核苷酸类似物以及包含其的寡核苷酸的制作方法

本技术涉及具有降低脱靶效应的核苷酸类似物、包含其的寡核苷酸及其应用，所述核苷酸类似物可用于制备具有降低脱靶效应或增强基因表达抑制活性的寡核苷酸试剂（例如，小干扰rna（sirna）和反义寡核苷酸）。

背景技术：

1、近年来，寡核苷酸类试剂（如小干扰rna（sirna）和反义寡核苷酸）作为精准调控基因表达的工具，在生物医药领域展现出巨大的应用潜力。这类分子通过碱基互补配对原则靶向特定rna序列，可实现基因沉默或功能调控，为治疗遗传性疾病、病毒感染及癌症等提供了新策略。例如，sirna通过rna干扰机制介导靶mrna的降解，而反义寡核苷酸可通过空间位阻或rnase h依赖途径增强或抑制目标基因表达。目前，已有多个基于寡核苷酸技术的药物获得fda批准，验证了其临床转化可行性。

2、sirna（小干扰rna）药物作为一种革命性的基因沉默工具，在治疗遗传性疾病、病毒感染和癌症等领域展现出巨大潜力。然而，脱靶效应（off-target effects）是限制其临床应用的主要挑战之一。脱靶效应指的是sirna与非目标基因序列发生非特异性结合，导致非预期的基因沉默，从而可能引发细胞毒性、免疫反应或其他不良反应。这种现象主要源于sirna与靶mrna序列的部分互补性，尤其是种子区域（seed region，即sirna的2-8位核苷酸）与非靶基因的匹配。

3、研究表明，脱靶效应不仅会干扰实验结果的准确性，还可能在临床治疗中导致严重的安全性问题。例如，脱靶效应可能影响细胞正常功能，甚至诱发细胞凋亡或肿瘤发生。因此，降低sirna的脱靶效应是提高其特异性和安全性的关键。目前，研究者通过多种策略来减少脱靶效应，包括化学修饰sirna（如2'-o-甲基化修饰等）、优化sirna设计（如调整种子区域序列）、使用不对称sirna结构，以及开发高效的递送系统。这些方法在提高sirna靶向性和降低脱靶风险方面取得了显著进展，但仍需进一步优化以满足临床应用的需求。

技术实现思路

1、发明要解决的问题

2、本技术意在提供核苷酸类似物，以用于制备具有降低脱靶效应的寡核苷酸试剂（例如，小干扰rna（sirna）和反义寡核苷酸）。

3、用于解决问题的方案

4、式（i）所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体、氘代物、溶剂化物或前药

5、本技术提供了式（i）所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体、氘代物、溶剂化物或前药，

6、 式（i），

7、其中，x选自o或者s；

8、r1选自氢、羟基保护基基团或反应性磷基团；

9、r2或r3各自独立地选自氢、氘、c1-3烷基、氨基保护基基团或反应性磷基团；

10、其中，base代表未修饰或经修饰的核碱基，所述未修饰或经修饰的核碱基具有选自以下中任一种的结构：

11、、、、或，

12、其中，r4、r5、r6、r7、r8、r9、r10各自独立地选自氢、氘、氨基保护基基团、c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6卤代烷基、3-6元环烷基、或-(c=o)c1-6烷基。

13、在一些实施方式中，所述反应性磷基团可选自磷酸酯基团、硫代磷酸酯基团或亚磷酰胺类基团。

14、在一些实施方式中，所述反应性磷基团可为和。

15、在具体的实施方式中，所述氨基保护基基团选自以下中的任一种：苯甲酰基(bz)、乙酰基(ac)、苄氧羰基(cbz)、叔丁氧羰基(boc)、9-芴甲氧羰基(fmoc)、对甲氧基苄基(pmb)、苄基(bn)、三苯甲基(tr)、对甲苯磺酰基(tos)、邻苯二甲酰基(pht)、烯丙氧羰基(alloc)、三氟乙酰基(tfa)、异丁酰基（ibu）、或n-[(二甲基氨基)亚甲基]；优选自苯甲酰基(bz)、乙酰基(ac)、苄氧羰基(cbz)、叔丁氧羰基(boc)、9-芴甲氧羰基(fmoc)、异丁酰基（ibu）、或n-[(二甲基氨基)亚甲基]。

16、在一些实施方式中，所述羟基保护基选自以下中的任一种：甲氧基甲基醚(mom)、2-四氢吡喃(thp)、叔丁基二甲基硅基(tbs)、三甲基硅基(tms)、三乙基硅基(tes)、三苯甲基(tr)、4,4′-双甲氧基三苯甲基(dmtr)、4,4′,4′′-三甲氧基三苯甲基(tmtr)、苄基(bn)、苯甲酰基(bz)、异丁酰基（ibu）、乙酰基(ac)、对甲氧基苄基(pmb)、或叔丁基二苯基硅基（tbdps）；优选自三苯甲基(tr)、4,4′-双甲氧基三苯甲基(dmtr)、4,4′,4′′-三甲氧基三苯甲基(tmtr)、苄基(bn)、苯甲酰基(bz)、异丁酰基（ibu）、乙酰基(ac)、或叔丁基二苯基硅基（tbdps）。

17、在一些实施方式中，所述羟基保护基选自以下中的任一种：甲氧基甲基醚(mom)、2-四氢吡喃(thp)、叔丁基二甲基硅基(tbs)、三甲基硅基(tms)、三乙基硅基(tes)、三苯甲基(tr)、4,4′-双甲氧基三苯甲基(dmtr)、4,4′,4′′-三甲氧基三苯甲基(tmtr)、苄基(bn)、苯甲酰基(bz)、乙酰基(ac)、或对甲氧基苄基(pmb)；优选自三苯甲基(tr)、4,4′-双甲氧基三苯甲基(dmtr)、4,4′,4′′-三甲氧基三苯甲基(tmtr)、苄基(bn)、苯甲酰基(bz)、或乙酰基(ac)。

18、在一些实施方式中，x优选为o。

19、在一些实施方式中，r2或r3各自独立地选自氢、氘、甲基、乙基、氨基保护基基团或反应性磷基团。

20、在一些实施方式中，r2选自氢、氘、甲基或乙基，r3选自氢、氘、氨基保护基基团或反应性磷基团。在一些实施方式中，r2选自氢、甲基或乙基，r3选自氢、氘或氨基保护基基团或反应性磷基团。

21、在一些实施方式中，r2或r3中的一个为氨基保护基基团，另一个为氢或氘。在一些实施方式中，r2或r3中的一个为氨基保护基基团，另一个为氢。

22、在优选的实施方式中，r2为氢，r3为氨基保护基基团（例如boc、bz或ac），同时r1选自反应性磷基团（例如）。

23、在一些实施方式中，r10选自氢、氘、c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6卤代烷基、3-6元环烷基、或-(c=o)c1-6烷基。

24、在一些实施方式中，r4、r5、r6、r7、r8、r9、r10各自独立地选自氢、氘、氨基保护基基团、c1-3烷基、c1-3烷氧基、c1-3卤代烷基、3-6元环烷基、或-(c=o)c1-3烷基。

25、在一些实施方式中，r4、r5、r6、r7、r8、r9、r10各自独立地选自氢、氨基保护基基团、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基乙基、环丙基、氟甲基、二氟甲基、或乙酰基。

26、在一些实施方式中，r4或r5各自独立地选自氢、氨基保护基基团或c1-3烷基。

27、在一些实施方式中，r6或r7各自独立地选自氢或氨基保护基基团。

28、在一些实施方式中，r8或r9各自独立地选自氢或氨基保护基基团。

29、在优选的实施方式中，r10为氢或c1-3烷基，优选氢或甲基。

30、在一些实施方式中，所述base选自以下中任一种：

31、、、或，

32、其中，r5、r7或r9各自独立地选自氢、氨基保护基基团或c1-3烷基，r10选自氢或c1-6烷基；优选地，r10选自氢或c1-3烷基（例如甲基）。

33、在一些实施方式中，本技术所述的式（i）所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体、氘代物、溶剂化物或前药可选自以下：

34、

35、，或其药学上可接受的盐、立体异构体、氘代物、溶剂化物或前药。

36、在一些实施方式中，本技术所述的式（i）所示的化合物、其药学上可接受的盐、氘代物、溶剂化物或前药可选自以下：

37、，或其药学上可接受的盐、氘代物、溶剂化物或前药。

38、式（i）所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体、氘代物、溶剂化物或前药

39、本技术提供了式（i）所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体、氘代物、溶剂化物或前药，

40、

41、其中，x选自o或者s；

42、r1和rib各自独立地选自氢、羟基保护基基团或反应性磷基团；

43、ria选自羟基、氢、氟、任选取代的氨基、任选取代的c1-6烷基、任选取代的c1-6烷氧基、c1-6烯基或c1-6炔基；

44、其中，base分别代表未修饰或经修饰的核碱基，所述未修饰或经修饰的核碱基具有选自以下中任一种的结构：

45、、、、或，

46、其中，r4、r5、r6、r7、r8、r9、r10各自独立地选自氢、氘、氨基保护基基团、c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6卤代烷基、3-6元环烷基、或-(c=o)c1-6烷基。

47、在一些实施方式中，所述反应性磷基团可选自磷酸酯基团、硫代磷酸酯基团或亚磷酰胺类基团。

48、在一些实施方式中，所述反应性磷基团可为和。

49、在具体的实施方式中，所述氨基保护基基团选自以下中的任一种：苯甲酰基(bz)、乙酰基(ac)、苄氧羰基(cbz)、叔丁氧羰基(boc)、9-芴甲氧羰基(fmoc)、对甲氧基苄基(pmb)、苄基(bn)、三苯甲基(tr)、对甲苯磺酰基(tos)、邻苯二甲酰基(pht)、烯丙氧羰基(alloc)、三氟乙酰基(tfa)、异丁酰基（ibu）、或n-[(二甲基氨基)亚甲基]；优选自苯甲酰基(bz)、乙酰基(ac)、苄氧羰基(cbz)、叔丁氧羰基(boc)、9-芴甲氧羰基(fmoc)、异丁酰基（ibu）、或n-[(二甲基氨基)亚甲基]。

50、在一些实施方式中，所述羟基保护基选自以下中的任一种：甲氧基甲基醚(mom)、2-四氢吡喃(thp)、叔丁基二甲基硅基(tbs)、三甲基硅基(tms)、三乙基硅基(tes)、三苯甲基(tr)、4,4′-双甲氧基三苯甲基(dmtr)、4,4′,4′′-三甲氧基三苯甲基(tmtr)、苄基(bn)、苯甲酰基(bz)、乙酰基(ac)、对甲氧基苄基(pmb)、或叔丁基二苯基硅基（tbdps）；优选自三苯甲基(tr)、4,4′-双甲氧基三苯甲基(dmtr)、4,4′,4′′-三甲氧基三苯甲基(tmtr)、苄基(bn)、苯甲酰基(bz)、乙酰基(ac)、或叔丁基二苯基硅基（tbdps）。

51、在一些实施方式中，所述羟基保护基选自以下中的任一种：甲氧基甲基醚(mom)、2-四氢吡喃(thp)、叔丁基二甲基硅基(tbs)、三甲基硅基(tms)、三乙基硅基(tes)、三苯甲基(tr)、4,4′-双甲氧基三苯甲基(dmtr)、4,4′,4′′-三甲氧基三苯甲基(tmtr)、苄基(bn)、苯甲酰基(bz)、异丁酰基（ibu）、乙酰基(ac)、对甲氧基苄基(pmb)；优选自三苯甲基(tr)、4,4′-双甲氧基三苯甲基(dmtr)、4,4′,4′′-三甲氧基三苯甲基(tmtr)、苄基(bn)、苯甲酰基(bz)、异丁酰基（ibu）、或乙酰基(ac)。

52、在一些实施方式中，x优选为o。

53、在优选的实施方式中，r1选自反应性磷基团（例如），rib选自氢或羟基保护基。

54、ria选自氢、羟基、f、甲氧基、-o-ch2-ch2-o-ch3或-ch2-ch2-ch=ch2。

55、在一些实施方式中，r10选自氢、氘、c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6卤代烷基、3-6元环烷基、或-(c=o)c1-6烷基。

56、在一些实施方式中，r4、r5、r6、r7、r8、r9、r10各自独立地选自氢、氘、氨基保护基基团、c1-3烷基、c1-3烷氧基、c1-3卤代烷基、3-6元环烷基、或-(c=o)c1-3烷基。

57、在一些实施方式中，r4、r5、r6、r7、r8、r9、r10各自独立地选自氢、氨基保护基基团、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基乙基、环丙基、氟甲基、二氟甲基、或乙酰基。

58、在一些实施方式中，r4或r5各自独立地选自氢、氨基保护基基团或c1-3烷基。

59、在一些实施方式中，r6或r7各自独立地选自氢或氨基保护基基团。

60、在一些实施方式中，r8或r9各自独立地选自氢或氨基保护基基团。

61、在优选的实施方式中，r10为氢或c1-3烷基，优选氢或甲基。

62、在一些实施方式中，所述base选自以下中任一种：

63、、、或，

64、其中，r5、r7或r9各自独立地选自氢、氨基保护基基团或c1-3烷基，r10选自氢或c1-6烷基；优选地，r10选自氢或c1-3烷基（例如甲基）。

65、在一些实施方式中，式（i）所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体、氘代物、溶剂化物或前药中两个base可相同或不同。例如，当一个base选自修饰或未修饰的u，另个base可选自修饰或未修饰a、c、g或t。或者，例如，当一个base选自修饰或未修饰的u，另个base可选自修饰或未修饰的u。示例性地，式（i）所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体、氘代物、溶剂化物或前药可为

66、。

67、在一些方面，本技术还提供了以下的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体、氘代物或溶剂化物：

68、、、、、、、、、、、、、、、、、、。

69、寡核苷酸

70、在一方面，本技术涉及寡核苷酸，特别是双链核糖核酸（dsrna）。

71、在一些实施方式中，所述双链核糖核酸的一条链为反义链，反义链与靶基因在表达过程中形成的mrna序列互补配对，用于指导对靶mrna（也即，靶基因的转录产物）的切割。所述双链核糖核酸中另一条正义链包括与反义链至少部分互补（包括与反义链完全互补）形成双链核糖核酸的双链区的序列。

72、在一些实施方式中，所述双链核糖核酸作为核酸内切酶（dicer）的底物，被切割为小片段的dsrna，也即sirna。在一些实施方案中，所述双链核糖核酸为sirna。sirna通过装配形成rna诱导的沉默复合物（rna-induced silencing complex，risc）risc复合体，切割靶mrna，抑制靶基因的表达。

73、所述双链核糖核酸包含正义链和反义链，其中反义链与靶基因互补；正义链与所述反义链互补。

74、在一些实施方式中，所述反义链包含与靶标序列中至少15个连续核苷酸的反向互补序列的差异不超过3个核苷酸的序列b。具体地，沿5’末端向3’末端的方向，在靶标序列中选择起始核苷酸，以包含起始核苷酸在内的向3’方向延伸的至少15个核苷酸作为sirna的结合区域。反义链包含结合区域对应的核苷酸序列的反向互补序列。需要说明的是，起始核苷酸可以是靶标序列任意位置处的核苷酸，只要基于该起始核苷酸向靶标序列3’方向延伸，可以得到至少15个连续核苷酸（包含起始位置处的核苷酸）即可。

75、在本发明中，反义链的核苷酸序列与靶标序列可以是完全互补或基本上互补。当反义链的核苷酸序列与靶标序列基本上互补时，反义链的核苷酸序列中存在与靶标序列具有不超过3个的错配碱基。例如，错配碱基为1个、2个或3个。当反义链的核苷酸序列与靶标序列完全互补时，反义链的核苷酸序列与靶标序列不存在错配碱基。

76、进一步地，反义链由至少15个核苷酸组成。在一些实施方式中，反义链由15-28个核苷酸组成。例如，反义链的长度为15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28个核苷酸。作为优选，反义链由18-25个核苷酸组成，更优选18-23个核苷酸，最优选19、21或23个核苷酸。

77、在一些实施方式中，所述正义链包含与靶标序列中至少15个连续核苷酸的差异不超过3个核苷酸的序列a。正义链中包括与反义链互补的区域，正义链的核苷酸序列与反义链在靶标序列上结合区域的序列完全相同或基本上完全相同。因此，正义链的核苷酸序列包含或为靶标序列中结合反义链的至少15个连续核苷酸；或者，正义链的核苷酸序列与靶标序列中结合反义链的至少15个连续核苷酸相比，存在1个、2个或3个碱基不同的差异核苷酸。

78、进一步地，正义链由至少15个核苷酸组成。在一些实施方式中，正义链由15-28个核苷酸组成。例如，正义链的长度为15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28个核苷酸。作为优选，正义链由18-25个核苷酸组成，更优选18-23个核苷酸，最优选19、21或23个核苷酸。

79、在一些具体的实施方式中，优选与靶标序列具有差异的核苷酸位于正义链的末端。例如，在一些具体的实施方式中，存在差异的核苷酸位于正义链的3’末端。在另一些具体的实施方式中，存在差异的核苷酸位于正义链的5’末端。

80、在本公开中，正义链的长度与反义链的长度可以相同或不同。

81、在一些实施方式中，正义链与反义链的长度相同，具体地，正义链/反义链的长度比为15/15、16/16、17/17、18/18、19/19、20/20、21/21、22/22、23/23、24/24、25/25、26/26、27/27或28/28。作为优选，正义链/反义链的长度比为18/18、19/19、20/20、21/21、22/22、23/23、24/24或25/25，更优选19/19、20/20、21/21、22/22或23/23，最优选19/19、21/21或23/23。

82、在一些实施方式中，正义链与反义链的长度不同。例如，正义链/反义链的长度比为18/19、18/20、18/21、18/22、18/23、18/24、18/25、18/26、19/18、19/20、19/21、19/22、19/23、19/24、19/25、19/26、20/19、20/21、20/22、20/23、20/24、20/25、20/26、21/18、21/19、21/20、21/22、21/23、21/24、21/25、21/26、22/18、22/19、22/20、22/21、22/23、22/24、22/25、22/26、23/19、23/20、23/21、23/22、23/24、23/25或23/26等。在一些优选的实施方式中，正义链/反义链的长度比为19/21或21/23。

83、在本公开中，正义链与反义链可以是完全互补或基本上互补，当两者基本上互补时，正义链与反义链形成的双链区内存在不超过3个错配碱基。

84、在一些实施方式中，所述双链核糖核酸的正义链的核苷酸序列包含序列a和任选的序列d，所述正义链中序列a的3’末端连接由1-2个核苷酸组成的序列d，序列d优选为1-2个胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸；和/或，所述双链核糖核酸的反义链的核苷酸序列包含序列b和任选的序列e，所述反义链中序列b的3’末端连接由1-2个核苷酸组成的序列e，序列e优选为1-2个胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸。

85、在一些实施方式中，所述正义链与反义链至少部分互补形成双链区后，正义链、反义链或其二者具有延伸出所述双链区的突出的核苷酸。突出的核苷酸的数量可以是1个或多个，例如，1个或2个。另外，突出的1-2个核苷酸可以位于任意反义链或正义链的5’末端、3’末端或两端，并且，每一个突出的核苷酸可以是任意类型的核苷酸。

86、例如，在正义链由长度为21的序列a+序列d组成，反义链由长度为21的序列b+序列e组成的情况下，按5’末端向3’末端的方向，序列a的第1-19位核苷酸与序列b的第1-19位完全反向互补，从而序列d和序列e分别在其所在链的3’末端形成突出的核苷酸。例如，在正义链由长度为19的序列a组成，反义链由长度为21的序列b+e组成的情况下，按5’末端向3’末端的方向，序列a的第1-19位核苷酸与序列b的第1-19位完全反向互补，从而在序列e在反义链的3’末端形成突出的核苷酸。

87、在一些实施方案中，所述正义链与所述反义链至少部分互补形成所述双链区，且所述正义链的3’末端具有1-2个延伸出所述双链区的突出的核苷酸，所述反义链的3’末端形成平末端。在一些实施方案中，所述正义链与所述反义链至少部分互补形成所述双链区，且所述反义链的3’末端具有1-2个延伸出所述双链区的突出的核苷酸，所述正义链的3’末端形成平末端。在一些实施方案中，所述正义链与所述反义链至少部分互补形成所述双链区，且所述正义链与所述反义链的3’末端均具有1-2个延伸出所述双链区的突出的核苷酸。在一些实施方案中，所述正义链与所述反义链至少部分互补形成所述双链区，且所述正义链与所述反义链的3’末端均形成平末端。

88、在一些实施方案中，正义链的每个核苷酸彼此独立地为修饰的核苷酸或未修饰的核苷酸。在一些实施方案中，反义链的每个核苷酸彼此独立地为修饰的核苷酸或未修饰的核苷酸。

89、在一些实施方案中，正义链的每个核苷酸彼此独立地为修饰的核苷酸或未修饰的核苷酸。在一些实施方案中，反义链的每个核苷酸彼此独立地为修饰的核苷酸或未修饰的核苷酸。

90、在一些实施方案中，正义链和/或反义链中包含磷酸二酯键，以及其修饰。所述磷酸二酯键的修饰包括任意相连的两个核苷酸之间的硫代磷酸二酯键、甲基膦酸酯键、硼烷磷酸酯键、磷酰胺二酯键或酰胺键连接。例如，所述正义链中任意相连的两个核苷酸之间的磷酸二酯键、硫代磷酸二酯键、甲基膦酸酯键、硼烷磷酸酯键、磷酰胺二酯键或酰胺键连接。在一些实施方案中，所述正义链中任意相连的两个核苷酸之间的磷酸二酯键、硫代磷酸二酯键、甲基膦酸酯键、硼烷磷酸酯键、磷酰胺二酯键或酰胺键连接。

91、在一些实施方案中，正义链中任意相连的两个核苷酸由磷酸二酯键、硫代磷酸二酯键、或酰胺键连接。在一些实施方案中，反义链中任意相连的两个核苷酸由磷酸二酯键、硫代磷酸二酯键、或酰胺键连接。

92、在一些实施方案中，正义链中任意相连的两个核苷酸由磷酸二酯键或硫代磷酸二酯键连接。在一些实施方案中，反义链中任意相连的两个核苷酸由磷酸二酯键或硫代磷酸二酯键连接。

93、在一些实施方案中，所述正义链的5’末端核苷酸的核糖基团为5’羟基。

94、在一些实施方案中，所述反义链的5’末端核苷酸的核糖基团具有：5’羟基、5’磷酸酯基团或5’磷酸衍生基团。核糖基团的5’位置具有何种基团，取决于所用的制备方法，这是本领域技术人员能够根据相应的制备方法知晓的。

95、位于反义链的5’末端核苷酸的核糖基团具有5’磷酸酯基团或5’磷酸衍生基团的情况下，形成如下所示结构：

96、，，；其中，base表示核碱基，例如a、u、g、c或t；r’为羟基或氢或被本领域技术人员所知晓的各类基团所取代，例如，2’-氟代（2’-f）修饰的核苷酸，2’-烷氧基修饰的核苷酸，2’-取代的烷氧基修饰的核苷酸，2’-烷基修饰的核苷酸，2’-取代的烷基修饰的核苷酸，2’-脱氧核糖核苷酸。

97、在本文中，正义链和/或反义链的5’末端核苷酸的核糖基团不具有5’磷酸酯基团或5’磷酸衍生基团而具有羟基时，该5’末端核苷酸的结构如下式所示：

98、，

99、其中，base表示核碱基，例如a、u、g、c或t，r为羟基或氢或被本领域技术人员所知晓的各类基团所取代，例如，r可以为2’-氟代（2’-f）、2’-烷氧基、2’-取代的烷氧基、2’-烷基、2’-取代的烷基、2’-氨基、2’-取代的氨基。

100、寡核苷酸的修饰物和缀合物

101、本公开的第二方面提供一种双链核糖核酸的修饰物。进一步地，所述双链核糖核酸修饰物为sirna修饰物。

102、在一些实施方案中，双链核糖核酸的修饰物包含至少一个核苷酸的修饰。

103、在本公开中，所述双链核糖核酸的修饰物包括选自核苷酸的修饰、核苷酸衍生物修饰、磷酸二酯键的修饰、5’-末端修饰中的任一种或多种的修饰。

104、在本文中，“核苷酸的修饰”是指核苷酸的核糖基团2’位羟基被其他基团取代形成的核苷酸或核苷酸衍生物，或者核苷酸上的核碱基是经修饰的核碱基的核苷酸。所述核苷酸的修饰不会导致sirna抑制基因表达的功能明显削弱或丧失。例如，可以选择j. k.watts, g.f. deleavey, and m.j. damha, chemically modified sirna: tools andapplications. drug discov today, 2008, 13(19-20): 842-55中公开的修饰的核苷酸。通过核苷酸的修饰可以提高sirna的稳定性，并保持其对靶基因的高抑制效率。

105、示例性地，修饰的核苷具有如下所示结构：

106、；其中，base表示核碱基，例如a、u、g、c或t，核糖基团2’位的羟基被r取代。这些核糖基团2’位的羟基可以为本领域技术人员所知晓的各类基团所取代，例如，r可以选自卤素、烷基、烷氧基、取代的烷基以及取代的烷氧基。例如，在一些具体的实施方式中，所述修饰的核苷酸包括但不限于2’-氟代（2’-f）修饰的核苷酸、2’-烷氧基修饰的核苷酸、2’-取代的烷氧基修饰的核苷酸、2’-烷基修饰的核苷酸、2’-取代的烷基修饰的核苷酸、2’-脱氧核糖核苷酸。

107、在一些实施方式中，2’-烷氧基修饰的核苷酸为2’-甲氧基（2’-ome，2’-o-ch3）修饰的核苷酸等。

108、在一些实施方式中，2’-取代的烷氧基修饰的核苷酸为2’-甲氧基乙氧基（2’-o-ch2-ch2-o-ch3）修饰的核苷酸、2’-o-ch2-ch=ch2修饰的核苷酸等。

109、在一些实施方式中，2’-取代的烷基修饰的核苷酸为2’-ch2-ch2-ch=ch2修饰的核苷酸等。

110、在一些实施方式中，核苷酸的修饰是核碱基的修饰。核碱基的修饰可以是本领域技术人员所知晓的各类型修饰。示例性地，核碱基的修饰包括但不限于ψ、inosine（i）、cm、um、gm或其衍生物。

111、在本文中，核苷酸衍生物可指能够在核酸中代替核苷酸，但结构不同于腺嘌呤核糖核苷酸、鸟嘌呤核糖核苷酸、胞嘧啶核糖核苷酸、尿嘧啶核糖核苷酸或胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸的化合物。在一些实施方式中，核苷酸衍生物可以是异核苷酸、脱碱基残基、桥联的核苷酸(bridged nucleic acid，简称bna)或无环核苷酸。bna是指受约束的或不能接近的核苷酸。bna可以含有五元环、六元环、或七元环的具有“固定的”c3’-内切糖缩拢的桥联结构。通常将该桥掺入到该核糖的2’-、4’-位处以提供一个2’,4’-bna核苷酸，如lna、ena、cet等。

112、例如，lna的核苷如式（1）所示，ena的核苷如式（2）所示，cet的核苷如式（3）所示：

113、

114、式（1） 式（2） 式（3），

115、其中，base指核碱基，如a、u、g、c或t。

116、无环核苷酸是核苷酸的糖环被打开形成的一类核苷酸，如解锁核酸（una）或甘油核酸（gna）。其中，una如式（4）所示，gna如式（5）所示：

117、

118、式（4） 式（5），

119、上述式（4）和式（5）中，base指核碱基，ra各自独立地选自h、oh或烷氧基（-o-c1-6烷基）。

120、在一些实施方式中，核苷酸衍生物可包括来自本技术上述所述式（i）的化合物的核苷酸类似物，即来自式（i）所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体或氘代物的核苷酸类似物。

121、在一些实施方式中，核苷酸衍生物修饰是指核酸中的核苷酸被替代为核苷酸衍生物。示例性地，核苷酸衍生物选自异核苷酸、脱碱基残基、lna、ena、cet、una、gna或本技术所述的核苷酸类似物。在本技术中，当包含来自本技术式（i）所示的化合物的核苷酸类似物时，优选地，其中的核碱基优选地与所替代的核苷酸的核碱基相同。或者，在本技术中，当包含来自本技术式（i）所示的化合物的核苷酸类似物时，优选地，其中的核碱基优选地保持与所述双链核糖核酸的另一条链的对应核苷酸上的核碱基符合沃森-克里克的碱基互补配对原则。

122、在一些实施方式中，双链核糖核酸中的核苷酸被替代为异核苷酸，在本公开的上下文中，也称之为异核苷修饰。在一些实施方式中，异核苷修饰包括在欲修饰的双链核糖核酸（例如sirna）的正义链和/或反义链的一个或多个位点掺入异核苷，以代替天然核苷在相应位置进行偶联。

123、在一些实施方式中，异核苷修饰采用d-异核苷修饰。在另一些实施方式中，异核苷修饰采用l-异核苷修饰。在又一些实施方式中，异核苷修饰采用d-异核苷修饰和l-异核苷修饰。

124、在一些实施方式中，正义链可包含一个或多个封端残基或部分，在本领域中有时称为“帽”、“末端帽”或“封端残基”。如本文所用，“封端残基”是指可以并入本文公开的双链核糖核酸（例如sirna）的核苷酸序列中的一个或多个末端处的非核苷酸化合物或其它结构单元。在一些情况下，封端残基可以为双链核糖核酸（例如sirna）提供某些有益的特性，例如针对核酸外切酶降解的保护。在一些实施方式中，添加反向脱碱基脱氧核糖残基(invab)作为封端残基。在一些实施方式中，封端残基出现在正义链的3’末端或5’和3’末端两者。

125、在一些实施方式中，将一个或多个反向脱碱基脱氧核糖残基(invab)添加至正义链的3’末端。在一些实施方式中，将一个或多个反向脱碱基脱氧核糖残基(invab)添加至正义链的5’末端和正义链的3’末端。在一些实施方式中，反向脱碱基脱氧核糖残基可经由磷酸酯键、硫代磷酸酯键或其它核苷间键连接。在描述修饰方法中的修饰位点时，(invab)不作为核苷酸序列的第1位点计算在内。其中，(invab)可具有如下所示的结构：

126、当位于3’末端时为；当位于5’末端时为 。

127、在一些实施方式中，修饰的双链核糖核酸包含至少一个位置处的磷酸二酯键的修饰，例如硫代磷酸酯修饰、硫代磷酸酯修饰、甲基膦酸酯修饰、甲氧基丙基膦酸酯、酰胺键修饰。在一些实施方式中，修饰的双链核糖核酸包含任意相连的两个核苷酸之间的硫代磷酸二酯键、甲基膦酸酯键、硼烷磷酸酯键、磷酰胺二酯键或酰胺键连接。

128、在一些实施方式中，磷酸二酯键的修饰是指磷酸二酯键中一个氧原子被硫原子取代形成硫代磷酸二酯键。硫代磷酸二酯键可以稳定双链核糖核酸（例如sirna）的双链结构，保持碱基配对的特异性。示例性地，硫代磷酸二酯键结构如下所示：

129、。

130、在一些实施方式中，5’-末端修饰包括5’末端的磷酸酯修饰，例如，在正义链和/或反义链的5’末端的核苷酸具有5’磷酸衍生基团，包括5’-(e)-乙烯基膦酸酯（5’-(e)-vp，也称为evp）、5’-甲基膦酸酯（5’-mp）和(s)-5’-c-甲基类似物。

131、在一些实施方式中，反义链和/或正义链的5’末端核苷酸的核糖基团可具有5’羟基。作为示例，位于反义链的5’末端核苷酸的核糖基团具有5’磷酸酯基团或5’磷酸衍生基团的情况下，形成如下所示结构：

132、，，；其中，base表示核碱基，例如a、u、g、c或t；r’各自独立地选自羟基或氢或被本领域技术人员所知晓的各类基团所取代，例如，r’可以为2’-氟代（2’-f）、2’-烷氧基、2’-取代的烷氧基、2’-烷基、2’-取代的烷基、2’-氨基、2’-取代的氨基。

133、在本文中，正义链和/或反义链的5’末端核苷酸的核糖基团不具有5’磷酸酯基团或5’磷酸衍生基团而具有羟基时，该5’末端核苷酸的结构如下式所示：

134、，

135、其中，base表示核碱基，例如a、u、g、c或t，r为羟基或氢或被本领域技术人员所知晓的各类基团所取代，例如，r可以为2’-氟代（2’-f）、2’-烷氧基、2’-取代的烷氧基、2’-烷基、2’-取代的烷基、2’-氨基、2’-取代的氨基。

136、在一些实施方式中，所述双链核糖核酸的修饰物还包含如下至少一种的化学修饰：

137、(1)正义链中至少一个核苷酸的修饰，

138、(2)正义链中至少一个位置处的磷酸二酯键的修饰，

139、(3)反义链中至少一个核苷酸的修饰，

140、(4)反义链中至少一个位置处的磷酸二酯键的修饰。

141、进一步地，双链核糖核酸的修饰物是包含(1)-(4)中至少一种化学修饰的sirna修饰物。

142、在一些实施方式中，沿5’末端向3’末端方向，双链核糖核酸修饰物的正义链包括如下修饰：正义链的序列a中第3-11位的核糖核苷酸中的至少3个（例如至少3-6个，如3、4、5或6个）为2’-氟代修饰的核糖核苷酸。例如，沿5’末端向3’末端方向，双链核糖核酸修饰物的正义链包括如下修饰：正义链的序列a中第3位、第5位、第7位、第8位、第9位、第10位和第11位的核糖核苷酸中的至少3个（例如3、4、5或6个）为2’-氟代修饰的核糖核苷酸。例如，沿5’末端向3’末端方向，双链核糖核酸修饰物的正义链包括如下修饰：正义链的序列a中第3位、第5位、第7位、第8位、第9位和第11位的核糖核苷酸中的至少3个（例如3、4、5或6个）为2’-氟代修饰的核糖核苷酸。

143、在进一步优选的实施方式中，正义链的序列a中其他位置的核糖核苷酸可为2’-甲氧基修饰的核糖核苷酸。在一些实施方式中，正义链还可具有一个或多个核苷酸衍生物修饰。

144、在一些实施方式中，沿5’末端向3’末端方向，双链核糖核酸修饰物的正义链包括如下修饰：正义链的序列a中第5位、第7位、第8位和第9位的核糖核苷酸为2’-氟代修饰的核糖核苷酸；任选地，正义链的序列a中其他位置的核糖核苷酸为2’-甲氧基修饰的核糖核苷酸；

145、或者，在一些实施方式中，沿5’末端向3’末端方向，双链核糖核酸修饰物的正义链包括如下修饰：正义链的序列a中第3位、第7位、第8位和第9位的核糖核苷酸为2’-氟代修饰的核糖核苷酸；任选地，正义链的序列a中其他位置的核糖核苷酸为2’-甲氧基修饰的核糖核苷酸；

146、或者，在一些实施方式中，沿5’末端向3’末端方向，双链核糖核酸修饰物的正义链包括如下修饰：正义链的序列a中第3位、第7位、第9位和第11位的核糖核苷酸为2’-氟代修饰的核糖核苷酸；任选地，正义链的序列a中其他位置的核糖核苷酸为2’-甲氧基修饰的核糖核苷酸；

147、或者，在一些实施方式中，沿5’末端向3’末端方向，双链核糖核酸修饰物的正义链包括如下修饰：正义链的序列a中第7位、第9位、第10位和第11位的核糖核苷酸为2’-氟代修饰的核糖核苷酸；任选地，正义链的序列a中其他位置的核糖核苷酸为2’-甲氧基修饰的核糖核苷酸。

148、在一些实施方式中，当所述正义链的5’末端和3’末端都不连接(invab)时，所述正义链包含位于如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：

149、所述正义链5’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间；

150、所述正义链5’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间；

151、所述正义链3’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间；和/或

152、所述正义链3’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间；

153、或者，

154、所述正义链包含位于如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：

155、所述正义链5’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间；和/或

156、所述正义链5’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间。

157、在一些实施方式中，当所述正义链的仅5’末端连接一个(invab)时，所述正义链包含位于如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：

158、所述正义链5’末端的(invab)和5’末端起始的第1个核苷酸之间；

159、所述正义链5’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间。

160、在一些实施方式中，当所述正义链的仅3’末端连接一个(invab)时，所述正义链包含位于如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：

161、所述正义链5’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间；

162、所述正义链5’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间；

163、所述正义链3’末端的(invab)和3’末端起始的第1个核苷酸之间。

164、在一些实施方式中，当所述正义链的5’末端和3’末端分别连接一个(invab)时，所述正义链包含位于如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：

165、所述正义链5’末端的(invab)和5’末端起始的第1个核苷酸之间；

166、所述正义链5’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间；

167、所述正义链3’末端的(invab)和3’末端起始的第1个核苷酸之间。

168、在一些实施方式中，正义链的5’末端核苷酸的核糖基团为5’羟基。

169、在一些实施方式中，正义链的5’末端核苷酸的核糖基团的具有5’羟基的核苷酸结构如式x所示：

170、(式x)

171、其中，base表示核碱基，例如a、u、g、c或t；r为羟基或被本领域技术人员所知晓的各类基团所取代，例如，r可以为2’-氟代（2’-f）、2’-烷氧基、2’-取代的烷氧基、2’-烷基、2’-取代的烷基、2’-氨基、2’-取代的氨基、2’-脱氧核苷酸。

172、在一些实施方式中，沿5’末端向3’末端方向，sirna修饰物的正义链包括如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：5’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间，5’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间，3’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间，以及3’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间。

173、在一些实施方式中，沿5’末端向3’末端方向，sirna修饰物的正义链包括如下位置处的硫代磷酸二酯键：5’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间、5’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间。

174、在一些实施方式中，沿5’末端向3’末端方向，双链核糖核酸修饰物的反义链包括如下修饰：反义链的序列b中第2-16位的核糖核苷酸中的至少3个（例如至少3-7个，如3、4、5、6或7个）为2’-氟代修饰的核糖核苷酸。例如，沿5’末端向3’末端方向，双链核糖核酸修饰物的反义链包括如下修饰：反义链的序列b中第2位、第6位、第7位、第8位、第9位、第10位、第14位和第16位的核糖核苷酸中的至少3个（例如3、4、5、6或7个）为2’-氟代修饰的核糖核苷酸。例如，沿5’末端向3’末端方向，双链核糖核酸修饰物的反义链包括如下修饰：反义链的序列b中第2位、第6位、第7位、第10位、第14位和第16位的核糖核苷酸中的至少3个（例如3、4、5、6或7个）为2’-氟代修饰的核糖核苷酸。

175、在进一步优选的实施方式中，反义链的序列b中其他位置的核糖核苷酸可为2’-甲氧基修饰的核糖核苷酸。

176、在一些实施方式中，反义链还可具有一个或多个核苷酸衍生物修饰，例如gna或来自本技术上述的式（i）所示的化合物的核苷酸类似物。

177、在一些实施方式中，沿5’末端向3’末端方向，双链核糖核酸修饰物的反义链包括如下修饰：所述反义链的序列b中第2位、第6位、第14位和第16位的核糖核苷酸为2’-氟代修饰的核糖核苷酸；任选地，反义链的序列b中可具有一个或多个核苷酸衍生物修饰，例如gna或来自本技术上述的式（i）所示的化合物的核苷酸类似物，并且所述反义链的序列b中其余位置的核糖核苷酸为2’-甲氧基修饰的核糖核苷酸。例如，沿5’末端向3’末端方向，双链核糖核酸修饰物的反义链包括如下修饰：所述反义链的序列b中第2位、第6位、第14位和第16位的核糖核苷酸为2’-氟代修饰的核糖核苷酸；所述反义链的序列b中其余位置的核糖核苷酸为2’-甲氧基修饰的核糖核苷酸。

178、在一些实施方式中，沿5’末端向3’末端方向，双链核糖核酸修饰物的反义链包括如下修饰：所述反义链的序列b中第2位、第7位、第10位和第14位的核糖核苷酸为2’-氟代修饰的核糖核苷酸；任选地，反义链的序列b中可具有一个或多个核苷酸衍生物修饰，例如gna或来自本技术上述的式（i）所示的化合物的核苷酸类似物，并且所述反义链的序列b中其余位置的核糖核苷酸为2’-甲氧基修饰的核糖核苷酸。例如，沿5’末端向3’末端方向，双链核糖核酸修饰物的反义链包括如下修饰：所述反义链的序列b中第2位、第7位、第10位和第14位的核糖核苷酸为2’-氟代修饰的核糖核苷酸；所述反义链的序列b中其余位置的核糖核苷酸为2’-甲氧基修饰的核糖核苷酸。

179、在一些实施方式中，沿5’末端向3’末端方向，双链核糖核酸修饰物的反义链包括如下修饰：所述反义链的序列b中第2位、第14位和第16位的核糖核苷酸为2’-氟代修饰的核糖核苷酸；任选地，反义链的序列b中可具有一个或多个核苷酸衍生物修饰，例如gna或来自本技术上述的式（i）所示的化合物的核苷酸类似物，并且所述反义链的序列b中其余位置的核糖核苷酸为2’-甲氧基修饰的核糖核苷酸。在具体的实施方式中，沿5’末端向3’末端方向，双链核糖核酸修饰物的反义链包括如下修饰：所述反义链的序列b中第2位、第14位和第16位的核糖核苷酸为2’-氟代修饰的核糖核苷酸；所述反义链中第6位的核糖核苷酸为核苷酸衍生物gna修饰的核糖核苷酸或来自本技术上述的式（i）所示的化合物的核苷酸类似物；所述反义链中其余位置的核糖核苷酸为2’-甲氧基修饰的核糖核苷酸。

180、在一些实施方式中，沿5’末端向3’末端方向，双链核糖核酸修饰物的反义链包括如下修饰：所述反义链的序列b中第2位、第6位、第14位和第16位的核糖核苷酸为2’-氟代修饰的核糖核苷酸；任选地，反义链的序列b中可具有一个或多个核苷酸衍生物修饰，例如gna或来自本技术上述的式（i）所示化合物的核苷酸类似物，并且所述反义链的序列b中其余位置的核糖核苷酸为2’-甲氧基修饰的核糖核苷酸。例如，沿5’末端向3’末端方向，双链核糖核酸修饰物的反义链包括如下修饰：所述反义链的序列b中第2位、第6位、第14位和第16位的核糖核苷酸为2’-氟代修饰的核糖核苷酸，所述反义链的序列b中第7位的核糖核苷酸为核苷酸衍生物gna修饰的核糖核苷酸或来自本技术上述的式（i）所示化合物的核苷酸类似物，所述反义链的序列b中其余位置的核糖核苷酸为2’-甲氧基修饰的核糖核苷酸。

181、在一些实施方式中，沿5’末端向3’末端方向，双链核糖核酸修饰物的反义链包括如下修饰：所述反义链的序列b中第2位、第7位、第10位和第14位的核糖核苷酸为2’-氟代修饰的核糖核苷酸；任选地，反义链的序列b中可具有一个或多个核苷酸衍生物修饰，例如gna或来自本技术上述的式（i）所示化合物的核苷酸类似物，并且所述反义链的序列b中其余位置的核糖核苷酸为2’-甲氧基修饰的核糖核苷酸。例如，双链核糖核酸修饰物的反义链包括如下修饰：所述反义链的序列b中第2位、第7位、第10位和第14位的核糖核苷酸为2’-氟代修饰的核糖核苷酸，所述反义链的序列b中第6位的核糖核苷酸为核苷酸衍生物gna修饰的核糖核苷酸或来自本技术上述的式（i）所示化合物的核苷酸类似物，所述反义链的序列b中其余位置的核糖核苷酸为2’-甲氧基修饰的核糖核苷酸。

182、在一些实施方式中，沿5’末端向3’末端方向，双链核糖核酸修饰物的反义链包括如下修饰：所述反义链的序列b中第2位、第10位和第14位的核糖核苷酸为2’-氟代修饰的核糖核苷酸；任选地，反义链的序列b可具有一个或多个核苷酸衍生物修饰，例如gna或来自本技术上述的式（i）所示化合物的核苷酸类似物，并且所述反义链的序列b中其余位置的核糖核苷酸为2’-甲氧基修饰的核糖核苷酸。例如，沿5’末端向3’末端方向，双链核糖核酸修饰物的反义链包括如下修饰：所述反义链的序列b中第2位、第10位和第14位的核糖核苷酸为2’-氟代修饰的核糖核苷酸，所述反义链的序列b中第7位的核糖核苷酸为核苷酸衍生物gna修饰的核糖核苷酸或来自本技术上述的式（i）所示化合物的核苷酸类似物，所述反义链的序列b中其余位置的核糖核苷酸为2’-甲氧基修饰的核糖核苷酸。

183、在一些实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，双链核糖核酸修饰物的反义链包括如下修饰：所述反义链的序列b中第2位、第6位、第8位、第9位、第14位和第16位的核糖核苷酸为2’-氟代修饰的核糖核苷酸；任选地，反义链的序列b可具有一个或多个核苷酸衍生物修饰，例如gna或来自本技术上述的式（i）所示化合物的核苷酸类似物，并且所述反义链的序列b中其余位置的核糖核苷酸为2’-甲氧基修饰的核糖核苷酸。例如，沿5’末端向3’末端方向，双链核糖核酸修饰物的反义链包括如下修饰：所述反义链的序列b中第2位、第6位、第8位、第9位、第14位和第16位的核糖核苷酸为2’-氟代修饰的核糖核苷酸，所述反义链的序列b中第7位的核糖核苷酸为核苷酸衍生物gna修饰的核糖核苷酸或来自本技术上述的式（i）所示化合物的核苷酸类似物，所述反义链的序列b中其余位置的核糖核苷酸为2’-甲氧基修饰的核糖核苷酸。

184、在一些实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，双链核糖核酸修饰物的反义链包括如下修饰：所述反义链的序列b中第2位、第8位、第9位、第14位和第16位的核糖核苷酸为2’-氟代修饰的核糖核苷酸；任选地，反义链的序列b可具有一个或多个核苷酸衍生物修饰，例如gna或来自本技术上述的式（i）所示化合物的核苷酸类似物，并且所述反义链的序列b中其余位置的核糖核苷酸为2’-甲氧基修饰的核糖核苷酸。例如，沿5’末端向3’末端方向，双链核糖核酸修饰物的反义链包括如下修饰：所述反义链的序列b中第2位、第8位、第9位、第14位和第16位的核糖核苷酸为2’-氟代修饰的核糖核苷酸，所述反义链的序列b中第6或7位的核糖核苷酸为核苷酸衍生物gna修饰的核糖核苷酸或来自本技术上述的式（i）所示化合物的核苷酸类似物，所述反义链的序列b中其余位置的核糖核苷酸为2’-甲氧基修饰的核糖核苷酸。

185、在一些实施方式中，沿5’末端向3’末端方向，双链核糖核酸修饰物的反义链包括如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：5’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间、5’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间、3’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间、和/或3’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间。

186、在一些实施方式中，沿5’末端向3’末端方向，双链核糖核酸修饰物的反义链包括如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：5’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间、5’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间、3’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间、以及3’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间。

187、在一些实施方式中，反义链还可具有一个或多个核苷酸衍生物修饰，例如gna或来自本技术上述的式（i）所示的化合物的核苷酸类似物，并且所述具有核苷酸衍生物修饰的核苷与其相邻的核苷之一或二者之间具有磷酸二酯键、硫代磷酸二酯键或酰胺键。例如，反义链的序列b中第6或7位的核糖核苷酸为核苷酸衍生物gna修饰的核糖核苷酸或来自本技术上述的式（i）所示化合物的核苷酸类似物，其与第5或6位核苷酸之间可具有硫代磷酸二酯键或酰胺键。

188、在一些实施方式中，所述反义链的5’末端核苷酸的核糖基团具有：5’羟基、5’磷酸酯基团或5’磷酸衍生基团。核糖基团的5’位置具有何种基团，取决于所用的制备方法，这是本领域技术人员能够根据相应的制备方法知晓的。

189、在一些实施方式中，位于反义链的5’末端核苷酸的核糖基团具有5’磷酸酯基团或5’磷酸衍生基团的情况下，形成如下所示结构：

190、，，；其中，base表示核碱基，例如a、u、g、c或t；r’各自独立地为羟基或氢或被本领域技术人员所知晓的各类基团所取代，例如，2’-氟代（2’-f）修饰的核苷酸、2’-烷氧基修饰的核苷酸、2’-取代的烷氧基修饰的核苷酸、2’-烷基修饰的核苷酸、2’-取代的烷基修饰的核苷酸、2’-脱氧核糖核苷酸。

191、包含本技术的核苷单体的寡核苷酸的修饰物

192、在一个方面，本技术提供了寡核苷酸的修饰物，所述寡核苷酸的修饰物中的一个或多个核苷被式（ii）所示的核苷单体所替代，

193、式（ii），

194、其中，x选自o或者s；

195、其中，r2选自氢、氘或c1-3烷基；

196、其中，base代表未修饰或经修饰的核碱基，所述未修饰或经修饰的核碱基具有选自以下中任一种的结构：

197、、、、或，

198、其中，r4、r5、r6、r7、r8、r9、r10各自独立地选自氢、氘、c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6卤代烷基、3-6元环烷基、或-(c=o)c1-6烷基。

199、在一些实施方式中，所述寡核苷酸的修饰物为双链核糖核酸（dsrna）的修饰物，所述双链核糖核酸包含正义链和反义链，每条链具有15-40个核苷酸；按照5'末端到3'末端方向，所述反义链的第2-8位中的至少一个核苷被式（ii）所示的核苷单体所替代。在一些实施方式中，按照5'末端到3'末端方向，所述反义链中序列b的第2-8位中的1、2、3或4核苷被式（ii）所示的核苷单体所替代。

200、在一些实施方式中，所述寡核苷酸的修饰物为双链核糖核酸（dsrna）的修饰物，所述双链核糖核酸包含正义链和反义链，每条链具有15-40个核苷酸；按照5'末端到3'末端方向，所述反义链的第2-8位中的至少一个核苷被式（ii）所示的核苷单体所替代：

201、式（ii），

202、其中，x选自o或者s；

203、其中，r2选自氢、氘或c1-3烷基；

204、其中，base代表未修饰或经修饰的核碱基，所述未修饰或经修饰的核碱基具有选自以下中任一种的结构：

205、、、、或，

206、其中，r4、r5、r6、r7、r8、r9、r10各自独立地选自氢、氘、c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6卤代烷基、3-6元环烷基、或-(c=o)c1-6烷基。

207、在一些实施方式中，x优选为o。

208、在一些实施方式中，r2选自氢、氘或甲基。

209、在一些实施方式中，r2为氢。

210、在一些实施方式中，r10选自氢、氘、c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6卤代烷基、3-6元环烷基、或-(c=o)c1-6烷基。

211、在一些实施方式中，r4、r5、r6、r7、r8、r9、r10各自独立地选自氢、氘、氨基保护基基团、c1-3烷基、c1-3烷氧基、c1-3卤代烷基、3-6元环烷基、或-(c=o)c1-3烷基。

212、在一些实施方式中，r4、r5、r6、r7、r8、r9、r10各自独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基乙基、环丙基、氟甲基、二氟甲基、或乙酰基。

213、在一些实施方式中，r4或r5各自独立地选自氢或c1-3烷基，优选氢或甲基。例如，r4和r5均为氢；或者，r4为氢，r5为甲基。

214、在一些实施方式中，r6和r7为氢。

215、在一些实施方式中，r8和r9为氢。

216、在优选的实施方式中，r10为氢或甲基。

217、在一些实施方式中，所述base选自以下中任一种：

218、、、或，

219、其中，r5、r7或r9各自独立地选自氢或c1-3烷基，r10选自氢或c1-6烷基；优选地，r10选自氢或c1-3烷基（例如甲基）。

220、在一些实施方式中，所述式（ii）所示的核苷单体选自以下中的一种或多种：

221、；

222、优选地，所述式（ii）所示的核苷单体选自以下中的一种或多种：

223、。

224、在一些实施方式中，按照5'末端到3'末端方向，所述反义链的第2、3、4、5、6、7或8位中的1、2、3、4或5个核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代。在一些实施方式中，按照5'末端到3'末端方向，所述反义链中序列b的第2、3、4、5、6、7或8位中的1、2、3、4或5个核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代。

225、在具体的实施方式中，所述式（ii）所示的核苷单体中的base与正义链对应核苷酸上的核碱基符合沃森-克里克的碱基互补配对原则。

226、在具体的实施方式中，所述式（ii）所示的核苷单体与其相邻的核苷之间具有磷酸二酯键或其修饰，所述修饰包括但不限于硫代磷酸二酯键、甲基膦酸酯键、硼烷磷酸酯键、磷酰胺二酯键或酰胺键，例如酰胺键。

227、在一些实施方式中，所述双链核糖核酸修饰物的反义链还可包含其它修饰。在优选的实施方式中，反义链中的所有核糖核苷酸均为经修饰的核糖核苷酸。

228、在一些实施方式中，所述双链核糖核酸修饰物的正义链也包含修饰。在优选的实施方式中，正义链中的所有核糖核苷酸均为经修饰的核糖核苷酸。

229、关于寡核苷酸、双链核糖核苷酸及其修饰的相关方面，可参见上述的描述。

230、在部分实施方式中，本文所述的寡核苷酸、双链核糖核苷酸及其修饰物或缀合物处于药学上可接受的盐的形式。在具体的实施方式中，如上所述的盐选自碱加成盐、酸加成盐及其组合。

231、在部分实施方式中，碱加成盐选自钠、钾、钙、铵、有机胺、镁盐及其组合，酸加成盐选自无机酸盐、有机酸盐及其组合。

232、在部分实施方式中，无机酸选自盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、碳酸氢根、磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸及其组合，有机酸选自乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸及其组合。

233、在部分实施方式中，所述药学上可接受的盐选自钠盐。

234、关于正义链和反义链的修饰的相关方面，可参见上述的描述。

235、在部分实施方式中，所述正义链含有或选自如本技术所述的seq id no：1、7、16、33和39中任一个所示的核苷酸序列中15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个或23个连续核苷酸。在部分实施方式中，所述正义链含有或选自如本技术所述的seq id no：1、7、16、33和39中任一个所示的核苷酸序列中17个、18个、19个、20个或21个连续核苷酸。在部分实施方式中，所述正义链含有或选自如本技术所述seq id no：1、7、16、33和39中任一个所示的核苷酸序列中17个、18个或19个连续核苷酸。

236、在部分实施方式中，所述反义链含有或选自如本技术所述的seq id no：2、8、17、34和40中任一个所示的核苷酸序列中15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个或23个连续核苷酸。在部分实施方式中，所述反义链含有或选自如本技术所述的seq id no：2、8、17、34和40中任一个所示的核苷酸序列中19个、20个、21个、22个或23个连续核苷酸。在部分实施方式中，所述反义链含有或选自如本技术所述的seq id no：2、8、17、34和40中任一个所示的核苷酸序列中19个、20个或21个连续核苷酸。

237、在部分实施方式中，所述正义链或其含有的核苷酸序列与本技术所述seq id no：1、7、16、33和39中任一个所示的序列相差0、1、2或3个核苷酸。在部分实施方式中，所述正义链或其含有的核苷酸序列与本技术所述seq id no：1、7、16、33和39中任一个所示的序列相差0、1或2个核苷酸。在部分实施方式中，所述正义链或其含有的核苷酸序列与本技术所述seq id no：1、7、16、33和39中任一个所示的序列相差0或1个核苷酸。

238、在部分实施方式中，所述反义链或其含有的核苷酸序列与本技术所述seq id no：2、8、17、34和40中任一个所示的序列相差0、1、2或3个核苷酸。在部分实施方式中，所述反义链或其含有的核苷酸序列与本技术所述seq id no：2、8、17、34和40中任一个所示的序列相差0、1或2个核苷酸。在部分实施方式中，所述反义链或其含有的核苷酸序列与本技术所述seq id no：2、8、17、34和40中任一个所示的序列相差0或1个核苷酸。

239、用于抑制cfb基因表达的双链核糖核酸及其修饰物

240、本公开进一步的方面提供双链核糖核酸(dsrna)，用于抑制cfb基因的表达。该双链核糖核酸的一条链为反义链，反义链与靶基因（也即，cfb基因）在表达过程中形成的mrna序列互补配对，用于指导对靶mrna（也即，cfb基因的转录产物）的切割。双链核糖核酸中的正义链包括与反义链至少部分互补（包括与反义链完全互补）形成双链核糖核酸的双链区的序列。

241、在一些实施方式中，该双链核糖核酸作为核酸内切酶（dicer）的底物，被切割为小片段的dsrna，也即sirna。在一些实施方式中，该双链核糖核酸为sirna。sirna通过装配形成rna诱导的沉默复合物（rna-induced silencing complex，risc）risc复合体，切割靶mrna，抑制cfb基因的表达。

242、根据来源于人cfb mrna (nm_001710.6)中的靶标序列，设计与靶mrna结合的双链核糖核酸（例如sirna）。

243、在一些实施方式中，所述用于抑制cfb的双链核糖核酸包含正义链和反义链，其中所述正义链包含与如seq id no：1所示的核苷酸序列具有不多于3个（例如不多于2或1个）差异的序列a，所述反义链包含与如seq id no：2所示的核苷酸序列具有不多于3个（例如不多于2或1个）差异的序列b；所述序列a与所述序列b至少部分地反向互补形成所述修饰的双链核糖核酸的双链区；

244、5’-auggugugaagccaagaua-3’（seq id no：1），

245、5’-uaucuuggcuucacaccau-3’（seq id no：2）。

246、在具体的实施方式中，所述正义链包含如seq id no：1所示的核苷酸序列作为序列a，所述反义链包含如seq id no：2所示的核苷酸序列作为序列b。

247、在一些实施方式中，所述反义链中序列b的第2-8位中的至少一个核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代。在一些实施方式中，所述反义链中序列b的第4、5、6或7位中的1、2或3个核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代。在一些实施方式中，所述反义链中序列b的第6位中的核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代。

248、在一些实施方式中，所述反义链中序列b的第6或7位中的核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代。

249、在优选的实施方式中，用于抑制cfb的双链核糖核酸的反义链和正义链中序列a和序列b的核苷酸均为经修饰的核苷酸。

250、在一些实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述反义链的序列b的第2、7、10和14位的核苷酸中的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸；任选地，所述反义链的序列b其它位置的每个核苷酸独立地为非2’-氟代修饰的核苷酸中的一种。

251、在一些实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述正义链的序列a的第3、7、8和9位的核苷酸中的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸；任选地，所述正义链序列a其它位置的每个核苷酸独立地为非2’-氟代修饰的核苷酸中的一种。

252、在另一具体的实施方式中，反义链任选可包含核苷酸序列e。

253、优选地，所述反义链包括evp修饰等。

254、在具体的实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述反义链的序列b的第2、7、10和14位的核苷酸中的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述反义链的序列b其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸；或者，

255、按照5’末端至3’末端的方向，所述反义链的序列b的第2、7、10和14位的核苷酸中的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述反义链的序列b第6位的核苷酸具有gna修饰，反义链的序列b其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸；或者

256、按照5’末端至3’末端的方向，所述反义链的序列b的第2、7、10和14位的核苷酸中的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，反义链的序列b第6位的核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代，反义链的序列b其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸，任选地，反义链的序列b第5位与第6位核苷间为酰胺键连接。

257、在具体的实施方式中，在用于抑制cfb的双链核糖核酸修饰物中所述反义链可具有选自以下序列中的任一种的结构：

258、1）5’-evpusafsucuugfgcufucacfaccaustst-3’（seq id no：3）；

259、2）5’-evpusafsucuugfgcufucacfaccaustst-3’（seq id no：4）；或

260、3）5’-evpusafsucuunp1gfgcufucacfaccaustst-3’（seq id no：5）；

261、其中，小写字母a、u、c、g表示：2’-甲氧基修饰的核苷酸；af、uf、cf、gf表示2’-氟代修饰的核苷酸；evp表示该字母组合右侧相邻的一个核苷酸为5’-反式乙烯基膦酸酯核苷酸；u（加粗，斜体，下划线）：表示具有gna修饰的尿嘧啶核苷酸；s表示前后相邻的两个核苷酸之间以硫代磷酸二酯键连接；t表示：胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸；unp1表示：。

262、在具体的实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述正义链的序列a的第3、7、8和9位的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸。

263、在具体的实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述正义链的序列a的第3、7、8和9位的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述正义链的序列a其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸。

264、在一些实施方式中，正义链包含一个或多个（invab），优选包含一个或两个。在一些实施方式中，（invab）位于正义链的5’末端和/或3’末端。例如，（invab）位于正义链的5’末端；或者，（invab）位于正义链的3’末端；或者，（invab）位于正义链的5’末端和3’末端，其中，所述（invab）每一个独立地为1个或2个(invab)，优选为1个(invab)。

265、在优选的实施方式中，在正义链的5’端和/或3’端添加一个或多个(invab)，例如1个或2个。在一些实施方式中，在正义链的5’端添加1个(invab)。在一些实施方式中，在正义链的3’端添加1个(invab)。在一些实施方式中，在正义链的5’端和3’端分别添加1个(invab)。

266、在一些实施方式中，沿5’末端向3’末端的方向，所述正义链包含位于如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：

267、所述正义链5’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间；

268、所述正义链5’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间；

269、所述正义链3’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间；

270、所述正义链3’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间；

271、所述正义链5’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与正义链5’末端第1个核苷酸之间；和/或

272、所述正义链3’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与正义链3’末端第1个核苷酸之间。

273、优选地，所述正义链包含位于如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：所述正义链5’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与第1个核苷酸之间和第1个核苷酸与第2个核苷酸之间、以及3’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与第1个核苷酸之间。

274、优选地，所述正义链包含位于如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：所述正义链5’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间和第2个核苷酸与第3个核苷酸之间、以及3’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与第1个核苷酸之间。

275、优选地，所述正义链包含位于如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：所述正义链5’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与第1个核苷酸之间、和第1个核苷酸与第2个核苷酸之间。

276、在具体的实施方式中，在所述修饰的双链核糖核酸中所述正义链可具有以下序列：

277、5’-asusgfgugufgfafagccaagauas(invab)-3’（seq id no：6）；

278、其中，小写字母a、u、c、g表示：2’-甲氧基修饰的核苷酸；af、uf、cf、gf表示2’-氟代修饰的核苷酸；s表示前后相邻的两个核苷酸、核苷酸与(invab)之间以硫代磷酸二酯键连接；(invab)表示反向脱碱基脱氧核糖残基；任选地，在所述正义链的5’末端不具有反向脱碱基脱氧核糖残基的情况下，该核苷酸的核糖基团具有5’羟基，优选为具有5’羟基。

279、在一些实施方式中，本公开提供试剂盒，所述试剂盒包含：a）本公开所述的双链核糖核酸、修饰物、缀合物，或其药物组合物；以及b）如下的使用说明：

280、(1)抑制cfb基因表达；

281、(2)用于预防或治疗与cfb基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱；

282、(3)用于治疗患有将受益于cfb基因表达降低的疾病的受试者。

283、本公开提供了本公开所述的修饰的双链核糖核酸，或其缀合物或其药物组合物的如下至少一种用途：

284、(1)抑制cfb基因表达，或制备用于抑制cfb基因表达的药物；

285、(2)用于预防或治疗与cfb基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱，或制备用于预防或治疗与cfb基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱的药物；

286、(3)用于治疗患有将受益于cfb基因表达降低的疾病的受试者，或制备用于治疗患有将受益于cfb基因表达降低的疾病、病症或紊乱的受试者的药物。

287、本公开进一步提供了sirna分子(包括修饰的sirna、sirna缀合物)或其药物组合物在上述(1)-(3)至少一种中的用途。

288、在本公开中，“受试者”包括人或者非人类动物，优选脊椎动物，并且更优选哺乳动物。受试者可以包括转基因生物体。最优选地，受试者是人。进一步地，受试者具有如下至少一种特性：

289、(1)体内cfb基因异常表达，更具体地为cfb基因异常高表达；

290、(2)患有与cfb基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱；

291、(3)患有将受益于cfb基因表达降低的疾病。如罹患或倾向于患上与于cfb基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱的人。

292、在本文中，“与cfb基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱”不受限地包括：原发性膜性肾病、溶血性尿毒症综合征、c3肾小球病、iga肾病、阵发性夜间血红蛋白尿(pnh)、年龄相关性黄斑病变和眼科疾病。

293、用于抑制scap基因表达的双链核糖核酸及其修饰物

294、本公开进一步的方面提供双链核糖核酸(dsrna)，用于抑制scap基因的表达。该双链核糖核酸的一条链为反义链，反义链与靶基因（也即，scap基因）在表达过程中形成的mrna序列互补配对，用于指导对靶mrna（也即，scap基因的转录产物）的切割。双链核糖核酸中的正义链包括与反义链至少部分互补（包括与反义链完全互补）形成双链核糖核酸的双链区的序列。

295、在一些实施方式中，该双链核糖核酸作为核酸内切酶（dicer）的底物，被切割为小片段的dsrna，也即sirna。在一些实施方式中，该双链核糖核酸为sirna。sirna通过装配形成rna诱导的沉默复合物（rna-induced silencing complex，risc）risc复合体，切割靶mrna，抑制scap基因的表达。

296、根据来源于人scap mrna (nm_012235.4)中的靶标序列，设计与靶mrna结合的双链核糖核酸（例如sirna）。

297、在一些实施方式中，所述用于抑制scap的双链核糖核酸包含正义链和反义链，其中所述正义链包含与如seq id no：7所示的核苷酸序列具有不多于3个（例如不多于2或1个）差异的序列a，所述反义链包含与如seq id no：8所示的核苷酸序列具有不多于3个（例如不多于2或1个）差异的序列b；所述序列a与所述序列b至少部分地反向互补形成所述修饰的双链核糖核酸的双链区；

298、5’-ucuccuuuugggaccuaaa-3’（seq id no：7），

299、5’-uuuaggucccaaaaggaga-3’（seq id no：8）。

300、在具体的实施方式中，所述正义链包含如seq id no：7所示的核苷酸序列作为序列a，所述反义链包含如seq id no：8所示的核苷酸序列作为序列b。

301、在一些实施方式中，所述反义链中序列b的第2-8位中的至少一个核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代。在一些实施方式中，所述反义链中序列b的第4、5、6或7位中的1、2或3个核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代。在一些实施方式中，所述反义链中序列b的第6或7位中的核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代。

302、在一些实施方式中，所述反义链中序列b的第6或7位中的核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代。

303、在优选的实施方式中，用于抑制scap的双链核糖核酸的反义链和正义链中序列a和序列b的核苷酸均为经修饰的核苷酸。

304、在一些实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述反义链的序列b的第2、6、7、10、14和16位中的至少三个位点（例如3-7个，如3、4、5、6或7个）的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述反义链的序列b其它位置的每个核苷酸独立地为非2’-氟代修饰的核苷酸中的一种。

305、在一些实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述正义链的序列a的第3、5、7、8、9和11位中的至少三个位点（例如3-6个，如3、4、5或6个）的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述正义链的序列a其它位置的每个核苷酸独立地为非2’-氟代修饰的核苷酸中的一种。

306、在另一具体的实施方式中，反义链任选可包含核苷酸序列e。

307、优选地，所述反义链包括evp修饰等。

308、在具体的实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述反义链的序列b的第2、7、10和14位的核苷酸中的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述反义链的序列b其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸。

309、在具体的实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述反义链的序列b的第2、6、14和16位的核苷酸中的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述反义链的序列b其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸；或者，

310、按照5’末端至3’末端的方向，所述反义链的序列b的第2、6、14和16位的核苷酸中的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，反义链的序列b第7位的核苷酸具有gna修饰，反义链的序列b其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸，任选地，反义链的序列b第6位与第7位核苷间为酰胺键连接；或者

311、按照5’末端至3’末端的方向，所述反义链的序列b的第2、6、14和16位的核苷酸中的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，反义链的序列b第7位的核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代，反义链的序列b其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸。

312、在具体的实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述反义链的序列b的第2、10和14位的核苷酸中的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述反义链的序列b其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸；或者，

313、按照5’末端至3’末端的方向，所述反义链的序列b的第2、10和14位的核苷酸中的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，反义链的序列b第7位的核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代，反义链的序列b其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸，任选地，反义链的序列b第6位与第7位核苷间为酰胺键连接。

314、在具体的实施方式中，在用于抑制scap的修饰的双链核糖核酸中所述反义链可具有选自以下序列中的任一种：

315、1）5’-evpusufsuaggufcccfaaaafggagastst-3’（seq id no：9）；

316、2）5’-evpusufsuaggfucccaaaafggfagastst-3’（seq id no：10）；

317、3）5’-evpusufsuaggfunp1cccaaaafggfagastst-3’（seq id no：11）；或

318、4）5’-evpusufsuaggunp1cccfaaaafggagastst-3’（seq id no：12）；

319、其中，小写字母a、u、c、g表示：2’-甲氧基修饰的核苷酸；af、uf、cf、gf表示2’-氟代修饰的核苷酸；evp表示该字母组合右侧相邻的一个核苷酸为5’-反式乙烯基膦酸酯核苷酸；u（加粗，斜体，下划线）：表示具有gna修饰的尿嘧啶核苷酸；s表示前后相邻的两个核苷酸之间以硫代磷酸二酯键连接；t表示：胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸；unp1表示：。

320、在具体的实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述正义链的序列a的第3、7、9和11位的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述正义链的序列a其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸。

321、在具体的实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述正义链的序列a的第3、7、8和9位的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述正义链的序列a其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸。

322、在具体的实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述正义链的序列a的第5、7、8和9位的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述正义链的序列a其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸。

323、在一些实施方式中，正义链包含一个或多个（invab），优选包含一个或两个。在一些实施方式中，（invab）位于正义链的5’末端和/或3’末端。例如，（invab）位于正义链的5’末端；或者，（invab）位于正义链的3’末端；或者，（invab）位于正义链的5’末端和3’末端，其中，所述（invab）每一个独立地为1个或2个(invab)，优选为1个(invab)。

324、在优选的实施方式中，在正义链的5’和/或3’末端添加一个或多个(invab)，例如1个或2个。在一些实施方式中，在正义链的5’末端添加1个(invab)。在一些实施方式中，在正义链的3’末端添加1个(invab)。在一些实施方式中，在正义链的5’末端和3’末端分别添加1个(invab)。

325、在一些实施方式中，沿5’末端向3’末端的方向，所述正义链包含位于如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：

326、所述正义链5’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间；

327、所述正义链5’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间；

328、所述正义链3’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间；

329、所述正义链3’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间；

330、所述正义链5’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与正义链5’末端第1个核苷酸之间；和/或

331、所述正义链3’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与正义链3’末端第1个核苷酸之间。

332、优选地，所述正义链包含位于如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：所述正义链5’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与第1个核苷酸之间和第1个核苷酸与第2个核苷酸之间、以及3’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与第1个核苷酸之间。

333、优选地，所述正义链包含位于如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：所述正义链5’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间和第2个核苷酸与第3个核苷酸之间、以及3’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与第1个核苷酸之间。

334、优选地，所述正义链包含位于如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：所述正义链5’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与第1个核苷酸之间、和第1个核苷酸与第2个核苷酸之间。

335、在具体的实施方式中，在所述修饰的双链核糖核酸中所述正义链可具有选自以下序列中的任一种的结构：

336、1)5’-uscsufccuufuufggfgaccuaaa-3’（seq id no：13）；

337、2)5’- uscsufccuufufufgggaccuaaas(invab)-3’（seq id no：14）;

338、3)5’- uscsuccfuufufufgggaccuaaa-3’（seq id no：15）；

339、其中，小写字母a、u、c、g表示：2’-甲氧基修饰的核苷酸；af、uf、cf、gf表示2’-氟代修饰的核苷酸；s表示前后相邻的两个核苷酸、核苷酸与(invab)之间以硫代磷酸二酯键连接；(invab)表示反向脱碱基脱氧核糖残基。任选地，在所述正义链的5’末端不具有反向脱碱基脱氧核糖残基的情况下，该核苷酸的核糖基团具有5’羟基，优选为具有5’羟基。

340、在一些实施方式中，本公开提供试剂盒，所述试剂盒包含：a）本公开所述的双链核糖核酸、修饰物、缀合物，或其药物组合物；以及b）如下的使用说明：

341、(1)抑制scap基因表达；

342、(2)用于预防或治疗与scap基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱；

343、(3)用于治疗患有将受益于scap基因表达降低的疾病的受试者。

344、本公开提供了本公开所述的修饰的双链核糖核酸，或其缀合物或其药物组合物的如下至少一种用途：

345、(1)抑制scap基因表达，或制备用于抑制scap基因表达的药物；

346、(2)用于预防或治疗与scap基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱，或制备用于预防或治疗与scap基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱的药物；

347、(3)用于治疗患有将受益于scap基因表达降低的疾病的受试者，或制备用于治疗患有将受益于scap基因表达降低的疾病、病症或紊乱的受试者的药物。

348、本公开进一步提供了sirna分子(包括sirna修饰物、sirna缀合物)或其药物组合物在上述(1)-(3)至少一种中的用途。

349、在本公开中，“受试者”包括人或者非人类动物，优选脊椎动物，并且更优选哺乳动物。受试者可以包括转基因生物体。最优选地，受试者是人。进一步地，受试者具有如下至少一种特性：

350、(1)体内scap基因异常表达，更具体地为scap基因异常高表达；

351、(2)患有与scap基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱；

352、(3)患有将受益于scap基因表达降低的疾病。如罹患或倾向于患上与scap基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱的人。

353、在本文中，“与scap基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱”不受限地包括：食管癌、高血脂症、肥胖、脂肪性肝病如非酒精性脂肪性肝病(nafld)、肝纤维化疾病。

354、用于抑制inhbe基因表达的双链核糖核酸及其修饰物

355、本公开进一步的方面提供双链核糖核酸(dsrna)，用于抑制inhbe基因的表达。该双链核糖核酸的一条链为反义链，反义链与靶基因（也即，inhbe基因）在表达过程中形成的mrna序列互补配对，用于指导对靶mrna（也即，inhbe基因的转录产物）的切割。双链核糖核酸中的正义链包括与反义链至少部分互补（包括与反义链完全互补）形成双链核糖核酸的双链区的序列。

356、在一些实施方式中，该双链核糖核酸作为核酸内切酶（dicer）的底物，被切割为小片段的dsrna，也即sirna。在一些实施方式中，该双链核糖核酸为sirna。sirna通过装配形成rna诱导的沉默复合物（rna-induced silencing complex，risc）risc复合体，切割靶mrna，抑制inhbe基因的表达。

357、根据来源于人inhbe mrna (nm_031479.5)中的靶标序列，设计与靶mrna结合的双链核糖核酸（例如sirna）。

358、在一些实施方式中，所述用于抑制inhbe的双链核糖核酸包含正义链和反义链，其中所述正义链包含与如seq id no：16所示的核苷酸序列具有不多于3个（例如不多于2或1个）差异的序列a，所述反义链包含与如seq id no：17所示的核苷酸序列具有不多于3个（例如不多于2或1个）差异的序列b；所述序列a与所述序列b至少部分地反向互补形成所述修饰的双链核糖核酸的双链区；

359、5’- cagcuuugcuacugucacu -3’（seq id no：16），

360、5’- agugacaguagcaaagcugag-3’（seq id no：17）。

361、在具体的实施方式中，所述正义链包含如seq id no：16所示的核苷酸序列作为序列a，所述反义链包含如seq id no：17所示的核苷酸序列作为序列b。

362、在一些实施方式中，所述反义链中序列b的第2-8位中的至少一个核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代。在一些实施方式中，所述反义链中序列b的第4、5、6或7位中的1、2或3个核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代。在一些实施方式中，所述反义链中序列b的第6或7位中的核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代。

363、在一些实施方式中，所述反义链中序列b的第6或7位中的核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代。

364、在优选的实施方式中，用于抑制inhbe的双链核糖核酸的反义链和正义链中序列a和序列b的核苷酸均为经修饰的核苷酸。

365、在一些实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述反义链的序列b的第2、6、7、10、14和16位中的至少三个位点（例如3-7个，如3、4、5、6或7个）的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述反义链的序列b其它位置的每个核苷酸独立地为非2’-氟代修饰的核苷酸中的一种。

366、在一些实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述正义链的序列a的第3、5、7、8和9位中的至少三个位点（例如3-6个，如3、4、5或6个）的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述正义链的序列a其它位置的每个核苷酸独立地为非2’-氟代修饰的核苷酸中的一种。

367、在另一具体的实施方式中，反义链任选可包含核苷酸序列e。

368、优选地，所述反义链包括evp修饰等。

369、在具体的实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述反义链的序列b的第2、6、14和16位的核苷酸中的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述反义链的序列b其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸。

370、在具体的实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述反义链的序列b的第2、14和16位的核苷酸中的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述反义链的序列b其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸；或者，

371、按照5’末端至3’末端的方向，所述反义链的序列b的第2、14和16位的核苷酸中的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，反义链的序列b第6位的核苷酸具有gna修饰，反义链的序列b其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸，任选地，反义链的序列b第5位与第6位核苷间为酰胺键连接；或者

372、按照5’末端至3’末端的方向，所述反义链的序列b的第2、14和16位的核苷酸中的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，反义链的序列b第6位的核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代，反义链的序列b其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸，任选地，反义链的序列b第5位与第6位核苷间为酰胺键连接。

373、在具体的实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述反义链的序列b的第2、7、10和14位的核苷酸中的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述反义链的序列b其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸；或者，

374、按照5’末端至3’末端的方向，所述反义链的序列b的第2、7、10和14位的核苷酸中的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，反义链的序列b第6位的核苷酸具有gna修饰，反义链的序列b其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸，任选地，反义链的序列b第5位与第6位核苷间为酰胺键连接；或者

375、按照5’末端至3’末端的方向，所述反义链的序列b的第2、7、10和14位的核苷酸中的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，反义链的序列b第6位的核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代，反义链的序列b其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸，任选地，反义链的序列b第5位与第6位核苷间为酰胺键连接。

376、在具体的实施方式中，在用于抑制inhbe的修饰的双链核糖核酸中所述反义链可具有选自以下序列中的任一种的结构：

377、1）5’- evpasgfsugacfaguagcaafagfcugsasg -3’（seq id no：18）；

378、2）5’- evpasgfsugacaguagcaafagfcugsasg -3’（seq id no：19）；

379、3）5’- evpasgfsugacnp1aguagcaafagfcugsasg -3’（seq id no：20）；

380、4）5’- evpasgfsugacafguafgcaafagcugsasg -3’（seq id no：21）；

381、5）5’- evpasgfsugacafguafgcaafagcugsasg -3’（seq id no：22）；或

382、6）5’- evpasgfsugacnp1afguafgcaafagcugsasg -3’ （seq id no：23）；

383、其中，小写字母a、u、c、g表示：2’-甲氧基修饰的核苷酸；af、uf、cf、gf表示2’-氟代修饰的核苷酸；evp表示该字母组合右侧相邻的一个核苷酸为5’-反式乙烯基膦酸酯核苷酸；c（加粗，斜体，下划线）：表示具有gna修饰的胞嘧啶核苷酸；s表示前后相邻的两个核苷酸之间以硫代磷酸二酯键连接；cnp1表示：。

384、在具体的实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述正义链的序列a的第3、7、8和9位的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述正义链的序列a其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸。

385、在具体的实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述正义链的序列a的第5、7、8和9位的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述正义链的序列a其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸。

386、在一些实施方式中，正义链包含一个或多个（invab），优选包含一个或两个。在一些实施方式中，（invab）位于正义链的5’末端和/或3’末端。例如，（invab）位于正义链的5’末端；或者，（invab）位于正义链的3’末端；或者，（invab）位于正义链的5’末端和3’末端，其中，所述（invab）每一个独立地为1个或2个(invab)，优选为1个(invab)。

387、在优选的实施方式中，在正义链的5’末端和/或3’末端添加一个或多个(invab)，例如1个或2个。在一些实施方式中，在正义链的5’末端添加1个(invab)。在一些实施方式中，在正义链的3’末端添加1个(invab)。在一些实施方式中，在正义链的5’末端和3’末端分别添加1个(invab)。

388、在一些实施方式中，沿5’末端向3’末端的方向，所述正义链包含位于如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：

389、所述正义链5’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间；

390、所述正义链5’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间；

391、所述正义链3’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间；

392、所述正义链3’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间；

393、所述正义链5’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与正义链5’末端第1个核苷酸之间；和/或

394、所述正义链3’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与正义链3’末端第1个核苷酸之间。

395、优选地，所述正义链包含位于如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：所述正义链5’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与第1个核苷酸之间和第1个核苷酸与第2个核苷酸之间、以及3’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与第1个核苷酸之间。

396、优选地，所述正义链包含位于如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：所述正义链5’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间和第2个核苷酸与第3个核苷酸之间、以及3’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与第1个核苷酸之间。

397、优选地，所述正义链包含位于如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：所述正义链5’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与第1个核苷酸之间、和第1个核苷酸与第2个核苷酸之间。

398、在具体的实施方式中，在所述修饰的双链核糖核酸中所述正义链可具有选自以下序列中的任一种的结构：

399、1)5’-csasgcufuufgfcfuacugucacu-3’（seq id no：24）；

400、2)5’-csasgfcuuufgfcfuacugucacus(invab)-3’（seq id no：25）；

401、其中，小写字母a、u、c、g表示：2’-甲氧基修饰的核苷酸；af、uf、cf、gf表示2’-氟代修饰的核苷酸；s表示前后相邻的两个核苷酸、核苷酸与(invab)之间以硫代磷酸二酯键连接；(invab)表示反向脱碱基脱氧核糖残基。任选地，在所述正义链的5’末端不具有反向脱碱基脱氧核糖残基的情况下，该核苷酸的核糖基团具有5’羟基，优选为具有5’羟基。

402、在一些实施方式中，本公开提供试剂盒，所述试剂盒包含：a）本公开所述的双链核糖核酸、修饰物、缀合物，或其药物组合物；以及b）如下的使用说明：

403、(1)抑制inhbe基因表达；

404、(2)用于预防或治疗与inhbe基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱；

405、(3)用于治疗患有将受益于inhbe基因表达降低的疾病的受试者。

406、本公开提供了本公开所述的修饰的双链核糖核酸，或其缀合物或其药物组合物的如下至少一种用途：

407、(1)抑制inhbe基因表达，或制备用于抑制inhbe基因表达的药物；

408、(2)用于预防或治疗与inhbe基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱，或制备用于预防或治疗与inhbe基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱的药物；

409、(3)用于治疗患有将受益于inhbe基因表达降低的疾病的受试者，或制备用于治疗患有将受益于inhbe基因表达降低的疾病、病症或紊乱的受试者的药物。

410、本公开进一步提供了sirna分子(包括sirna修饰物、sirna缀合物)或其药物组合物在上述(1)-(3)至少一种中的用途。

411、在本公开中，“受试者”包括人或者非人类动物，优选脊椎动物，并且更优选哺乳动物。受试者可以包括转基因生物体。最优选地，受试者是人。进一步地，受试者具有如下至少一种特性：

412、(1)体内inhbe基因异常表达，更具体地为inhbe基因异常高表达；

413、(2)患有与inhbe基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱；

414、(3)患有将受益于inhbe基因表达降低的疾病。如罹患或倾向于患上与inhbe基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱的人。

415、在本文中，“与inhbe基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱”不受限地包括：肥胖症（如腹型肥胖）、非酒精性脂肪性肝病、酒精相关的脂肪性肝病、非酒精性脂肪性肝炎、肝硬化、肝纤维化、肝酶水平升高(alt、ast、alp)、肝细胞癌、高胆固醇血症和相关的心血管疾病（如冠心病）、胰岛素抵抗、葡萄糖耐量异常、高血糖症、ii型糖尿病和代谢综合征。

416、用于抑制c5基因表达的双链核糖核酸及其修饰物

417、本公开进一步的方面提供双链核糖核酸(dsrna)，用于抑制c5基因的表达。该双链核糖核酸的一条链为反义链，反义链与靶基因（也即，c5基因）在表达过程中形成的mrna序列互补配对，用于指导对靶mrna（也即， c5基因的转录产物）的切割。双链核糖核酸中的正义链包括与反义链至少部分互补（包括与反义链完全互补）形成双链核糖核酸的双链区的序列。

418、在一些实施方式中，该双链核糖核酸作为核酸内切酶（dicer）的底物，被切割为小片段的dsrna，也即sirna。在一些实施方式中，该双链核糖核酸为sirna。sirna通过装配形成rna诱导的沉默复合物（rna-induced silencing complex，risc）risc复合体，切割靶mrna，抑制c5基因的表达。

419、根据来源于人c5 mrna (nm_001735.3)中的靶标序列，设计与靶mrna结合的双链核糖核酸（例如sirna）。

420、在一些实施方式中，所述用于抑制c5的双链核糖核酸包含正义链和反义链，其中所述正义链包含与如seq id no：33所示的核苷酸序列具有不多于3个（例如不多于2或1个）差异的序列a，所述反义链包含与如seq id no：34所示的核苷酸序列具有不多于3个（例如不多于2或1个）差异的序列b；所述序列a与所述序列b至少部分地反向互补形成所述修饰的双链核糖核酸的双链区；

421、5’-agucaaagaacugucauacua-3’（seq id no：33），

422、5’-uaguaugacaguucuuugacugc-3’（seq id no：34）。

423、在具体的实施方式中，所述正义链包含如seq id no：33所示的核苷酸序列作为序列a，所述反义链包含如seq id no：34所示的核苷酸序列作为序列b。

424、在一些实施方式中，所述反义链中序列b的第2-8位中的至少一个核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代。在一些实施方式中，所述反义链中序列b的第4、5、6或7位中的1、2或3个核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代。在一些实施方式中，所述反义链中序列b的第6或7位中的核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代。

425、在一些实施方式中，所述反义链中序列b的第6或7位中的核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代。

426、在优选的实施方式中，用于抑制c5的双链核糖核酸的反义链和正义链中序列a和序列b的核苷酸均为经修饰的核苷酸。

427、在一些实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述反义链的序列b的第2、6、8、9、14和16位中的至少三个位点（例如3-7个，如3、4、5、6或7个）的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述反义链的序列b其它位置的每个核苷酸独立地为非2’-氟代修饰的核苷酸中的一种。

428、在一些实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述正义链的序列a的第7、9、10和11位中的至少三个位点（例如3-6个，如3、4、5或6个）的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述正义链的序列a其它位置的每个核苷酸独立地为非2’-氟代修饰的核苷酸中的一种。

429、在另一具体的实施方式中，反义链任选可包含核苷酸序列e。

430、优选地，所述反义链包括evp修饰等。

431、在具体的实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述反义链的序列b的第2、6、8、9、14和16位的核苷酸中的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述反义链的序列b其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸。

432、在具体的实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述反义链的序列b的第2、8、9、14和16位的核苷酸中的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述反义链的序列b其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸；或者，

433、按照5’末端至3’末端的方向，所述反义链的序列b的第2、8、9、14和16位的核苷酸中的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，反义链的序列b第6位的核苷酸具有gna修饰或者反义链的序列b第6位的核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代，反义链的序列b其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸，任选地，反义链的序列b第5位与第6位核苷间为酰胺键连接。

434、在具体的实施方式中，在用于抑制c5的修饰的双链核糖核酸中所述反义链可具有选自以下序列中的任一种的结构：

435、1）5’- evpusafsguaufgafcfaguucfuufugacusgsc -3’（seq id no：35）；

436、或

437、2）5’- evpusafsgu(aam)unp1gafcfaguucfuufugacusgsc -3’（seq id no：36）；

438、其中，小写字母a、u、c、g表示：2’-甲氧基修饰的核苷酸；af、uf、cf、gf表示2’-氟代修饰的核苷酸；evp表示该字母组合右侧相邻的一个核苷酸为5’-反式乙烯基膦酸酯核苷酸；s表示前后相邻的两个核苷酸之间以硫代磷酸二酯键连接；(aam)unp1表示：。

439、在具体的实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述正义链的序列a的第7、9、10和11位的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述正义链的序列a其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸。

440、在一些实施方式中，正义链包含一个或多个（invab），优选包含一个或两个。在一些实施方式中，（invab）位于正义链的5’末端和/或3’末端。例如，（invab）位于正义链的5’末端；或者，（invab）位于正义链的3’末端；或者，（invab）位于正义链的5’末端和3’末端，其中，所述（invab）每一个独立地为1个或2个(invab)，优选为1个(invab)。

441、在优选的实施方式中，在正义链的5’末端和/或3’末端添加一个或多个(invab)，例如1个或2个。在一些实施方式中，在正义链的5’末端添加1个(invab)。在一些实施方式中，在正义链的3’末端添加1个(invab)。在一些实施方式中，在正义链的5’末端和3’末端分别添加1个(invab)。

442、在一些实施方式中，沿5’末端向3’末端的方向，所述正义链包含位于如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：

443、所述正义链5’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间；

444、所述正义链5’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间；

445、所述正义链3’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间；

446、所述正义链3’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间；

447、所述正义链5’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与正义链5’末端第1个核苷酸之间；和/或

448、所述正义链3’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与正义链3’末端第1个核苷酸之间。

449、优选地，所述正义链包含位于如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：所述正义链5’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与第1个核苷酸之间和第1个核苷酸与第2个核苷酸之间、以及3’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与第1个核苷酸之间。

450、优选地，所述正义链包含位于如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：所述正义链5’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间和第2个核苷酸与第3个核苷酸之间、以及3’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与第1个核苷酸之间。

451、优选地，所述正义链包含位于如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：所述正义链5’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与第1个核苷酸之间、和第1个核苷酸与第2个核苷酸之间。

452、在具体的实施方式中，在所述修饰的双链核糖核酸中所述正义链可具有以下序列：

453、1)5’- asgsucaaafgafafcfugucauacua-3’（seq id no：37）；

454、其中，小写字母a、u、c、g表示：2’-甲氧基修饰的核苷酸；af、uf、cf、gf表示2’-氟代修饰的核苷酸；s表示前后相邻的两个核苷酸之间以硫代磷酸二酯键连接。任选地，在所述正义链的5’末端不具有反向脱碱基脱氧核糖残基的情况下，该核苷酸的核糖基团具有5’羟基，优选为具有5’羟基。

455、在一些实施方式中，本公开提供试剂盒，所述试剂盒包含：a）本公开所述的双链核糖核酸、修饰物、缀合物，或其药物组合物；以及b）如下的使用说明：

456、(1)抑制c5基因表达；

457、(2)用于预防或治疗与c5基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱；

458、(3)用于治疗患有将受益于c5基因表达降低的疾病的受试者。

459、本公开提供了本公开所述的修饰的双链核糖核酸，或其缀合物或其药物组合物的如下至少一种用途：

460、(1)抑制c5基因表达，或制备用于抑制c5基因表达的药物；

461、(2)用于预防或治疗与c5基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱，或制备用于预防或治疗与c5基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱的药物；

462、(3)用于治疗患有将受益于c5基因表达降低的疾病的受试者，或制备用于治疗患有将受益于c5基因表达降低的疾病、病症或紊乱的受试者的药物。

463、本公开进一步提供了sirna分子(包括sirna修饰物、sirna缀合物)或其药物组合物在上述(1)-(3)至少一种中的用途。

464、在本公开中，“受试者”包括人或者非人类动物，优选脊椎动物，并且更优选哺乳动物。受试者可以包括转基因生物体。最优选地，受试者是人。进一步地，受试者具有如下至少一种特性：

465、(1)体内c5基因异常表达，更具体地为c5基因异常高表达；

466、(2)患有与c5基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱；

467、(3)患有将受益于c5基因表达降低的疾病。如罹患或倾向于患上与c5基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱的人。

468、在本文中，“与c5基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱”不受限地包括：阵发性睡眠性血红蛋白尿、非典型溶血尿毒综合征、广泛性重症肌无力、血栓栓塞、视神经脊髓炎、抗体介导的肾移植排斥反应、吉兰巴雷综合症、抗中性粒细胞胞质抗体相关血管炎、肌萎缩侧索硬化、帕金森病、自身免疫性脑炎、igg4相关性疾病、哮喘、抗磷脂抗体综合征、缺血再灌注损伤、典型溶血尿毒综合征、多灶性运动神经病、多发性硬化、血栓性血小板减少性紫癜、创伤性脑损伤、冷凝集素病、皮肌炎、与产志贺氏毒素大肠埃希氏菌相关的溶血性尿毒症综合征、移植物功能障碍、心肌梗死、败血症、动脉粥样硬化、感染性休克、脊髓损伤、银屑病、自身免疫性溶血性贫血、抗磷脂综合征、心肌炎、免疫复合物血管炎、高安氏病、川崎病和类风湿性关节炎。

469、用于抑制pnpla3基因表达的双链核糖核酸及其修饰物

470、本公开进一步的方面提供双链核糖核酸(dsrna)，用于抑制pnpla3基因的表达。该双链核糖核酸的一条链为反义链，反义链与靶基因（也即，pnpla3基因）在表达过程中形成的mrna序列互补配对，用于指导对靶mrna（也即，pnpla3基因的转录产物）的切割。双链核糖核酸中的正义链包括与反义链至少部分互补（包括与反义链完全互补）形成双链核糖核酸的双链区的序列。

471、在一些实施方式中，该双链核糖核酸作为核酸内切酶（dicer）的底物，被切割为小片段的dsrna，也即sirna。在一些实施方式中，该双链核糖核酸为sirna。sirna通过装配形成rna诱导的沉默复合物（rna-induced silencing complex，risc）risc复合体，切割靶mrna，抑制pnpla3基因的表达。

472、根据来源于人pnpla3 mrna (nm_025225.3)中的靶标序列，设计与靶mrna结合的双链核糖核酸（例如sirna）。

473、在一些实施方式中，所述用于抑制pnpla3的双链核糖核酸包含正义链和反义链，其中所述正义链包含与如seq id no：39所示的核苷酸序列具有不多于3个（例如不多于2或1个）差异的序列a，所述反义链包含与如seq id no：40所示的核苷酸序列具有不多于3个（例如不多于2或1个）差异的序列b；所述序列a与所述序列b至少部分地反向互补形成所述修饰的双链核糖核酸的双链区；

474、5’- cgaggauauuuggaugcau -3’（seq id no：39），

475、5’- augcauccaaauauccucgaa -3’（seq id no：40）。

476、在具体的实施方式中，所述正义链包含如seq id no：39所示的核苷酸序列作为序列a，所述反义链包含如seq id no：40所示的核苷酸序列作为序列b。

477、在一些实施方式中，所述反义链中序列b的第2-8位中的至少一个核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代。在一些实施方式中，所述反义链中序列b的第4、5、6或7位中的1、2或3个核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代。在一些实施方式中，所述反义链中序列b的第6或7位中的核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代。

478、在一些实施方式中，所述反义链中序列b的第6或7位中的核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代。

479、在优选的实施方式中，用于抑制pnpla3的双链核糖核酸的反义链和正义链中序列a和序列b的核苷酸均为经修饰的核苷酸。

480、在一些实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述反义链的序列b的第2、6、7、10、14和16位中的至少三个位点（例如3-7个，如3、4、5、6或7个）的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述反义链的序列b其它位置的每个核苷酸独立地为非2’-氟代修饰的核苷酸中的一种。

481、在一些实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述正义链的序列a的第3、5、7、8、9、10或11位中的至少三个位点（例如3-6个，如3、4、5或6个）的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述正义链的序列a其它位置的每个核苷酸独立地为非2’-氟代修饰的核苷酸中的一种。

482、在另一具体的实施方式中，反义链任选可包含核苷酸序列e。

483、优选地，所述反义链包括evp修饰等。

484、在具体的实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述反义链的序列b的第2、6、14和16位的核苷酸中的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述反义链的序列b其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸。

485、在具体的实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述反义链的序列b的第2、14和16位的核苷酸中的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述反义链的序列b其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸；或者，

486、按照5’末端至3’末端的方向，所述反义链的序列b的第2、14和16位的核苷酸中的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，反义链的序列b第6位的核苷酸具有gna修饰，反义链的序列b其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸或者反义链的序列b第6位的核苷残基被式（ii）所示的核苷单体替代；任选地，反义链的序列b第5位与第6位核苷间为酰胺键连接。

487、在具体的实施方式中，在用于抑制pnpla3的修饰的双链核糖核酸中所述反义链可具有选自以下序列中的任一种的结构：

488、1）5’- evpasufsgcaufccaaauaufccfucgsasa -3’（seq id no：41）； 或

489、2）5’- evpasufsgc(aam)unp1ccaaauaufccfucgsasa -3’（seq id no：42）；

490、其中，小写字母a、u、c、g表示：2’-甲氧基修饰的核苷酸；af、uf、cf、gf表示2’-氟代修饰的核苷酸；evp表示该字母组合右侧相邻的一个核苷酸为5’-反式乙烯基膦酸酯核苷酸；s表示前后相邻的两个核苷酸之间以硫代磷酸二酯键连接；（aam)unp1表示：。

491、在具体的实施方式中，按照5’末端至3’末端的方向，所述正义链的序列a的第7、9、10和11位的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述正义链的序列a其它位置的每个核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸。

492、在一些实施方式中，正义链包含一个或多个（invab），优选包含一个或两个。在一些实施方式中，（invab）位于正义链的5’末端和/或3’末端。例如，（invab）位于正义链的5’末端；或者，（invab）位于正义链的3’末端；或者，（invab）位于正义链的5’末端和3’末端，其中，所述（invab）每一个独立地为1个或2个(invab)，优选为1个(invab)。

493、在优选的实施方式中，在正义链的5’末端和/或3’末端添加一个或多个(invab)，例如1个或2个。在一些实施方式中，在正义链的5’末端添加1个(invab)。在一些实施方式中，在正义链的3’末端添加1个(invab)。在一些实施方式中，在正义链的5’末端和3’末端分别添加1个(invab)。

494、在一些实施方式中，沿5’末端向3’末端的方向，所述正义链包含位于如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：

495、所述正义链5’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间；

496、所述正义链5’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间；

497、所述正义链3’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间；

498、所述正义链3’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间；

499、所述正义链5’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与正义链5’末端第1个核苷酸之间；和/或

500、所述正义链3’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与正义链3’末端第1个核苷酸之间。

501、优选地，所述正义链包含位于如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：所述正义链5’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与第1个核苷酸之间和第1个核苷酸与第2个核苷酸之间、以及3’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与第1个核苷酸之间。

502、优选地，所述正义链包含位于如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：所述正义链5’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间和第2个核苷酸与第3个核苷酸之间、以及3’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与第1个核苷酸之间。

503、优选地，所述正义链包含位于如下所述位置处的硫代磷酸二酯键：所述正义链5’末端起始的反向脱碱基脱氧核糖残基与第1个核苷酸之间、和第1个核苷酸与第2个核苷酸之间。

504、在具体的实施方式中，在所述修饰的双链核糖核酸中所述正义链可具有选自以下序列中的任一种的结构：

505、1)5’- csgsaggaufaufufufggaugcau-3’（seq id no：43）；

506、其中，小写字母a、u、c、g表示：2’-甲氧基修饰的核苷酸；af、uf、cf、gf表示2’-氟代修饰的核苷酸；s表示前后相邻的两个核苷酸之间以硫代磷酸二酯键连接。任选地，在所述正义链的5’末端不具有反向脱碱基脱氧核糖残基的情况下，该核苷酸的核糖基团具有5’羟基，优选为具有5’羟基。

507、在一些实施方式中，本公开提供试剂盒，所述试剂盒包含：a）本公开所述的双链核糖核酸、修饰物、缀合物，或其药物组合物；以及b）如下的使用说明：

508、(1)抑制pnpla3基因表达；

509、(2)用于预防或治疗与pnpla3基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱；

510、(3)用于治疗患有将受益于pnpla3基因表达降低的疾病的受试者。

511、本公开提供了本公开所述的修饰的双链核糖核酸，或其缀合物或其药物组合物的如下至少一种用途：

512、(1)抑制pnpla3基因表达，或制备用于抑制pnpla3基因表达的药物；

513、(2)用于预防或治疗与pnpla3基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱，或制备用于预防或治疗与pnpla3基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱的药物；

514、(3)用于治疗患有将受益于pnpla3基因表达降低的疾病的受试者，或制备用于治疗患有将受益于pnpla3基因表达降低的疾病、病症或紊乱的受试者的药物。

515、本公开进一步提供了sirna分子(包括sirna修饰物、sirna缀合物)或其药物组合物在上述(1)-(3)至少一种中的用途。

516、在本公开中，“受试者”包括人或者非人类动物，优选脊椎动物，并且更优选哺乳动物。受试者可以包括转基因生物体。最优选地，受试者是人。进一步地，受试者具有如下至少一种特性：

517、(1)体内pnpla3基因异常表达，更具体地为pnpla3基因异常高表达；

518、(2)患有与pnpla3基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱；

519、(3)患有将受益于pnpla3基因表达降低的疾病。如罹患或倾向于患上与pnpla3基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱的人。

520、在本文中，“与pnpla3基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱”不受限地包括：nafld、酒精性脂肪肝病、酒精性脂肪性肝炎、肝性脂肪变性、肝硬化、肝癌、肝纤维化、肝炎、肝损伤、肝细胞坏死；所述nafld选自以下任一项或其组合：非酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪性肝炎；所述肝炎选自以下任一项或其组合：慢性肝炎、hcv肝炎。

521、双链核糖核酸或其修饰物或缀合物

522、本公开还提供本技术所述的双链核糖核酸或其修饰物或缀合物（在本文简称为双链核糖核酸缀合物、或者缀合物），是本公开上述提供的双链核糖核酸或其修饰物与缀合基团缀合连接得到。

523、在本公开中，所述缀合物的正义链与反义链形成双链核糖核酸缀合物的双链区，在双链核糖核酸缀合物的正义链的3’末端具有平末端。

524、在一些优选的实施方式中，双链核糖核酸缀合物由双链核糖核酸或其修饰物与缀合基团缀合连接得到。其中，双链核糖核酸或其修饰物的正义链与反义链至少部分互补形成双链核糖核酸或修饰的双链核糖核酸的双链区，并且，缀合基团与正义链的3’末端缀合连接，形成双链核糖核酸缀合物。

525、任选地，在所述正义链的5’末端不具有反向脱碱基脱氧核糖残基的情况下，所述正义链的5’末端核苷酸核糖基团具有5’羟基。

526、sirna与缀合基团的缀合位点可以在sirna正义链的3’末端或5’末端，也可在反义链的5’末端，还可以在sirna的内部序列中。在一些实施方式中，所述sirna与缀合基团的缀合位点在sirna正义链的3’末端。

527、在一些实施方式中，所述缀合基团可以连接在核苷酸的磷酸酯基团、2’-位羟基或者碱基上。在一些实施方式中，所述缀合基团还可以连接在3’-位羟基上，此时核苷酸之间采用2’,5’-磷酸二酯键连接。当缀合基团连接在sirna链的末端时，所述缀合基团通常连接在核苷酸的磷酸酯基团上；当缀合基团连接在sirna的内部序列时，所述缀合基团通常连接在核糖糖环或者碱基上，例如可以通过磷酸酯键、硫代磷酸酯键连接。各种连接方式可以参考文献：muthiah manoharan et.al. sirna conjugates carrying sequentiallyassembled trivalent n-acetylgalactosamine linked through nucleosides elicitrobust gene silencing in vivo in hepatocytes. acs chemical biology, 2015,10(5): 1181-7。

528、在本公开中，缀合基团可以是sirna给药领域常规使用的配体。在一些实施方式中，所述缀合基团可以选自以下靶向分子或其衍生物形成的配体中的一种或多种：亲脂分子，例如胆固醇、胆汁酸、维生素(例如维生素e)、不同链长的脂质分子；聚合物，例如聚乙二醇；多肽，例如透膜肽；适配体；抗体；量子点；糖类，例如乳糖、聚乳糖、甘露糖、半乳糖、n-乙酰半乳糖胺(galnac)；叶酸(folate)；肝实质细胞表达的受体配体，例如去唾液酸糖蛋白、去唾液酸糖残基、脂蛋白(如高密度脂蛋白、低密度脂蛋白等)、胰高血糖素、神经递质(如肾上腺素)、生长因子以及转铁蛋白等。

529、在一些实施方式中，所述缀合基团具有如式l-i、式l-iii、式l-iv、式l-v、式l-vi、式l-vii、式l-viii、式l-ix任一所示的结构（其中，在一些缀合基团中示例性地示出了磷酸酯键或硫代磷酸酯键部分）：

530、 (式 l-i)；

531、 (式l-iii)；

532、 (式l-iv)；

533、 (式l-v)；

534、(式l-vi)；

535、 (式l-vii)；

536、 (式l-viii)；

537、 (式l-ix)。

538、其中，式l-i、式l-iii、式l-iv、式l-v、式l-vi、式l-vii、式l-viii、式l-ix所示的缀合基团为galnac，galnac具有肝脏靶向性，可以将sirna分子高特异性地递送于肝脏组织中，特异性抑制肝脏内靶基因的高表达。

539、在一些具体的实施方式中，galnac通过磷酸二酯键与正义链的3’末端缀合连接，得到如下式iii所示结构的sirna缀合物：

540、(式iii)，

541、其中，双螺旋结构为本文所述的sirna或sirna修饰物。

542、药物组合物

543、本公开还提供了一种药物组合物，包括本文所述的寡核苷酸（例如双链核糖核酸）、以及其修饰物和缀合物中的一种或多种。

544、在一些实施方案中，所述药物组合物含有如上所述的本文所述的寡核苷酸（例如双链核糖核酸）、以及其修饰物和缀合物中的一种或多种（例如修饰的sirna）作为活性成分和药学上可接受的载体。在本公开中，使用药物组合物的目的在于促进针对生物体的给药，有利于活性成分的吸收，进而发挥生物活性。本公开的药物组合物可以通过任何形式给药，包括注射（动脉内、静脉内、肌肉内、腹膜内、皮下）、黏膜、口服（口服固体制剂、口服液体制剂）、直肠、吸入、植入、局部（例如眼部）给药等。口服固体制剂的非限制性实例包括但不限于散剂、胶囊剂、锭剂、颗粒剂、片剂等。口服或黏膜给药的液体制剂的非限制性实例包括但不限于混悬剂、酊剂、酏剂、溶液剂等。局部给药制剂的非限制性实例包括但不限于乳剂、凝胶剂、软膏剂、乳膏剂、贴剂、糊剂、泡沫剂、洗剂、滴剂或血清制剂。胃肠外给药制剂的非限制性实例包括但不限于注射用溶液剂、注射用干粉剂、注射用悬浮液、注射用乳剂等。本公开的药物组合物还可以制成控制释放或延迟释放剂型（例如脂质体或微球）。

545、在本公开中，施用途径能够以任何适用的方式进行变化或调整，以满足药物的性质、患者和医务人员的便利以及其它相关因素的需求。

546、在一些实施方式中，本公开提供试剂盒，所述试剂盒包含：a）本公开所述的寡核苷酸（例如双链核糖核酸，特别是sirna）、其修饰物或缀合物，或其药物组合物；以及b）如下的使用说明：

547、(1)抑制靶标基因表达；

548、(2)用于预防或治疗与靶标基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱；

549、(3)用于治疗患有将受益于靶标基因表达降低的疾病的受试者。

550、医药用途

551、本公开提供了本公开所述的寡核苷酸（例如双链核糖核酸，特别是sirna）、或其修饰物或缀合物或其药物组合物的如下至少一种用途：

552、(1)抑制靶标基因表达，或制备用于抑制靶标基因表达的药物；

553、(2)用于预防或治疗与靶标基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱，或制备用于预防或治疗与靶标基因异常表达相关的疾病、病症或紊乱的药物；

554、(3)用于治疗患有将受益于靶标基因表达降低的疾病的受试者，或制备用于治疗患有将受益于靶标基因表达降低的疾病、病症或紊乱的受试者的药物。

555、本公开进一步提供了sirna分子(包括sirna修饰物、sirna缀合物)或其药物组合物在上述(1)-(3)至少一种中的用途。

556、根据本公开的sirna的修饰物或其缀合物或其药物组合物致使靶标基因的表达被抑制至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％，实现对靶标基因异常表达相关疾病、病症或紊乱的治疗。

557、在一些实施方式中，本公开提供一种抑制细胞内靶标基因表达的方法，包括将本公开所述的寡核苷酸（例如双链核糖核酸）或其修饰物或缀合物或其药物组合物与细胞接触。

558、进一步地，抑制细胞内靶标基因表达的方法，是将本公开所述的sirna分子(包括sirna修饰物或其缀合物)或其药物组合物引入细胞内。

559、在一些实施方式中，所述细胞为体内细胞或体外细胞。在一些具体的实施方式中，所述细胞在受试者体内。

560、在一些实施方式中，本公开提供预防或治疗疾病的方法，包括向受试者施用本公开所述的寡核苷酸（例如双链核糖核酸）、或其修饰物或缀合物或其药物组合物。

561、在一些实施方式中，本公开提供预防或治疗疾病的方法，包括向受试者施用有效量的本公开所述的寡核苷酸（例如双链核糖核酸）、或其修饰物或缀合物或其药物组合物。在一些实施方式中，所述有效量是治疗有效量。

562、可通过本领域已知的任何合适途径向受试者进行施用。在本公开的一些实施方式中，所述途径包括但不仅限于：口服或胃肠外途径，包括静脉内给药、肌肉内给药、皮下给药、经皮给药、气道给药（气雾剂）、肺部给药、鼻部给药、直肠给药和局部给药（包括口腔含化给药和舌下给药）中的至少一种。在本公开的一些实施方式中，给药频率可为每天、每周、每个月或每年一次或多次。本文所述的sirna的修饰物或其缀合物的使用剂量可根据各种参数，尤其是受试者的年龄、体重和性别等来确定。

563、进一步地，预防或治疗疾病的方法是向受试者施用本公开所述的sirna分子(包括sirna修饰物、sirna缀合物)或其药物组合物。

564、在本公开中，“受试者”包括人或者非人类动物，优选脊椎动物，并且更优选哺乳动物。受试者可以包括转基因生物体。最优选地，受试者是人。进一步地，受试者具有如下至少一种特性：

565、(1)体内靶标基因异常表达，更具体地为靶标基因异常高表达；

566、(2)患有与靶标基因异常表达相关的疾病；

567、(3)患有将受益于靶标基因表达降低的疾病。如罹患或倾向于患上与于靶标基因异常表达相关的疾病的人。

568、在本文中，靶基因包括但不限于如下的基因中的一种或多种：sod1、cfb、scap、inhbe、c5、pnpla3、ttr、pcsk9、apoc3、或c3。