FCMR结合分子和其用途的制作方法

no:14的vhcdr2、包括seq id no:15的vhcdr3、包括seq id no:16的vlcdr1、包括seq id no:17的vlcdr2和包括seq id no:18的vlcdr3。在一些实施例中，所述抗fcmr抗体包含包括seq id no:19的vhcdr1、包括seq id no:20的vhcdr2、包括seq id no:21的vhcdr3、包括seq id no:22的vlcdr1、包括seq id no:23的vlcdr2和包括seq id no:24的vlcdr3。在一些实施例中，所述抗fcmr抗体包含包括seq id no:25的vhcdr1、包括seq id no:26的vhcdr2、包括seq id no:27的vhcdr3、包括seq id no:28的vlcdr1、包括seq id no:29的vlcdr2和包括seq id no:30的vlcdr3。在一些实施例中，所述抗fcmr抗体包含包括seq id no:31的vhcdr1、包括seq id no:32的vhcdr2、包括seq id no:33的vhcdr3、包括seq id no:34的vlcdr1、包括seq id no:35的vlcdr2和包括seq id no:36的vlcdr3。在一些实施例中，所述抗fcmr抗体包含包括seq id no:37的vhcdr1、包括seq id no:38的vhcdr2、包括seq id no:39的vhcdr3、包括seq id no:40的vlcdr1、包括seq id no:41的vlcdr2和包括seq id no:42的vlcdr3。在一些实施例中，所述抗fcmr抗体包含包括seq id no:43的vhcdr1、包括seq id no:44的vhcdr2、包括seq id no:45的vhcdr3、包括seq id no:46的vlcdr1、包括seq id no:47的vlcdr2和包括seq id no:48的vlcdr3。
9.在一些实施例中，本文所述的抗fcmr抗体结合人fcmr。
10.在一些实施例中，本文所述的抗fcmr抗体包含氨基酸序列与人igg至少90％相同的恒定区。在一些实施例中，所述igg选自igg1、igg2、igg3或igg4。在一些实施例中，所述igg是igg1。在一些实施例中，所述igg是igg2。
11.在另一方面，本发明涉及一种核酸组合物，所述核酸组合物对本文所述的抗fcmr抗体中的任何一种进行编码。
12.本发明的另一方面涉及一种表达载体组合物，所述表达载体组合物包含本文所述的核酸组合物中的任何一种。在一些实施例中，第一表达载体中含有第一核酸，并且第二表达载体中含有第二核酸。在一些其它实施例中，单个表达载体中含有第一核酸和第二核酸。
13.本发明的另一方面涉及一种宿主细胞，所述宿主细胞包含本文所述的表达载体中的任何一种。还呈现了一种制备抗fcmr抗体的方法，并且所述方法包含在所述抗体被表达的条件下培养宿主细胞以及回收所述抗体。
14.在另一方面，本发明涉及一种组合物，所述组合物包含本文所述的抗fcmr抗体中的任何一种以及药学上可接受的载体或稀释剂。
15.还描述了一种调节受试者的免疫应答的方法，并且所述方法包含向所述受试者施用有效量的本文所述的抗fcmr抗体中的任何一种或本文所述的组合物中的任何一种。在一些实施例中，所述方法抑制所述受试者的免疫应答，并且所述方法包含向所述受试者施用有效量的充当fcmr拮抗剂的抗fcmr抗体或其药物组合物。在一些实施例中，所述方法刺激所述受试者的免疫应答，并且所述方法包含向所述受试者施用有效量的充当fcmr激动剂的抗fcmr抗体或其药物组合物。
16.在一些实施例中，所述方法抑制所述受试者的免疫应答，并且所述方法包含向所述受试者施用有效量的抗fcmr抗体。
17.在一些实施例中，所述方法刺激所述受试者的免疫应答，并且所述方法包含向所述受试者施用有效量的抗fcmr抗体。
18.在另一方面，本发明涉及一种治疗受试者的癌症的方法，并且所述方法包含向所
述受试者施用有效量的本文所述的抗fcmr抗体或其组合物。在一些实施例中，与对应非癌组织相比，待治疗的癌症上调fcmr。在一些实施例中，所述待治疗的癌症可以是b细胞恶性肿瘤。在一些实施例中，所述b细胞恶性肿瘤是慢性淋巴细胞白血病。在一些实施例中，抗fcmr抗体与一种或多种另外的抗癌治疗剂组合使用。在一些实施例中，此类抗癌治疗剂是其它免疫检查点抑制剂，如pd-1抑制剂、pd-l1抑制剂、ctla-4抑制剂、tim-3抑制剂和lag-3抑制剂。
19.在另一方面，本发明涉及一种治疗受试者的自身免疫性疾病的方法，并且所述方法包含向所述受试者施用有效量的本文所述的抗fcmr抗体或其组合物。在一些实施例中，抗fcmr抗体与一种或多种另外的抗炎治疗剂组合使用。
20.在另一方面，本发明涉及一种治疗受试者的细菌感染的方法，并且所述方法包含向所述受试者施用有效量的本文所述的抗fcmr抗体或其组合物。在一些实施例中，抗fcmr抗体与一种或多种抗生素治疗剂组合使用。
21.在另一方面，本发明涉及一种治疗受试者的病毒感染的方法，并且所述方法包含向所述受试者施用有效量的本文所述的抗fcmr抗体或其组合物。在一些实施例中，抗fcmr抗体与一种或多种另外的抗病毒治疗剂组合使用。
附图说明
22.当结合附图阅读时，可以从以下详细说明最好地理解本发明。附图中包含以下图：
23.图1示出了使用流式细胞术在各种造血亚群上的fcmr表面表达。
24.图2示出了fcmr抗体或fcmr-fc蛋白对淋巴细胞在初级混合淋巴细胞反应(mlr)中的反应性的影响。
25.图3示出了fcmr 2a5抗体对淋巴细胞在初级mlr中的反应性的影响。
26.图4示出了fcmr 2a5抗体对由pbmc响应于t细胞刺激产生细胞因子的影响。
27.图5示出了fcmr 2a5抗体不会导致细胞因子从未经刺激的全血中显著释放。
28.图6示出了通过表面等离子体共振确定的fcmr抗体2a5和2h2对fcmr-fc蛋白的亲和力。
具体实施方式
29.本公开提供了新型抗fcmr抗体。本文所述的抗fcmr抗体结合人fcmr。在一些实施例中，抗fcmr抗体以高亲和力与人fcmr结合。在一些实施例中，抗fcmr抗体刺激免疫应答。在一些实施例中，抗fcmr抗体抑制免疫应答。本公开还提供了使用此类抗体来调节受试者的免疫应答，并且例如治疗癌症、自身免疫性疾病、细菌感染或病毒感染的方法。
30.为了促进对本发明的理解，下文对多个术语和短语进行了定义。
31.如本文所用，以下术语中的每个术语在此章节中具有与其相关联的含义。
32.如本文所用，术语“fcmr”、“toso”、“faim3”或“fas凋亡抑制分子3”是指氨基酸序列与任何代表性toso序列基本上相同的蛋白质，包含genbank登录号np_001 135945(人同种型b)、np_001 180267(人同种型c)、np_005440(人同种型a)、np_081252(小鼠)或np_001014843(大鼠)的任何和所有版本。对toso进行编码的合适cdna在genbank登录号nm_001 142473、nm_001 193338、nm_005449、nm_026976和nm_001014843中提供。
33.如本文所用，术语“fcmr的生物活性”或“fcmr活性”是指与全长天然fcmr蛋白相关联的任何生物活性。在一些实施例中，fcmr的生物活性是指与igm抗体结合。在另外的实施例中，fcmr的生物活性是指抑制cd11b或cd18活性。在又另外的实施例中，fcmr的生物活性是指增加粒细胞的活化阈值。活化阈值可以通过来自骨髓的活化的粒细胞的数量来测量。在另外的实施例中，fcmr的生物活性包含活化树突状细胞以及其能够向t细胞呈递抗原。在另外的实施例中，fcmr的生物活性包含抑制凋亡或增强tnf信号传导。在一些实施例中，fcmr生物活性等同于氨基酸序列由genbank登录号np_001 135945、np_001180267、np_005440、np_081252或np_001014843表示的蛋白质的活性，包含这些登录号的任何和所有版本。
34.本文使用冠词“一个(a)”和“一种(an)”来指代所述冠词的一个或多于一个(即，至少一个)语法宾语。通过举例，“要素”意指一个要素或多于一个要素。
35.当提及如量、持续时间等可测量值时，本文所使用的“约”意味着涵盖与指定值的
±
20％或
±
10％，更优选地
±
5％，甚至更优选地
±
1％，以及仍更优选地
±
0.1％的偏差，因为此类偏差适合于执行所公开的方法。
36.本文的“消融”意指降低或去除活性。因此，例如，“消融fcγr结合”意指fc区氨基酸变体与不含有特异性变体的fc区相比具有少于50％的起始结合，优选少于70％-80％-90％-95％-98％的活性损失，并且通常所述活性低于biacore测定中可检测结合的水平。
37.如本文所使用的“adcc”或“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”意指其中表达fcγr的非特异性细胞毒性细胞识别靶细胞上的结合抗体并且随后引起靶细胞裂解的细胞介导的反应。adcc与和fcγriiia的结合相关；与fcγriiia的结合增加导致adcc活性增加。如本文所讨论的，本发明的许多实施例完全消融adcc活性。
38.如本文所使用的“adcp”或“抗体依赖性细胞介导的吞噬”意指其中表达fcγr的非特异性细胞毒性细胞识别靶细胞上的结合抗体并且随后引起靶细胞吞噬的细胞介导的反应。
39.本文的“抗原结合结构域”或“abd”意指在作为多肽序列的一部分存在时特异性地结合如本文所讨论的靶抗原的一组六个互补决定区(cdr)。因此，“抗原结合结构域”结合如本文概述的靶抗原。如本领域中已知，这些cdr通常作为第一组可变重cdr(vhcdr或vhcdr或cdr-hc)和第二组可变轻cdr(vlcdr或vlcdrs或cdr-lc)存在，其各自包括三个cdr：重链的vhcdr1、vhcdr2、vhcdr3和轻链的vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3。cdr分别存在于可变重结构域和可变轻结构域中并且一起形成fv区。因此，在一些情况下，抗原结合结构域的六个cdr源自可变重链和可变轻链。在“fab”形式中，一组6个cdr源自两个不同的多肽序列、可变重结构域(vh或vh；含有vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3)和可变轻结构域(vl或vl；含有vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3)，vh结构域的c端与重链的ch1结构域的n端连接并且vl结构域的c端与恒定轻结构域的n端连接(并且因此形成轻链)。在scfv形式中，vh结构域和vl结构域通常通过使用如本文概述的连接子二价连接到单个多肽序列中，这可以是(从n末端开始)vh-连接子-vl或vl-连接子-vh，通常优选的是前者(包含各侧上的任选结构域连接子，这取决于所使用的形式)。如本领域所理解的，cdr在可变重链结构域和可变轻链结构域中的每个结构域中被框架区隔开：对于轻可变区，这些是fr1-vlcdr1-fr2-vlcdr2-fr3-vlcdr3-fr4，并且对于重可变区，这些是fr1-vhcdr1-fr2-vhcdr2-fr3-vhcdr3-fr4，其中框架区示出与人种系序列的
高度同一性。本发明的抗原结合结构域包含fab、fv和scfv。
[0040]“连接子”在本文中意指scfv和/或其它抗体结构中使用的连接子。通常，存在许多可以使用的合适的scfv连接子，包含通过重组技术生成的传统肽键。连接子肽可以主要包含以下氨基酸残基：gly、ser、ala或thr。连接子肽的长度应当足以以其相对于彼此呈现正确的构象，使得其保留期望活性的此方式连接两个分子。在一个实施例中，连接子的长度为约1个到50个氨基酸，优选地长度为约1个到30个氨基酸。在一个实施例中，可以使用长度为1个到20个氨基酸的连接子，在一些实施例中使用约5个到约10个氨基酸。有用的连接子包含甘氨酸-丝氨酸聚合物、甘氨酸-丙氨酸聚合物、丙氨酸-丝氨酸聚合物和其它柔性连接子，所述甘氨酸-丝氨酸聚合物包含例如(gs)n、(gsggs)n、(ggggs)n和(gggs)n，其中n是至少为一(并且通常为3到4)的整数)。可替代地，各种非蛋白质聚合物可以用作连接子，包含但不限于可以用作连接子的聚乙二醇(peg)、聚丙二醇、聚氧化烯、或聚乙二醇和聚丙二醇的共聚物。其它连接子序列可以包含任何长度的cl/ch1结构域的任何序列，但并非cl/ch1结构域的所有残基；例如，cl/ch1结构域的前5-12个氨基酸残基。连接子可以衍生自免疫球蛋白轻链，例如cκ或cλ。连接子可以衍生自任何同种型的免疫球蛋白重链，包含例如cγ1、cγ2、cγ3、cγ4、cα1、cα2、cδ、cε和cμ。连接子序列还可以源自其它蛋白质，如ig样蛋白(例如，tcr、fcr、kir)、铰链区来源的序列以及来自其它蛋白质的其它天然序列。在一些实施例中，连接子是“结构域连接子”，用于将如本文概述的任何两个结构域连接在一起。虽然可以使用任何适合的连接子，但是许多实施例利用甘氨酸-丝氨酸聚合物以及允许以足够允许每个结构域保持其生物学功能的长度和柔性来重组连接这两个结构域的任何肽序列，所述甘氨酸-丝氨酸聚合物包含例如(gs)n、(gsggs)n、(ggggs)n和(gggs)n，其中n是至少为一(并且通常为3到4到5)的整数。
[0041]
术语“抗体”以最广泛的含义使用并且包含例如完整的免疫球蛋白或抗原结合部分。抗原结合部分可以通过重组dna技术或通过完整抗体的酶促或化学切割产生。因此，术语抗体包含两条重链和两条轻链的传统四聚抗体，以及抗原结合片段，如fv、fab和scfv。在一些情况下，本发明提供了包含如本文概述的至少一个抗原结合结构域的双特异性抗体。
[0042]
本文中的“修饰”意指多肽序列中的氨基酸取代、插入和/或缺失或对与蛋白质化学连接的部分的更改。例如，修饰可以是与蛋白质连接的改变的碳水化合物或peg结构。本文中的“氨基酸修饰”意指多肽序列中的氨基酸取代、插入和/或缺失。为清楚起见，除非另外指出，否则氨基酸修饰总是用于由dna编码的氨基酸，例如，在dna和rna中具有密码子的20个氨基酸。
[0043]
本文中的“氨基酸取代”或“取代”意指用不同的氨基酸来替代亲本多肽序列中的特定位置处的氨基酸。具体地，在一些实施例中，取代用于并非天然存在于特定位置处或并非天然存在于生物体内或任何生物体中的氨基酸。例如，取代m252y是指变体多肽，在此情况下是fc变体，其中位置252处的甲硫氨酸用酪氨酸代替。为了清楚起见，已经过工程化以改变核酸编码序列但不改变起始氨基酸(例如将cgg(编码精氨酸)换成cga(仍然编码精氨酸)来提高宿主生物体表达水平)的蛋白质不是“氨基酸取代”；也就是说，尽管创建了编码相同蛋白质的新基因，但是如果蛋白质在其起始的特定位置具有相同的氨基酸，那么它就不是氨基酸取代。
[0044]
如本文所使用的，“变体蛋白质”或“蛋白质变体”或“变体”意指由于至少一个氨基
酸修饰而与亲本蛋白质不同的蛋白质。蛋白质变体可以指蛋白质本身、包括蛋白质的组合物或编码其的氨基酸序列。优选地，蛋白质变体与亲本蛋白相比具有至少一个氨基酸修饰，例如，与亲本相比，约一种到约七十个氨基酸修饰，以及优选地约一个到约五个氨基酸修饰。如下文所描述的，在一些实施例中，亲本多肽，例如fc亲本多肽是人野生型序列，如来自人igg1、igg2、igg3或igg4的fc区。本文中的蛋白变体序列与亲本蛋白质序列的同一性将优选地为至少约80％并且最优选地同一性为至少约90％，更优选地同一性为至少约95％-98％-99％。变体蛋白质可以指代变体蛋白质本身、包括蛋白质变体的组合物或对所述蛋白质变体进行编码的dna序列。
[0045]
因此，如本文所使用的“抗体变体”或“变体变体”意指由于至少一个氨基酸修饰而与亲本抗体不同的抗体。如本文所使用的“igg变体”或“变体igg”意指由于至少一个氨基酸修饰而与亲本igg(再次，在许多情况下，来自人igg序列)不同的抗体，并且如本文所使用的，“免疫球蛋白变体”或“变体免疫球蛋白”意指由于至少一个氨基酸修饰而与亲本免疫球蛋白序列不同的免疫球蛋白序列。如本文所使用的，“fc变体”或“变体fc”意指包括fc结构域中的氨基酸修饰的蛋白质。本发明的fc变体是根据构成其的氨基酸修饰定义的。对于本发明中讨论的与抗体相关的所有位置，除非另有说明，否则氨基酸位置编号根据可变区编号的kabat并且根据恒定区，包含fc区的eu索引。eu索引或如kabat或eu编号方案中的eu指数是指eu抗体的编号(edelman等人,1969,《美国国家科学院院刊(proc natl acad sci usa)》63:78-85，其通过引用在此整体并入)。所述修饰可以是添加、缺失或取代。取代可以包含天然存在的氨基酸，以及在一些情况下合成氨基酸。
[0046]
如本文所使用的，本文的“蛋白质”意指至少两个共价连接的氨基酸，包含蛋白质、多肽、寡肽和肽。肽基可以包括天然存在的氨基酸和肽键。
[0047]
如本文所使用的“fab”或“fab区”意指包括vh、ch1、vl和cl免疫球蛋白结构域的多肽。fab可以单独指代此区，或者在全长抗体、抗体片段或fab融合蛋白的上下文中的此区。
[0048]
如本文所使用的，“fv”或“fv片段”意指包括单个抗原结合结构域(abd)的vl和vh结构域的多肽。如本领域的技术人员将理解的，这些通常由两条链构成，或者可以(通常与本文所讨论的连接子)组合以形成scfv。
[0049]
如本文所使用的，“氨基酸”和“氨基酸同一性”意指由dna和rna编码的20个天然存在的氨基酸。
[0050]
如本文所使用的，“效应子功能”意指由抗体fc区与fc受体或配体的相互作用引起的生物化学事件。效应子功能包含但不限于adcc、adcp和cdc。
[0051]
如本文所使用的，“fcγ受体”、“fcγr”“或fcγr”意指结合igg抗体fc区并且由fcγr基因编码的蛋白质家族的任何成员。在人类中，此家族包含但不限于：fcγri(cd64)，其包含同种型fcγria、fcγrib和fcγric；fcγrii(cd32)，其包含同种型fcγriia(包含同种异型h131和r131)、fcγriib(包含fcγriib-1和fcγriib-2)和fcγriic；以及fcγriii(cd16)，其包含同种型fcγriiia(包含同种异型v158和f158)和fcγriiib(包含同种异型fcγriib-na1和fcγriib-na2)(jefferis等人,2002,《免疫学快报(immunol lett)》82:57-65，其通过引用整体并入)；以及任何未发现的人fcγr或fcγr同种型或同种异型。在一些情况下，如本文所概述的，与一种或多种fcγr受体的结合被减少或消融。例如，减少与fcγriiia的结合减少了adcc，并且在一些情况下，期望减少与fcγriiia和fcγriib的结合。
[0052]
如本文所用的“fcrn”或“新生fc受体”意指结合igg抗体fc区并且至少部分地由fcrn基因编码的蛋白。fcrn可以来自任何生物体，包含但不限于人、小鼠、大鼠、兔和猴。如本领域已知的，功能fcrn蛋白包括两种多肽，通常被称为重链和轻链。轻链是β-2微球蛋白，并且重链由fcrn基因编码。除非本文另有说明，否则fcrn或fcrn蛋白是指fcrn重链与β-2-微球蛋白的复合物。
[0053]
如本文所使用的，“亲本多肽”意指随后修饰以生成变体的起始多肽。亲本多肽可以是天然存在的多肽或者天然存在的多肽的变体或经工程化版本。亲本多肽可以指多肽本身、包括亲本多肽的组合物或对其进行编码的氨基酸序列。因此，如本文所使用的，“亲本免疫球蛋白”意指被修饰以产生变体的未经修饰的免疫球蛋白多肽，并且如本文所使用的，“亲本抗体”意指被修饰以产生变体抗体的未经修饰的抗体。应注意，“亲本抗体”包含如下文概述的已知商业的重组产生抗体。
[0054]
本文的“重恒定区”意指抗体的通常来自人igg1、igg2或igg4的ch1-铰链-ch2-ch3部分。
[0055]
如本文所使用的，“靶抗原”意指通过给定抗体的可变区特异性地结合的分子。在本案中，靶抗原是btla蛋白。
[0056]
如本文所使用的，“靶细胞”意指表达靶抗原的细胞。
[0057]
如本文所使用的，“可变区”意指包括基本上由分别构成κ、λ和重链免疫球蛋白遗传基因座任何的vκ、vλ、和/或vh基因编码的一个或多个ig结构域的免疫球蛋白的区。
[0058]“野生型或wt”在本文中意指存在于自然界的氨基酸序列或核苷酸序列，包含等位变异。wt蛋白具有未经有意修饰的氨基酸序列或核苷酸序列。
[0059]
如本文所使用的，“位置”意指蛋白质的序列中的位置。位置可以顺序地编号或根据已确立格式，例如，用于抗体编号的eu索引编号。
[0060]
如本文所使用的，“残基”意指蛋白质中的位置和其缔合的氨基酸同一性。例如，天冬酰胺297(也被称为asn297或n297)是人类抗体igg1中的位置297处的残基。
[0061]
本发明的抗体通常是重组的。“重组”意指在外源性宿主细胞中使用重组核酸技术生成抗体。
[0062]
相对于蛋白质序列的“氨基酸序列同一性百分比(％)”被定义为在将序列比对并在需要时引入缺口以实现最大序列同一性百分比之后，并且在不考虑任何保守取代作为序列同一性的一部分的情况下，候选序列中的与特定(亲本)序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。出于确定氨基酸序列同一性百分比的目的进行的比对可以以本领域的能力范围内的各种方式实现，例如使用可共开获得的计算机软件，如blast、blast-2、align或megalign(dnastar)软件实现。本领域的技术人员可以确定用于测量比对的适当参数，包含在进行比较的序列的全长内实现最大比对所需的任何算法。一种特定程序是美国公开第20160244525号的段落[0279]到[0280]中所概述的align-2程序，所述公开特此通过引用并入。核酸序列的另一种近似比对由smith和waterman,《应用数学进展(advances in applied mathematics)》,2:482-489(1981)的局部同源性算法提供。此算法可以通过使用由dayhoff,《蛋白质序列和结构地图集(atlas of protein sequences and structure)》,m.o.dayhoff编辑,增刊5 3:353-358,美国华盛顿特区国家生物医学研究基金会(national biomedical research foundation,washington,d.c.,usa)开发的评分矩阵应用于氨基酸
序列，并由gribskov,《核酸研究(nucl.acids res.)》14(6):6745-6763(1986)归一化。
[0063]
此算法的用于确定序列的同一性百分比的实施方案的实例由遗传学计算机组(genetics computer group)(威斯康星州麦迪逊(madison,wi))在“bestfit”实用应用中提供。此方法的默认参数在《威斯康星州序列分析软件包计划手册(wisconsin sequence analysis package program manual)》,版本8(1995)(可从威斯康星州麦迪逊的遗传学计算机组(genetics computer group,madison,wi)获得)中进行了描述。在本发明的上下文中确立同一性百分比的另一种方法是使用爱丁堡大学(university of edinburgh)版权所有的、由john f.collins和shane s.sturrok开发并且由intelligenetics公司(加州山景城(mountain view,ca))分销的mpsrch程序包。从此套软件包中，可以采用smith-waterman算法，其中对评分表使用了默认参数(例如，空位开放罚分12、空位扩展罚分一和空位六)。从生成的数据中，“匹配”值反映了“序列同一性”。用于计算序列之间的同一性或相似性百分比的其它合适程序通常是本领域已知的，例如，另一种比对程序是与默认参数一起使用峰blast。例如，可以使用以下默认参数来使用blastn和blastp：遗传密码＝标准；筛选＝无；链＝两者；截止＝60；期望＝10；矩阵＝blosum62；描述＝50个序列；排序＝高评分；数据库＝非冗余，genbank embl ddbj pdb genbank cds翻译 swiss蛋白质 spupdate pir。这些程序的细节可以在通过将http://放置在blast.ncbi.nlm.nih.gov/blast.cgi前面定位的网址处找到。
[0064]
本发明的氨基酸序列(“发明序列”)与亲本氨基酸序列之间的同一性的程度被计算为在两个序列的比对中精确匹配的数除以“发明序列”的长度或亲本序列的长度，以最短者为准。结果以同一性百分比表示。
[0065]
在一些实施例中，两个或更多个氨基酸序列至少50％、60％、70％、80％或90％相同。在一些实施例中，两个或更多个氨基酸序列至少95％、97％、98％、99％或甚至100％相同。
[0066]
与特定抗原或表位的“特异性结合”或与特定抗原或表位“特异性地结合”或对特定抗原或表位“具有特异性”意指可测量地不同于非特异性相互作用的结合。特异性结合可以例如通过与对照分子的结合相比确定分子的结合来测量，所述对照分子通常是不具有结合活性的类似结构的分子。例如，特异性结合可以通过与类似于靶标的对照分子竞争来确定。
[0067]
如本文所用的术语“kassoc”或“ka”旨在指特定抗体-抗原相互作用的缔合速率，而如本文所用的术语“kdis”或“kd”旨在指特定抗体-抗原相互作用的解离速率。如本文所用，术语“k
d”旨在指解离常数，其由kd与ka之比获得(即，kd/ka)并表示为摩尔浓度(m)。可以使用本领域中既定的方法来确定抗体的kd值。在一些实施例中，用于确定抗体的kd的方法是通过使用表面等离子共振，例如，通过使用系统等生物传感器系统。在一些实施例中，抗体的kd通过生物层干涉测量法确定。在一些实施例中，kd值是用固定物测量的。在其它实施例中，kd值是利用未固定的抗体(例如，亲本小鼠抗体、嵌合抗体或人源化抗体变体)测量的。在某些实施例中，kd值以二价结合模式测量。在其它实施例中，kd值以单价结合模式测量。
[0068]“疾病”包含动物不能维持稳态，并且如果疾病没有改善，则动物的健康继续恶化的动物的健康状态，所述动物包含人。
[0069]
相比之下，包含人类的动物的“病症”包含动物能够维持稳态，但动物的健康状态不如没有病症的情况下有利的健康状态。如果不进行治疗，病症不一定会导致动物健康状况进一步下降。
[0070]
术语“治疗(treatment)”、“治疗(treating)”、“治疗(treat)”等是指获得期望的药理学和/或生理学效果。效果在完全或部分地预防疾病或其症状或降低疾病或其症状的可能性方面可以是预防性的，和/或在部分或完全治愈疾病和/或由疾病引起的不良作用方面可以是治疗性的。如本文所使用的，“治疗”涵盖对哺乳动物特别是人的疾病的任何治疗，并且包含：(a)预防疾病在可能易患疾病但尚未诊断患有所述疾病的受试者体内发生；(b)抑制疾病，即，遏止其发展或进展；以及(c)减轻疾病，即，引起疾病消退和/或减轻一种或多种疾病症状。“治疗”还旨在涵盖甚至在不存在疾病或病状的情况下递送药剂以提供药理学效果。例如，“治疗”涵盖在不存在疾病病状的情况下，例如，在疫苗的情况下递送可以引发免疫应答或赋予免疫性的组合物。
[0071]
如本文所用，术语“哺乳动物”是指任何哺乳动物，包含但不限于如小鼠和仓鼠等啮齿目的哺乳动物以及如兔等兔目的哺乳动物。在一些实施例中，哺乳动物来自食肉目，包含猫科动物(猫)和犬科动物(狗)。在一些实施例中，哺乳动物来自偶蹄目，包含牛属(牛)和猪属(猪)或属于奇蹄目，包含马属(马)。最优选的是哺乳动物属于灵长目(primates)、猿目(ceboids)或猴目(simoids)(猴子)或猿猴亚目(anthropoids)(人和猿)。在一些实施例中，所述哺乳动物是人。在一些实施例中，所述哺乳动物是食蟹猴。
[0072]
如本文所用，术语“消退”以及源自其的词语不一定意味着100％或完全消退。相反，存在不同程度的消退，本领域的普通技术人员认识到其中具有潜在益处或治疗效果。在此方面，所公开的方法可以提供任何量的任何水平的哺乳动物的癌症消退。此外，本发明方法提供的消退可以包含疾病，例如，癌症的一种或多种病状或症状消退。同样，出于本文的目的，“消退”可以涵盖延迟疾病的发作、延迟症状的发作和/或延迟其病状的发作。相对于进行性疾病和病症，“消退”可以涵盖减缓疾病或病症的进展、减缓疾病或病症的症状的进展和/或减缓其病症的进展。
[0073]
组合物的“有效量”或“治疗有效量”包含足以为组合物所施用的受试者提供有益效果的组合物的量。递送媒剂的“有效量”包含足以有效结合或递送组合物的量。
[0074]“个体”或“宿主”或“受试者”或“患者”是指期望诊断、治疗或疗法的任何哺乳动物受试者，特别是人类。其它受试者可以包含食蟹猴、牛、狗、猫、豚鼠、兔、大鼠、小鼠、马等。
[0075]
如本文所用的，术语“与
…
组合”是指例如在施用第二疗法的整个过程期间施用第一疗法的用途；其中所述第一疗法在与第二疗法的施用重叠的时间段施用，例如，其中第一疗法的施用开始于第二疗法的施用结束之前，并且第一疗法的施用结束于第二疗法的施用结束之前；其中第二疗法的施用开始于第一疗法的施用结束之前并且第二疗法的施用结束于第一疗法的施用结束之后；其中第一疗法的施用开始于第二疗法的施用开始之前，并且第二疗法的施用结束于第一疗法的施用结束之前；其中第二疗法的施用开始于第一疗法的施用开始之前，并且第一疗法的施用结束于第二疗法的施用结束之前。因此，“组合”也可以指涉及施用两种或更多种疗法的方案。如本文所用，“与
…
组合”还指施用两种或更多种疗法，所述疗法可以以相同或不同的调配物形式、通过相同或不同的途径以及以相同或不同的剂型类型施用。
[0076]“编码”包含如基因、cdna或mrna等多核苷酸中的核苷酸的特异性序列的固有性质，所述序列用于充当用于在生物过程中合成其它聚合物和大分子的模板，所述其它聚合物和大分子具有定义的核苷酸序列(即，rrna、trna和mrna)或定义的氨基酸序列和由其产生的生物性质。因此，如果例如对应于基因的mrna的转录和翻译在细胞或其它生物系统中产生蛋白质，则所述基因对蛋白质进行编码。其核苷酸序列与mrna序列相同并且通常设置在序列表中的编码链和用作用于基因或cdna的转录的模板的非编码链两者均可以被称为对所述基因或cdna的蛋白质或其它产物进行编码。
[0077]
术语“核酸”包含具有多于一个核苷酸的任何形式的rna或dna分子，包含单链、双链、寡核苷酸或多核苷酸。术语“核苷酸序列”包含单链形式的核酸中的寡核苷酸或多核苷酸中的核苷酸的排序。
[0078]“核酸构建体”是指已被构建为包括未一起存在于自然界中的一个或多个功能单元的核酸序列。实例包含环状、线性、双链、染色体外dna分子(质粒)、粘粒(含有来自λ噬菌体的cos序列的质粒)、包含非天然核酸序列的病毒基因组等。
[0079]
如本文所用，术语“可操作地连接”包含与第二多核苷酸具有功能关系的多核苷酸，例如，单链或双链核酸部分，所述多核苷酸包括以两个多核苷酸中的至少一个能够通过对另一个施加其所表征的生理学影响的方式布置在核酸部分内的两个多核苷酸。例如，与基因编码区可操作地连接的启动子能够促进编码区的转录。在指示可操作地连接时指定的顺序并不重要。例如，短语：“启动子与核苷酸序列可操作地连接”和“核苷酸序列与启动子可操作地连接”在本文中可互换使用并且被认为是等效的。在一些情况下，当对期望的蛋白质进行编码的核酸进一步包括启动子/调节序列时，所述启动子/调节序列定位在所期望的蛋白质编码序列的5'端，使得其驱动期望的蛋白质在细胞中的表达。
[0080]
本文可互换使用的术语“寡核苷酸”、“多核苷酸”和“核酸分子”是指任何长度的核苷酸——核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸——的聚合物形式。因此，此术语包含但不限于单链、双链或多链dna或rna、基因组dna、cdna、dna-rna杂交体或包括嘌呤和嘧啶碱基或其它天然的、经化学或生化修饰的、非天然的或衍生的核苷酸碱基的聚合物。多核苷酸的主链可以包括糖和磷酸基(如通常可以存在于rna或dna中的)，或经修饰的或经取代的糖或磷酸基。
[0081]
如应用于多核苷酸的术语“重组”意指多核苷酸是克隆、限制或连接步骤以及导致构建体与存在于自然界中的多核苷酸有区别和/或不同的其它程序的各种组合的产物。所述术语分别包含原始多核苷酸构建体的复制物和原始病毒构建体的子代。
[0082]
如本文所用，术语“启动子”包含与待转录的核酸序列可操作地连接的dna序列，如对期望的分子进行编码的核酸序列。启动子通常定位在待转录的核酸序列的上游，并且提供用于通过rna聚合酶和其它转录因子特异性结合的位点。
[0083]“载体”能够将基因序列转移到靶细胞。通常，“载体构建体”、“表达载体”和“基因转移载体”意指能够引导所关注的基因的表达并且可以将基因序列转移到靶细胞的任何核酸构建体，所述转移可以通过载体的全部或一部分的基因组整合或载体作为染色体外元素的瞬时或可遗传维持来实现。因此，所述术语包含克隆和表达载体，以及整合载体。
[0084]
如本文所用，术语“调节元素”包含控制核酸序列的表达的一些方面的核苷酸序列。调节元素的实例说明性地包含有助于核酸序列的复制、转录和/或转录后处理的增强
子、内部核糖体进入位点(ires)、内含子、复制起点、聚腺苷酸化信号(pa)、启动子、增强子、转录终止序列和上游调节结构域。在各种情况下，调节元素还可以包含顺式调节dna元素以及转座元素(te)。本领域的普通技术人员能够在不超过常规实验的情况下选择和使用表达构建体中的这些和其它调节元素。表达构建体可以使用遗传重组方法或以合成方式使用众所周知的方法产生。
[0085]“控制元素”或“控制序列”是参与分子的相互作用的核苷酸序列，所述相互作用促进多核苷酸的功能调节，包含多核苷酸的重复、复制、转录、剪接、翻译或降解。调节会影响过程的频率、速度或特异性并且在本质上会是增强性的或抑制性的。本领域已知的控制元素包含例如转录调节序列，如启动子和增强子。启动子是在某些条件下能够结合rna聚合酶并且启动对通常位于启动子下游(沿3'方向)的编码区进行转录的dna区。
[0086]
本文所用的对氨基酸残基进行“磷酸化”的表述意指磷酸基与氨基酸残基的侧链酯连接。可以进行磷酸化的典型氨基酸残基包含丝氨酸(ser)、苏氨酸(thr)和酪氨酸(tyr)。
[0087]
如本文所使用，术语“药物组合物”是指活性剂与惰性或活性的载体的组合，所述组合使所述组合物尤其适合于体内或离体诊断或治疗用途。
[0088]
如本文所用的，术语“药学上可接受的载体”是指任何标准药物载体，如磷酸盐缓冲盐溶液、水、乳剂(例如，油/水或水/油乳剂)和各种类型的湿润剂。所述组合物还可以包含稳定剂和防腐剂。关于载体、稳定剂和佐剂的实例，参见例如martin,《雷明顿药物科学(remington's pharmaceutical sciences)》,第15版,宾夕法尼亚州伊斯顿市的mack出版公司(mack publ.co.,easton,pa)[1975]。
[0089]
贯穿本说明书，在组合物被描述为具有、包含或包括特定组分的情况下或在过程和方法被描述为具有、包含或包括特定步骤的情况下，设想了另外存在基本上由叙述的组分组成或由叙述的组分组成的本发明的组合物，并且存在基本上由叙述的处理步骤组成或由叙述的处理步骤组成的根据本发明的方法。
[0090]
一般而言，指定百分比的组合物是按重量计的，除非另外指明。进一步地，如果变量没有伴随定义，则以变量的先前定义为主。
[0091]
本发明的各个方面在以下章节中进行了阐述；然而，在一个特定章节中描述的本发明的方面不限于任何特定章节。
[0092]
i.抗体
[0093]
本公开提供了新型抗fcmr抗体。此类抗体结合人fcmr。表1列出了如表1中指定的组合可以与人fcmr结合的重链可变区和轻链可变区的肽序列。在一些实施例中，重链可变区和轻链可变区以fab形式布置。在一些实施例中，重链可变区和轻链可变区融合在一起以形成scfv。
[0094]
针对人fcmr的小鼠抗体是使用常规小鼠单克隆抗体技术产生的。简而言之，对小鼠(品系sjl/j)接种重组人fcmr-fc。加强免疫之后，使用非相关的his6标记的蛋白作为对照通过elisa确定抗体滴度。将选择用于融合的小鼠处死。使用p3x63ag8.653鼠骨髓瘤细胞系作为融合伴侣执行杂交瘤融合。通过有限稀释将克隆分离并通过杂交瘤上清液的elisa进行选择。使用重组人fcmr-fc作为elisa测定的底物。
[0095]
将杂交瘤mrna转录成cdna并且通过5'-cdna末端快速扩增(race)进行扩增。将pcr
产物克隆到适当的测序载体中，并且通过双脱氧sanger方法进行测序。对多个拷贝进行测序以验证每个克隆的克隆性。将经翻译的蛋白质序列输入到ncbi igblast搜索工具中(ye,j.等人,2013,《核酸研究》41,w34-40)以标识cdr。
[0096]
[0097]
[0098][0099][0100]
在一些实施例中，本公开的抗fcmr抗体包含氨基酸序列与seq id no:1至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、
94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的重链可变区和氨基酸序列与seq id no:2至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的轻链可变区。
[0101]
在一些实施例中，所述抗fcmr抗体包含包括seq id no:13的vhcdr1、包括seq id no:14的vhcdr2、包括seq id no:15的vhcdr3、包括seq id no:16的vlcdr1、包括seq id no:17的vlcdr2和包括seq id no:18的vlcdr3。在一些实施例中，此6个cdr中的一个或多个具有1个、2个、3个、4个或5个氨基酸修饰。在另外的实施例中，单个cdr含有1个或2个氨基酸取代，并且经修饰的抗fcmr抗体保持与人fcmr的结合。
[0102]
在一些实施例中，本公开的抗fcmr抗体包含氨基酸序列与seq id no:3至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的重链可变区以及氨基酸序列与seq id no:4至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的轻链可变区。
[0103]
在一些实施例中，抗fcmr抗体包含包括seq id no:19的vhcdr1、包括seq id no:20的vhcdr2、包括seq id no:21的vhcdr3、包括seq id no:22的vlcdr1、包括seq id no:23的vlcdr2和包括seq id no:24的vlcdr3。在另外的实施例中，单个cdr含有1个或2个氨基酸取代，并且经修饰的抗fcmr抗体保持与人fcmr的结合。
[0104]
在一些实施例中，本公开的抗fcmr抗体包含氨基酸序列与seq id no:5至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的重链可变区以及氨基酸序列与seq id no:6至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的轻链可变区。
[0105]
在一些实施例中，抗fcmr抗体包含包括seq id no:25的vhcdr1、包括seq id no:26的vhcdr2、包括seq id no:27的vhcdr3、包括seq id no:28的vlcdr1、包括seq id no:29的vlcdr2和包括seq id no:30的vlcdr3。在一些实施例中，此6个cdr中的一个或多个具有1个、2个、3个、4个或5个氨基酸修饰。在另外的实施例中，单个cdr含有1个或2个氨基酸取代，并且经修饰的抗fcmr抗体保持与人fcmr的结合。
[0106]
在一些实施例中，本公开的抗fcmr抗体包含氨基酸序列与seq id no:7至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的重链可变区以及氨基酸序列与seq id no:8至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的轻链可变区。
[0107]
在一些实施例中，抗fcmr抗体包含包括seq id no:31的vhcdr1、包括seq id no:32的vhcdr2、包括seq id no:33的vhcdr3、包括seq id no:34的vlcdr1、包括seq id no:35的vlcdr2和包括seq id no:36的vlcdr3。在一些实施例中，此6个cdr中的一个或多个具有1个、2个、3个、4个或5个氨基酸修饰。在另外的实施例中，单个cdr含有1个或2个氨基酸取代，并且经修饰的抗fcmr抗体保持与人fcmr的结合。
[0108]
在一些实施例中，本公开的抗fcmr抗体包含氨基酸序列与seq id no:9至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、
94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的重链可变区和氨基酸序列与seq id no:10至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的轻链可变区。
[0109]
在一些实施例中，抗fcmr抗体包含包括seq id no:37的vhcdr1、包括seq id no:38的vhcdr2、包括seq id no:39的vhcdr3、包括seq id no:40的vlcdr1、包括seq id no:41的vlcdr2和包括seq id no:42的vlcdr3。在一些实施例中，此6个cdr中的一个或多个具有1个、2个、3个、4个或5个氨基酸修饰。在另外的实施例中，单个cdr含有1个或2个氨基酸取代，并且经修饰的抗fcmr抗体保持与人fcmr的结合。
[0110]
在一些实施例中，本公开的抗fcmr抗体包含氨基酸序列与seq id no:11至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的重链可变区和氨基酸序列与seq id no:12至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的轻链可变区。
[0111]
在一些实施例中，抗fcmr抗体，其包含包括seq id no:43的vhcdr1、包括seq id no:44的vhcdr2、包括seq id no:45的vhcdr3、包括seq id no:46的vlcdr1、包括seq id no:47的vlcdr2和包括seq id no:48的vlcdr3。在一些实施例中，此6个cdr中的一个或多个具有1个、2个、3个、4个或5个氨基酸修饰。在另外的实施例中，单个cdr含有1个或2个氨基酸取代，并且经修饰的抗fcmr抗体保持与人fcmr的结合。
[0112]
除了本文所述的重链和轻链可变区和/或cdr中的序列变体之外，还可以对重和/或轻可变区的框架区进行改变。在一些实施例中，框架区中的变体(例如，不包含cdr)保留与种系序列的至少约80％、85％、90％或95％的同一性。变体可以被制成保留与轻链v-gene、轻链j-gene、重链v-gene、重链j-gene和重链d-gene等位基因中的任一个的至少约80％、85％、90％或95％的同一性。
[0113]
在一些实施例中，在框架区中进行保留与种系基因序列至少80％、85％、90％或95％的同一性同时保持6个cdr不变的变异。
[0114]
在一些实施例中，在框架区和6个cdr两者中进行保留与种系基因序列至少80％、85％、90％或95％的同一性的变异。cdr可以具有氨基酸修饰(例如，来自所述组的cdr中的1个、2个、3个、4个或5个氨基酸修饰(即，可以对cdr进行修饰，只要所述组的6个cdr中的改变的总数小于6个氨基酸修饰，其中cdr的任何组合改变；例如，vlcdr1中可以存在一个变化，vhcdr2中可以存在两个变化，vhcdr3中可以不存在变化等)。
[0115]
通过从本文所述的氨基酸序列中选择重链和轻链的cdr和/或可变区的氨基酸序列并且在适当时将其与抗体的重链和轻链的框架区和/或恒定区的氨基酸序列组合，本领域的技术人员将能够设计根据本发明的抗fcmr抗体。本发明所述的抗体框架区和/或恒定区(fc结构域)可以源自任何物种的抗体，如源自人、兔、狗、猫、小鼠、马或猴。
[0116]
在一些实施例中，恒定区源自人并且包含源自igg、iga、igm、ige和igd亚型或其变体的那些的重链恒定区，以及源自κ或λ亚型或其变体的轻链恒定区。在一些实施例中，重链恒定区源自人igg，包含igg1、igg2、igg3和igg4。在一些实施例中，重链恒定区的氨基酸序列与人igg1、igg2、igg3或igg4恒定区至少80％、85％、90％或95％相同。在一些其它实施例中，恒定区的氨基酸序列与来自另一种哺乳动物，如兔、狗、猫、小鼠、马或猴至少80％、
85％、90％或95％相同。在一些实施例中，抗体恒定区包含铰链、ch2结构域、ch3结构域和任选地ch1结构域。
[0117]
在一些实施例中，本文所述的抗体可以源自来自不同物种的，例如形成嵌合抗体和/或人源化抗体的混合物。通常，“嵌合抗体”和“人源化抗体”两者是指将来自多于一种物种的区组合的抗体。例如，“嵌合抗体”传统上包括来自小鼠(或在一些情况下大鼠)的可变区和来自人的恒定区。“人源化抗体”通常是指已经将可变结构域框架区替换为存在于人抗体中的序列的非人抗体。通常，在人源化抗体中，除cdr之外的整个抗体由人类来源的多核苷酸编码或除了在其cdr内之外，与此抗体相同。将cdr移植到人抗体可变区的β片层框架中以产生抗体，所述抗体的特异性由移植的cdr确定，所述cdr中的一些或全部是由源自非人生物体的核酸编码的。此类抗体的产生描述于例如wo 92/11018,jones,1986,《自然(nature)》321:522-525、verhoeyen等人,1988,《科学(science)》239:1534-1536中，所有所述文献通过引用整体并入。通常需要所选受体框架残基“反突变”为对应供体残基以重新获得丧失于初始移植的构建体中的亲和力(us 5530101；us 5585089；us 5693761；us 5693762；us6180370；us 5859205；us 5821337；us 6054297；us 6407213，均通过引用整体并入)。人源化抗体最佳地还将包括免疫球蛋白恒定区，典型地是人免疫球蛋白的恒定区的至少一部分，并且因此将典型地包括人fc区。使用具有经基因工程化的免疫系统的小鼠也可以生成人源化抗体，例如roque等人,2004,《生物技术进展(biotechnol.prog.)》20:639-654中所述，所述文献通过引用整体并入。用于对非人抗体进行人源化和重塑的多种技术和方法是本领域众所周知的(参见tsurushita和vasquez,2004,“单克隆抗体的人源化(humanization of monoclonal antibodies)”,《b细胞分子生物学(molecular biology of b cells)》,533-545,爱思唯尔科学公司(elsevier science)(美国(usa)和其中引用的参考文献，所述文献均通过引用整体并入)。人源化方法包含但不限于以下所述的方法：jones等人,1986,《自然》321:522-525；riechmann等人,1988；《自然》332:323-329；verhoeyen等人,1988,《科学》,239:1534-1536；queen等人,1989,《美国国家科学院院刊》86:10029-33；he等人,1998,j.《免疫学(immunol.)》160:1029-1035；carter等人,1992,《美国国家科学院院刊》89:4285-9；presta等人,1997,《癌症研究(cancer res.)》57(20):4593-9；gorman等人,1991,《美国国家科学院院刊》88:4181-4185；o'connor等人,1998,《蛋白质工程化(protein eng)》11:321-8，所述文献均通过引用整体并入。降低非人类抗体可变区的免疫原性的人源化方法或其它方法可以包含表面再塑方法，例如roguska等人,1994,《美国国家科学院院刊》91:969-973中所述，所述文献通过引用整体并入。其它人源化方法可以涉及移植仅cdr的一部分，包含但不限于以下中所述的方法：tan等人,2002,《免疫学杂志(j.immunol.)》169:1119-1125；de pascalis等人,2002,《免疫学杂志》169:3076-3084，所述文献均通过引用并入。
[0118]
在一些实施例中，本发明的抗体包括源自特定人种系重链免疫球蛋白基因的重链可变区和/或源自特定人种系轻链免疫球蛋白基因的轻链可变区。此抗体可能由于例如天然存在的体细胞突变或故意引入定点突变而含有相比于人种系序列的氨基酸差异。然而，人源化抗体通常与由人种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列在氨基酸序列上至少80％相同，并且在与其它物种的种系免疫球蛋白氨基酸序列(例如，鼠种系序列)进行比较时，含有将抗体鉴定为源自人类序列的氨基酸残基。在某些情况下，人源化抗体可以与由人种系
免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列在氨基酸序列上至少95％、96％、97％、98％或99％，或甚至至少96％、97％、98％或99％相同。通常，源自特定人类种系序列的人源化抗体将显示与由人种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列不超过10-20个氨基酸差异。在某些情况下，人源化抗体可以显示出与由种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列不超过5个，或甚至不超过4个、3个、2个或1个氨基酸差异。
[0119]
在一些实施例中，如本领域已知的，本公开的抗体是人源化的并且是亲和力成熟的。可以采用基于结构的方法进行人源化和亲和力成熟，例如美国专利第7,657,380号中所述。可以采用基于选择的方法以对抗体可变区进行人源化和/或亲和力成熟，所述方法包含但不限于以下所述的方法：wu等人,1999,《分子生物学杂志(j.mol.biol.)》294:151-162；baca等人,1997,《生物化学杂志(j.biol.chem.)》272(16):10678-10684；rosok等人,1996,《生物化学杂志》271(37):22611-22618；rader等人,1998,《美国国家科学院院刊》95:8910-8915；krauss等人,2003,《蛋白质工程化》16(10):753-759，所述文献均通过引用整体并入。
[0120]
ii.抗体的特性
[0121]
在一些实施例中，本文所述的抗fcmr抗体与人fcmr结合。在一些实施例中，抗fcmr抗体与人fcmr的结合通过流式细胞术，如实例1中所述的示例性测定测量。
[0122]
在一些实施例中，本文所述的抗fcmr抗体以高亲和力结合人fcmr。在另外的实施例中，具有高亲和力的抗体是亲和力在纳摩尔或皮摩尔范围内的抗体。在一些实施例中，本文所述的抗fcmr抗体对fcmr-fc蛋白具有高结合亲和力(参见图6)。可以用固定的抗原或固定的抗体来测量kd值。图6列出了抗体克隆中的一些抗体克隆的示例性kd。在一些实施例中，抗体与人fcmr之间的kd值的范围为2.57
×
10-8
m到7.21
×
10-9
m。
[0123]
在一些实施例中，抗fcmr抗体在施用于人类受试者时显示出低免疫原性。这些抗体可以含有源自人igg1、人igg2或人igg3的fc结构域。在一些实施例中，这些抗体使用源自人免疫球蛋白的框架区进行人源化。
[0124]
抗fcmr抗体对细胞因子释放的影响可以使用本领域已知和本文所述的多种方法来测定，包含例如通过实例4和5中所述的方法。因此，抗fcmr抗体可以用作fcmr拮抗剂或fcmr激动剂。
[0125]
在一些实施例中，所述的抗fcmr抗体充当fcmr拮抗剂并抑制t细胞功能。因此，此类抗fcmr抗体抑制免疫应答。此抗fcmr抗体的实例包含含有以下的抗体：包括与seq id no:9至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的氨基酸序列的重链可变区和包括与seq id no:10至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的氨基酸序列的轻链可变区；和/或包括seq id no:37的vhcdr1、包括seq id no:38的vhcdr2、包括seq id no:39的vhcdr3、包括seq id no:40的vlcdr1、包括seq id no:41的vlcdr2和包括seq id no:42的vlcdr3。
[0126]
在一些其它实施例中，本文所述的抗fcmr抗体充当fcmr激动剂，并且刺激免疫细胞功能，包含促炎性t细胞功能。因此，此类抗fcmr抗体刺激免疫应答。例如，此类抗fcmr抗体可以包含包括与seq id no:1至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同
的氨基酸序列的重链可变区和包括与seq id no:2至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的氨基酸序列的轻链可变区；和/或包括seq id no:13的vhcdr1、包括seq id no:14的vhcdr2、包括seq id no:15的vhcdr3、包括seq id no:16的vlcdr1、包括seq id no:17的vlcdr2和包括seq id no:18的vlcdr3。
[0127]
iii.本发明的核酸
[0128]
还提供了对本文所述的抗fcmr抗体进行编码的核酸，以及含有此类核酸的表达载体和用此类核酸和/或表达载体转换的宿主细胞。如本领域的技术人员所理解的，由于遗传密码的简并性，本文描绘的蛋白质序列可以由任何数量的可能核酸序列进行编码。
[0129]
如本领域的技术人员将理解的，在抗原结合结构域的情况下，核酸组合物通常包含对重链可变区进行编码的第一核酸和对轻链可变区进行编码的第二核酸。在scfv的情况下，可以制成对重链可变区和轻链可变区进行编码的，由本文所述的连接子分开的单个核酸。在传统抗体的情况下，核酸组合物通常包含对重链进行编码的第一核酸和对轻链进行编码的第二核酸，所述第一核酸和所述第二核酸当在细胞中表达时将自发地组装成两条重链和两条轻链的“传统”四聚体格式。
[0130]
如本领域已知的，对本发明的组合物进行编码的核酸可以并入到表达载体中并且取决于宿主细胞可以用于产生本发明的抗体。这两种核酸可以并入到单个表达载体中或两种不同的表达载体中。通常，核酸可以与任何数量的调节元素(启动子、复制起点、可选择标记、核糖体结合位点、诱导剂等)在表达载体中可操作地连接。表达载体可以是染色体外载体或整合载体。
[0131]
本发明的核酸和/或表达载体可以引入到本领域已知的任何类型的宿主细胞中，包含哺乳动物、细菌、酵母、昆虫和真菌细胞。转染之后，可以使用本领域已知的方法，如有限稀释、elisa、facs、显微镜检查或clonepix对单细胞克隆进行分离以用于细胞库生成。克隆可以在适合于抗体的生物反应器放大和维持表达的条件下培养。可以使用本领域已知的方法对抗体进行分离和纯化，所述方法包含离心、深度过滤、细胞裂解、均质化、冻融、亲和力纯化、凝胶过滤、离子交换色谱法、疏水相互作用交换色谱法和混合模式色谱法。
[0132]
iv.治疗应用
[0133]
本公开提供了一种调节受试者的免疫应答的方法，并且所述方法包含向所述受试者施用有效量的本文所述的抗fcmr抗体或含有抗fcmr抗体的药物组合物。
[0134]
在一些实施例中，本公开涵盖的所述调节免疫应答的方法包括抑制受试者的免疫应答，并且在另外的实施例中，此类方法包括向所述受试者施用有效量的抗fcmr抗体或通过施用含有抗fcmr抗体的药物组合物。
[0135]
在一些实施例中，本公开涵盖的所述调节免疫应答的方法包括刺激受试者的免疫应答，并且在另外的实施例中，此类方法包括向所述受试者施用有效量的抗fcmr抗体或通过施用含有抗fcmr抗体的药物组合物。
[0136]
在一些实施例中，本公开所涵盖的方法包括，例如，通过施用抗fcmr抗体调节受试者的免疫应答的方法，所述抗fcmr抗体包含包括与seq id no:1至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的氨基酸序列的重链可变区和包括与seq id no:2至
少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的氨基酸序列的轻链可变区；和/或包括seq id no:13的vhcdr1、包括seq id no:14的vhcdr2、包括seq id no:15的vhcdr3、包括seq id no:16的vlcdr1、包括seq id no:17的vlcdr2和包括seq id no:18的vlcdr3。
[0137]
在一些实施例中，本文所描述的方法，例如，通过施用抗fcmr抗体调节受试者的免疫应答，所述抗fcmr抗体包含包括与seq id no:3至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的氨基酸序列的重链可变区和包括与seq id no:4至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的氨基酸序列的轻链可变区；和/或包括seq id no:19的vhcdr1、包括seq id no:20的vhcdr2、包括seq id no:21的vhcdr3、包括seq id no:22的vlcdr1、包括seq id no:23的vlcdr2和包括seq id no:24的vlcdr3。
[0138]
在一些实施例中，本文所描述的方法，例如，通过施用抗fcmr抗体调节受试者的免疫应答，所述抗fcmr抗体包含包括与seq id no:5至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的氨基酸序列的重链可变区和包括与seq id no:6至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的氨基酸序列的轻链可变区；和/或包括seq id no:25的vhcdr1、包括seq id no:26的vhcdr2、包括seq id no:27的vhcdr3、包括seq id no:28的vlcdr1、包括seq id no:29的vlcdr2和包括seq id no:30的vlcdr3。
[0139]
在一些实施例中，本文所描述的方法，例如，通过施用抗fcmr抗体调节受试者的免疫应答，所述抗fcmr抗体包含包括与seq id no:7至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的氨基酸序列的重链可变区以及包括与seq id no:8至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的氨基酸序列的轻链可变区；和/或包括seq id no:31的vhcdr1、包括seq id no:32的vhcdr2、包括seq id no:33的vhcdr3、包括seq id no:34的vlcdr1、包括seq id no:35的vlcdr2和包括seq id no:36的vlcdr3。
[0140]
在一些实施例中，本文所描述的方法，例如，通过施用抗fcmr抗体调节受试者的免疫应答，所述抗fcmr抗体包含包括与seq id no:9至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的氨基酸序列的重链可变区和包括与seq id no:10至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的氨基酸序列的轻链可变区；和/或包括seq id no:37的vhcdr1、包括seq id no:38的vhcdr2、包括seq id no:39的vhcdr3、包括seq id no:40的vlcdr1、包括seq id no:41的vlcdr2和包括seq id no:42的vlcdr3。
[0141]
在一些实施例中，本文所描述的方法，例如，通过施用抗fcmr抗体调节受试者的免疫应答，所述抗fcmr抗体包含包括与seq id no:11至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、
99％或100％)相同的氨基酸序列的重链可变区和包括与seq id no:12至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的氨基酸序列的轻链可变区；和/或包括seq id no:43的vhcdr1、包括seq id no:44的vhcdr2、包括seq id no:45的vhcdr3、包括seq id no:46的vlcdr1、包括seq id no:47的vlcdr2和包括seq id no:48的vlcdr3。
[0142]
本公开还提供了治疗受试者的癌症的方法，并且此类方法包含向所述受试者施用有效量的抗fcmr抗体或含有此抗fcmr抗体的药物组合物。在一些实施例中，待治疗的癌症在癌细胞表面上表达fcmr。在一些实施例中，与对应非癌组织相比，待治疗的癌症上调fcmr。在一些实施例中，待治疗的癌症对靶向其它免疫检查点，如ctla-4、pd-1或pd-l1的现有免疫调节抗体无响应。
[0143]
在一些实施例中，所述癌症是b细胞慢性淋巴细胞白血病、霍奇金氏淋巴瘤(hodgkin'slymphoma)、b细胞非霍奇金氏淋巴瘤或t细胞非霍奇金氏淋巴瘤。在一些实施例中，所述癌症是实体瘤，如胃癌、结肠直肠癌、肝细胞癌、黑色素瘤或食管鳞状细胞癌。
[0144]
在一些其它实施例中，所述癌症是脑癌、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、子宫内膜癌、食道癌、白血病、肺癌、肝癌、黑色素瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、肾癌、睾丸癌或子宫癌。在又其它实施例中，所述癌症是血管化肿瘤、鳞状细胞癌、腺癌、小细胞癌、神经母细胞瘤、肉瘤(例如，血管肉瘤或软骨肉瘤)、喉癌、腮腺癌、胆道癌、甲状腺癌、肢端雀斑样黑色素瘤、光化性角化病、急性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病、腺样囊性癌、腺瘤、腺肉瘤、腺鳞癌、肛管癌、肛门癌、肛门直肠癌、星形细胞瘤、前庭大腺癌、基底细胞癌、胆道癌、骨癌、骨髓癌、支气管癌、支气管腺癌、类癌、胆管癌、软骨肉瘤(chondrosarcoma)、脉络丛乳头状瘤/癌、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓白血病、透明细胞癌、结缔组织癌、囊腺瘤、消化系统癌症、十二指肠癌、内分泌系统癌症、内胚窦瘤、子宫内膜增生、子宫内膜间质肉瘤、子宫内膜样腺癌、内皮细胞癌、室管膜癌、上皮细胞癌、尤文氏肉瘤(ewing'ssarcoma)、眼眶癌、女性生殖器癌、局灶性结节性增生、胆囊癌、胃窦癌、胃底癌、胃泌素瘤、胶质母细胞瘤、胰高血糖素瘤、心脏病、成血管细胞瘤(hemangiblastomas)、血管内皮瘤、血管瘤、肝腺瘤、肝腺瘤病、肝胆癌、肝细胞癌、霍奇金氏病、回肠癌、胰岛素瘤、上皮内瘤变、上皮间鳞状细胞瘤、肝内胆管癌、侵袭性鳞状细胞癌、空肠癌、关节癌、卡波济氏肉瘤(kaposi's sarcoma)、盆腔癌、大细胞癌、大肠癌、平滑肌肉瘤、雀斑样恶性黑色素瘤、淋巴瘤、男性生殖器癌、恶性黑色素瘤、恶性间皮肿瘤、髓母细胞瘤、髓上皮瘤、脑膜癌、间皮癌、转移性癌、口癌症、粘液表皮样癌、多发性骨髓瘤、肌肉癌、鼻道癌、神经系统癌、神经上皮腺癌、结节性黑色素瘤、非上皮性皮肤癌、燕麦细胞癌、少突神经胶质细胞癌、口腔癌、骨肉瘤、乳头状浆液性腺癌、阴茎癌、咽癌、垂体瘤、浆细胞瘤、假肉瘤、肺母细胞瘤、直肠癌、肾细胞癌、呼吸系统癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肉瘤、浆液性癌、鼻窦癌、皮肤癌、小细胞癌、小肠癌、平滑肌癌、软组织癌、生长抑素分泌肿瘤、脊柱癌、鳞状细胞癌、横纹肌癌、间皮下癌、浅表扩散性黑色素瘤、t细胞白血病、舌癌、未分化癌、输尿管癌、尿道癌、尿膀胱癌、泌尿系统癌、子宫颈癌、子宫体癌、葡萄膜黑色素瘤、阴道癌、疣状癌、vip瘤、外阴癌、分化良好的癌或威尔姆氏瘤(wilms tumor)。
[0145]
在一些其它实施例中，所述待治疗的癌症是非霍奇金氏淋巴瘤，如b细胞淋巴瘤或t细胞淋巴瘤。在某些实施例中，所述非霍奇金氏淋巴瘤是b细胞淋巴瘤，如弥漫性大b细胞
淋巴瘤、原发性纵隔b细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区b细胞淋巴瘤、结外边缘区b细胞淋巴瘤、淋巴结边缘区b细胞淋巴瘤、脾边缘区b细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤(burkitt lymphoma)、淋巴浆细胞淋巴瘤、毛细胞白血病或原发性中枢神经系统(cns)淋巴瘤。在某些其它实施例中，所述非霍奇金氏淋巴瘤是t细胞淋巴瘤，如前体t淋巴细胞淋巴瘤、外周t细胞淋巴瘤、皮肤t细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞性t细胞淋巴瘤、结外自然杀伤细胞/t细胞淋巴瘤、肠病型t细胞淋巴瘤、皮下脂膜炎样t细胞淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤或外周t细胞淋巴瘤。
[0146]
本公开还提供了治疗受试者的自身免疫性或炎性病症的方法，并且所述方法包含向所述受试者施用有效量的抗fcmr抗体或含有此抗fcmr抗体的药物组合物。施用抗fcmr抗体可以抑制患有自身免疫性或炎性病症的受试者的自身反应性免疫应答。
[0147]
在一些实施例中，所述待治疗的自身免疫性或炎性病症是多发性硬化症、艾迪生氏病(addison's disease)、肌萎缩侧索硬化症、克罗恩氏病(crohn's disease)、库欣氏综合征(cushing's syndrome)、糖尿病1型、移植物抗宿主病、格雷夫斯病(graves'disease)、格林-巴利综合征(guillain-barre syndrome)、红斑狼疮、银屑病、银屑病关节炎、类风湿性关节炎、结节病、硬皮病、全身性红斑狼疮、移植排斥或血管炎。
[0148]
在一些其它实施例中，所述待治疗的自身免疫性或炎性病症包含但不限于急性播散性脑脊髓炎(adem)、无丙种球蛋白血症、斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、抗合成酶综合征、特应性变态反应、特应性皮炎、自身免疫性再生障碍性贫血、自身免疫性心肌病、自身免疫性肠病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性内耳疾病、自身免疫性淋巴组织增生综合征、自身免疫性胰腺炎、自身免疫性周围神经病变、自身免疫性多内分泌综合征、自身免疫性孕激素性皮炎、自身免疫性血小板减少性紫癜、自身免疫性荨麻疹、自身免疫性葡萄膜炎、巴洛病/巴洛同心性硬化症(balo disease/balo concentric sclerosis)、白塞氏病(behcet's disease)、伯杰氏病(berger's disease)、比克斯塔夫氏脑炎(bickerstaffs encephalitis)、布劳综合征(blau syndrome)、大疱性类天疱疮、癌症、卡斯尔曼氏病(castleman's disease)、乳糜泻、恰加斯氏病(chagas disease)、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、慢性阻塞性肺病、慢性复发性多灶性骨髓炎、查格-施特劳斯综合征(churg-strauss syndrome)、疤痕性类天疱疮、科干综合征(cogan syndrome)、冷凝集素疾病、补体成分2缺乏症、接触性皮炎、颅动脉炎、crest综合征、皮肤百血球分解型血管炎、代戈氏病(dego's disease)、德尔肯氏病(dercum's disease)、疱疹样皮炎、皮肌炎、弥漫性皮肤系统慢性硬化症、盘状红斑狼疮、德雷斯勒氏综合征(dressler's syndrome)、药物诱导的狼疮、湿疹、子宫内膜异位症、嗜酸性筋膜炎、嗜酸性胃肠炎、嗜酸性肺炎、获得性大疱性表皮松解症、结节性红斑、胎儿成红细胞增多病、原发混合性冷凝球蛋白血症、埃文氏综合征(evan's syndrome)、进行性肌肉骨化症、纤维性肺泡炎(或特发性肺间质纤维化)、胃炎、胃肠类天疱疮、肾小球肾炎、古德帕斯丘氏综合征(goodpasture's syndrome,)、桥本脑病(hashimoto’sencephalopathy)、桥本甲状腺炎、亨-舍二氏紫癜(henoch-schonlein purpura)、又名称妊娠期类天疱疮的妊娠疱疹、化脓性汗腺炎(hidradenitis suppurativa)、休-斯二氏综合征(hughes-stovin syndrome)、低丙球蛋白血症(hypogammaglobulinemi)、特发性炎性脱髓鞘疾病、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜、iga肾病、包涵体肌炎、间质性膀胱炎、又名幼年类风湿性关节炎的幼年特
发性关节炎、川崎病(kawasaki's disease)、郎-爱二氏肌无力综合征(lambert-eaton myasthenic syndrome)、白质细胞碎裂性血管炎、扁平苔藓、硬化性苔藓、线性iga病、又名自身免疫性肝炎的狼疮样肝炎、马吉德综合征(majeed syndrome)、显微镜下结肠炎、显微镜下多血管炎、米勒-费舍尔综合征(miller-fisher syndrome)、混合性结缔组织病、硬斑病、又名急性痘疮样苔藓样糠疹的穆哈-哈二氏病(mucha-habermann disease)、多发性硬化症、重症肌无力、肌炎、美尼尔氏病(meniere's disease)、发作性睡病、视神经脊髓炎、神经性肌强直、眼部瘢痕性类天疱疮、斜视眼阵挛肌阵挛综合征、奥德氏甲状腺炎(ord's thyroiditis)、复发性风湿病、pandas(与链球菌相关的小儿自身免疫性神经精神障碍)、副肿瘤性小脑变性、阵发性夜间血红蛋白尿(pnh)、帕-罗二氏综合征(parry romberg syndrome)、睫状体扁平部炎、牧师特纳综合征(parsonage-turner syndrome)、寻常天疱疮、静脉周脑脊髓炎、恶性贫血、poems综合征、结节性多动脉炎、风湿性多肌痛、多肌炎、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、进行性炎性神经病、纯红细胞再生障碍、坏疽性脓皮病、拉斯穆森氏脑炎(rasmussen's encephalitis)、雷诺现象、莱特尔氏综合征(reiter's syndrome)、复发性多软骨炎、不宁腿综合征、腹膜后纤维化、风湿热、精神分裂症、施密特综合征(schmidt syndrome)、施尼茨勒综合征(schnitzler syndrome)、巩膜炎、血清病、修格兰氏综合征(sjogren's syndrome)、脊柱关节病、僵人综合征(stiff person syndrome)、斯提耳氏病(still's disease)、亚急性细菌性心内膜炎(sbe)、苏萨克氏综合征(susac's syndrome)、斯威特氏综合征(sweet's syndrome)、西登哈姆氏舞蹈病(sydenham chorea)、交感性眼炎、高安氏动脉炎(takayasu's arteritis)、颞动脉炎、血小板减少症、t-h二氏综合征(tolosa-hunt syndrome)、横贯性脊髓炎、溃疡性结肠炎、未分化型脊椎关节病变、荨麻疹性血管炎、白癜风、韦格纳氏肉芽肿(wegener's granulomatosis)。
[0149]
本公开还提供了治疗受试者的细菌感染的方法，并且所述方法包含向所述受试者施用有效量的充当fcmr激动剂的抗fcmr抗体，或含有此抗fcmr抗体的药物组合物。施用抗fcmr抗体可以刺激炎性免疫应答，以增加对细菌感染的清除。
[0150]
在一些实施例中，待治疗的细菌感染包含但不限于：呼吸道感染、急性细菌性中耳炎、细菌性肺炎、尿道感染、并发性感染、非并发性感染、肾盂肾炎、腹内感染、深部脓肿、细菌性败血症、皮肤和皮肤结构感染、软组织感染、骨和关节感染、中枢神经系统感染、菌血症、伤口感染、腹膜炎、脑膜炎、烧伤后感染、泌尿生殖道感染、胃肠道感染、盆腔炎性疾病、心内膜炎和其它血管内感染。
[0151]
本公开还提供了治疗受试者的病毒感染的方法，并且所述方法包含向所述受试者施用有效量的充当fcmr拮抗剂的抗fcmr抗体，或含有此抗fcmr抗体的药物组合物。施用抗fcmr抗体可以刺激炎性免疫应答，以增加对病毒感染的清除。
[0152]
v.组合疗法
[0153]
本文所述的抗fcmr抗体可以与另外的治疗剂组合使用以治疗癌症或自身免疫性病症。
[0154]
可以用作治疗癌症的组合疗法的一部分的示例性治疗剂包含例如辐射、丝裂霉素(mitomycin)、维甲酸(tretinoin)、核莫司汀(ribomustin)、吉西他滨(gemcitabine)、长春新碱(vincristine)、依托泊苷(etoposide)、克拉屈滨(cladribine)、二溴甘露醇
(mitobronitol)、甲氨蝶呤(methotrexate)、多柔比星(doxorubicin)、卡波醌(carboquone)、喷司他丁(pentostatin)、硝基可润(nitracrine)、净司他丁(zinostatin)、西曲瑞克(cetrorelix)、来曲唑(letrozole,)、雷替曲塞(raltitrexed)、道诺霉素(daunorubicin)、法倔唑(fadrozole)、福莫司汀(fotemustine)、胸腺法新(thymalfasin)、索布佐生(sobuzoxane)、奈达铂(nedaplatin)、阿糖胞苷(cytarabine)、比卡鲁胺(bicalutamide)、诺维本(vinorelbine)、维司力农(vesnarinone)、氨鲁米特(aminoglutethimide)、安吖啶(amsacrine)、丙谷胺(proglumide)、依利醋铵(elliptinium acetate)、酮色林(ketanserin)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依曲替酯(etretinate)、异维甲酸(isotretinoin)、链脲佐菌素(streptozocin)、尼莫司汀(nimustine)、长春地辛(vindesine)、氟他米特(flutamide)、氟他胺(drogenil)、布缩宫素(butocin)、卡莫氟(carmofur)、雷佐生(razoxane)、西佐喃(sizofilan)、卡铂(carboplatin)、二溴卫矛醇(mitolactol)、替加氟(tegafur)、异环磷酰胺(ifosfamide)、泼尼莫司汀(prednimustine)、毕西巴尼(picibanil)、左旋咪唑(levamisole)、替尼泊苷(teniposide)、英丙舒凡(improsulfan)、依诺他滨(enocitabine)、麦角乙脲(lisuride)、羟甲烯龙(oxymetholone)、它莫西芬(tamoxifen)、黄体酮(progesterone)、美雄烷(mepitiostane)、环硫雄醇(epitiostanol)、福美斯坦(formestane)、干扰素α、干扰素-2α、干扰素β、干扰素γ、集落刺激因子1、集落刺激因子2、地尼白介素(denileukin diftitox)、白介素2、促黄体生成素释放因子(luteinizing hormone releasing factor)以及前述药剂的可以展示出与其同源受体的不同结合以及增加的或减少的血清半衰期的变体。
[0155]
可以用作治疗癌症的组合疗法的一部分的另外类别的药剂是免疫检查点抑制剂。示例性免疫检查点抑制剂包含抑制以下中的一种或多种的药剂：(i)细胞毒性t淋巴细胞相关抗原4(ctla4)，(ii)程序性细胞死亡蛋白1(pd1)，(iii)pdl1，(iv)lag3，(v)b7-h3，(vi)b7-h4以及(vii)tim-3，如易普利姆玛(ipilimumab)、纳武单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、阿维单抗(avelumab)、德瓦鲁单抗(durvalumab)和阿特珠单抗(atezolizumab)。
[0156]
可以用作治疗癌症的组合疗法的一部分的又其它药剂是靶向非检查点靶标(例如，赫赛汀(herceptin))和非细胞毒性药剂(例如，酪氨酸激酶抑制剂)的单克隆抗体药剂。
[0157]
抗癌药剂的又其它类别包含例如：(i)抑制剂，所述抑制剂选自以下：alk抑制剂、atr抑制剂、a2a拮抗剂、碱基切除修复抑制剂、bcr-ab1酪氨酸激酶抑制剂、布鲁顿氏酪氨酸激酶抑制剂(bruton's tyrosine kinase inhibitor)、cdc7抑制剂、chk1抑制剂、周期蛋白依赖性激酶抑制剂、dna-pk抑制剂、dna-pk和mtor两者的抑制剂、dnmt1抑制剂、dnmt1抑制剂加上2-氯-脱氧腺苷、hdac抑制剂、hedgehog信号传导通路抑制剂、ido抑制剂、jak抑制剂、mtor抑制剂、mek抑制剂、melk抑制剂、mth1抑制剂、parp抑制剂、磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂、parp1和dhodh的抑制剂、蛋白酶体抑制剂、拓扑异构酶-ii抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、vegfr抑制剂和wee1抑制剂；(ii)ox40、cd137、cd40、gitr、cd27、hvem、tnfrsf25或icos的激动剂；以及(iii)细胞因子，所述细胞因子选自il-12、il-15、gm-csf和g-csf。
[0158]
本发明的抗体还可以用作从原发性病变中以外科手术方式移除癌症的佐剂。
[0159]
可以用作与抗fcmr抗体的组合疗法的一部分的用于治疗自身免疫性或炎性病症、延迟自身免疫性或炎性病症的进展、预防自身免疫性或炎性病症的复发或减轻自身免疫性
或炎性病症的症状的示例性治疗剂包含例如多种已知抗炎和/或免疫抑制疗法中的任何疗法。在一些实施例中，所述抗炎和/或免疫抑制疗法包含但不限于甲氨蝶呤、环孢菌素a(包含例如环孢菌素微乳剂)、他克莫司(tacrolimus)、皮质类固醇(corticosteroids)、他汀类(statins)、干扰素β、非甾体抗炎剂和6-mp(巯基嘌呤(mercaptopurine)，也被称为6-巯基嘌呤或嘌呤醇(purinethol))。
[0160]
在一些实施例中，用于与抗fcmr抗体组合的抗炎和/或免疫抑制疗法包含但不限于topk抑制剂(例如，ots964((r)-9-(4-(1-(二甲基氨基)丙烷-2-基)苯基)-8-氢氧基-6-甲基噻吩并[2,3-c]喹啉-4(5h)-酮)(肿瘤疗法科学公司(oncotherapy science))，酪氨酸激酶抑制剂(例如，阿西替尼(axitinib)、达沙替尼(dasatinib)、埃克替尼(icotinib))、拓扑异构酶抑制剂(如拓扑替康(topotecan))、1-磷酸鞘氨醇受体激动剂(例如，芬戈莫德(fingolimod)、krp-203)、抗t细胞免疫球蛋白(例如，atgam)、抗il-2受体抗体(例如达珠单抗(daclizumab))、酰胺类(ctx)、异环磷酰胺(ifo)、阿霉素(adriamycin，adm)、柔红霉素(道诺霉素，dnr)、长春新碱(vcr)、长春碱(vinblastine，vbl)、依托泊苷(etoposide，vp16)、vermeer(vumon)、卡铂(cbp)、他克莫司(tacrolimus)、西罗莫司(sirolimus)、依维莫司(everolimus)、硫唑嘌呤(azathioprine)、布喹那(brequinar)、来氟米特(leflunomide)、lea-29y、抗cd3抗体(例如okt3)、阿司匹林(aspirin)、b7-cd28阻断分子(例如贝拉西普(belatacept)、阿巴西普(abatacept))、cd40-cd154阻断分子(抗cd40抗体)、对乙酰氨基酚(acetaminophen)、布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen)、吡罗昔康(piroxicam)和抗炎类固醇(例如泼尼松龙或地塞米松)。
[0161]
在一些实施例中，用于与抗fcmr抗体组合的抗炎和/或免疫抑制疗法包含消融自身免疫性细胞，例如通过施用tnf-α、cfa、白介素-1(il-1)、蛋白酶体抑制剂、nfκb抑制剂、抗炎药、组织纤溶酶原激活剂(tpa)、脂多糖、uv线和tnf-α信号传导通路的细胞内介体。此类药剂通过中断tnf-α受体信号传导下游的途径或在tnf-α受体结合的下游起作用来诱导自身反应性淋巴细胞的凋亡。(baldwin等人,《免疫学年度评论(ann.rev.immunol.)》(1996)12:141；baltimore,《细胞(cell)》(1996)87:13)。
[0162]
在一些实施例中，所述抗fcmr抗体与治疗或另外减轻自身免疫性疾病的外科手术方法结合使用。
[0163]
可以用作治疗自身免疫性疾病的组合疗法的一部分的示例性治疗剂包含例如。在一些实施例中，用于与抗fcmr抗体组合的抗炎和/或免疫抑制疗法包含但不限于topk抑制剂(例如，ots964((r)-9-(4-(1-(二甲基氨基)丙烷-2-基)苯基)-8-氢氧基-6-甲基噻吩并[2,3-c]喹啉-4(5h)-酮)(肿瘤疗法科学公司(oncotherapy science))，酪氨酸激酶抑制剂(例如，阿西替尼、达沙替尼、埃克替尼)、拓扑异构酶抑制剂(如拓扑替康)、1-磷酸鞘氨醇受体激动剂(例如，芬戈莫德、krp-203)、抗t细胞免疫球蛋白(例如，atgam)、抗il-2受体抗体(例如达珠单抗)、酰胺类(ctx)、异环磷酰胺(ifo)、阿霉素(adm)、柔红霉素(道诺霉素，dnr)、长春新碱(vcr)、长春碱(vbl)、依托泊苷(vp16)、vermeer(vumon)、卡铂(cbp)、他克莫司、西罗莫司、依维莫司、硫唑嘌呤、布喹那、来氟米特、lea-29y、抗cd3抗体(例如okt3)、阿司匹林、b7-cd28阻断分子(例如贝拉西普、阿巴西普)、cd40-cd154阻断分子(抗cd40抗体)、对乙酰氨基酚、布洛芬、萘普生、吡罗昔康和抗炎类固醇(例如泼尼松龙或地塞米松)。也可以使用前述药剂的可以展现出与其同源受体的不同结合以及增加的或减少的血清半衰期
的变体。
[0164]
在一些实施例中，用于与抗fcmr抗体组合的抗炎和/或免疫抑制疗法包含消融自身免疫性细胞，例如通过施用tnf-α、cfa、白介素-1(il-1)、蛋白酶体抑制剂、nfκb抑制剂、抗炎药、组织纤溶酶原激活剂(tpa)、脂多糖、uv线和tnf-α信号传导通路的细胞内介体。此类药剂通过中断tnf-α受体信号传导下游的途径或在tnf-α受体结合的下游起作用来诱导自身反应性淋巴细胞的凋亡。(baldwin等人,《免疫学年度评论》(1996)12:141；baltimore,《细胞》(1996)87:13)。
[0165]
在一些实施例中，所述抗fcmr抗体与治疗或另外减轻自身免疫性疾病的外科手术方法结合使用。
[0166]
例如，为了治疗多发性硬化症、延缓多发性硬化症的进展、预防多发性硬化症的复发或减轻多发性硬化症的症状，可以将起到fcmr拮抗剂作用的抗fcmr抗体与针对多发性硬化症的任何现有疗法组合使用，例如，皮质类固醇(口服泼尼松(prednisone)和静脉注射甲泼尼龙)、血浆置换、奥瑞组单抗(ocrelizumab)、β干扰素、醋酸格拉替雷(glatiramer acetate)、富马酸二甲酯、芬戈莫德、费立氟胺(feriflunomide)、那他珠单抗(natalizumab)、阿仑单抗(alemtuzumab)和/或米托蒽醌(mitoxantrone)。
[0167]
可以用作与抗fcmr抗体的组合疗法的一部分的用于治疗细菌感染、延迟细菌感染的进展、预防细菌感染的复发或减轻细菌感染的症状的示例性治疗剂包含例如多种已知抗生素治疗剂中的任何治疗剂。
[0168]
在一些实施例中，用于治疗细菌感染的抗生素治疗剂与抗fcmr抗体的组合包含但不限于：β-内酰胺类(lactam)，如盘尼西林(penicillin)(例如，盘尼西林g、盘尼西林v、甲氧西林(methicillin)、苯唑西林(oxacillin)、氯唑西林(cloxacillin)、双氯西林(dicloxacillin)、萘夫西林(nafcillin)、氨苄西林(ampicillin)、阿莫西林(amoxicillin)、羧苄西林(carbenicillin)、替卡西林(ticarcillin)、美洛西林(mezlocillin)、哌拉西林(piperacillin)、阿洛西林(azlocillin)和替莫西林(temocillin))、头孢菌素类(cephalosporins)(例如，头孢噻吩(cepalothin)、头孢匹林(cephapirin)、头孢拉定(cephradine)、头孢噻啶(cephaloridine)、头孢唑啉(cefazolin)、头孢孟多(cefamandole)、头孢呋辛(cefuroxime)、头孢氨苄(cephalexin)、头孢丙烯(cefprozil)、头孢克洛(cefaclor)、氯碳头孢(loracarbef)、头孢西丁(cefoxitin)、头孢美唑(cefmatozole)、头孢噻肟(cefotaxime)、头孢唑肟(ceftizoxime)、头孢曲松(ceftriaxone)、头孢哌酮(cefoperazone)、头孢他啶(ceftazidime)、世伏素(cefixime)、头孢泊肟(cefpodoxime)、头孢布烯(ceftibuten)、头孢地尼(cefdinir)、头孢匹罗(cefpirome)、头孢吡肟(cefepime))、碳青霉烯类(carbapenams)(例如亚胺培南(imipenem)、厄他培南(ertapenem)和美罗培南(meropenem))以及单内酰环类(monobactams)(例如氨曲南(astreonam))；β-内酰胺酶抑制剂(例如克拉维酸(clavulanate)、舒巴坦(sulbactam)和他唑巴坦(tazobactam))；氨基甙类(例如，链霉素(streptomycin)、新霉素(neomycin)、卡那霉素(kanamycin)、巴龙霉素(paromycin)、庆大霉素(gentamicin)、妥布霉素(tobramycin)、阿米卡星(amikacin)、奈替米星(netilmicin)、大观霉素(spectinomycin)、西索米星(sisomicin)、地贝卡星(dibekalin)和异帕米星(isepamicin))；四环素类(tetracyclines)(例如，四环素(tetracycline)、氯
四环素(chlortetracycline)、地美环素(demeclocycline)、米诺环素(minocycline)、氧四环素(oxytetracycline)、美他环素(methacycline)和多西环素(doxycycline))；大环内酯类(macrolides)(例如，红霉素(erythromycin)、阿奇霉素(azithromycin)和克拉霉素(clarithromycin))；酮内酯(ketolides)(例如，泰利霉素(telithromycin)；林可酰胺(lincosamides)(例如，林可霉素(lincomycin)和克林霉素(clindamycin))；糖肽(glycopeptides)(例如，万古霉素(vancomycin)、奥利万星(oritavancin)、达巴万星(dalbavancin)和替考拉宁(teicoplanin))；链阳菌素类(streptogramins)(例如，奎奴普汀(quinupristin)和达福普汀(dalfopristin))；磺胺类(sulphonamides)(例如，磺胺(sulphanilamide)、对氨基苯甲酸(para-aminobenzoic acid)、磺胺嘧啶(sulfadiazine)、磺胺异恶唑(sulfisoxazole)、磺胺甲恶唑(sulfamethoxazole)和酞磺胺噻唑(sulfathalidine))；唑烷酮类(oxazolidinones)(例如，利奈唑胺(linezolid))；喹诺酮类(quinolones)(例如，萘啶酸(nalidixic acid)、恶喹酸(oxolinic acid)、诺氟沙星(norfloxacin)、培氟沙星(perfloxacin)、依诺沙星(enoxacin)、氧氟沙星(ofloxacin)、环丙沙星(ciprofloxacin)、替马沙星(temafloxacin)、洛美沙星(lomefloxacin)、氟罗沙星(fleroxacin)、格雷沙星(grepafloxacin)、司帕沙星(sparfloxacin)、曲伐沙星(trovafloxacin)、克林沙星(clinafloxacin)、加替沙星(gatifloxacin)、莫西沙星(moxifloxacin)、吉米沙星(gemifloxacin)和西他沙星(sitafloxacin))；甲硝哒唑(metronidazole)；达托霉素(daptomycin)；加雷沙星(garenoxacin)；雷莫拉宁(ramoplanin)；法罗培南(faropenem)；多粘菌素(polymyxin)；替加环素(tigecycline)；和甲氧苄啶(trimethoprim)。
[0169]
可以用作与抗fcmr抗体的组合疗法的一部分的用于治疗病毒感染、延迟病毒感染的进展、预防病毒感染的复发或减轻病毒感染的症状的示例性治疗剂包含例如多种已知抗病毒治疗剂中的任何治疗剂。
[0170]
在一些实施例中，可以与本发明的方法一起使用的抗病毒治疗剂包含但不限于阿昔洛韦(aciclovir)、阿昔洛韦(acyclovir)、阿德福韦(adefovir)、金刚烷胺(amantadine)、安普那韦(amprenavir)、安普利近(ampligen)、阿比朵尔(arbidol)、阿扎那韦(atazanavir)、立普妥(atripla)、巴拉韦(balavir)、西多福韦(cidofovir)、可比韦(combivir)、地瑞那韦(darunavir)、二十二醇(docosanol)、依度尿苷(edoxudine)、恩替卡韦(entecavir)、埃科利韦(ecoliever)、泛昔洛韦(famciclovir)、福米韦森(fomivirsen)、膦甲酸(foscamet)、膦乙醇(fosfonet)、更昔洛韦(ganciclovir)、伊巴他滨(ibacitabine)、伊姆诺韦(imunovir)、碘苷(idoxuridine)、咪喹莫特(imiquimod)、肌苷(inosine)、干扰素iii型、干扰素ii型、干扰素i型、干扰素、洛匹那韦(lopinavir)、洛韦胺(loviride)、吗啉胍(moroxydine)、甲吲噻腙(methisazone)、奈克沙韦(nexavir)、硝唑尼特(nitazoxanide)、诺韦(novir)、聚乙二醇干扰素α-2a、喷昔洛韦(penciclovir)、帕拉米韦(peramivir)、普可那利(pleconaril)、鬼臼毒素(podophyllotoxin)、利巴韦林(ribavirin)、金刚乙胺(rimantadine)、嘧啶(pyramidine)、索非布韦(sofosbuvir)、特拉匹韦(telaprevir)、曲氟尿苷(trifluridine)、三协唯(trizivir)、曲金刚胺(tromantadine)、特鲁瓦达(truvada)、伐昔洛韦(valaciclovir)、缬更昔洛韦(valganciclovir)、苹果酸(vicriviroc)、阿糖腺苷(vidarabine)、韦拉米啶
(viramidine)、扎西他滨(zalcitabine)、扎那米韦(zanamivir)。
[0171]
可以对受试者施用本文所公开的任何药物或药物的组合以治疗疾病。本文的药物可以以多种方式调配，通常根据本领域中的或如本文公开或引用的各种已知调配物。
[0172]
抗体和另外的治疗剂的量和相对施用时机可以选择以达到期望的组合治疗效果。例如，当向需要此施用的患者施用组合疗法时，组合中的治疗剂或包括所述治疗剂的一种或多种药物组合物可以以任何顺序施用，例如依序地、并行、一起、同时等。进一步地，例如，可以在另外的治疗剂发挥其预防或治疗作用的时间期间施用多特异性结合蛋白，反之亦然。
[0173]
vi.药物组合物和施用
[0174]
本公开的特征还在于含有治疗有效量的本文所述的抗fcmr抗体的药物组合物/调配物。所述组合物可以被调配成用于多种药物递送系统。组合物中也可以包含一种或多种生理学上可接受的赋形剂或载体以供适当调配。用于本公开的合适调配物可见于《雷明顿药物科学(remington's pharmaceutical sciences)》,宾夕法尼亚州费城的马克出版公司(mack publishing company,philadelphia,pa.),第17版,1985中。对于药物递送方法的简要综述，参见langer(《科学》249:1527-1533，1990)。
[0175]
本公开的抗体可以存在于冻干调配物或液体水性药物调配物中。本文所关注的水性载体是药学上可接受的(对施用于人类安全且无毒性)并且可用于制备液体调配物的睡醒载体。说明性载体包含无菌注射用水(swfi)、抑菌注射用水(bwfi)、ph缓冲溶液(例如，磷酸盐缓冲盐水)、无菌盐水溶液、林格氏溶液(ringer's solution)或右旋糖溶液。
[0176]
本公开的抗体可以存在于包含蛋白质和冻干保护剂的冻干调配物中。冻干保护剂可以是糖，例如二糖。在某些实施例中，冻干保护剂是蔗糖或麦芽糖。冻干调配物还可以包含缓冲剂、表面活性剂、增体剂和/或防腐剂中的一种或多种。
[0177]
本发明的药物组合物中的活性成分的实际剂量水平可以变化，以便在对患者无毒性的情况下获得对于实现对特定患者、组合物和施用模式的期望的治疗反应有效的活性成分的量。所述药物组合物可以在对成人每次施用活性抗体的0.1mg到1g的范围内并且优选地在0.5mg到500mg的范围内施用。可替代地，患者的剂量可以根据患者的大致体重或表面积定制。确定适当剂量的其它因素可以包含待治疗或预防的疾病或病状、疾病的严重度、施用途径以及患者的年龄、性别和医学病状。确定适当治疗剂量所需的计算的进一步细化常规地由本领域的技术人员尤其是根据本文公开的剂量信息和测定进行。剂量也可以通过使用用于确定结合适当的剂量反应数据使用的剂量的已知测定来确定。个体患者的剂量可以在监测到疾病进展时进行调整。可以测量患者体内的可靶向构建体或复合物的血液水平，以确定是否需要调整剂量以达到或维持有效浓度。可以使用药物基因组学来确定哪些可靶向构建体和/或复合物及其剂量最可能对给定个体有效(schmitz等人,《临床化学学报(clinica chimica acta)》308:43-53,2001；steimer等人,《临床化学学报》308:33-41,2001)。
[0178]
剂量可以每天、每周、每月或每年给予一次或多次，或甚至每2年到20年一次。本领域的普通技术人员可以基于测量到的驻留时间和可靶向构建体或复合物在体液或组织中的浓度来容易地估计给药的重复速率。本发明的施用可以是静脉内、动脉内、腹膜内、肌肉内、皮下、胸膜内、鞘内、腔内、通过导管灌注或通过直接病灶内注射。此施用可以每天施用
panel确定血清样品中的细胞因子水平。示出fcmr 2a5抗体在t细胞受体刺激不存在的情况下没有显著刺激影响(图5)。数据表示几个独立实验并且报告为2a5相对于二联孔的同种型对照抗体的均值倍数变化。
[0191]
实例6-通过表面等离子体共振确定的fcmr抗体2a5和2h2对fcmr-fc蛋白的亲和力
[0192]
在10mm hepes缓冲液(ph 7.4)、150mm nacl、3mm edta、0.05％聚山梨醇酯20中在25℃下通过表面等离子体共振(biacore)确定fcmr抗体2a5和2h2对fcmr-fc蛋白的亲和力(图6)。将抗体固定到40ru的目标水平。使用经固定的人igg作为用于参考扣除的空白表面。使用500、250、125、62.5、31.25和0nm fcmr-fc蛋白执行滴定。由观察到的ka和kd计算平衡解离常数(kd)。
[0193]
通过引用并入
[0194]
本文引用的专利文件和科学论文中的每一个的全部公开内容均出于所有目的通过引用并入。
[0195]
等效形式
[0196]
可以在不背离本发明的精神或实质特性的情况下以其它具体形式来实施本发明。因此，前述实施例应当在所有方面被视为是说明性的而不限制本文所述的发明。因此，本发明的范围由所附权利要求而非前述说明指示，并且落入权利要求的等效含义和范围内的所有变化意图被包含在其中。