一种抗Rab7b抗体及其应用

本发明属于抗体，具体涉及一种抗rab7b抗体及其应用。

背景技术：

1、rab7b（也称rab7b）是ras相关蛋白rab家族成员之一，属于小gtp酶（smallgtpase），在人类中由rab7b基因编码。它与经典的rab7a具有约50%的序列同源性，但二者在细胞定位和功能上存在显著差异。rab7a主要调控从早期内体到晚期内体以及晚期内体到溶酶体的运输，而rab7b则主要负责调控从晚期内体/溶酶体到反式高尔基体网络（trans-golgi network, tgn）的逆向运输，同时参与溶酶体相关过程。

2、rab7b在多种细胞类型中表达，尤其在树突细胞（dendritic cells, dcs）中高表达，并在脂多糖（lps）诱导的成熟过程中出现短暂上调。它通过与肌球蛋白ii（myosin ii）等效应蛋白相互作用，连接溶酶体钙通道trpml1，从而调控细胞后端的局部肌球蛋白激活，影响树突细胞的极化、迁移和免疫功能。此外，rab7b还作为toll样受体（tlr）信号的负调控因子，通过促进tlr4和tlr9的溶酶体降解来抑制炎症反应，在先天免疫调控中发挥重要作用。

3、近年来研究表明，rab7b参与自噬通量调控、细胞迁移、炎症响应以及多种疾病进程。例如，在肝硬化模型中，rab7b可促进肝星状细胞（hscs）的激活、迁移和增殖，抑制其表达可能缓解纤维化相关病理；在肿瘤细胞中，rab7b通过调控自噬影响细胞增殖和凋亡；在免疫细胞中，其缺失会导致细胞极化障碍和迁移缺陷。这些研究提示rab7b是细胞内膜泡运输、自噬-溶酶体途径以及免疫调控的关键节点，具有重要的生理和病理意义。

4、目前，针对rab7b的检测和功能研究主要依赖特异性抗体。现有商业或文献报道的rab7b抗体多为多克隆抗体或鼠源单克隆抗体，在亲和力、特异性和兔源应用兼容性等方面存在一定局限性。例如，在western blot、免疫荧光、bli（生物层干涉）亲和力检测以及动物模型实验中，常因背景信号较高、种属交叉反应或亲和力不足而影响实验准确性。

5、因此，开发一种高效、稳定的rab7b兔源单克隆抗体制备方法，并通过血清效价检测、浓度纯度分析、western blot特异性验证以及bli亲和力检测等手段获得高性能抗体，对于rab7b的基础生物学研究、疾病机制阐明以及相关检测试剂盒的开发具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明的目的在于供一种高效、稳定的rab7b兔源单克隆抗体及其制备方法。本发明旨在通过动物免疫方案、血清效价检测、浓度与纯度分析、western blot特异性验证以及bli亲和力检测等技术手段，得到一种效价高、纯度高、特异性强、亲和力优异的rab7b兔源单克隆抗体。从而解决现有rab7b抗体（尤其是多克隆抗体或鼠源抗体）在特异性、亲和力、种属兼容性及批次稳定性等方面存在的不足，为rab7b蛋白的检测、功能研究以及相关疾病机制探讨提供高性能的检测工具和研究试剂。

2、本发明一方面，提供一种抗rab7b抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区序列vh，所述重链可变区vh包含vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3，其中所述vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3为如下的氨基酸序列：

3、1) seq id no:1-3或；

4、2) seq id no:7、seq id no:8、seq id no:3或：

5、3)seq id no:12、seq id no:13、seq id no:3或；

6、4)seq id no:17、seq id no:8、seq id no:3或；

7、5)seq id no:21、seq id no:22、seq id no:3。

8、本发明一实施方式中，所述的抗体或其抗原结合片段进一步包含轻链可变区vl，所述轻链可变区vl包含vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3，其中所述vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3为如下的氨基酸序列：

9、6) seq id no:4-6或；

10、7) seq id no:9-11或；

11、8)seq id no:14-16或；

12、9)seq id no:18-20或；

13、10)seq id no:23、seq id no:24、seq id no:11。

14、本发明一实施方式中，所述重链可变区的cdr和轻链可变区的cdr组合如下，依照vhcdr1、vhcdr2、vhcdr3、vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3的顺序：

15、i)seq id no:1-6，或；

16、ii)seq id no:7、seq id no:8、seq id no:3、seq id no:9、seq id no:10、seqid no:11，或；

17、iii)seq id no:12、seq id no:13、seq id no:3、seq id no:14、seq id no:15、seq id no:16，或；

18、iv)seq id no:17、seq id no:8、seq id no:3、seq id no:18、seq id no:19、seqid no:20，或；

19、v)seq id no:21、seq id no:22、seq id no:3、seq id no:23、seq id no:24、seqid no:11。

20、本发明一实施方式中，所述的抗体或其抗原结合片段的重链可变区vh包含与seqid no:25、27、29、31或33具有至少75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。

21、本发明一实施方式中，所述的抗体或其抗原结合片段的轻链可变区vl包含与seqid no:26、28、30、32或34具有至少75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。

22、本发明进一步的实施方式中，所述的抗体或其抗原结合片段包含如下重链可变区vh和轻链可变区vl的组合：seq id no:25和26、seq id no:27和28、seq id no:29和30、seqid no:31和32或seq id no:33和34。

23、在本发明的具体实施方案中，所述的抗体或其抗原结合片段，满足以下至少一项：

24、（1）所述抗体或其抗原结合片段选自全长抗体、fab、fab’、f(ab’)2、fv、scfv或纳米抗体（单域抗体）；

25、（2）所述抗体为兔源、嵌合或人源化抗体或全人源抗体。

26、本发明一实施方式中，所述的抗体或其抗原结合片段包含重链恒定区（ch）和轻链恒定区（cl），所述重链恒定区和轻链恒定区的至少之一的至少一部分来自于人源抗体或灵长目源抗体的至少之一。本发明一实施方式中，所述抗体或抗原结合片段的重链恒定区和轻链恒定区均来自于人源igg抗体。优选地，所述重链恒定区是人igg1、igg2或者igg4亚型的恒定区；优选地，所述轻链恒定区是人源的kappa或lambda链恒定区。

27、本发明还提供一种核酸分子，所述核酸分子编码上述任一的抗体或其抗原结合片段。

28、本发明还提供一种载体，所述的载体含有上述的核酸分子。

29、本发明还提供一种宿主细胞，所述的宿主细胞含有上述的载体或上述的核酸分子或表达上述任一的抗体或其抗原结合片段。

30、本发明还提供一种药物组合物，其包含上述任一所述的抗体或其抗原结合部分，以及药学上可接受的佐剂。

31、本发明还提供一种抗体偶联物，其包含上述任一所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合片段通过化学接头或直接偶联至至少一种效应子部分。

32、本发明一实施方案中，所述效应子部分为可检测标记，所述可检测标记选自：荧光染料、酶、酶底物、生物发光材料、放射性核素、化学发光剂或上述物质的任意组合。

33、本发明还提供一种诊断试剂，所述试剂包含上述任一所述的抗体或其抗原结合部分或/和所述抗体偶联物，所述试剂用于检测rab7b蛋白。

34、本发明还提供上述任一的抗体或其抗原结合片段、上述的核酸分子、上述的载体、上述细胞、抗体偶联物在用于制备rab7b蛋白检测试剂或试剂盒中的用途。

35、本发明一实施方式中，所述检测试剂或试剂盒用于western blot检测、浓度纯度检测和/或bli亲和力检测、免疫沉淀（ip）、免疫荧光（if）、免疫组织化学（ihc）、流式细胞术（facs）或酶联免疫吸附测定（elisa）。

36、本发明还提供一种检测rab7b蛋白的方法，使用上述任一项所述的抗体或其抗原结合片段、抗体偶联物或诊断试剂进行检测。

37、本发明的有益效果：本发明所提供的抗rab7b抗体或抗原结合片段效价高、纯度高、特异性强、亲和力优异，为rab7b蛋白的检测、功能研究以及相关疾病机制探讨提供高性能的检测工具和研究试剂。