温热至室温，并再搅拌1.5小时。反应混合物通过硅胶塞(75g)过滤，用1:1乙醚:庚烷洗脱，并蒸发溶剂。残余物通过硅胶上的色谱纯化，用0-30%在庚烷中的tbme洗脱，以得到透明油状物。从庚烷中结晶后，通过过滤收集固体并在真空中干燥，以提供(2r)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-碘-丙酸甲酯(11.46g,33.1mmol,69%产率)。1hnmr(500mhz,氯仿-d)δ5.34(d,j=5.9hz,1h),4.56
–
4.46(m,1h),3.80(s,3h),3.63
–
3.49(m,2h),1.46(s,9h)。
[0142]
步骤6.2：(2s)-2-(叔丁氧基羰基氨基)己-5-烯酸甲酯将锌(1.96g,30.0mmol)和分子碘(76mg,0.299mmol)添加至装有温度计的3-颈烧瓶中。将烧瓶抽真空并用热风枪加热10分钟，然后用n2冲洗并重复该过程两次。冷却至室温后，添加无水dmf(1ml)，并将浆液冷却至0℃。经10分钟逐滴添加(2{r})-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-碘-丙酸甲酯(3.29g,10.0mmol)于dmf(6.5ml)中的溶液，并将反应混合物在室温搅拌1小时。
[0143]
向装有温度计的第二个3-颈烧瓶中装入溴化铜与甲基硫的络合物(bromocoppermethylsulfanymethane)(207mg,1.00mmol)，并在真空下用热风枪轻轻加热，同时颜色从灰白色变为浅绿色。冷却至室温后，添加dmf(6.5ml)和3-氯丙-1-烯(0.81ml,10.0mmol)。将烧瓶冷却至-15℃并逐滴添加锌试剂。使反应混合物温热至室温，并搅拌18小时。添加etoac(75ml)并将混合物搅拌15分钟，再用etoac(75ml)稀释，用5%na2s2o3(2x25ml)、水(2x25ml)、盐水(brine)(25ml)洗涤，经na2so4干燥并在减压下浓缩。残余物通过硅胶上的色谱纯化，用0-50%在庚烷中的tbme洗脱，以得到作为澄清油状物的(2s)-2-(叔丁氧基羰基氨基)己-5-烯酸甲酯(1.96g,7.67mmol,77%产率)。1hnmr(500mhz,氯仿-d)δ5.79(ddt,j=16.9,10.2,6.6hz,1h),5.08
–
4.95(m,3h),4.36
–
4.27(m,1h),3.74(s,3h),2.17
–
2.05(m,2h),1.90(dq,j=13.5,7.4hz,1h),1.71(dq,j=14.4,8.0hz,1h),1.44(s,9h)。
[0144]
步骤6.3：n-[(1s)-1-(羟基甲基)戊-4-烯基]氨基甲酸叔丁酯
(ddd, j = 11.5, 7.1, 4.5 hz, 1h), 3.36 (dtd, j = 10.3, 5.5, 2.7 hz, 1h), 3.02 (t, j = 10.7 hz, 1h), 2.16
ꢀ–ꢀ
1.96 (m, 2h), 1.51
ꢀ–ꢀ
1.36 (m, 10h), 1.29 (qd, j = 12.5, 4.2 hz, 1h)路线7的方案中间体7：2-[(5-氟-6-甲基-3-吡啶基)氧基]乙酸锂在室温向2-[(5-氟-6-甲基-3-吡啶基)氧基]乙酸乙酯(0.50 g, 2.35 mmol)于甲醇(5 ml)中的溶液中添加2m氢氧化锂(2.3 ml, 4.69 mmol)并在室温搅拌过夜，然后蒸发至干。将固体悬浮于乙腈(10 ml)中，并蒸发至干，以得到作为白色固体的2-[(5-氟-6-甲基-3-吡啶基)氧基]乙酸锂(630 mg, 2.34 mmol, 100%产率)。1h nmr (400 mhz, dmso-d6) δ 8.01
ꢀ–ꢀ
7.84 (m, 1h), 7.08
ꢀ–ꢀ
7.00 (m, 1h), 4.20
ꢀ–ꢀ
4.11 (m, 2h), 3.20
ꢀ–ꢀ
3.13 (m, 1h), 2.35
ꢀ–ꢀ
2.29 (m, 3h)。m/z: 186 [m h] , rt = 0.4-0.6 min (s4)。
[0147]
步骤7.1：2-[(5-氟-6-甲基-3-吡啶基)氧基]乙酸乙酯在室温在氮气气氛下向2-[(6-氯-5-氟-3-吡啶基)氧基]乙酸乙酯(97%, 2.60 g, 10.8 mmol)于无水thf (30 ml)中的脱气溶液添加三苯基膦钯(0.80 g, 0.692 mmol)并搅拌。然后添加在thf中的2 m 甲基氯化锌(6.5 ml, 13.0 mmol)并搅拌5分钟。将反应混合物加热至75℃，搅拌过夜并使其冷却至室温。反应混合物用氯化铵溶液(20 ml)淬灭，用水(100 ml)稀释，并用etoac (2 x 50 ml)萃取。有机物经硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干。通过快速色谱(biotage isolera, c18 120 g kp
‑ꢀ
ultra snap短柱)纯化，用mecn ( 0.1 %甲酸)于水 ( 0.1 %甲酸)中的溶液(10至100 %)洗脱，随后蒸发，得到作为灰白色固体的2-[(5-氟-6-甲基-3-吡啶基)氧基]乙酸乙酯(1.69 g, 7.69 mmol, 71%产率)。1h nmr (400 mhz, 氯仿-d) δ 8.05 (d, j = 2.4 hz, 1h), 6.94 (dd, j = 10.4, 2.5 hz, 1h), 4.63 (s, 2h), 4.27 (q, j = 7.1 hz, 2h), 2.45 (d, j = 2.9 hz, 3h), 1.30 (t, j = 7.1 hz, 3h)。m/z: 214 [m h] , rt = 0.98 (s1)。
[0148]
路线8的方案：
实施例1： 2-(4-氯-3-氟-苯氧基)-n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]乙酰胺在室温，向[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]氯化铵 (78 mg, 0.241 mmol)于dcm (1.5 ml)中的溶液中添加dipea (0.17 ml, 0.964 mmol)，随后逐滴添加2-(4-氯-3-氟-苯氧基)乙酰氯 (0.11 g, 0.482 mmol)于dcm (1 ml)中的溶液。搅拌5 分钟后，将反应混合物用1m氯化氢水溶液和dcm稀释。将有机层分离并依次用1 m naoh溶液和盐水(brine)洗涤，干燥(mgso4)，过滤并在真空中浓缩。残余物质通过柱色谱 (硅胶，用庚烷-etoac，1:0至0:1洗脱)纯化，以提供作为灰白色固体的2-(4-氯-3-氟-苯氧基)-n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]乙酰胺(106 mg, 0.22 mmol, 92%产率)。1h nmr (500 mhz, dmso-d6) δ 8.12 (d, j = 7.8 hz, 1h), 8.00
ꢀ–ꢀ
8.06 (m, 2h), 7.67
ꢀ–ꢀ
7.73 (m, 2h), 7.51 (t, j = 8.9 hz, 1h), 7.09 (dd, j = 11.4, 2.8 hz, 1h), 6.83
ꢀ–ꢀ
6.91 (m, 1h), 4.82 (dd, j = 10.7, 2.6 hz, 1h), 4.56 (s, 2h), 3.84
ꢀ–ꢀ
4.00 (m, 2h), 3.38 (t, j = 10.2 hz, 1h), 2.12
ꢀ–ꢀ
2.22 (m, 1h), 1.95
ꢀ–ꢀ
2.08 (m, 2h), 1.68
ꢀ–ꢀ
1.80 (m, 1h)。m/z: 466[m h], esi , rt = 4.20 min (s1)。
[0149]
表1中的化合物使用相应的中间体根据如实施例1所例举的通用路线8合成。
2h), 4.87
ꢀ–ꢀ
4.76 (m, 1h), 4.67 (d, j =1.9, 2h), 3.97
ꢀ–ꢀ
3.91 (m, 1h), 3.92
ꢀ–ꢀ
3.84 (m, 1h), 3.40
ꢀ–ꢀ
3.37 (m, 1h), 2.16 (d, j =13.7, 1h), 2.10
ꢀ–ꢀ
1.95 (m, 2h), 1.77
ꢀ–ꢀ
1.67 (m, 1h)。m/z: 467, 469 [m h], esi , rt = 3.35 min (s2)。
[0151]
表2中的化合物使用相应的中间体根据如实施例7所例举的通用路线9合成。
[0152]
路线10的方案实施例18：n-[3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]-2-[[6-(三氟甲基)-3-吡啶基]氧基]乙酰胺：将2-氯-n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]乙
酰胺(84%, 70 mg, 0.165 mmol)、碳酸二钾(46 mg, 0.330 mmol)、碘化钠(37 mg, 0.248 mmol)和6-(三氟甲基)吡啶-3-醇(27 mg, 0.165 mmol)于无水dmf (1 ml)中的溶液在n2下在40℃搅拌4 小时。添加水并在真空下过滤形成的沉淀物。残余物通过硅胶上的柱色谱纯化，使用etoac/庚烷(40-100%)作为洗脱液，以提供作为白色固体的n-[(3r,6s)-6-[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]四氢吡喃-3-基]-2-[[6-(三氟甲基)-3-吡啶基]氧基]乙酰胺(41 mg, 0.082 mmol, 50%产率)。1h nmr (500 mhz, dmso-d6) δ 8.48 (d, j = 2.8 hz, 1h), 8.23 (d, j = 7.8 hz, 1h), 8.06
ꢀ–ꢀ
8.01 (m, 2h), 7.88 (d, j = 8.7 hz, 1h), 7.71
ꢀ–ꢀ
7.66 (m, 2h), 7.58 (dd, j = 8.7, 2.8 hz, 1h), 4.83 (dd, j = 10.7, 2.5 hz, 1h), 4.74 (d, j = 1.8 hz, 2h), 3.98
ꢀ–ꢀ
3.93 (m, 1h), 3.93
ꢀ–ꢀ
3.85 (m, 1h), 3.40 (s, 1h), 2.17 (dt, j = 10.2, 2.5 hz, 1h), 2.08
ꢀ–ꢀ
1.97 (m, 2h), 1.78
ꢀ–ꢀ
1.69 (m, 1h)。m/z: 483, 485 [m h] , rt = 3.37 (s2)。
[0153]
表3中的化合物使用相应的中间体根据如实施例18所例举的通用路线10合成。
[0154]
ii 生物测定hek-atf4高含量成像测定在hek-atf4高含量成像测定中测试实施例化合物，以评估它们防止衣霉素诱导的isr的药理学效力。将野生型hek293细胞以每孔12,000个细胞的密度铺板于384-孔成像测定板中的生长培养基(含有dmem/f12、10% fbs、2mm l-谷氨酰胺、100 u/ml青霉素-100μg/ml链霉素)中并在37℃、5% co2下孵育。24小时后，将培养基改为每孔50
ꢀµ
l测定培养基
(dmem/f12、0.3% fbs、2mm l-谷氨酰胺、100 u/ml青霉素-100 μg/ml链霉素)。将实施例化合物在二甲亚砜(dmso)中连续稀释，点样至中间板中，并用含有3.3
ꢀµ
m衣霉素的测定培养基预稀释，以得到最终测定浓度的11倍过量。除了实施例化合物测试区域之外，所述板还含有多个用于测定归一化目的的对照孔、含有衣霉素但不含实施例化合物的孔(高对照)，以及既不含实施例化合物也不含衣霉素的孔(低对照)。通过将5μl从中间板转移至测定板中开始测定，随后在37℃、5%co2下孵育6小时。随后，将细胞固定(在pbs中的4% pfa，在室温20 分钟)并进行间接atf4免疫荧光染色(一抗兔抗atf4，克隆d4b8，cell signaling technologies；二抗alexa fluor 488山羊抗-兔igg (h l)，thermofisher scientific)。使用hoechst染料(thermofisher scientific)对细胞核进行染色，并在配备405nm和488nm发射的opera phenix高含量成像平台上对板成像。最后，使用基于脚本的算法分析图像。主要读数hek-atf4监测细胞核和细胞质之间的atf4信号比。衣霉素诱导总体atf4比率信号的增加，这被isr调节实施例化合物所阻止。此外，hek-细胞计数(hek-cellcount)读数衍生自将对应于健康细胞的染色细胞核的数量进行计数。该读数充当内部毒性对照。本文的实施例化合物在细胞计数(cellcount)中没有产生显著的减少。
[0155]
测试的实施例化合物的活性提供于如下表t5中： = ic50 1-500nm； = ic50 》500-2000nm； = ic50 》2000-15000nm。
再多了解一些
本文用于企业家、创业者技术爱好者查询，结果仅供参考。
