用于产生包含治疗剂或显像剂的细胞外囊泡的流体系统及相关方法与流程

技术特征：
1.一种用于将至少一种治疗剂和/或显像剂加载到生产细胞(6)的细胞外囊泡(ev)的膜或腔中的流体系统(1)，其包括至少一个容器(4)、包含在容器(4)中的液体培养基(5)、生产细胞(6)、适合用于生产细胞(6)生长的液体培养基(5)的搅拌器(7)，其特征在于它还包括用于控制搅拌器(7)的速度的装置，并且搅拌器(7)和容器(4)的尺寸适于在容器(4)中产生液体培养基(5)的湍流，以将剪切应力施加到生产细胞(6)上，以便在通过流体系统(1)生产细胞外囊泡(ev)的同时将治疗剂或显像剂加载到所产生的细胞外囊泡的膜或腔中，湍流的柯尔莫哥洛夫长度小于100μm。2.根据权利要求1所述的流体系统(1)，其中湍流的柯尔莫哥洛夫长度小于或等于80μm，优选小于或等于70μm，甚至更优选小于或等于60μm。3.根据权利要求1或2所述的流体系统(1)，其包括出口(9)和连接到出口(9)的连接器(13)，连接器(13)能够包括液体培养基(5)和细胞外囊泡(ev)。4.根据权利要求1至3中任一项所述的流体系统(1)，其中液体培养基的搅拌器(7)是旋转式搅拌器，其旋转速度(s)、形状和尺寸与容器(4)的形状和尺寸相适应，以在容器中产生液体培养基(5)的湍流。5.根据权利要求1至4中任一项所述的流体系统(1)，其包括细胞外囊泡(ev)的分离器(15)，其与容器(4)流体连通以便能够将贫细胞外囊泡(ev)的液体培养基(5)重新引入容器(4)中。6.一种用于将至少一种治疗剂和/或显像剂加载到生产细胞(6)的细胞外囊泡(ev)的膜或腔中的方法，其包括：
‑
控制搅拌器(7)的速度，使容器(4)中产生液体培养基(5)的湍流，从而对生产细胞(6)施加剪切应力，以便将治疗剂和/或显像剂加载到细胞外囊泡(ev)的膜或腔中，湍流的柯尔莫哥洛夫长度小于100μm，容器包括出口(9)、包含治疗剂和/或显像剂的液体培养基(5)、生产细胞(6)，和
‑
在容器(4)的出口(9)处收集包含细胞外囊泡(ev)的液体培养基(5)。7.一种将至少一种治疗剂和/或显像剂加载到细胞外囊泡(ev)的膜或腔中的方法，其包括：
‑
在液体培养基(5)中提供细胞外囊泡(ev)，
‑
控制搅拌器(7)的速度，使容器(4)中产生液体培养基(5)的湍流，从而对囊泡施加剪切应力，以便将治疗剂和/或显像剂加载到细胞外囊泡(ev)的膜或腔中，湍流的柯尔莫哥洛夫长度小于100μm，液体培养基(5)包含治疗剂和/或显像剂。8.一种将至少一种治疗剂和/或显像剂加载到生产细胞(6)的膜或细胞质中的方法，其包括：
‑
控制搅拌器(7)的速度，使容器(4)中产生液体培养基(5)的湍流，从而对生产细胞(6)施加剪切应力，以便将治疗剂和/或显像剂加载到生产细胞(6)的膜或细胞质中，在容器(4)中，湍流的柯尔莫哥洛夫长度小于100μm，该容器包括出口(9)、包含治疗剂和/或显像剂的液体培养基(5)、生产细胞(6)，和
‑
在容器(4)的出口(9)处收集包含细胞外囊泡(ev)的液体培养基(5)，和
‑
任选地，收集加载的生产细胞。9.根据权利要求6至8中任一项所述的方法，其中，湍流的柯尔莫哥洛夫长度小于或等
于80μm，优选小于或等于70μm，甚至更优选小于或等于60μm。10.根据权利要求6至9中任一项所述的方法，其中将液体培养基(5)搅拌超过二十分钟。11.根据权利要求6至10中任一项所述的方法，其中控制搅拌器以使液体培养基的流动恒定或间歇，强度增加或减少。12.根据权利要求6或8中任一项所述的方法，其中分离器使在容器(4)的出口处收集的一部分液体培养基(5)贫细胞外囊泡(ev)，并且其中所述一部分液体培养基(5)被重新引入容器(4)中。13.一种加载有至少一种治疗剂和/或显像剂的细胞外囊泡，其通过实施根据权利要求1至5中任一项所述的流体系统(1)和/或通过根据权利要求6、7和9至12中任一项所述的将至少一种治疗剂和/或显像剂加载到生产细胞(6)的细胞外囊泡(ev)的膜或腔中的方法而获得。14.一种加载有至少一种治疗剂和/或显像剂的生产细胞(6)，其通过实施根据权利要求1至5中任一项所述的流体系统(1)和/或通过根据权利要求8所述的将至少一种治疗剂和/或显像剂加载到生产细胞(6)的膜或细胞质中的方法而获得。15.根据权利要求13所述的加载有至少一种治疗剂和/或显像剂的细胞外囊泡，用作施用所述至少一种显像剂和/或至少一种治疗剂的载体。16.根据权利要求15所述之用途的加载有至少一种治疗剂的细胞外囊泡，用于治疗感染性疾病、炎性疾病、免疫性疾病、代谢性疾病、癌症疾病、遗传疾病、退行性疾病或外科手术或创伤中的继发性疾病。17.根据权利要求6至12中任一项所述的方法，其特征在于，所述治疗剂选自替莫泊芬、两性霉素b、柔红霉素、伊立替康、长春新碱和阿糖胞苷。18.根据权利要求13所述的细胞外囊泡、根据权利要求14所述的生产细胞或根据权利要求15或权利要求16所述之用途的加载有至少一种治疗剂的细胞外囊泡，其特征在于所述治疗剂选自替莫泊芬、两性霉素b、柔红霉素、伊立替康、长春新碱和阿糖胞苷。19.根据权利要求15所述的加载有至少一种显像剂的细胞外囊泡作为用于施用所述至少一种医学显像剂的载体的用途，所述医学显像剂例如是荧光成像剂、发光剂或通过放射性同位素检测的成像剂，或具有磁性、等离子体、声学或不透射线性质的造影剂。

技术总结
本发明涉及一种流体系统，其用于将治疗剂或显像剂加载到生产细胞的细胞外囊泡(EV)的腔中，所述流体系统包括至少一个容器、包含在容器中的液体培养基、生产细胞、液体培养基搅拌器和用于控制适合生产细胞生长的搅拌器速度的装置，其特征在于它还包括用于控制搅拌器的速度的装置，其中容器和搅拌器的形状和尺寸适合于产生容器中的液体培养基的湍流，用于对生产细胞施加剪切应力，以便将治疗剂或显像剂加载到由流体系统同时产生的细胞外囊泡(EV)的腔中。的腔中。的腔中。


技术研发人员：艾莉丝
受保护的技术使用者：法国洛林大学 巴黎大学
技术研发日：2019.12.27
技术公布日：2021/11/26