一种稳定性好的总胆汁酸检测试剂盒的制作方法

本发明涉及体外生化试剂检测，具体涉及一种稳定性好的总胆汁酸检测试剂盒。

背景技术：

1、胆汁酸(3α-羟类固醇)是胆汁的重要组成成分，其存在形式主要有甘氨胆酸、脱氧胆酸、鹅去氧胆酸和石胆酸等，这些胆酸合起来称为总胆汁酸(tba)。总胆汁酸是肝脏代谢胆固醇产生的关键生物标志物，其水平异常与多种肝胆疾病密切相关，例如急性肝炎、肝硬化、胆汁淤积症等。比如急性肝炎时血清中tba显著增高，可达正常人水平 10～100 倍，甚至更高。研究表明，tba检测对早期肝损伤的灵敏度高于传统肝功能指标(如alt)，尤其在肝硬化诊断中阳性率高达95%。此外，tba测定在健康管理(如酒精性肝病筛查)和术后肝功能监测中也具有重要价值。现有研究认为，血清中胆汁酸的测定，对肝胆疾病的诊断其敏感性高达70％以上，特异性高达90％以上，在肝硬化等慢性肝病发生时，胆汁酸升高的出现比白蛋白、胆固醇和胆固醇酯等的改变来得更早，因此对慢性肝病的诊断有重要意义。

2、tba的测定方法包括色谱法、酶联免疫法和酶学法等，酶学法由于检测快速渐变，应用广泛。目前酶学法主要采用五代循环酶法胆汁酸测试试剂盒，均采用游离的酶以及辅酶，酶和辅酶的用量较大，稳定性较差。因此，如何提高总胆汁酸检测试剂盒的稳定性是检测总胆汁酸必须要解决的问题。

技术实现思路

1、针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种稳定性好的总胆汁酸检测试剂盒。

2、为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、本发明的第一方面，提供一种稳定性好的总胆汁酸检测试剂盒，包括试剂r1试剂和试剂r2；所述r1试剂包括磷酸盐缓冲液、β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型、抗干扰剂、防腐剂；所述r2试剂包括hepes缓冲液、3α-羟基类固醇脱氢酶、β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型、稳定剂、防腐剂；

4、抗干扰剂为edta-2na、甜菜碱、聚乙二醇6000中的一种或几种；

5、稳定剂为ectoine及其衍生物、bsa、甘露醇、海藻糖、甘油中的一种或几种。

6、进一步的，抗干扰剂为edta-2na、甜菜碱和聚乙二醇6000，edta-2na的浓度为0.01-1g/l、甜菜碱的浓度为0.1-5g/l、聚乙二醇6000的浓度为1-10g/l。

7、进一步的，稳定剂为ectoine、海藻糖和甘油，ectoine的浓度为0.1-10g/l、海藻糖的浓度为1-10g/l、甘油的浓度为1-10g/l。

8、进一步的，磷酸盐缓冲液的浓度为20mmol/l-50mmol/l。

9、进一步的，β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型的浓度为0.5-1g/l。

10、进一步的， hepes缓冲液的浓度为50mmol/l-250mmol/l。

11、进一步的， 3α-羟基类固醇脱氢酶的浓度为5-20ku/l。

12、进一步的，所述试剂r2中β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型的浓度为5-10g/l。

13、进一步的，防腐剂为叠氮钠、proclin300、牛莎950中的一种或几种。

14、进一步的，防腐剂为叠氮钠，浓度为0.05%-0.1%

15、本发明的有益效果：

16、(1)稳定性好：本发明中r1试剂添加的甜菜碱和聚乙二醇6000可提高酶的稳定性，同时r2试剂中稳定剂的添加，更是极大的提高了试剂各方面的稳定性。经过验证，热稳定性可达10天，开瓶实验试剂稳定性可达36天，高于市面上常见的28天。其中ectoine及其衍生物具有出色的蛋白质稳定性，防止蛋白质变性或聚集；与甘油或bsa等稳定剂相比，其在低浓度下就可实现等效保护；同时具有优秀的生物降解性，无生态残留风险。多种稳定剂的联合使用，使试剂可在较为不利的环境下维持更高的稳定性。

17、(2)抗干扰能力强：试剂中添加的ectoine以其无色、无蛋白的特性不影响酶促反应，同时增强信号强度；ectoin来源于微生物发酵或化学合成，成分纯净，不含动物源性成分，避免交叉污染风险；相比较于来源于牛血清的bsa，避免了可能引起的非特异性结合和背景干扰，使检测结果更加准确。

1.一种稳定性好的总胆汁酸检测试剂盒，其特征在于，包括试剂r1试剂和试剂r2；所述r1试剂包括磷酸盐缓冲液、β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型、抗干扰剂、防腐剂；所述r2试剂包括hepes缓冲液、3α-羟基类固醇脱氢酶、β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型、稳定剂、防腐剂；

2.根据权利要求1所述的总胆汁酸检测试剂盒，其特征在于，抗干扰剂为edta-2na、甜菜碱和聚乙二醇6000，edta-2na的浓度为0.01 -1g/l、甜菜碱的浓度为0.1-5g/l、聚乙二醇6000的浓度为1-10g/l。

3.根据权利要求1所述的总胆汁酸检测试剂盒，其特征在于，稳定剂为ectoine、海藻糖和甘油，ectoine的浓度为0.1-10g/l、海藻糖的浓度为1-10g/l、甘油的浓度为1-10g/l。

4.根据权利要求1所述的总胆汁酸检测试剂盒，其特征在于，磷酸盐缓冲液的浓度为20mmol/l-50mmol/l。

5.根据权利要求1所述的总胆汁酸检测试剂盒，其特征在于，β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型的浓度为0.5-1g/l。

6.根据权利要求1所述的总胆汁酸检测试剂盒，其特征在于， hepes缓冲液的浓度为50mmol/l-250mmol/l。

7.根据权利要求1所述的总胆汁酸检测试剂盒，其特征在于， 3α-羟基类固醇脱氢酶的浓度为5-20ku/l。

8.根据权利要求1所述的总胆汁酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂r2中β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型的浓度为5-10g/l。

9.根据权利要求1所述的总胆汁酸检测试剂盒，其特征在于，防腐剂为叠氮钠、proclin300、牛莎950中的一种或几种。

10.根据权利要求9所述的总胆汁酸检测试剂盒，其特征在于，防腐剂为叠氮钠，浓度为0.05%-0.1%。