耐热性细菌组合物的制作方法

1.本发明涉及含有耐热性得到改善的细菌的组合物及其制造法。


背景技术：

2.作为改善细菌的耐热性的技术，例如已知利用乳蛋白(专利文献1)、凝固剂(专利文献2)、在常温下为非流动性的疏水性物质(专利文献3)、稳定化剂和保护剂(专利文献4)、蛋白质系食用凝胶化剂(专利文献5)、蛋白质(非专利文献1)、低熔点油脂(lmf)(非专利文献2)等成分将细菌包覆或进行胶囊化的技术。
3.另外，已知利用甘油脂肪酸酯将细菌包覆或进行造粒的技术(专利文献6～7)。然而，专利文献6～7中，未记载细菌的耐热性。
4.另外，尚不知晓通过将细菌与油脂和乳化剂混合从而改善细菌的耐热性。
5.现有技术文献
6.专利文献
7.专利文献1：日本专利第3698455号
8.专利文献2：日本特开2004
‑
344146
9.专利文献3：日本专利第3102990号
10.专利文献4：日本专利第5841527号
11.专利文献5：日本特开平10
‑
191950
12.专利文献6：日本特开平2
‑
200639
13.专利文献7：日本专利第2596418号
14.非专利文献
15.非专利文献1：journal of food science,2017,9,2134
‑
2141
16.非专利文献2：food hydrocolloids,2015,51,459
‑
467


技术实现要素：

17.发明要解决的问题
18.本发明的目的在于提供改善细菌的耐热性的技术。
19.用于解决问题的方案
20.本发明人等发现通过将双歧杆菌(bifidobacterium)属细菌等细菌与油脂和乳化剂混合从而改善细菌的耐热性，至此完成了本发明。
21.即，本发明可以如下示例。
22.本发明的一方式为含有细菌的组合物的制造方法，其包括下述工序a和工序b：
23.(a)将细菌与油脂混合的工序，
24.(b)将细菌与乳化剂混合的工序
25.在前述油脂的熔点以上的温度下实施前述工序a。
26.前述方法的优选方式是：在前述工序b开始前或开始后开始进行前述工序a。
27.前述方法的优选方式是：使前述工序a和b同时开始。
28.前述方法的优选方式是：前述油脂是熔点为50℃以下的油脂。
29.前述方法的优选方式是：前述油脂是熔点为35℃以上的油脂。
30.前述方法的优选方式是：前述油脂为棕榈仁极度硬化油。
31.前述方法的优选方式是：在50℃以下的温度下实施前述工序a。
32.前述方法的优选方式是：在40℃以下的温度下实施前述工序a。
33.前述方法的优选方式是：前述乳化剂为卵磷脂或聚甘油脂肪酸酯。
34.前述方法的优选方式是：在50℃以下的温度下实施前述工序b。
35.前述方法的优选方式是：在40℃以上的温度下实施前述工序b。
36.前述方法的优选方式是：前述油脂的混合量为每50g前述细菌的干燥菌体重量1.5～4.5g。
37.前述方法的优选方式是：前述乳化剂为聚甘油脂肪酸酯，前述乳化剂的混合量为每50g前述细菌的干燥菌体重量8～17g。
38.前述方法的优选方式是：前述乳化剂为卵磷脂，前述乳化剂的混合量为每50g前述细菌的干燥菌体重量1～20g。
39.前述方法的优选方式是：前述细菌为双歧杆菌属细菌。
40.前述方法的优选方式是：前述细菌为长双歧杆菌(bifidobacterium longum)或短双歧杆菌(bifidobacterium breve)。
41.前述方法的优选方式是：前述细菌为长双歧杆菌bb536(nite bp
‑
02621)或短双歧杆菌m
‑
16v(nite bp
‑
02622)。
42.本发明的一方式为改善细菌的耐热性的方法，其包括下述工序a和工序b：
43.(a)将细菌与油脂混合的工序，
44.(b)将细菌与乳化剂混合的工序
45.在前述油脂的熔点以上的温度下实施前述工序a。
46.本发明的一方式的优选方式是含有细菌、油脂和乳化剂的组合物。
47.前述组合物的优选方式是用前述油脂和前述乳化剂包覆前述细菌。
48.本发明的一方式为含有利用前述方法制造的组合物或前述组合物的奶粉。
49.前述奶粉的优选方式是育儿用配方奶粉。
具体实施方式
50.以下对本发明进行详细地说明。需要说明的是，与本发明相关的下述的说明只要没有特别声明，则可以单独地采用任一者，也可以适宜组合采用。
51.＜1＞本发明的方法
52.本发明的方法是包括下述工序a和工序b的方法：
53.(a)将细菌与油脂混合的工序，
54.(b)将细菌与乳化剂混合的工序。
55.根据本发明的方法，能够改善细菌的耐热性。换言之，根据本发明的方法，可以得到改善细菌的耐热性的效果。也将相同效果称为“耐热性改善效果”。即，本发明的方法例如可以为改善细菌的耐热性的方法。
56.另外，根据本发明的方法，可以得到含有细菌的组合物。也将含有细菌的组合物称为“细菌组合物”。即，本发明的方法例如可以为细菌组合物的制造方法。细菌组合物中包含的细菌可以为耐热性得到改善的细菌。即，细菌组合物可以为含有耐热性得到改善的细菌的组合物。也将含有耐热性得到改善的细菌的组合物称为“耐热性细菌组合物”。另外，细菌组合物的一方式可以为后述的本发明的组合物。
[0057]“耐热性的改善”是指：实施工序a和b之后的细菌的耐热性高于实施工序a和b之前的细菌的耐热性。作为耐热性的改善，可列举出对细菌进行加热时的存活率(survival rate)的改善。作为加热的温度，可列举出70℃。作为加热时间，可列举出1分钟。即，作为加热，可具体列举出在70℃下1分钟的加热。在70℃下将细菌加热1分钟时的存活率例如可以以将细菌分散于70℃的热水中1分钟后的存活率的形式进行测定。在70℃下将细菌加热1分钟时的存活率具体而言例如可以在实施例中记载的条件下进行测定。对细菌进行加热时的存活率以加热后的活菌数相对于加热前(具体而言，加热开始时)的活菌数的比率而算出。活菌数例如可以以菌落形成单位(colony forming unit；cfu)的形式进行测定。需要说明的是，“细菌的加热”在细菌组合物中包含细菌时，可以指对细菌组合物进行加热。
[0058]
将实施工序a和b后的细菌在70℃下加热1分钟时的存活率(具体而言，将利用本发明的方法得到的细菌组合物在70℃下加热1分钟时的细菌的存活率)例如可以为将实施工序a和b前的细菌在70℃下加热1分钟时的存活率的10倍以上、100倍以上、1000倍以上、10000倍以上或100000倍以上。
[0059]
将实施工序a和b后的细菌在70℃下加热1分钟时的存活率(具体而言，将利用本发明的方法得到的细菌组合物在70℃下加热1分钟时的细菌的存活率)例如可以为1％以上、3％以上、5％以上或10％以上。
[0060]
也将细菌、油脂和乳化剂统称为“有效成分”。本发明的方法中，可以仅使用有效成分，也可以不仅使用有效成分。即，本发明的方法中，除了有效成分之外，也可以使用其它成分。也将本发明的方法中使用的成分(即，有效成分和任意的其它成分)统称为“原料”。
[0061]
具体而言，工序a中，除了细菌和油脂之外，也可以使用其它成分。“原料”在工序a中也可以统称为细菌和油脂、以及任意的其它成分。另外，具体而言，工序b中，除了细菌和乳化剂之外，也可以使用其它成分。“原料”在工序b中也可以统称为细菌和乳化剂、以及任意的其它成分。
[0062]
＜细菌＞
[0063]
细菌没有特别限制。作为细菌，可以使用1种细菌，也可以使用2种或2种以上的细菌。作为细菌，可列举出可以用作益生菌的细菌。作为细菌，可具体列举出乳酸菌。作为乳酸菌，可列举出双歧杆菌(bifidobacterium)属细菌、乳杆菌(lactobacillus)属细菌、乳球菌(lactococcus)属细菌、链球菌(streptococcus)属细菌。
[0064]
作为双歧杆菌属细菌，可列举出长双歧杆菌(bifidobacterium longum)、短双歧杆菌(bifidobacterium breve)、两歧双歧杆菌(bifidobacterium bifidum)、青春双岐杆菌(bifidobacterium adolescentis)、角双歧杆菌(bifidobacterium angulatum)、齿双歧杆菌(bifidobacterium dentium)、假小链双歧杆菌(bifidobacterium pseudocatenulatum)、动物双歧杆菌(bifidobacterium animalis)、假长双歧杆菌(bifidobacterium pseudolongum)、嗜热双歧杆菌(bifidobacterium thermophilum)。作
为双歧杆菌属细菌，尤其可列举出长双歧杆菌、短双歧杆菌。作为双歧杆菌属细菌，进而尤其可列举出长双歧杆菌。
[0065]
长双歧杆菌中，还包括：长双歧杆菌长亚种(b.longum subsp.longum)、长双歧杆菌婴儿亚种(b.longum subsp.infantis)、长双歧杆菌猪亚种(b.longum subsp.suis)等分类为长双歧杆菌的任意亚种的菌株。动物双歧杆菌中，还包括：动物双歧杆菌乳亚种(b.animalis subsp.lactis)等分类为动物双歧杆菌的任意亚种的菌株。假长双歧杆菌中，还包括：假长双歧杆菌球形亚种(b.pseudolongum subsp.globosum)、假长双歧杆菌假长亚种(b.pseudolongum subsp.pseudolongum)等分类为假长双歧杆菌的任意亚种的菌株。
[0066]
作为长双歧杆菌，可具体列举出bb536(nite bp
‑
02621)、atcc 15697、atcc 15707、atcc 25962、atcc 15702、atcc 27533、m
‑
63(nite bp
‑
02623)、bg7、dsm 24736、sbt 2928、ncc 490(cncm i
‑
2170)、ncc 2705(cncm i
‑
2618)。作为长双歧杆菌，尤其可列举出bb536。作为长双歧杆菌，可以使用1种菌株，也可以使用2种或2种以上的菌株。
[0067]
作为短双歧杆菌，可具体列举出m
‑
16v(nite bp
‑
02622)、mcc1274(ferm bp
‑
11175)、atcc 15700、b632(dsm 24706)、bb99(dsm13692)、atcc 15698、dsm 24732、ucc2003、yit4010、yit4064、bbg
‑
001、br
‑
03、c50、r0070。作为短双歧杆菌，尤其可列举出m
‑
16v。作为短双歧杆菌，可以使用1种菌株，也可以使用2种或2种以上的菌株。
[0068]
长双歧杆菌bb536于2018年1月26日在独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心(现在的国家技术评估学会，专利微生物保藏中心(npmd)、邮政编码：292
‑
0818、地址：日本国千叶县木更津市上总镰足2
‑5‑
8122号室)以nite bp
‑
02621的保藏编号进行了基于布达佩斯条约的国际保藏。
[0069]
短双歧杆菌m
‑
16v于2018年1月26日在独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心(现在的国家技术评估学会，专利微生物保藏中心(npmd)、邮政编码：292
‑
0818、地址：日本国千叶县木更津市上总镰足2
‑5‑
8122号室)以nite bp
‑
02622的保藏编号进行了基于布达佩斯条约的国际保藏。
[0070]
作为两歧双歧杆菌，可具体列举出atcc 29521、olb6378、bf
‑
1。作为青春双岐杆菌，可具体列举出atcc 15703。作为齿双歧杆菌，可具体列举出dsm 20436。作为动物双歧杆菌，可具体列举出dsm 10140、bb
‑
12、dn
‑
173 010、gcl2505、cncm i
‑
3446。作为假长双歧杆菌，可具体列举出jcm 5820、atcc 25526。作为嗜热双歧杆菌，可具体列举出atcc 25525。
[0071]
作为乳杆菌属细菌，可列举出副干酪乳杆菌(lactobacillus paracasei)、干酪乳杆菌(lactobacillus casei)、植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)、格氏乳杆菌(lactobacillus gasseri)、嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)、德氏乳杆菌(lactobacillus delbrueckii)。德氏乳杆菌中，还包括：德氏乳杆菌保加利亚亚种(lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)、德氏乳杆菌德氏亚种(lactobacillus delbrueckii subsp.delbrueckii)、德氏乳杆菌乳酸亚种(lactobacillus delbrueckii subsp.lactis)等分类为德氏乳杆菌的任意亚种的菌株。
[0072]
作为乳球菌属细菌，可列举出乳酸乳球菌(lactococcus lactis)。乳酸乳球菌中，还包括乳酸乳球菌乳酸亚种(lactococcus lactis subsp.lactis)、乳酸乳球菌乳脂亚种(lactococcus lactis subsp.cremoris)、乳酸乳球菌霍氏亚种(lactococcus lactis subsp.hordniae)等分类为乳酸乳球菌的任意亚种的菌株。
[0073]
作为链球菌属细菌，可列举出嗜热链球菌(streptococcus thermophilus)。
[0074]
这些菌株例如可以从美国典型培养物保藏中心(atcc,address:10801university boulevard manassas,va 20110,united states of america)、比利时微生物协调保藏中心(bccm,address:rue de la science 8,1000brussels,belgium)、德国微生物和细胞培养物保藏中心(dsmz,address:inhoffenstr.7b,d38124 braunschweig,germany)、菌种保藏管理中心jcm(jcm,邮政编码：305
‑
0074、地址：日本茨城县筑波市高野台3
‑1‑
1理化学研究所生物资源中心微生物材料开发室)或保藏有各菌株的保藏机构获得。
[0075]
需要说明的是，以上述示例的菌株名限定的菌株中，不限定于以该菌株名在规定的机构被保藏、注册的菌株本身(以下为了便于说明，也称为“保藏菌株”)，还包括与其实质上同等的菌株(也称为“衍生株”或“诱变菌株”)。即，例如，“长双歧杆菌bb536”中，不限定于以bb536的保藏编号在上述保藏机构被保藏的菌株本身，还包括与其实质上同等的菌株。对于各菌株，“与上述保藏菌株实质上同等的菌株”是指：属于与上述保藏菌株相同的种，而且其16srrna基因的碱基序列与上述保藏菌株的16srrna基因的碱基序列具有优选为99.86％以上、更优选为99.93％以上、进一步优选为100％的同一性，并且优选为具有与上述保藏菌株相同的菌学性质的菌株。对于各菌株，与上述保藏菌株实质上同等的菌株例如可以是以该保藏菌株为亲本菌株的衍生株。作为衍生株，可列举出由保藏菌株育种而得到的菌株、由保藏菌株自然生长出的菌株。作为育种方法，可列举出基于基因工程方法的变性、基于突变处理的变性。作为突变处理，可列举出x射线的照射、紫外线的照射、以及基于n
‑
甲基
‑
n
’‑
硝基
‑
n
‑
亚硝基胍(mnng)、甲基磺酸乙酯(ems)、和甲基磺酸甲酯(mms)等诱变剂的处理。作为由保藏菌株自然生长出的菌株，可列举出使用保藏菌株时自然生长出的菌株。作为这样的菌株，可列举出通过保藏菌株的培养(例如传代培养)而自然生长出的突变株。衍生株可以通过1种改变而构建，也可以通过2种或2种以上的改变而构建。
[0076]
作为细菌，可以使用市售品，也可以使用适宜制造而获得者。例如，作为双歧杆菌属细菌的市售品，可列举出森永乳业株式会社制的长双歧杆菌长亚种bb536、短双歧杆菌m
‑
16v。另外，细菌的菌体可以通过培养细菌而容易地获得。培养方法只要能使细菌增殖就没有特别限制。作为培养方法，例如可以直接利用在双歧杆菌属细菌等细菌的培养中通常使用的方法或对该方法适宜修正而使用。培养温度例如可以为25～50℃，优选为35～42℃。培养可以优选在厌氧条件下实施，例如，可以边通入二氧化碳气体等厌氧气体边实施。另外，培养也可以在液体静置培养等微好氧条件下实施。培养例如实施至细菌增殖到期望的程度。
[0077]
用于培养的培养基只要能使细菌增殖就没有特别限制。作为培养基，例如可以直接使用在双歧杆菌属细菌等细菌的培养中通常使用的培养基或对该方法适宜修正而使用。培养基例如可以含有碳源、氮源、无机盐、有机成分，乳成分或它们的组合。作为碳源，可以根据同化性使用例如半乳糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、纤维素二糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、淀粉、淀粉水解物、黑糖蜜等糖类。作为氮源，可以使用例如氨、硫酸铵、氯化铵、硝酸铵等铵盐类、硝酸盐类。另外，作为无机盐，可以使用例如氯化钠、氯化钾、磷酸钾、硫酸镁、氯化钙、硝酸钙、氯化锰、硫酸亚铁等。另外，作为有机成分，可以使用例如蛋白胨、大豆粉、脱脂豆粕、肉提取物、酵母提取物等。作为乳成分，例如可以使用乳蛋白等。作为乳蛋白，可列举出酪蛋白、乳清、它们的分解物。另外，作为双歧杆菌属细菌等细菌的培养中通常使用的
培养基，可具体列举出梭菌强化培养基(reinforced clostridial medium)、mrs培养基(de man,rogosa,and sharpe medium)、mmrs培养基(modified mrs medium)、tosp培养基(tos propionate medium)、tosp mup培养基(tos propionate mupirocin medium)。
[0078]
作为细菌，可以没有特别限制地使用细菌的菌体或含有其的级分。即，作为细菌，例如，可以直接使用通过培养而得到的培养物，也可以将培养物稀释或浓缩而使用，也可以使用从培养物中回收的菌体。另外，只要不损害耐热性改善效果，就可以在培养后进行加热、喷雾干燥、冷冻干燥等各种追加操作。追加操作优选菌体的存活率高者。即，作为细菌的菌体或含有其的级分，可具体列举出细菌的培养物、从相同培养物中回收的菌体、它们的稀释物、浓缩物、干燥物等处理物。
[0079]
需要说明的是，菌体可以以含有活菌体的形态使用。菌体例如可以由活菌体构成，也可以是活菌体和死菌体的混合物。
[0080]
从菌体的存活率的观点出发，作为细菌，优选使用冷冻干燥菌粉。即，作为细菌(具体而言细菌的菌体或含有其的级分)，尤其可列举出冷冻干燥菌粉。另外，优选在冷冻干燥前与保护剂等一起将细菌分散于分散介质中。具体而言，从培养液中收集菌体并进行清洗，得到湿菌体后，将该湿菌体分散于水中而可以制备菌体分散液。接着，在该菌体分散液中优选添加保护剂等并进行均匀地混合后，利用常规方法进行冷冻干燥而可以得到冷冻干燥菌粉。作为保护剂，可以使用天冬氨酸、精氨酸、谷氨酸、脯氨酸、赖氨酸、亮氨酸和蛋氨酸等氨基酸、甘油、蔗糖、和抗坏血酸等公知的保护剂。冷冻干燥菌粉可以直接使用或与其它食品原材料混合而使用。冷冻干燥菌粉优选直接使用。
[0081]
＜油脂＞
[0082]
只要通过与乳化剂的组合使用而可以得到耐热性改善效果，油脂就没有特别限制。作为油脂，可以使用1种油脂，也可以组合使用2种或2种以上的油脂。作为油脂，可以使用市售品，也可以使用适宜制造而获得者。
[0083]
作为油脂，可列举出动物来源的油脂(动物油脂)、植物来源的油脂(植物油脂)、它们的硬化油。作为动物油脂，可列举出鸡油、猪油、牛油、羊油、鲸油、鱼油、蛋油、黄油。作为鱼油，可列举出金枪鱼油、鲣鱼油、沙丁鱼油、鲭鱼油、三文鱼油、鳕鱼油。作为植物油脂，可列举出菜籽油、米油、红花油、葵花油、橄榄油、花生油、棕榈油、棕榈仁油、椰子油、大豆油、玉米油、棉籽油、芝麻油、葡萄籽油、紫苏油。作为硬化油，可列举出部分硬化油、极度硬化油。作为硬化油，可具体列举出上述示例的植物油脂的部分硬化油、上述示例的植物油脂的极度硬化油。作为硬化油，尤其可列举出棕榈仁油的硬化油。作为硬化油，进而尤其可列举出棕榈仁油的极度硬化油(棕榈仁极度硬化油)。作为市售的棕榈仁极度硬化油，可列举出k
‑
40(太阳油脂株式会社制)。
[0084]
作为油脂，可列举出熔点为特定范围的油脂。作为油脂，例如，可以选择上述示例的油脂中熔点为特定范围的油脂。需要说明的是，棕榈仁极度硬化油的熔点可以为40℃左右。油脂的熔点例如可以为20℃以上、25℃以上、30℃以上、35℃以上、40℃以上、45℃以上或50℃以上，可以为55℃以下、50℃以下、45℃以下、40℃以下、35℃以下、30℃以下或25℃以下，可以为这些不矛盾的组合的范围。油脂的熔点具体而言例如可以为20～55℃、25～50℃、30～50℃、35～50℃或40～50℃。油脂的熔点具体而言例如可以为20～25℃、25～30℃、30～35℃、35～40℃、40～45℃、45～50℃或50～55℃。油脂的熔点尤其可以为35℃以上，可
以为50℃以下，可以为35～50℃。
[0085]
＜乳化剂＞
[0086]
只要通过与油脂的组合使用而可以得到耐热性改善效果，乳化剂就没有特别限制。作为乳化剂，可以使用1种乳化剂，也可以组合使用2种或2种以上的乳化剂。作为乳化剂，可以使用市售品，也可以使用适宜制造而获得者。
[0087]
作为乳化剂，可列举出甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、卵磷脂、皂苷。作为甘油脂肪酸酯，可列举出单甘油脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯。作为甘油脂肪酸酯，尤其可列举出聚甘油脂肪酸酯。作为乳化剂，尤其可列举出聚甘油脂肪酸酯、卵磷脂。作为乳化剂，进而尤其可列举出卵磷脂。
[0088]“聚甘油脂肪酸酯”是指具有脂肪酸酯与聚甘油的羟基键合的结构的化合物的总称。聚甘油脂肪酸酯的分子结构(例如，聚甘油的聚合度、聚甘油的聚合形态(直链状或环状或支链状)、构成脂肪酸的种类、酯化率、酯化位置、等)只要通过与油脂的组合使用而可以得到耐热性改善效果，就没有特别限制。作为构成脂肪酸，可列举出碳数8～24的脂肪酸。构成脂肪酸可以为饱和脂肪酸，可以为不饱和脂肪酸。作为碳数8～24的脂肪酸，可具体列举出辛酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸、山萮酸、芥酸。作为构成脂肪酸，可以使用1种脂肪酸，也可以组合使用2种或2种以上的脂肪酸。例如，也可以在1分子的聚甘油中酯键合有2种或2种以上的脂肪酸。
[0089]
聚甘油的聚合度(平均聚合度)例如可以为2以上、3以上、4以上、5以上、6以上、7以上或8以上，可以为20以下、15以下、12以下、10以下、8以下或5以下，可以为这些不矛盾的组合的范围。聚甘油的聚合度(平均聚合度)具体而言例如优选为2～20、3～15、3～12或3～5。聚甘油的聚合度(平均聚合度)基于聚甘油的羟值而算出。聚甘油的羟值依据日本工业标准jis k 0070:1992而测定。
[0090]
聚甘油的hlb(亲水亲油平衡，hydrophile
‑
lipophile balance)值例如可以为1以上、2以上、3以上或4以上，可以为20以下、15以下、10以下、8以下或5以下，可以为这些不矛盾的组合的范围。聚甘油的hlb值具体而言例如优选为1～15、1～10、2～8或2～5。hlb值利用atlas法而算出。
[0091]
对于聚甘油脂肪酸酯的分子结构(例如，构成脂肪酸的种类、等)的记载也可以适用于其它脂肪酸酯。
[0092]
作为市售的聚甘油脂肪酸酯，可列举出poeme rj
‑
38(riken vitamin co.,ltd.制)。poeme rj
‑
38是具有c18(65％)和c16(34％)的构成脂肪酸的聚甘油脂肪酸酯。
[0093]“卵磷脂”是含有磷脂的原材料的总称。卵磷脂也可以含有磷脂作为主成分。作为卵磷脂，可列举出植物卵磷脂、蛋黄卵磷脂、它们的衍生物。作为植物卵磷脂，可列举出大豆卵磷脂、油籽卵磷脂、向日葵卵磷脂。作为衍生物，可列举出分选卵磷脂、酶处理卵磷脂、酶分解卵磷脂。作为卵磷脂，尤其可列举出大豆卵磷脂。
[0094]
卵磷脂的hlb值例如可以为1以上、2以上、3以上或4以上，可以为20以下、15以下、10以下、8以下或5以下，可以为这些不矛盾的组合的范围。卵磷脂的hlb值具体而言例如可以优选为1～15、1～10、2～8或2～5。
[0095]
作为市售的卵磷脂，可列举出yelkin ts(hlb值＝约4、adm japan ltd.制)。yelkin ts为液体状的大豆卵磷脂。
[0096]“皂苷”是皂苷元糖苷的总称。作为皂苷，可列举出各种植物的皂苷。作为皂苷，可具体列举出大豆皂苷、茶籽皂苷、槐树皂角苷。
[0097]
＜其它成分＞
[0098]
其它成分只要不损害耐热性改善效果就没有特别限制。作为其它成分，可以使用1种的成分，也可以组合使用2种或2种以上的成分。
[0099]
作为其它成分，可以根据细菌组合物的利用方式使用可允许者。作为其它成分，可列举出能经口摄取的成分。作为能经口摄取的成分，可列举出配混于饮食品或药物中而利用的成分。
[0100]
＜工序a和工序b＞
[0101]
工序a是将细菌与油脂混合的工序。工序b是将细菌与乳化剂混合的工序。细菌被供于工序a和工序b这两者(即，与油脂的混合、及与乳化剂的混合这两者)。
[0102]
工序a和工序b可以同时实施，也可以分别实施。尤其可以分别实施工序a和工序b。实施工序a和b的顺序没有特别限制。即，可以在实施工序a后实施工序b，也可以在实施工序b后实施工序a。尤其可以在实施工序a后实施工序b。“同时实施工序a和b”是指：在工序a和工序b中任一者结束前开始进行工序a和工序b中的另一者。“同时实施工序a和工序b”包括：同时开始进行工序a和工序b的情况、在实施工序a和工序b中任一者的过程中开始进行工序a和工序b中的另一者的情况。即，“同时实施工序a和工序b”也可以指工序a和工序b在一部分或整个期间同时实施。同时实施工序a和工序b时，工序a和工序b可以同时结束，也可以分别结束。“分别实施工序a和工序b”是指：在工序a和工序b中任一者结束后，开始进行工序a和工序b中的另一者。“工序的实施过程中”是指：从该工序开始至结束为止的期间。“工序的结束”是指该工序得以充分实施的状态，具体而言，可以指该工序被实施了规定时间的状态。作为实施各工序的“规定时间”，可列举出后述的各工序的实施时间。
[0103]
换言之，工序a和工序b可以同时开始，也可以分别开始。工序a和工序b尤其可以分别开始。即，可以在工序a和工序b中任一者开始后，开始进行工序a和工序b中的另一者。具体而言，可以在工序a和工序b中任一者实施过程中或结束后，开始进行工序a和工序b中的另一者。开始进行工序a和工序b的顺序没有特别限制。即，可以在工序a开始后开始进行工序b，也可以在工序b开始后开始进行工序a。尤其可以在工序a开始后开始进行工序b。进而尤其可以在工序a结束后开始进行工序b。
[0104]
通过工序a的实施，例如，可以用油脂包覆细菌。通过实施工序b，例如，可以用乳化剂包覆细菌。通过工序a和工序b的实施，例如，可以用油脂和乳化剂包覆细菌。通过工序a和工序b的实施，具体而言，例如，可以用油脂和乳化剂的混合物包覆细菌。另外，通过工序a和工序b的实施，具体而言，例如，可以用油脂包覆细菌、进而用乳化剂包覆细菌。特别是，在工序a之后开始进行工序b的情况，可以用油脂包覆细菌、进而用乳化剂包覆细菌。另外，通过工序a和b的实施，具体而言，例如，可以用乳化剂包覆细菌、进而用油脂包覆细菌。特别是，在工序b之后开始进行工序a的情况，可以用乳化剂包覆细菌、进而用油脂包覆细菌。即，“用油脂和乳化剂包覆细菌”，只要没有特别声明，则可以指用油脂和乳化剂包覆细菌，而不依赖于油脂和乳化剂的混合状态以及基于油脂和乳化剂的包覆顺序。
[0105]“用油脂包覆细菌”不限定于单独用油脂包覆细菌的情况，还包括用油脂与其它成分的混合物包覆细菌的情况。例如，在实施工序a时，除了细菌和油脂之外还共存有其它成
分的情况，可以用油脂与其它成分的混合物包覆细菌。
[0106]“用乳化剂包覆细菌”不限定于单独用乳化剂包覆细菌的情况，还包括用乳化剂与其它成分的混合物包覆细菌的情况。例如，在实施工序b时，除了细菌和乳化剂之外还共存有其它成分的情况，可以用乳化剂与其它成分的混合物包覆细菌。
[0107]
需要说明的是，在工序a之后开始进行工序b的情况，供于工序b的“细菌”可以理解为工序a开始后的细菌。工序a开始后的细菌例如可以为细菌与油脂的混合物。工序a开始后的细菌具体而言例如可以为用油脂包覆的细菌。另外，在工序b之后开始进行工序a的情况，供于工序a的“细菌”可以理解为工序b开始后的细菌。工序b开始后的细菌例如可以为细菌与乳化剂的混合物。工序b开始后的细菌具体而言例如可以为用乳化剂包覆的细菌。
[0108]
工序a中，原料(细菌和油脂、以及任意的其它成分)均可以以液体、糊剂、粉末等任意的形状使用。例如，油脂尤其可以以液体的形状用于工序a。液体状的油脂可以原本是液体状的油脂，也可以是为了成为液体状而经处理(例如加热)的油脂。即，油脂例如可以预先加热至熔点以上的温度后用于工序a。实施工序a时例如可以在细菌中添加油脂，也可以在油脂中添加细菌。添加手段可以根据原料的形状等各种条件进行适宜设定。例如，所添加的成分为液体时，可以将相同成分滴加或喷雾。具体而言，例如，油脂为液体时，可以将油脂滴加或喷雾至细菌中。使用其它成分的情况，其它成分例如可以预先与细菌和/或油脂混合，也可以不预先混合。
[0109]
工序b中，原料(细菌和乳化剂、以及任意的其它成分)均可以以液体、糊剂、粉末等任意的形状使用。例如，乳化剂尤其可以以液体的形状用于工序b。液体状的乳化剂可以原本是液体状的乳化剂，也可以是为了成为液体状而经处理(例如加热)的乳化剂。即，乳化剂例如可以预先加热至熔点以上的温度后用于工序b。实施工序b时例如可以在细菌中添加乳化剂，也可以在乳化剂中添加细菌。添加手段可以根据原料的形状等各种条件进行适宜设定。例如，所添加的成分为液体时，可以将相同成分滴加或喷雾。具体而言，例如，乳化剂为液体时，可以将乳化剂滴加或喷雾至细菌中。使用其它成分的情况，其它成分例如可以预先与细菌和/或乳化剂混合，也可以不预先混合。
[0110]
同时实施工序a和工序b时，油脂和乳化剂例如可以分别使用，也可以作为混合物而使用。
[0111]
混合原料的手段没有特别限制。作为混合原料的手段，可列举出搅拌混合、反转混合。作为混合原料的手段，尤其可列举出搅拌混合。原料的混合例如可以在适合的容器内实施。也将实施原料的混合的容器称为“混合容器”。工序a和工序b可以在同一混合容器内实施，也可以不在同一混合容器内实施。工序a和工序b均可以以例如间歇式实施，也可以以连续式实施。原料的混合例如可以使用混合装置实施。混合装置例如可以具备混合容器。另外，混合装置例如可以具备搅拌叶片。搅拌叶片有时也称为搅拌器或切碎机等。另外，混合装置例如可以具备温度控制功能。作为混合装置，可列举出搅拌造粒装置。作为混合装置，可具体列举出高速搅拌型混合造粒机(nmg系列等；奈良机械制作所制)、新型高速捏合机(nsk系列等；冈田精工制)、高速混合制粒机(bg系列等；freund
‑
turbo公司制)、flexomix(fxd
‑
250等；hosokawa micron corporation制)、vertical granulator(paulek,inc.制)。
[0112]
只要可以得到耐热性改善效果，本发明的方法中使用的原料的量比就没有特别限制。本发明的方法中使用的原料的量比例如可以根据原料的种类、细菌组合物的形状(剂
型)、细菌组合物的用途等各种条件进行适宜设定。
[0113]
油脂的用量可以为每50g细菌的干燥菌体重量例如1.2g以上、1.5g以上、2g以上、2.5g以上、3g以上或3.5g以上，可以为4.8g以下、4.5g以下、4g以下、3.5g以下、3g以下或2.5g以下，可以为这些不矛盾的组合的范围。油脂的用量具体而言可以为每50g细菌的干燥菌体重量例如1.2～4.8g、优选为1.5～4.5g，更优选为2～4g。另外，油脂的用量可以以细菌的活菌数为基准进行设定。此时，上述“细菌的干燥菌体重量每50g”可以理解为例如“细菌的活菌每4
×
10
12
cfu”。
[0114]
乳化剂的用量可以为每50g细菌的干燥菌体重量例如1g以上、1.5g以上、2g以上、3g以上、4g以上、5g以上、6g以上、7g以上、8g以上、9g以上或10g以上，可以为20g以下、17g以下、15g以下、14g以下、13g以下、12g以下、11g以下、10g以下、9g以下、8g以下，可以为这些不矛盾的组合的范围。乳化剂的用量具体而言可以为每50g细菌的干燥菌体重量例如1～20g、1.5～17g或2～15g，可以为8～17g、9～16g或10～15g。乳化剂的用量、特别是在乳化剂为卵磷脂的情况下，可以为每50g细菌的干燥菌体重量1～20g、优选为1.5～17g，更优选为2～15g。乳化剂的用量、特别是在乳化剂为聚甘油脂肪酸酯的情况下，可以为每50g细菌的干燥菌体重量8～17g、优选为9～16g，更优选为10～15g。另外，乳化剂的用量、特别是在乳化剂为卵磷脂的情况下，每50g细菌的干燥菌体重量，换算为磷脂的重量可以为上述示例的用量的1/2量。另外，乳化剂的用量可以以细菌的活菌数为基准进行设定。此时，上述“每50g细菌的干燥菌体重量”可以理解为例如“细菌的活菌每4
×
10
12
cfu”。
[0115]
作为有效成分的总用量相对于原料的总用量的重量比，例如可以为1％以上、3％以上、5％以上、10％以上、20％以上、30％以上、40％以上、50％以上、60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、95％以上、97％以上或99％以上，可以为100％以下、99％以下、97％以下、95％以下、90％以下、80％以下、70％以下、60％以下或50％以下，可以为这些不矛盾的组合的范围。作为有效成分的总用量相对于原料的总用量的重量比，可具体列举出例如可以为1～100％、10～100％、30～100％、50～100％、70～100％、90～100％、95～100％或99～100％。
[0116]
只要可以得到耐热性改善效果，工序a的实施时间就没有特别限制。工序a的实施时间例如可以根据原料的种类、细菌组合物的形状(剂型)、细菌组合物的用途等各种条件进行适宜设定。工序a的实施时间例如可以为30秒以上、45秒以上、1分钟以上、1.5分钟以上、2分钟以上、2.5分钟以上、3分钟以上、3.5分钟以上或4分钟以上，可以为15分钟以下、10分钟以下、7分钟以下、5分钟以下、4.5分钟以下、4分钟以下、3.5分钟以下、3分钟以下或2.5分钟以下，可以为这些不矛盾的组合的范围。工序a的实施时间具体而言例如可以为30秒～15分钟、优选为45秒～10分钟、更优选为1分钟～7分钟。
[0117]
只要可以得到耐热性改善效果，实施工序b的时间就没有特别限制。实施工序b的时间例如可以根据原料的种类、细菌组合物的形状(剂型)、细菌组合物的用途等各种条件进行适宜设定。实施工序b的时间例如可以为30秒以上、1分钟以上、2分钟以上、3分钟以上、5分钟以上、7分钟以上、10分钟以上、15分钟以上、20分钟以上、25分钟以上或30分钟以上，可以为180分钟以下、150分钟以下、120分钟以下、100分钟以下、90分钟以下、80分钟以下、70分钟以下、60分钟以下、50分钟以下、45分钟以下、40分钟以下、35分钟以下、30分钟以下、25分钟以下、20分钟以下、15分钟以下或10分钟以下，可以为这些不矛盾的组合的范围。实
施工序b的时间具体而言例如可以为30秒～30分钟、1分钟～20分钟或2分钟～15分钟，也可以为30秒～180分钟、1分钟～120分钟或2分钟～90分钟。对于实施工序b的时间，特别是在乳化剂为聚甘油脂肪酸酯的情况下，可以为30秒～40分钟、优选为1分钟～30分钟、更优选为2分钟～20分钟。对于实施工序b的时间，特别是在乳化剂为卵磷脂的情况下，可以为30秒～180分钟、优选为1分钟～120分钟、更优选为2分钟～90分钟。
[0118]
在工序a之后开始进行工序b的情况，例如，可以在开始进行工序a后，经过上述示例那样的工序a的实施时间之前开始进行工序b，也可以在经过上述示例那样的工序a的实施时间之后开始进行工序b。例如，可以将从工序a开始到工序b开始的时间设定为上述示例那样的工序a的实施时间。
[0119]
在工序b之后开始进行工序a的情况，例如，可以在开始进行工序b后，经过上述示例那样的工序b的实施时间之前开始进行工序a，也可以在经过上述示例那样的工序b的实施时间之后开始进行工序a。例如，可以将从工序b开始到工序a开始的时间设定为上述示例那样的工序b的实施时间。
[0120]
对于工序a和工序b的总实施时间，例如两工序可以以能够确保上述示例那样的实施时间的方式设定。“工序a和工序b的总实施时间”是指：从工序a和工序b中任一者先开始的工序开始到工序a和工序b中任一者晚结束的工序结束为止时间。需要说明的是，“工序a和工序b中任一者先开始的工序开始”是指：在同时开始两个工序时两个工序的开始。另外，“工序a和工序b中任一者晚结束的工序结束”是指：在同时结束两个工序时两个工序的结束。同时开始进行工序a和工序b时，工序a和工序b的总实施时间例如可以设定为上述示例那样的工序a的实施时间和上述示例那样的工序b的实施时间中的较长者。
[0121]
工序a和工序b的实施条件(例如，温度、混合速度)可以相同，也可以不同。至少在同时实施工序a和工序b的期间，工序a和工序b的实施条件相同。
[0122]
工序a的实施条件(例如，温度、混合速度)可以在实施工序a的整个期间是恒定的，也可以不是恒定的。
[0123]
工序b的实施条件(例如，温度、混合速度)可以在实施工序a的整个期间是恒定的，也可以不是恒定的。
[0124]
工序a在油脂的熔点以上的温度下实施。即，工序a的温度(即，实施工序a的温度)是油脂的熔点以上的温度。工序a的温度只要为油脂的熔点以上且可以得到耐热性改善效果，就没有特别限制。工序a的温度例如可以根据原料的种类、细菌组合物的形状(剂型)、细菌组合物的用途等各种条件进行适宜设定。工序a的温度例如可以比油脂的熔点高1℃以上、2℃以上、3℃以上、4℃以上或5℃以上。工序a的温度例如可以为20℃以上、25℃以上、30℃以上、35℃以上、40℃以上、45℃以上或50℃以上，可以为55℃以下、50℃以下、45℃以下、40℃以下、35℃以下、30℃以下或25℃以下，可以为这些不矛盾的组合的范围。工序a的温度具体而言例如可以为20～55℃、25～50℃、30～50℃、35～50℃或40～50℃。工序a的温度具体而言例如可以为20～25℃、25～30℃、30～35℃、35～40℃、40～45℃、45～50℃或50～55℃。对于工序a的温度，尤其可以为40℃以上，可以为50℃以下，可以为40～50℃。对于温度，通常在工序a的整个期间可以在上述示例那样的温度的范围内，但也可以暂时不在该范围内。即，“工序a的温度为某范围”不限定于在工序a的整个期间温度在该范围内的情况，还包括温度暂时不在该范围内的情况。例如，工序a中，温度也可以暂时降低至低于油脂的熔点。
对于工序a的“暂时”的长度，只要可以得到耐热性改善效果，就没有特别限制。对于工序a的“暂时”例如可以指在工序a的整个期间内的20％以下、15％以下、10％以下、5％以下、3％以下或1％以下的期间。需要说明的是，工序a的温度被设定为在实施工序a时使细菌存活至期望的程度。实施工序a时的细菌的存活率例如可以为50％以上、70％以上、90％以上或95％以上。实施工序a时的细菌的存活率以实施工序a后(具体而言，工序a结束时)的活菌数相对于实施工序a前(具体而言，工序a开始时)的活菌数的比率的形式算出。
[0125]
只要可以得到耐热性改善效果，工序b的温度(即，实施工序b的温度)就没有特别限制。工序b的温度例如可以根据原料的种类、细菌组合物的形状(剂型)、细菌组合物的用途等各种条件进行适宜设定。工序b例如可以在乳化剂的熔点以上的温度下实施。即，工序b的温度例如可以为乳化剂的熔点以上的温度。工序b的温度例如可以比乳化剂的熔点高1℃以上、2℃以上、3℃以上、4℃以上或5℃以上。工序b的温度例如可以为20℃以上、25℃以上、30℃以上、35℃以上、40℃以上、45℃以上或50℃以上，可以为55℃以下、50℃以下、45℃以下、40℃以下、35℃以下、30℃以下或25℃以下，可以为这些不矛盾的组合的范围。工序b的温度具体而言例如可以为20～55℃、25～50℃、30～50℃、35～50℃或40～50℃。工序b的温度具体而言例如可以为20～25℃、25～30℃、30～35℃、35～40℃、40～45℃、45～50℃或50～55℃。工序b的温度尤其可以为40℃以上，可以为50℃以下，可以为40～50℃。对于温度，通常在工序b的整个期间可以在上述示例那样的温度的范围内，但也可以暂时不在该范围内。即，“工序b的温度为某范围”不限定于在工序b的整个期间温度在该范围内的情况，还包括温度暂时不在该范围内的情况。只要可以得到耐热性改善效果，对于工序b的“暂时”的长度就没有特别限制。工序b的“暂时”例如可以指在工序b的整个期间内的20％以下、15％以下、10％以下、5％以下、3％以下或1％以下的期间。需要说明的是，工序b的温度被设定为在实施工序b时使细菌存活至期望的程度。实施工序b时的细菌的存活率例如可以为50％以上、70％以上、90％以上或95％以上。实施工序b时的细菌的存活率以实施工序b后(具体而言，工序b结束时)的活菌数相对于实施工序b前(具体而言，工序b开始时)的活菌数的比率的形式算出。
[0126]
工序a和工序b的温度均可以适宜控制(例如升温)在例如上述示例那样的温度范围。温度的控制方法(例如升温方法)没有特别限制。例如，通过将混合容器加热，从而能够控制(例如升温)温度。对混合容器进行加热的手段只要是使混合容器内部加热者(具体而言，能将混合容器内部的原料加热者)，就没有特别限制。加热装置例如可以组入混合容器中，也可以在混合容器的外部提供。作为在混合容器的外部具备的加热装置，可列举出加热用水套。即，例如，通过用加热用水套覆盖混合容器，并对水套进行加热，从而能够从外部将混合容器内部加热。
[0127]
只要可以得到耐热性改善效果，工序a中的混合速度就没有特别限制。工序a中的混合速度例如可以根据原料的种类、细菌组合物的形状(剂型)、细菌组合物的用途、所使用的混合装置的种类等各种条件进行适宜设定。对于工序a中的混合速度，例如作为搅拌叶片的转速，可以为100rpm以上、300rpm以上、500rpm以上、1000rpm以上、1500rpm以上、2000rpm以上或2500rpm以上，可以为5000rpm以下、4000rpm以下、3000rpm以下、2500rpm以下、2000rpm以下、1500rpm以下或1000rpm以下，可以为这些不矛盾的组合的范围。对于工序a中的混合速度，具体而言，例如作为搅拌叶片的转速，可以为500～5000rpm、优选为1000～
4000rpm，更优选为2000～3000rpm。另外，对于工序a中的混合速度，例如作为搅拌叶片的圆周速度(即搅拌叶片的顶端的转速)，可以为1m/s以上、3m/s以上、5m/s以上、10m/s以上、15m/s以上、20m/s以上或25m/s以上，可以为50m/s以下、40m/s以下、30m/s以下、25m/s以下、20m/s以下、15m/s以下或10m/s以下，可以为这些不矛盾的组合的范围。对于工序a中的混合速度，具体而言例如作为搅拌叶片的圆周速度(即搅拌叶片的顶端的转速)，可以为3～50m/s、优选为5～40m/s，更优选为10～30m/s。对于混合速度，通常在工序a的整个期间可以在上述示例那样的混合速度的范围内，但也可以暂时不在该范围内。即，“工序a中的混合速度为某范围”不限定于在工序a的整个期间混合速度在该范围内的情况，还包括混合速度暂时不在该范围内的情况。例如，工序a中，可以暂时停止原料的混合。即，工序a中，原料的混合可以连续地进行，也可以间歇地进行。只要可以得到耐热性改善效果，对于工序a的“暂时”的长度就没有特别限制。对于工序a的“暂时”可以指在工序a的整个期间内的20％以下、15％以下、10％以下、5％以下、3％以下或1％以下的期间。
[0128]
只要可以得到耐热性改善效果，工序b中的混合速度就没有特别限制。对于工序b中的混合速度，例如可以根据原料的种类、细菌组合物的形状(剂型)、细菌组合物的用途、所使用的混合装置的种类等各种条件进行适宜设定。对于工序b中的混合速度，例如作为搅拌叶片的转速，可以为100rpm以上、300rpm以上、500rpm以上、1000rpm以上、1500rpm以上、2000rpm以上或2500rpm以上，可以为5000rpm以下、4000rpm以下、3000rpm以下、2500rpm以下、2000rpm以下、1500rpm以下或1000rpm以下，可以为这些不矛盾的组合的范围。对于工序b中的混合速度，具体而言例如作为搅拌叶片的转速，可以为500～5000rpm、优选为1000～4000rpm，更优选为2000～3000rpm。另外，对于工序b中的混合速度，例如作为搅拌叶片的圆周速度(即搅拌叶片的顶端的转速)，可以为1m/s以上、3m/s以上、5m/s以上、10m/s以上、15m/s以上、20m/s以上或25m/s以上，可以为50m/s以下、40m/s以下、30m/s以下、25m/s以下、20m/s以下、15m/s以下或10m/s以下，可以为这些不矛盾的组合的范围。对于工序b中的混合速度，具体而言例如作为搅拌叶片的圆周速度(即搅拌叶片的顶端的转速)，可以为3～50m/s、优选为5～40m/s，更优选为10～30m/s。对于混合速度，通常在工序b的整个期间可以在上述示例那样的混合速度的范围内，但也可以暂时不在该范围内。即，“工序b中的混合速度为某范围”是指：不限定于工序b的整个期间混合速度在该范围内的情况，还包括混合速度暂时不在该范围内的情况。例如，工序b中，可以暂时停止原料的混合。即，工序b中，原料的混合可以连续地进行，也可以间歇地进行。只要可以得到耐热性改善效果，工序b的“暂时”的长度就没有特别限制。工序b的“暂时”可以指在工序b的整个期间内的20％以下、15％以下、10％以下、5％以下、3％以下或1％以下的期间。
[0129]
通过如上述那样实施工序a和工序b，从而能够改善细菌的耐热性。耐热性得到改善的细菌例如可以以细菌组合物(具体而言，耐热性细菌组合物)的形式得到。
[0130]
细菌组合物例如可以以膏状的组合物的形式得到。细菌组合物可以直接利用或进行适宜加工而利用。细菌组合物例如也可以加工成任意的形状而利用。
[0131]
细菌组合物的用途没有特别限制。细菌组合物例如可以添加至饮食品而利用。即，细菌组合物例如可以为饮食品添加用的组合物(即添加至饮食品中而利用的组合物)。另外，本发明提供含有细菌组合物的饮食品。饮食品没有特别限制。作为饮食品，可列举出乳制品。乳制品可以是以牛奶为原料制造而得到的产品。作为乳制品，可列举出奶粉。作为奶
粉，可列举出全脂奶粉、脱脂奶粉、配方奶粉、乳清粉末、奶精。作为奶粉等饮食品，可具体列举出婴儿用奶粉、幼儿用奶粉。作为奶粉等饮食品，尤其可列举出婴儿用奶粉。例如，作为奶粉，可具体列举出婴儿用配方奶粉、成长阶段奶粉(follow up
‑
milk)等育儿用配方奶粉。“婴儿”是指出生后小于1年的儿童。“幼儿”是指出生后1年至上小学为止的儿童。
[0132]
饮食品中的细菌组合物的含量没有特别限制。饮食品中的细菌组合物的含量例如可以为0.01％(w/w)以上、0.1％(w/w)以上、0.5％(w/w)以上、1％(w/w)以上、5％(w/w)以上或10％(w/w)以上，可以为50％(w/w)以下、30％(w/w)以下、20％(w/w)以下、10％(w/w)以下或5％(w/w)以下，可以为这些不矛盾的组合的范围。饮食品中的细菌组合物的含量具体而言例如可以为0.01％(w/w)～50％(w/w)、0.1％(w/w)～50％(w/w)、0.1(w/w)～10(w/w)％或0.5(w/w)～5(w/w)％。另外，饮食品中的细菌组合物的含量例如换算为细菌的含量可以为1
×
104cfu/g以上、1
×
105cfu/g以上、1
×
106cfu/g以上或1
×
107cfu/g以上，可以为1
×
10
13
cfu/g以下、1
×
10
12
cfu/g以下、1
×
10
11
cfu/g以下或1
×
10
10
cfu/g以下，可以为它们的组合的范围。饮食品中的细菌组合物的含量具体而言例如换算为细菌的含量，可以为1
×
105～1
×
10
12
cfu/g、优选为1
×
106～1
×
10
11
cfu/g，更优选为1
×
107～1
×
10
10
cfu/g。
[0133]
＜2＞本发明的组合物
[0134]
本发明的组合物是含有细菌、油脂和乳化剂的组合物。也将细菌、油脂和乳化剂统称为“有效成分”。
[0135]
本发明的组合物可以仅由有效成分构成，也可以不仅由有效成分构成。即，本发明的组合物中除了有效成分之外，也可以含有其它成分。
[0136]
对于本发明的组合物中包含的成分(即，有效成分和任意的其它成分)，可以适用关于本发明的方法中的原料的记载。本发明的组合物中包含的细菌可以是与不包含在本发明的组合物中的情况相比耐热性得到改善的细菌。即，本发明的组合物可以是耐热性细菌组合物(含有耐热性得到改善的细菌的组合物)。本发明的组合物中，也将通过包含在本发明的组合物中而得到的改善细菌的耐热性的效果称为“耐热性改善效果”。对于本发明的组合物中的耐热性改善效果，可以适用关于本发明的方法中的耐热性改善效果的记载。即，本发明的方法中的工序a和b的实施前的细菌可以理解为不包含在本发明的组合物中的状态的细菌。另外，本发明的方法中的实施工序a和工序b后的细菌可以理解为包含于本发明的组合物中的状态的细菌。
[0137]
只要可以得到耐热性改善效果，本发明的组合物中包含的成分的量和量比就没有特别限制。对于本发明的组合物中包含的成分的量和量比，可以适用关于本发明的方法中的原料的用量的记载。即，本发明的方法中使用的原料的量比可以理解为本发明的组合物中包含的成分的量比。另外，本发明的方法中的有效成分的总用量相对于原料的总用量的重量比可以理解为本发明的组合物中的有效成分的总含量。另外，本发明的组合物中的各有效成分的含量可以是由本发明的组合物中的有效成分的总含量与本发明的组合物中包含的成分的量比计算出的范围。
[0138]
另外，本发明的组合物中的细菌的含量例如可以为1
×
104cfu/g以上、1
×
105cfu/g以上、1
×
106cfu/g以上或1
×
107cfu/g以上，可以为1
×
10
13
cfu/g以下、1
×
10
12
cfu/g以下或1
×
10
11
cfu/g以下，可以为它们的组合的范围。本发明的组合物中的细菌的含量具体而言例如可以为1
×
104～1
×
10
13
cfu/g、优选为1
×
106～1
×
10
12
cfu/g，更优选为1
×
107～1
×
10
11
cfu/g。
[0139]
本发明的组合物中，细菌例如可以用油脂和乳化剂包覆。本发明的组合物中，具体而言例如可以用油脂与乳化剂的混合物包覆细菌。本发明的组合物中，具体而言例如可以用油脂包覆细菌、进而用乳化剂包覆细菌。本发明的组合物中，具体而言例如可以用乳化剂包覆细菌、进而用油脂包覆细菌。
[0140]
本发明的组合物的形状没有特别限制。本发明的组合物例如可以为粉末状，也可以为膏状。
[0141]
本发明的组合物的用途没有特别限制。对于本发明的组合物的用途，可以适用关于利用本发明的方法得到的细菌组合物的用途的记载。即，本发明的组合物例如可以添加至奶粉等饮食品中而利用。
[0142]
制造本发明的组合物的方法没有特别限制。本发明的组合物例如可以利用上述的本发明的方法制造。即，本发明的组合物的一方式可以是利用本发明的方法所制造的细菌组合物。
[0143]
实施例
[0144]
以下，参照非限定性的实施例，对本发明进行进一步具体地说明。
[0145]
〔实施例1〕
[0146]
本实施例中，对由油脂和乳化剂的组合使用带来的细菌的耐热性改善效果进行了评价。作为细菌，使用长双歧杆菌bb536(bifidobacterium longum bb536)(nite bp
‑
02621；以下也称为“bb536”)。作为油脂，使用棕榈仁极度硬化油(k
‑
40；太阳油脂株式会社制)。作为乳化剂，使用聚甘油脂肪酸酯(poeme rj
‑
38；riken vitamin co.,ltd.制)。poeme rj
‑
38为具有c18(65％)和c16(34％)的构成脂肪酸的聚甘油脂肪酸酯。
[0147]
培养bb536，将得到的菌体冷冻干燥，得到干燥菌体。将bb536的干燥菌体50g加入至高速混合制粒机lbg
‑
1l(搅拌叶片的旋转直径＝0.136m；freund
‑
turbo公司制)中，边以2400rpm搅拌边添加表1中记载的原料。添加原料后，在表1中记载的条件下实施搅拌，得到膏状的产物。需要说明的是，以2个阶段实施搅拌的情况，添加第1层的原料并在第1层的条件下实施搅拌，然后进一步添加第2层的原料并在第2层的条件下实施搅拌。预先将棕榈仁极度硬化油加热溶解后滴加至菌体中。聚甘油脂肪酸酯以粉末的状态添加至菌体中。以1.0重量％的浓度将产物分散至70℃的热水中，测定1分钟后的bb536的存活率，作为bb536的耐热性的指标。实验条件只要没有特别声明，则在以下的实施例中也相同。
[0148]
将结果示于表1。在组合使用棕榈仁极度硬化油和聚甘油脂肪酸酯的情况下(no.4～6)，与未处理的情况(no.1)及单独使用棕榈仁极度硬化油或聚甘油脂肪酸酯的情况(no.2～3)相比，可以得到高耐热性。特别是，在将棕榈仁极度硬化油和聚甘油脂肪酸酯分成2个阶段与细菌混合的情况(no.5～6)下，与同时添加棕榈仁极度硬化油和聚甘油脂肪酸酯的情况(no.4)相比，可以得到高耐热性。另一方面，棕榈仁极度硬化油的添加后的搅拌温度低于棕榈仁极度硬化油的熔点时，耐热性未得到改善(no.7)。根据以上结果，明确了优选的是：通过将细菌与油脂和乳化剂混合从而改善细菌的耐热性；以及、在油脂的熔点以上的温度下实施细菌与油脂的混合。
[0149]
[表1]
[0150]
表1：长双歧杆菌bb536的耐热性的评价结果
[0151][0152]
〔实施例2〕
[0153]
本实施例中，对以各种添加量使用乳化剂时的、由油脂和乳化剂的组合使用带来的细菌的耐热性改善效果进行了评价。所使用的细菌、油脂和乳化剂与实施例1相同。
[0154]
通过表2中记载的原料和搅拌条件实施搅拌，对细菌的耐热性进行了评价
[0155]
将结果示于表2。以任意的添加量使用聚甘油脂肪酸酯的情况(no.8～12)，与未处理的情况(no.1)相比，也可以得到高耐热性。特别是，聚甘油脂肪酸酯的添加量为10g～15g的情况下(no.9～11)可以得到高耐热性。
[0156]
[表2]
[0157]
表2：长双歧杆菌bb536的耐热性的评价结果
[0158][0159]
〔实施例3〕
[0160]
本实施例中，对使用了其它乳化剂时的、由油脂和乳化剂的组合使用带来的细菌的耐热性改善效果进行了评价。所使用的细菌和油脂与实施例1相同。作为乳化剂，使用了卵磷脂(yelkin ts；adm japan ltd.制)。yelkin ts为液体状的大豆卵磷脂。
[0161]
通过表3中记载的原料和搅拌条件实施搅拌，对细菌的耐热性进行了评价。卵磷脂直接滴加至菌体中。
[0162]
将结果示于表3。使用卵磷脂作为乳化剂的情况(no.13～28)与未处理的情况(no.1)相比，也可以得到高耐热性。根据以上结果，明确了不限于聚甘油脂肪酸酯，对于各种乳化剂，通过与油脂的组合使用也可以得到细菌的耐热性改善效果。
[0163]
[表3]
[0164]
表3：长双歧杆菌bb536的耐热性的评价结果
[0165][0166]
〔实施例4〕
[0167]
本实施例中，对使用了其它细菌时的、由油脂和乳化剂的组合使用带来的细菌的耐热性改善效果进行了评价。所使用的油脂和乳化剂与实施例3相同。作为细菌，使用短双歧杆菌m
‑
16v(nite bp
‑
02622；以下也称为“m
‑
16v”)。
[0168]
培养m
‑
16v，将菌体冷冻干燥，得到干燥菌体。使用m
‑
16v的干燥菌体50g，通过表4中记载的原料和搅拌条件实施搅拌，对细菌的耐热性进行了评价。
[0169]
将结果示于表4。作为细菌使用短双歧杆菌(bifidobacterium breve)的情况(no.30)与未处理的情况(no.29)相比，也可以得到高耐热性。根据以上结果，不限定于长双歧杆菌(bifidobacterium longum)，对于各种细菌可以得到由油脂和乳化剂的组合使用带来的耐热性改善效果。
[0170]
[表4]
[0171]
表4：短双歧杆菌m
‑
16v的耐热性的评价结果
[0172][0173]
〔实施例5〕
[0174]
将bb536的培养物冷冻干燥而得到的菌粉50g加入至高速混合制粒机lbg
‑
1l(搅拌叶片的旋转直径＝0.136m；freund
‑
turbo公司制)中，边以2400rpm搅拌边添加预先进行了加热溶解的液体状的菜籽极度硬化油脂3g，在45℃、转速2400rpm的条件下搅拌3分钟。接着，添加液体状的卵磷脂5g后，在45℃、转速2400rpm的条件下进一步搅拌3分钟，得到含有耐热性高的细菌的组合物。
[0175]
〔实施例6〕
[0176]
将bb536的培养物冷冻干燥而得到的菌粉50g加入至高速混合制粒机lbg
‑
1l(搅拌叶片的旋转直径＝0.136m；freund
‑
turbo公司制)中，边以2400rpm搅拌边添加预先进行了加热溶解的液体状的棕榈极度硬化油脂3g，在45℃、转速2400rpm的条件下搅拌3分钟。接着，添加单甘油脂肪酸酯10g后，在45℃、转速2400rpm的条件下进一步搅拌5分钟，得到含有耐热性高的细菌的组合物。
[0177]
〔实施例7〕
[0178]
将m
‑
16v的培养物冷冻干燥而得到的菌粉50g加入至高速混合制粒机lbg
‑
1l(搅拌叶片的旋转直径＝0.136m；freund
‑
turbo公司制)中，边以2400rpm搅拌边添加预先进行了加热溶解的液体状的棕榈仁极度硬化油脂3g，在45℃、转速2400rpm的条件下搅拌3分钟。接着，添加蔗糖脂肪酸酯10g后，在45℃、转速2400rpm的条件下进一步搅拌5分钟，得到含有耐热性高的细菌的组合物。
[0179]
产业上的可利用性
[0180]
根据本发明，能够改善细菌的耐热性。